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全自动荧光PCR检测技术在ICU下呼吸道感染诊断中的应用价值
1
作者 李丽娜 杜明梅 +3 位作者 焦宇诺 王杰 李春燕 王凯飞 《中华医院感染学杂志》 北大核心 2026年第1期27-31,共5页
目的 探讨下呼吸道六项病原体全自动荧光聚合酶链反应(PCR)检测的性能。方法 收集2024年6月-2025年2月北京某三甲医院呼吸ICU下呼吸道感染患者的下呼吸道分泌物样本299份,分别使用全自动荧光PCR检测及微生物培养法对病原菌进行检测,分... 目的 探讨下呼吸道六项病原体全自动荧光聚合酶链反应(PCR)检测的性能。方法 收集2024年6月-2025年2月北京某三甲医院呼吸ICU下呼吸道感染患者的下呼吸道分泌物样本299份,分别使用全自动荧光PCR检测及微生物培养法对病原菌进行检测,分析两种方法在流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、肺炎链球菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、铜绿假单胞菌6种细菌检出阳性率、阳性菌种数量、类别、浓度和检出一致率。结果 299份下呼吸道分泌物样本全自动荧光PCR检测阳性率(26.64%)高于微生物培养法(10.48%),存在统计学差异(P<0.05)。除肺炎链球菌外,其余5种菌两种检测方法阳性检出率比较差异有统计学意义(P<0.001),其中肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌全自动荧光PCR检出率较高,分别为48.83%和39.80%。两种检测方法检出阳性结果总体一致率为82.39%,具有统计学意义(P<0.001)。微生物培养和全自动荧光PCR检测方法的中位时间分别96 h和1.77 h,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 全自动荧光PCR检测法可用于下呼吸道病原学诊断,与微生物培养法检出一致性高、敏感性高,且检测菌种多,检测时间短,操作简单,可检测样本核酸浓度,临床应用价值高。 展开更多
关键词 荧光聚合酶链反应检测技术 下呼吸道感染 应用价值
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艾灸治疗伴肥胖斑块型银屑病患者关键差异蛋白测定及验证
2
作者 李隽 董玲玲 +2 位作者 张楠楠 聂振华 张理涛 《中国中西医结合皮肤性病学杂志》 2026年第1期1-9,共9页
目的 应用串联质量标签(TMT)方法,对艾灸治疗伴肥胖斑块型银屑病患者测定出关键差异蛋白,并应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证关键差异蛋白质表达情况,筛选潜在候选基因。方法 选取2020年10月... 目的 应用串联质量标签(TMT)方法,对艾灸治疗伴肥胖斑块型银屑病患者测定出关键差异蛋白,并应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证关键差异蛋白质表达情况,筛选潜在候选基因。方法 选取2020年10月—2021年10月期间来自天津市中医药研究院附属医院的18例符合诊断标准的伴肥胖斑块型银屑病住院患者,随机选取9例作为艾灸组,给予常规治疗及艾灸治疗;剩余9例作为非艾灸组,给予常规治疗。均应用TMT方法,对差异蛋白进行生物信息学分析,测定出关键差异蛋白质;又选取来自于体检中心的健康人群9例作为健康人对照组,运用蛋白质印迹法及qPCR检测出艾灸组治疗前后及健康人对照组关键差异蛋白表达量及对应的目的基因表达量,并进行各组比较。结果 通过生物信息学分析,结合银屑病、肥胖的病理生理特点,测定出艾灸组3个关键差异蛋白,均为下调表达,为微管蛋白α-1C链(TUBA1C),微管蛋白α-4A链(TUBA4A),NADH脱氢酶[泛素酮]1β亚复合物亚基11,线粒体(NDUFB11);而非艾灸组中这3个蛋白为非关键差异蛋白。采用qPCR检测这3个基因均有下调的趋势,其中TUBA1C在治疗后表达量更接近健康人对照组;运用蛋白质印迹法检测这3个蛋白表达量均有下降的趋势(均P<0.05),其中只有TUBA1C蛋白在治疗前表达量高于健康人对照组(P<0.05),治疗后低于健康人对照组。结论 艾灸通过下调TUBA1C蛋白,TUBA4A蛋白和NDUFB11蛋白脱氢酶这3个关键差异蛋白,从调节角质形成细胞的分化与增殖,减少受损的线粒体,改善氧化应激反应等方面,起到对银屑病及肥胖共病的治疗作用。通过q PCR方法及蛋白质印迹法,均验证了这3个关键蛋白在艾灸治疗后下调表达的趋势;推测TUBA1C在艾灸治疗伴肥胖银屑病患者中或起到重要作用,可能是银屑病与肥胖共病的潜在候选基因,亦或是艾灸治疗的关键作用靶点。 展开更多
关键词 银屑病 肥胖 艾灸 蛋白质组学 实时荧光定量聚合酶链式反应
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基于杂交链式反应的电化学传感技术检测四种药食同源食品中汞离子
3
作者 张鹏英 李芳 +3 位作者 刘文超 王耀 李兆周 刘云宏 《食品与发酵工业》 北大核心 2026年第2期346-352,共7页
