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CHO-K1细胞的fut8及bax基因敲除及其细胞生长特性研究
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作者 郭彤 金紫洋 吴光昊 《上海医药》 2025年第7期86-90,共5页
目的与方法 :本研究采用CRISPR-Cas9基因编辑方法,对CHO-K1细胞进行岩藻糖基转移酶基因fut8和细胞凋亡相关基因bax改构。结果 :对敲除fut8及bax基因的CHO-K1细胞通过单细胞培养在基因组水平进行鉴定,筛选获得CHO-K1(fut8^(-/-))及CHO-K1... 目的与方法 :本研究采用CRISPR-Cas9基因编辑方法,对CHO-K1细胞进行岩藻糖基转移酶基因fut8和细胞凋亡相关基因bax改构。结果 :对敲除fut8及bax基因的CHO-K1细胞通过单细胞培养在基因组水平进行鉴定,筛选获得CHO-K1(fut8^(-/-))及CHO-K1(bax^(-/-))双等位基因位点敲除的单细胞株。结论 :与野生型CHO-K1细胞相比,改构后的单细胞株生长曲线表明,CHO-K1(bax^(-/-))单细胞株仍可维持较高的活细胞密度,CHO-K1(fut8^(-/-))及CHO-K1(bax^(-/-))的倍增时间低于野生型细胞,可进一步探索作为工程宿主细胞高效表达外源抗体基因。 展开更多
关键词 cho-K1细胞 宿主细胞改造 岩藻糖基转移酶基因fut8 促调亡基因bax CRISPR-Cas9 基因敲除
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CHO-Reg3a细胞株的构建及抑菌活性检测
2
作者 代爽 秦达 +6 位作者 吴书音 王延涛 李国军 汪登奎 戴秀秀 余丽芸 侯喜林 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第7期115-121,共7页
为了利用中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞稳定表达再生胰岛衍生蛋白3a(regenerating islet-derived protein 3a, Reg3a),并获得具有抑菌活性的抑菌蛋白,试验先通过PCR扩增Reg3a基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Reg3a-EGFP... 为了利用中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞稳定表达再生胰岛衍生蛋白3a(regenerating islet-derived protein 3a, Reg3a),并获得具有抑菌活性的抑菌蛋白,试验先通过PCR扩增Reg3a基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Reg3a-EGFP后转染至对数生长期CHO细胞内,通过遗传霉素(G418)筛选阳性细胞,并采用有限稀释法进行单克隆细胞株筛选;随后利用Western-blot对细胞表达产物进行鉴定;最后使用纯化后的蛋白进一步进行抑菌活性试验。结果表明:重核真核表达载体pcDNA3.1-Reg3a-EGFP构建成功,连续传代20次仍正常表达。Western-blot鉴定显示在17.64 ku处有Reg3a特异性条带。纯化的Reg3a蛋白(0.8 mg/mL)可明显抑制产肠毒素性大肠杆菌C83912(ETEC-K99)、产肠毒素性大肠杆菌C83902(ETEC-K88)、产肠毒素性大肠杆菌C83916(ETEC-987p)及金黄色葡萄球菌,且对金黄色葡萄球菌的抑制效果更好。说明稳定表达Reg3a的CHO细胞株构建成功,且表达的Reg3a具有抑菌活性。 展开更多
关键词 Reg3a CHO细胞 真核表达 抑菌活性 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌
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纤维连接蛋白(FN)对CHO-C28细胞生长的影响 被引量:5
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作者 王宇 吴学军 +6 位作者 谷丽娟 于漫伦 赵小琳 郝富勇 付琳娜 王德亮 胡太梅 《药物生物技术》 CAS CSCD 2009年第1期80-82,共3页
