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苏云金芽孢杆菌chiA,chiB全基因的克隆、表达及其序列分析 被引量：7
1
作者 陈艳玲 卢伟 +3 位作者 陈月华 肖亮 蔡峻 韩苗苗 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期843-848,共6页
以苏云金芽孢杆菌科默尔亚种15A3菌株基因组DNA为模版,用touchdown PCR方法扩增几丁质酶ChiA和ChiB的全基因序列(GenBank登录号:EF103273和DQ512474)。将PCR产物连接pUCm-T克隆载体,获得重组质粒pUCm-chiA和pUCm-chiB,分别转化E.coliXL-... 以苏云金芽孢杆菌科默尔亚种15A3菌株基因组DNA为模版,用touchdown PCR方法扩增几丁质酶ChiA和ChiB的全基因序列(GenBank登录号:EF103273和DQ512474)。将PCR产物连接pUCm-T克隆载体,获得重组质粒pUCm-chiA和pUCm-chiB,分别转化E.coliXL-Blue。克隆的几丁质酶基因可以利用本身的启动子异源表达各自的蛋白,不需要几丁质作为诱导物。表达的几丁质酶能够分泌到胞外。证明15A3菌株可组成型表达2种几丁质酶。经核苷酸及氨基酸序列分析证明,chiA基因全长1426bp,含有343bp的上游非编码区和1083bp的ORF,编码360个氨基酸。推测成熟蛋白分子量为36kD,只有一个几丁质酶催化域。chiB基因全长2279bp,含有248bp的上游非编码区和2031bp的ORF,编码676个氨基酸。推测成熟蛋白分子量约为70.6kD,具有三个功能域。核苷酸序列分析显示chiA和chiB的启动子所处的位置及转录起始碱基都不相同,-35区相同,而-10区有两个碱基不同,SD序列也不完全一致。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 CHIA chib 组成型表达 序列分析
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粘质沙雷氏菌几丁质酶chiB基因的克隆与序列分析(英文) 被引量：7
2
作者 叶辉 程备久 +2 位作者 朱苏文 甘德芳 冯春 《激光生物学报》 CAS CSCD 2007年第3期299-303,共5页
采用改进的方法提取粘质沙雷氏菌基因组DNA,通过PCR扩增,得到大小为1 500 bp特异性DNA片段(chiB基因),以pUC18质粒构建了pUC-ch iB克隆载体,转化至感受态细胞E.coliDH5α培养,并筛选出重组质粒。经测序分析,证明克隆片段与文献报道相一致。
关键词 几丁质酶 chib基因 克隆 序列分析
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几丁质酶基因表达载体pET-chiB的构建及其在大肠杆菌中的诱导表达(英文) 被引量：7
3
作者 叶辉 冯春 +2 位作者 程郢 朱苏文 程备久 《激光生物学报》 CAS CSCD 2008年第3期384-390,共7页
几丁质酶在降解几丁质的过程中起着重要作用,目前人们已从不同微生物体中分离并克隆出了多种几丁质酶基因。实验以pET-22b(+)为载体,利用从粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)克隆出的chiB基因,构建出原核生物表达载体pET-chiB。通过表... 几丁质酶在降解几丁质的过程中起着重要作用,目前人们已从不同微生物体中分离并克隆出了多种几丁质酶基因。实验以pET-22b(+)为载体,利用从粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)克隆出的chiB基因,构建出原核生物表达载体pET-chiB。通过表达载体pET-chiB的诱导表达,实验结果显示该基因表达的蛋白为可溶性蛋白,其分子量约为52 kD。利用不同参数包括时间、IPTG浓度和温度诱导表达载体pET-chiB表达并对表达产物进行SDS-PAGE分析,结果显示其诱导表达的最佳参数分别为4 h,0.5 mmol/L和25℃。这些结果为几丁质酶基因的进一步研究和几丁质酶工程菌生产奠定了良好的工作基础。 展开更多