汞具有高生物毒性,可经水源、土壤污染药食同源食品,危害人体健康。该研究构建了一种基于杂交链式反应(hybridization chain reaction, HCR)的电化学传感检测法,并用于荷叶、金银花、白芷、鱼腥草4种药食同源食品中Hg^(2+)的测定。以金... 汞具有高生物毒性,可经水源、土壤污染药食同源食品,危害人体健康。该研究构建了一种基于杂交链式反应(hybridization chain reaction, HCR)的电化学传感检测法,并用于荷叶、金银花、白芷、鱼腥草4种药食同源食品中Hg^(2+)的测定。以金磁纳米粒子固定识别探针,Hg^(2+)通过形成T-Hg^(2+)-T结构与cDNA竞争识别探针。HCR体系由cDNA链和2个发卡探针组成,cDNA与金磁识别探针杂交,暴露触发HCR序列,引发HCR反应,形成含二茂铁(ferrocene, Fc)的dsDNA长链,产生电流信号。结果显示,最优条件下用差分脉冲伏安法(differential pulse voltammetry, DPV)测定Hg^(2+)引起的Fc电流变化(ΔI),其线性方程为ΔI(μA)=0.434 5+0.143 1 lgC(ng/mL),R^(2) =0.994 0,检测限为0.01 ng/mL。对荷叶等4种药食同源样品中的Hg^(2+)进行测定,加标回收率为95.28%~104.77%。该方法灵敏度高、特异性强,在药食同源食品检测中应用前景广阔。 展开更多
关键词 汞离子 杂交链式反应 金磁纳米粒子 电化学 药食同源食品
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RNA解旋酶DHX37基因不同功能结构域载体的构建及鉴定
4
作者 黄立敏 张春丽 +2 位作者 孙晋 任松 田红卫 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2026年第1期10-17,共8页
目的:通过在线网站和软件预测人源RNA解旋酶DHX37基因的功能结构域,构建其不同功能结构域缺失载体,并验证构建载体的正确性。方法:以人源DEAH-box解旋酶37(hDHX37)质粒作为模板,基于同源重组克隆技术,应用SnapGene V 6.0.2软件设计截短... 目的:通过在线网站和软件预测人源RNA解旋酶DHX37基因的功能结构域,构建其不同功能结构域缺失载体,并验证构建载体的正确性。方法:以人源DEAH-box解旋酶37(hDHX37)质粒作为模板,基于同源重组克隆技术,应用SnapGene V 6.0.2软件设计截短体ATP结合结构域(ΔATP binding)、C末端结构域(CTD)、HA2亚基(HA2)和Oligos/Accharide结合折叠域(O/A binding fold)的功能结构域特异性引物;采用高保真DNA聚合酶Prime STAR GXL polymerase进行PCR扩增截短体目的片段ATP binding、c-terminal-1、c-terminal-2、HA2-1、HA2-2和O/A binding fold;利用重组克隆试剂盒将截短体片段定向克隆至经双酶切的pCMV-MCS-3×HA-Neo空载体;将重组载体转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞后,通过限制性内切酶HindⅢ酶切、琼脂糖凝胶电泳和DNA测序验证功能结构域载体的正确性。结果:PCR法扩增的目的片段ATP binding(2148 bp)、c-terminal-1(1326 bp)、c-terminal-2(1269 bp)、HA2-1(2205 bp)、HA2-2(894 bp)和O/A binding(2583 bp)长度与设计一致;HindⅢ单酶切突变质粒ΔATP binding、Δc-terminal、ΔHA2和ΔO/A binding fold,得到线性化DNA片段,长度分别为8939、7589、8036、8540和8027 bp,产物条带大小均与设计相符。DNA测序Blast对比分析,ΔATP binding缺失ATP binding结构域(1~442)、Δc-terminal缺失c-terminal结构域(443~735)、ΔHA2缺失HA2结构域(736~861)和ΔO/A binding fold缺失O/A binding fold结构域(862~1158),分别缺失1326、879、375和891 bp,各突变质粒缺失的结构域位置和长度与设计完全一致。结论:成功构建hDHX37基因的ΔATP binding、Δc-terminal、ΔHA2和ΔO/A binding fold 4个不同功能结构域载体。 展开更多
关键词 DEAH-box解旋酶37 功能结构域载体 重组克隆 限制性酶切 聚合酶链式反应
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呼吸道样本NaOH液化处理对核酸检测的影响及方法优化选择
5
作者 赵伟凯 王子怡 +6 位作者 刘文静 孙玉杰 刘仪威 徐英春 陈雨 杨启文 伊洁 《现代检验医学杂志》 2026年第1期175-179,共5页