纤维连接蛋白(FN)最重要的功能是促进细胞的粘连、生长,因而对传代细胞的贴壁、增殖具有重要意义。试验通过观察不同含有FN的培养液对CHO-C28细胞的贴壁、集落形成、细胞增长速度的不同作用,比较FN对CHO-C28细胞的影响,同时对比进口与国... 纤维连接蛋白(FN)最重要的功能是促进细胞的粘连、生长,因而对传代细胞的贴壁、增殖具有重要意义。试验通过观察不同含有FN的培养液对CHO-C28细胞的贴壁、集落形成、细胞增长速度的不同作用,比较FN对CHO-C28细胞的影响,同时对比进口与国产FN之间的区别。证明FN对克隆形成及细胞增殖有明显的促进作用,进口FN组和国产FN组无明显区别。 展开更多
关键词 纤维连接蛋白 cho-C28细胞 克隆 增殖
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GPI-CTLA4Ig嵌合分子的构建和在CHO-dhfr^-细胞膜上的表达 被引量:3
4
作者 于继云 沈倍奋 +4 位作者 黎燕 陈兴 程绍辉 田蓉 曲梅花 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期212-214,共3页
目的 :研制GPI锚定修饰的新型免疫抑制分子GPI CT LA4Ig。方法 :通过将从促衰变因子 (DAF)来源的GPI修饰性信号序列与CTLA4Ig嵌合 ,获得GPI修饰的CTLA4Ig分子。将编码GPI CTLA4Ig嵌合分子的基因克隆到真核表达载体pCI dhfr中 ,并用脂质... 目的 :研制GPI锚定修饰的新型免疫抑制分子GPI CT LA4Ig。方法 :通过将从促衰变因子 (DAF)来源的GPI修饰性信号序列与CTLA4Ig嵌合 ,获得GPI修饰的CTLA4Ig分子。将编码GPI CTLA4Ig嵌合分子的基因克隆到真核表达载体pCI dhfr中 ,并用脂质体法转染CHO dhfr 细胞 ,用氨甲喋呤 (MTX)进行筛选。重组蛋白的表达用RT PCR、ELISA、细胞免疫荧光和Westernblot进行鉴定。最后采用ProteinA亲和层析纯化。结果 :构建了GPI CTLA4Ig嵌合分子 ,并在CHO dhfr 细胞膜上稳定表达。结论 :GPI修饰的CTLA4Ig分子有可能作为新型的免疫抑制剂用于器官移植中 。 展开更多
关键词 CTLA4IG 蛋白质表达 糖基化磷脂酰肌醇 cho-dhfr^-细胞
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淀粉微载体的制备及对CHO-K1细胞培养的初步应用 被引量:4
5
作者 张磊 李明生 +4 位作者 郑荣 张健 靳冬武 马忠仁 冯玉萍 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期454-460,516,共8页
以普通市售马铃薯淀粉为原材料,在常温下利用W/O乳化方法制备了交联淀粉微球,并以二乙胺基乙基修饰了微球的表面电荷。同时研究了制备淀粉微球的制备工艺和改性工艺,成功制备了适合细胞培养用的淀粉微载体。利用扫描电镜(SEM)、红外(FT-... 以普通市售马铃薯淀粉为原材料,在常温下利用W/O乳化方法制备了交联淀粉微球,并以二乙胺基乙基修饰了微球的表面电荷。同时研究了制备淀粉微球的制备工艺和改性工艺,成功制备了适合细胞培养用的淀粉微载体。利用扫描电镜(SEM)、红外(FT-IR)、X射线衍射仪(XRD)对微球进行了表征。结果表明,最佳制备条件为:淀粉溶液浓度为7%,搅拌速度为500 rpm,交联剂用量为8%,水油相体积比1∶6;微球表面修饰最佳条件为:加入微球质量2倍体积的3.5 mol/L NaOH溶液和2.5 mol/L DEAE-HCl溶液,60℃密闭反应4 h。对比Cytodex-1微载体,培养CHO-K1细胞至144 h时,淀粉微载体表面细胞密度达到1.8×10~6cells/mL,且两者培养效果相似,表明了自制淀粉微载体是一种潜在的贴壁细胞培养用高分子材料。 展开更多
关键词 马铃薯淀粉 淀粉微球 二乙氨基乙基 cho-K1细胞 细胞培养
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白细胞介素-7基因慢病毒表达载体的构建及在CHO-K1细胞中的稳定表达 被引量:2
6