关键词 几丁质酶基因 pET-chib 构建 表达 IPTG诱导
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几丁质酶基因chiB的克隆及表达分析 被引量：1
4
作者 王维婷 黄亦钧 +3 位作者 郭溆 张教洪 单成钢 王志芬 《中国农学通报》 CSCD 2014年第27期265-269,共5页
几丁质酶能够通过破坏昆虫组织中的几丁质起到抗虫作用。为获得高表达的植物几丁质酶基因载体,通过同源克隆的手段,从粘质沙雷氏菌中分离到了chiB基因,长度为992 bp,构建了pET28表达载体,并用IPTG诱导了该基因的表达。经分析发现该基因... 几丁质酶能够通过破坏昆虫组织中的几丁质起到抗虫作用。为获得高表达的植物几丁质酶基因载体,通过同源克隆的手段,从粘质沙雷氏菌中分离到了chiB基因,长度为992 bp,构建了pET28表达载体,并用IPTG诱导了该基因的表达。经分析发现该基因表达产物属于糖基水解酶(glycosyl hydrolases)18家族,并利用pCAMBIA2300构建了植物表达质粒pCAM-35S-chiB。 展开更多
关键词 几丁质酶 chib 基因克隆
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番茄灰霉病菌拮抗基因工程菌株Fh-chib培养条件的研究 被引量：1
5
作者 韩文霞 李伟泽 +1 位作者 陈立 陈五岭 《安徽农业科学》 CAS 2012年第25期12521-12523,共3页
[目的]筛选番茄灰霉病菌拮抗基因工程菌株Fh-chib的最佳培养条件。[方法]在单因素试验的基础上,采用正交试验设计对番茄灰霉病菌拮抗菌株Fh-chib的最佳培养条件(碳源、氮源和无机盐)进行了研究。[结果]工程菌株Fh-chib的最佳培养基配方... [目的]筛选番茄灰霉病菌拮抗基因工程菌株Fh-chib的最佳培养条件。[方法]在单因素试验的基础上,采用正交试验设计对番茄灰霉病菌拮抗菌株Fh-chib的最佳培养条件(碳源、氮源和无机盐)进行了研究。[结果]工程菌株Fh-chib的最佳培养基配方为0.50%葡萄糖、1.00%蔗糖、1.00%酵母膏、1.50%麸皮、1.00%黄豆饼粉、0.03%MgSO4和0.40%CaCl2。各个因素对发酵液抑菌活性影响的主次顺序为:葡萄糖>蔗糖>CaCl2>黄豆饼粉>酵母膏>麸皮>MgSO4。[结论]为该菌株的工业化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 番茄灰霉病菌 芽孢杆菌Fh-chib 培养基
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敦煌藏文文献ITJ.0570中的“Chibs-sde-bzhi”及其相关阐释
6
作者 班典 《攀登（藏文版）》 2022年第1期129-138,共10页
学术界对于敦煌文献ITJ.0570中关于“Chibs-sde-bzhi”的阐释存在分歧,有学者解读为“四骑队”,也有学者认为“马场四部落”。据吐蕃时期的军事律法和编制、传统教法史等的记载,“Chibs”一词最早指赞普及尚论等上层人物所属乘骑,可见... 学术界对于敦煌文献ITJ.0570中关于“Chibs-sde-bzhi”的阐释存在分歧,有学者解读为“四骑队”,也有学者认为“马场四部落”。据吐蕃时期的军事律法和编制、传统教法史等的记载,“Chibs”一词最早指赞普及尚论等上层人物所属乘骑,可见所谓“Chibs-sde-bzhi”为吐蕃时期叶茹“十大东岱”所属“西部护卫东岱”下的护卫兵马四队,应在“Rtsang-gling-kar-tshal”一带,现今为后藏南木林县邬郁地方。 展开更多
关键词 敦煌文献 chibs-sde-bzhi 吐蕃 护卫兵马四队
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苏云金芽胞杆菌几丁质酶B特性及其杀虫抑真菌的作用 被引量：16
7
作者 刘东 陈月华 +2 位作者 蔡峻 肖亮 刘传 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期180-185,共6页