作者 李向茸 令瑛 +5 位作者 徐雷 包晓婧 马玉梅 车敏娜 张海霞 冯若飞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第6期571-576,共6页
目的构建白细胞介素-7(interleukin-7,IL-7)基因慢病毒表达载体,并在CHO-K1细胞中稳定表达,为生产试剂级的IL-7奠定基础。方法参照Gen Bank中公布的人IL-7基因核苷酸序列(J04156.1),人工合成该条基因,亚克隆至表达载体pLV-CMV-EF1-GP上... 目的构建白细胞介素-7(interleukin-7,IL-7)基因慢病毒表达载体,并在CHO-K1细胞中稳定表达,为生产试剂级的IL-7奠定基础。方法参照Gen Bank中公布的人IL-7基因核苷酸序列(J04156.1),人工合成该条基因,亚克隆至表达载体pLV-CMV-EF1-GP上,构建重组慢病毒表达质粒pLV-CMV-EF1-GP-r IL-7,在HEK293T细胞中进行病毒包装,检测病毒滴度后,收获细胞毒液,感染CHO-K1细胞,经嘌呤霉素筛选,获得稳定表达IL-7的CHO-K1-r IL-7细胞。荧光显微镜观察感染细胞绿色荧光蛋白的表达;RT-PCR法检测IL-7基因m RNA的转录;ELISA法检测IL-7的含量;Western blot法检测IL-7的表达。结果重组慢病毒表达质粒pLV-CMV-EF1-GP-r IL-7经双酶切及测序结果证明构建正确。慢病毒的滴度为3×10~8 TU/ml。慢病毒感染CHO-K1细胞24、48和72 h后,均可见特异性绿色荧光蛋白表达,且随着培养时间的延长,荧光强度明显增强;CHO-K1-r IL-7细胞可扩增出约540 bp的IL-7基因片段;经ELISA检测,样品中IL-7含量为0.6 ng/ml;表达产物主要存在于CHO-K1-r IL-7细胞上清中,且具有良好的反应原性。结论成功构建了IL-7基因慢病毒重组表达质粒,并实现了IL-7在CHO-K1细胞上的稳定表达。 展开更多
关键词 白细胞介素-7 慢病毒 cho-K1细胞 稳定表达
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无血清悬浮培养CHO-K1-SFS细胞系的建立及其生物学特性 被引量:2
7
作者 杨妍梅 冯若飞 +3 位作者 谢晶莹 李向茸 王丹 马忠仁 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第2期180-184,共5页
目的建立无血清悬浮培养CHO-K1-SFS细胞系,并检测其生物学特性。方法将CHO-K1贴壁细胞通过逐步降低血清浓度,获得低血清CHO-K1贴壁细胞,以3×105个/ml接种于含无血清培养基SFM4CHO的150 ml三角瓶中,摇床无血清适应培养,获得CHO-K1-... 目的建立无血清悬浮培养CHO-K1-SFS细胞系,并检测其生物学特性。方法将CHO-K1贴壁细胞通过逐步降低血清浓度,获得低血清CHO-K1贴壁细胞,以3×105个/ml接种于含无血清培养基SFM4CHO的150 ml三角瓶中,摇床无血清适应培养,获得CHO-K1-SFS细胞。对该细胞进行生长曲线绘制、微生物污染检测、代谢分析及外源基因表达检测。结果所获得的CHO-K1-SFS细胞系可无血清悬浮培养,以3×105个/ml的初始密度接种,最大增殖浓度可达3.8×106个/ml,平均倍增时间为29.7 h;无细菌、真菌、病毒和支原体污染;对葡萄糖利用率较高,乳酸产生较多;能较好地表达外源基因。结论成功建立了无血清悬浮培养CHO-K1-SFS细胞系,为建立高效的外源基因表达平台奠定了基础。 展开更多
关键词 cho-K1细胞 无血清培养 悬浮培养 生物学特性
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猪TOLL样受体2基因在CHO-K1细胞中的表达 被引量:3
8
作者 房永祥 景志忠 +3 位作者 陈国华 段凤云 蒙学莲 窦永喜 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第1期14-17,共4页
将含猪TLR2(猪Toll样受体2,pTLR2)基因的真核表达载体PcDNA3.1/CT-GFP-pTLR2,采用脂质体法转染到CHO-K1细胞,用G418持续筛选获得了阳性细胞克隆.阳性细胞克隆系经PCR和RT-PCR检测表明:pTLR2基因得到稳定整合并能成功地转录.荧光显微镜观... 将含猪TLR2(猪Toll样受体2,pTLR2)基因的真核表达载体PcDNA3.1/CT-GFP-pTLR2,采用脂质体法转染到CHO-K1细胞,用G418持续筛选获得了阳性细胞克隆.阳性细胞克隆系经PCR和RT-PCR检测表明:pTLR2基因得到稳定整合并能成功地转录.荧光显微镜观察,转染细胞可见绿色荧光,表明获得了表达pTLR2的克隆细胞系. 展开更多
关键词 猪Toll样受体2 cho-K1细胞 转染
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稳定表达犬细小病毒VP2结构蛋白的CHO-K1细胞系的建立 被引量:2
9
作者 王微 李秀锦 +3 位作者 王幸兴 韩冬梅 潘素敏 仲飞 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期588-592,共5页
为构建犬细小病毒VP2基因分泌性表达细胞系,通过酶切将人CD5信号肽序列从质粒中切出,将其连接到真核表达载体pcDNA3.1A的多克隆位点上,构建成pcDNA3.1-CD5sp质粒。然后再通过PCR方法扩增犬细小病毒VP2基因,并将其插入到pcDNA3.1-CD5sp... 为构建犬细小病毒VP2基因分泌性表达细胞系,通过酶切将人CD5信号肽序列从质粒中切出,将其连接到真核表达载体pcDNA3.1A的多克隆位点上,构建成pcDNA3.1-CD5sp质粒。然后再通过PCR方法扩增犬细小病毒VP2基因,并将其插入到pcDNA3.1-CD5sp载体中CD5信号肽的下游,使其与CD5信号肽序列融合,构建成VP2基因的真核分泌型表达载体pcDNA-CD5sp-VP2。经脂质体介导转染细胞,后通过G418筛选,建立出稳定表达VP2蛋白的CHO-K1细胞系。测序结果表明,构建的犬细小病毒VP2基因的分泌型表达载体结构正确,表达载体经脂质体介导转染CHO-K1细胞,通过G418加压,筛选出稳定转染VP2基因的细胞株,经PCR检测证明VP2基因已经整合到细胞的染色体中;经RT-PCR、Westernblot分别检测VP2基因表达的mRNA和VP2蛋白,证明犬细小病毒VP2基因能够在CHO-K1细胞进行稳定性表达。这为下一步研究犬细小病毒VP2蛋白与宿主细胞的相互作用及VP2DNA疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 犬细小病毒 VP2蛋白 cho-K1细胞 稳定表达
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猪CD163 cDNA扩增及其稳定表达细胞系(CHO-K1)的建立 被引量:2
10
作者 徐建 霍珊珊 +4 位作者 张建楼 张永红 崔丹 仲飞 李秀锦 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期88-92,122,共6页
猪CD163是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的重要受体之一。为探讨此受体在病毒感染过程中与PRRSV的相互作用,需要建立稳定表达猪全长CD163基因的细胞系。首先通过RT-PCR方法从猪肺泡巨噬细胞中扩增猪全长CD163cDNA,然后通过KpnI和XhoI... 猪CD163是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的重要受体之一。为探讨此受体在病毒感染过程中与PRRSV的相互作用,需要建立稳定表达猪全长CD163基因的细胞系。首先通过RT-PCR方法从猪肺泡巨噬细胞中扩增猪全长CD163cDNA,然后通过KpnI和XhoI将其插入到pcDNA3.1A质粒中,构建成真核表达载体。将表达载体转染CHO-K1细胞,通过G418加压,筛选出在细胞膜上稳定表达猪CD163的细胞系。结果显示,扩增出的猪CD163基因与基因库的序列基本一致,个别碱基的突变没有引起编码氨基酸的改变。通过转染表达载体和G418筛选,成功构建了稳定表达猪全长CD163基因的CHO-K1细胞系。经流式细胞仪检测证实,重组猪CD163可在CHO-K1细胞膜上进行表达,这为进一步研究PRRSV与CD163受体相互作用提供了必要条件。 展开更多
关键词 猪CD163 稳定表达细胞系 cho-K1细胞 流式细胞术