【目的】本文对苏云金芽胞杆菌科默尔亚种15A3菌株(Bacillus thuringensis subsp.colmeri 15A3,简称Bt 15A3)几丁质酶B(chitinase B,简称ChiB)的特性及其杀虫抑真菌作用作了初步研究。【方法】将大肠杆菌(Escherichia coli)中表达的Bt 1... 【目的】本文对苏云金芽胞杆菌科默尔亚种15A3菌株(Bacillus thuringensis subsp.colmeri 15A3,简称Bt 15A3)几丁质酶B(chitinase B,简称ChiB)的特性及其杀虫抑真菌作用作了初步研究。【方法】将大肠杆菌(Escherichia coli)中表达的Bt 15A3菌株的ChiB,经过硫酸铵沉淀、透析、Sephadex G-200凝胶层析,最终得到初步纯化的几丁质酶。利用酶谱方法确定分子量,并且对2种分子量的酶蛋白进行了质谱鉴定。对各种金属离子对ChiB酶活的影响、最适反应温度及pH、温度及pH稳定性等理化特性进行研究,并且测定了ChiB抑制真菌孢子萌发的活性和对甜菜夜蛾和棉铃虫的杀虫增效作用。【结果】ChiB分子量约为70kDa。同时证明检测到的64kDa蛋白为70kDa蛋白C端的降解产物。ChiB最适作用温度为60℃,最适pH值为5,在温度20℃～60℃和pH4～8的范围内均有良好的稳定性。供试金属离子中Fe3+对ChiB的酶活有促进作用,Zn2+,Ag+有抑制作用。ChiB可抑制产黄青霉等真菌孢子的萌发,半抑制浓度(median effective inhibitory concentration,IC50)约为4μg/mL。该酶可以分别降低Bt晶体蛋白对甜菜夜蛾和棉铃虫的半致死浓度(median lethal concentration,LC50)26%和30%。【结论】Bt科默尔亚种的几丁质酶不但具有较稳定的理化性质,而且具有抑制真菌生长及明显的杀虫增效作用。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 chib 特性 抑真菌 杀虫增效
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肠易激综合征患者的生存质量评价及其影响因素分析 被引量：10
8
作者 徐雪梅 王巧民 +1 位作者 代子艳 宋继忠 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2009年第1期35-37,共3页
目的评价肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)病人的生存质量并分析其影响因素。方法对在消化专科门诊就诊、符合罗马Ⅲ诊断标准的73例IBS病人和78例其他功能性肠病(functional bowel diseases,FBD)患者采用肠易激综合征生存质... 目的评价肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)病人的生存质量并分析其影响因素。方法对在消化专科门诊就诊、符合罗马Ⅲ诊断标准的73例IBS病人和78例其他功能性肠病(functional bowel diseases,FBD)患者采用肠易激综合征生存质量量表汉化版(Chinese Irritable Bowel Syndrome-Quality Of Life Questinnaires,ChIBS-QOL),以及焦虑自评量表(Self-Rating Depression Scale,SAS)、抑郁自评量表(Self-Rating Depression Scale,SDS)进行问卷调查,并建立病人的资料档案。结果ChIBS-QOL的总条目及各维度得分,尤其是饮食限制方面,均明显低于对照组(P均<0.05)。将病人的性别、年龄、婚姻状态、职业、精神心理因素、文化程度、经济收入、病程、罗马Ⅲ分型,以及是否伴随功能性消化不良(FD)作为自变量,ChIBS-QOL作为因变量,进行多元逐步回归分析,筛选出精神心理因素(β=-17.729,t=-4.506,P<0.001)和文化程度(β=3.897,t=2.688,P<0.01)是影响ChIBS-QOL总分的主要因素。结论IBS患者的生存质量明显降低,精神心理因素和文化程度是影响其生存质量的重要因素。 展开更多
关键词 肠易激综合征 生存质量 chibS—QOL专用量表 精神心理因素 文化程度
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