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30L生物反应器连续灌注培养重组CHO-C_(28)细胞表达HBsAg的研究 被引量:4
11
作者 官桂范 李志强 +4 位作者 王妍 李云富 耿星涛 陈万革 叶世德 《微生物学免疫学进展》 1999年第4期45-54,共10页
应用30 L生物反应器和微载体悬浮 培养技术,通过电脑全自动控制,连续灌注培养分泌HBsAg 的重组CHO-C28细胞。试验了培养方式、连续灌流速度,反应器转速和细胞对葡萄糖消耗等工艺条件。观察培养60 天,细胞的生长形... 应用30 L生物反应器和微载体悬浮 培养技术,通过电脑全自动控制,连续灌注培养分泌HBsAg 的重组CHO-C28细胞。试验了培养方式、连续灌流速度,反应器转速和细胞对葡萄糖消耗等工艺条件。观察培养60 天,细胞的生长形态、HBsAg 分泌动态和染色体数。研究结果表明,连续培养60 天,细胞密度可达7.0×106cells/m l,平均维持在(5.0~6.0)×106cells/m l,收液的RPHA 滴度可达1∶512,HBsAg 每天平均产量为30 m g。 展开更多
关键词 cho-C28细胞 表面抗原 乙型肝炎 生物反应器
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基于TMT蛋白组学的硝酸铀酰诱导CHO-K1细胞损伤研究 被引量:1
12
作者 尹晶晶 刘欢 +4 位作者 高洁 王志鹏 袁慧 李建华 李建国 《陕西科技大学学报》 北大核心 2023年第1期66-71,87,共7页
应用蛋白组学技术筛选硝酸铀酰暴露诱导CHO-K1细胞损伤的差异表达蛋白,为铀毒性机制研究提供数据.CHO-K1细胞经500μmol/L硝酸铀酰染毒24 h,以差异倍数大于1.5倍,差异显著性小于0.05为标准,采用串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)标记... 应用蛋白组学技术筛选硝酸铀酰暴露诱导CHO-K1细胞损伤的差异表达蛋白,为铀毒性机制研究提供数据.CHO-K1细胞经500μmol/L硝酸铀酰染毒24 h,以差异倍数大于1.5倍,差异显著性小于0.05为标准,采用串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)标记蛋白组学技术筛选差异表达蛋白,应用生物信息学技术对差异表达蛋白进行聚类分析、基因本体(Gene Ontology,GO)分析、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析及蛋白相互作用分析.共鉴定出蛋白4772个,硝酸铀酰染毒组筛选出差异表达1.5倍以上的蛋白309个,其中164个表达上调,145个表达下调.GO分析结果显示差异表达的蛋白主要参与1086种生物过程、282种细胞成分以及377类分子功能.KEGG分析结果显示差异表达蛋白主要富集于40条信号转导通路,参与核糖体生物合成、RNA运输、辅因子代谢、Notch信号通路、吞噬体、染色体及相关蛋白、蛋白质外排、生理节律、IL-17信号通路、类脂物代谢等信号通路.差异蛋白相互作用网络分析结果显示蛋白RPS3A和RPS17的关联度最高.研究结果表明,CHO-K1细胞经500μmol/L硝酸铀酰染毒24 h后,蛋白发生差异表达,核糖体生物合成、RNA运输等多条信号通路发生改变,蛋白RPS3A和RPS17可能是硝酸铀酰暴露致CHO-K1细胞损伤的关键蛋白. 展开更多
关键词 硝酸铀酰 cho-K1细胞 蛋白质组学 生物信息学 差异蛋白
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猪源IFN-λ3在CHO-S细胞中的表达及其抗口蹄疫病毒活性分析
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作者 袁红 白兴文 +8 位作者 李坤 李平花 孙普 宋雅丽 焦云娟 刘在新 卢曾军 李冬 包慧芳 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期190-196,共7页
为了探究猪源IFN-λ3蛋白能否在CHO-S悬浮细胞中表达以及表达蛋白的抗口蹄疫病毒(FMDV)活性,根据NCBI上的猪源IFN-λ3序列,构建真核表达载体pcDNA3.4-IFNλ3-His,将其转染至CHO-K1贴壁细胞中,用间接免疫荧光试验和Western-blot验证重组... 为了探究猪源IFN-λ3蛋白能否在CHO-S悬浮细胞中表达以及表达蛋白的抗口蹄疫病毒(FMDV)活性,根据NCBI上的猪源IFN-λ3序列,构建真核表达载体pcDNA3.4-IFNλ3-His,将其转染至CHO-K1贴壁细胞中,用间接免疫荧光试验和Western-blot验证重组质粒是否表达IFN-λ3蛋白。将pcDNA3.4-IFNλ3-His转染至CHO-S悬浮细胞中大量制备IFN-λ3蛋白,用AKTA蛋白纯化系统纯化蛋白,用SDS-PAGE和Western-blot方法鉴定纯化出的蛋白,用细胞毒性试验分析纯化蛋白是否具有细胞毒性,用实时荧光定量PCR、Western-blot和空斑试验三种方法研究纯化蛋白的抗FMDV活性。结果显示,重组质粒pcDNA3.4-IFNλ3-His在CHO-K1细胞中瞬时表达IFN-λ3,在CHO-S细胞中以分泌形式表达IFN-λ3;用AKTA系统能够纯化出纯度较高的IFN-λ3蛋白;纯化出的IFN-λ3对PK-15细胞无明显毒性,能够抑制FMDV RNA的复制、减弱病毒蛋白翻译活动以及降低子代病毒的生成。本研究为发展新型FMDV防控策略提供了新方向。 展开更多
关键词 猪源IFN-λ3 表达 cho-S细胞 口蹄疫病毒 抗病毒活性
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重组CHO-C_(28)细胞生长动态的研究
14
作者 周长军 陈万革 +4 位作者 董雪林 赵丽剑 杨文冲 周安广 赵小琳 《药物生物技术》 CAS CSCD 2004年第1期19-21,共3页
观察CHO C2 8细胞在大生产过程中 ,生长状态曲线 ,为细胞培养过程中换液及培养条件提供依据。人为控制培养液中血清含量、加液量、pH值等条件。从生产种子 2 2代左右开始传代 ,经 5~ 6 d形成致密细胞单层 ,一般维持换液次数为 30次左... 观察CHO C2 8细胞在大生产过程中 ,生长状态曲线 ,为细胞培养过程中换液及培养条件提供依据。人为控制培养液中血清含量、加液量、pH值等条件。从生产种子 2 2代左右开始传代 ,经 5~ 6 d形成致密细胞单层 ,一般维持换液次数为 30次左右。如果生产种子代次高 ,其维持换液次数也相应减少 ,根据不同换液次数细胞增殖数量不同 ,总结出重组CHO C2 8细胞生长动态曲线。并根据换收液的HBsAg滴度 ,绘出换液次数和HB sAg相关曲线。结论 :7~ 2 3次换液期间 (缓慢生长期 )HBsAg收获最高。 展开更多
关键词 cho-C28细胞 动态曲线 HBSAG
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人凝血因子Ⅶ在CHO-K1细胞中的表达与鉴定
15
作者 肖薇 赵睿 +3 位作者 李长清 边国慧 肖小璞 林方昭 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第6期822-824,共3页
目的在CHO-K1细胞中表达人凝血因子Ⅶ(human coagulation factorⅦ,hFⅦ)。方法利用脂质体转染法,将表达质粒pcDNA3.1-FⅦ和空载体pcDNA3.1分别转染CHO-K1细胞,经900μg/ml G418筛选抗性细胞株。收集细胞培养上清,采用ELISA法检测细胞... 目的在CHO-K1细胞中表达人凝血因子Ⅶ(human coagulation factorⅦ,hFⅦ)。方法利用脂质体转染法,将表达质粒pcDNA3.1-FⅦ和空载体pcDNA3.1分别转染CHO-K1细胞,经900μg/ml G418筛选抗性细胞株。收集细胞培养上清,采用ELISA法检测细胞培养上清中rhFⅦ的水平;PT法检测细胞培养上清的凝血时间;Westernblot法检测细胞培养上清中rhFⅦ的表达。结果共获得3株抗性细胞,分别命名为CHO-FⅦ01~03,空载体转染的细胞命名为CHO-CK;CHO-FⅦ01~03细胞培养上清中均检测到了rhFⅦ,但含量均低于阳性对照;CHO-CK细胞培养上清的凝血时间分别为CHO-FⅦ01~03细胞培养上清的2.4、2.1和3.1倍;CHO-FⅦ01~03细胞培养上清中含目的蛋白rhFⅦ,相对分子质量约为50 000。结论成功在CHO-K1细胞中表达了hFⅦ,为下一步hFⅦ的深入研究及应用奠定了基础。 展开更多
关键词 人凝血因子Ⅶ cho-K1细胞 稳定转染 基因表达
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重组小鼠碱性成纤维细胞生长因子在CHO-K1-SFS细胞中的表达
16
作者 李向茸 冯若飞 +4 位作者 包晓婧 张海霞 谢晶莹 徐雷 马忠仁 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第6期564-569,共6页
目的构建小鼠碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF,亦称FGF-2)的真核表达质粒,并于无血清悬浮培养的CHO-K1-SFS细胞中进行表达。方法以小鼠垂体组织总RNA为模板,PCR扩增b FGF基因,并克隆至真核表达载体p EGFP-... 目的构建小鼠碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF,亦称FGF-2)的真核表达质粒,并于无血清悬浮培养的CHO-K1-SFS细胞中进行表达。方法以小鼠垂体组织总RNA为模板,PCR扩增b FGF基因,并克隆至真核表达载体p EGFP-C1,构建重组表达质粒p EGFP-C1-b FGF,经Lipofectamine 2000介导转染无血清悬浮培养的CHO-K1-SFS细胞,荧光显微镜观察CHO-K1-SFS细胞中EGFP的表达情况,普通光学显微镜观察CHO-K1-SFS细胞的生长状况和细胞形态,RT-PCR法检测CHO-K1-SFS细胞中b FGF基因的转录,Western blot法检测CHOK1-SFS细胞中b FGF蛋白的表达。结果重组表达质粒p EGFP-C1-b FGF经双酶切(BglⅡ/SalⅠ)鉴定证明构建正确;重组质粒p EGFP-C1-b FGF转染后24、48、72及96 h的CHO-K1-SFS细胞均可见特异性绿色荧光蛋白表达,重组质粒p EGFP-C1-b FGF转染对CHO-K1-SFS细胞形态和增殖速率不产生影响;p EGFP-C1-b FGF转染组CHO-K1-SFS细胞可扩增出510 bp的目的条带;p EGFP-C1-b FGF转染组可见相对分子质量约44 000的特异性条带,表达产物可与兔抗b FGF多克隆抗体发生特异性结合。结论构建的真核表达质粒p EGFP-C1-b FGF在无血清悬浮培养的CHO-K1-SFS细胞中成功的表达,为进一步实现小鼠b FGF在哺乳动物细胞中的分泌表达及药物开发奠定了基础。 展开更多
关键词 碱性成纤维细胞生长因子 cho-K1-SFS细胞 真核细胞 基因表达
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国产和进口DMEM培养基培养CHO-C_(28)工程细胞的质量评价
17
作者 艾智武 吕东升 +1 位作者 陈文庆 孙燮钧 《细胞生物学杂志》 CSCD 1999年第4期203-207,共5页
我们用10L转瓶培养能高效表达HBsAg的重组中国仓鼠卵巢细胞(CHO-C_(28)细胞株),在相同的培养条件下比较国产和进口DMEM培养基的质量。结果表明,两种DMEM培养的细胞之生长及分泌的HBsAg之滴度没有显著改变,国产DMEM培养的细胞收液的沉淀... 我们用10L转瓶培养能高效表达HBsAg的重组中国仓鼠卵巢细胞(CHO-C_(28)细胞株),在相同的培养条件下比较国产和进口DMEM培养基的质量。结果表明,两种DMEM培养的细胞之生长及分泌的HBsAg之滴度没有显著改变,国产DMEM培养的细胞收液的沉淀收率略高于进口DMEM的,前者的最后收率也不低于后者。两种DMEM培养的细胞收液经纯化后,HBsAg的各项指标都符合基因工程乙肝疫苗制造及检定规程的标准,从试验结果可以看出,用国产DMEM培养基替代进口DMEM培养基是完全有可能的。 展开更多
关键词 DMEM培养基 cho-C28细胞株 HBSAG 纯化 乙肝疫苗
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CHO-EPO-EGFR细胞株的构建及在光固定EGF材料上的生长
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作者 关燕清 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 1999年第S1期130-131,共2页
采用人工细胞法 ( liposome)将两种质粒 p CEPO及 p RC/ CMV/ EGFR转染宿主细胞 -中国仓鼠卵巢细胞 ( CHO) ,得到表达水平稳定 ,形态良好的细胞株 CHO- EPO- EGFR。
关键词 人工细胞法 促红细胞生长因子(EPO) 中国仓鼠卵巢细胞(cho-K1) 表皮细胞生长因子受体(EGFR) 细胞生长活性
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CHO-DG44细胞瞬时转染条件的优化 被引量:2
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作者 黎美香 陈先金 +4 位作者 王晓慧 王亚玉 袁凤媚 汪才坤 谢秋玲 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第4期558-562,566,共6页
目的优化CHO-DG44细胞瞬时转染的条件。方法采用TubeSpin一次性生物反应器,以绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)为报告基因,氯醚酰亚胺(Polyether imide,PEI)为转染试剂,将质粒pIRESneo3-eGFP瞬时转染CHO-DG44细胞,优化瞬... 目的优化CHO-DG44细胞瞬时转染的条件。方法采用TubeSpin一次性生物反应器,以绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)为报告基因,氯醚酰亚胺(Polyether imide,PEI)为转染试剂,将质粒pIRESneo3-eGFP瞬时转染CHO-DG44细胞,优化瞬时转染的基本条件[细胞密度、DNA浓度和DNA:PEI比例(w/w)]以及其他条件(换液、渗透压和温度),采用优化的条件转染质粒pIRESneo3-eGFP,流式细胞术检测细胞转染效率,生物发光仪检测相对荧光强度。结果 CHO-DG44细胞瞬时转染的最佳条件为:采用XLG-P8培养基进行转染,细胞密度为2×106个/ml,DNA浓度为6.25μg/5 ml,DNA∶PEI(w/w)比例为1∶5;转染后4 h更换新鲜培养基,添加30 mmol/L NaCl,并于31℃继续培养。在此条件下,CHO-DG44细胞的瞬时转染效率可达81.45%,相对荧光强度可达9×105RFU/106cells。结论优化了CHO-DG44细胞瞬时转染的条件,为下一步药物蛋白的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 cho-DG44细胞 转染 瞬时表达 优化
原文传递
丝裂霉素诱导CHO-K1细胞凋亡及对其细胞周期的影响 被引量:1
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作者 李睿 熊义 +2 位作者 陈虹颖 郑从义 屈三甫 《武汉大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期251-255,共5页
采用荧光探针染色法,琼脂糖凝胶电泳分析方法,流式细胞仪技术研究丝裂霉素诱导CHO K1细胞凋亡及对其细胞周期的影响.结果显示,丝裂霉素处理CHO K1细胞后,细胞核质收缩凝集,核碎裂及出现凋亡小体;琼脂糖电泳呈现典型的DNA梯带;流式细胞... 采用荧光探针染色法,琼脂糖凝胶电泳分析方法,流式细胞仪技术研究丝裂霉素诱导CHO K1细胞凋亡及对其细胞周期的影响.结果显示,丝裂霉素处理CHO K1细胞后,细胞核质收缩凝集,核碎裂及出现凋亡小体;琼脂糖电泳呈现典型的DNA梯带;流式细胞仪检测到典型的细胞凋亡峰(亚G1峰),分别用10,15,20,25mg/L丝裂霉素处理CHO K1细胞,其细胞凋亡率分别为4.76%,9.20%,14.51%,37.46%,且凋亡率随药物浓度的升高而升高,显示两者的正相关性;作用浓度相同而改变处理时间时,发现细胞凋亡率随处理时间的延长而呈上升趋势;流式细胞仪细胞周期分析,显示随着丝裂霉素浓度提高或作用时间延长,G1 S期细胞百分比降低,G2/M期细胞百分比升高,Ap峰与G1 S期负相关,与G2/M期正相关. 展开更多
关键词 丝裂霉素 细胞凋亡 cho-K1 细胞周期 中国仓鼠卵巢细胞 抗肿瘤抗生素
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