目的探讨呼吸道样本NaOH处理对核酸检测效率的影响及优化方法选择,为呼吸道样本核酸提取前处理流程提供科学依据。方法从北京协和医院检验科收集16份鼻咽拭子(NPS)样本和24份痰液样本。将浓度为1×106copies/ml的肺炎支原体(MP)DNA... 目的探讨呼吸道样本NaOH处理对核酸检测效率的影响及优化方法选择,为呼吸道样本核酸提取前处理流程提供科学依据。方法从北京协和医院检验科收集16份鼻咽拭子(NPS)样本和24份痰液样本。将浓度为1×106copies/ml的肺炎支原体(MP)DNA国家标准品分别用病毒保存液和痰液稀释,制备成模拟阳性鼻咽拭子样本和模拟阳性痰液样本。临床鼻咽拭子样本和模拟鼻咽拭子样本分别按照1∶1比例使用生理盐水、1mol/L NaOH,胰酶进行液化处理。模拟痰液样本按照1∶1比例分别用胰酶和1mol/L NaOH液化处理。模拟痰液样本用1mol/L NaOH液化后,加不同浓度三羟甲基氨基甲烷盐酸盐[Tris(hydroxymethyl)aminomethane hydrochloride,Tris-HCl]优化处理。所有样本均使用普通磁珠法核酸提取和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增。运用t检验比较不同液化试剂处理样本后核酸Ct值的组间差异。结果与生理盐水相比,1mol/L NaOH处理显著抑制鼻咽拭子中甲型流感病毒(IFVA)和呼吸道合胞病毒(RSV)RNA的检测,结果由阳性转为阴性;而处理前后MP和腺病毒(ADV)DNA的Ct值差异无统计学意义(t=2.644、2.862,均P>0.05)。在模拟鼻咽拭子样本中,1mol/L NaOH液化处理对2000和1000 copies/ml MP DNA无影响(t=0.946、1.925,均P>0.05),但对低载量(200和500 copies/ml)的检测具有显著抑制作用(t=3.085、2.566,均P<0.05)。胰酶处理对DNA和RNA病原体核酸检测均无显著影响(均P>0.05)。模拟痰液样本经1mol/L NaOH液化后,MP DNA Ct值相比胰酶组显著升高(t=3.935,P<0.05),使用不同浓度(1、0.5和0.25 mol/L)Tris-HCl(pH=7)中和后Ct值差异无统计学意义(t=0.333、1.984、0.182,均P>0.05)。结论1mol/L NaOH液化痰液对PCR检测具有抑制作用,可能导致假阴性结果。通过添加Tris-HCl可以一定程度缓冲NaOH的抑制,提高PCR检测的准确性。 展开更多
关键词 氢氧化钠 液化 核酸 聚合酶链反应 三羟甲基氨基甲烷盐酸盐
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泰和乌鸡的特异性PCR鉴定
6
作者 许源升 张恬 +4 位作者 刘天睿 赵玉洋 蒋超 李慧 袁媛 《中国现代中药》 2026年第2期222-229,共8页
目的:建立泰和乌鸡的特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴定方法,解决泰和乌鸡与其他乌鸡品种的混淆使用问题,完善乌鸡药材优质基原品种泰和乌鸡的药用质量控制体系。方法:收集泰和乌鸡与其他品种乌鸡、非乌鸡样品,采用泰和乌鸡特异性鉴别引物... 目的:建立泰和乌鸡的特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴定方法,解决泰和乌鸡与其他乌鸡品种的混淆使用问题,完善乌鸡药材优质基原品种泰和乌鸡的药用质量控制体系。方法:收集泰和乌鸡与其他品种乌鸡、非乌鸡样品,采用泰和乌鸡特异性鉴别引物,建立特异性PCR鉴定方法并优化影响PCR反应的条件。结果:特异性PCR鉴定方法退火温度为62℃,循环24次,DNA模板用量约100 ng。经PCR及凝胶电泳后,可在泰和乌鸡样品DNA扩增产物约410 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带,其他品种无该条带。结论:建立的特异性PCR鉴定方法可准确对泰和乌鸡进行鉴别,为其药用质量控制与标准研究提供了参考。 展开更多
关键词 乌鸡 泰和乌鸡 道地基原 特异性聚合酶链式反应 质量控制
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3种食源性致病菌SDS-PMA-mRT-qPCR检测方法建立及其在乳品中的应用
7
作者 刘霈霖 匙辰鹏 +1 位作者 王雁伟 艾鹏飞 《食品工业科技》 北大核心 2026年第1期311-317,共7页
本研究利用十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)联合叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)预处理样品后,采用多重实时荧光定量PCR(multiple real-time quantitative polymerase chain reaction,m RTqPCR)方法快速、准确检测... 本研究利用十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)联合叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)预处理样品后,采用多重实时荧光定量PCR(multiple real-time quantitative polymerase chain reaction,m RTqPCR)方法快速、准确检测乳制品中沙门氏菌、单增李斯特菌和产志贺毒素大肠埃希氏菌3种食源性致病菌。通过对沙门氏菌中的invA基因、单增李斯特菌中的hly基因和产志贺毒素大肠埃希氏菌中的stx基因的保守序列分别设计特异性引物和探针,建立mRT-qPCR反应体系,探讨PMA预处理消除由死菌造成的检测的假阳性结果,并对检测的特异性、检出限、稳定性以及模拟样品中的检测效果进行了研究。结果表明,PMA结合SDS的预处理能有效排除死菌对mRT-qPCR检测结果的干扰,最佳PMA浓度为20μmol/L;建立的mRT-qPCR方法特异性强,在18株非目标菌的干扰下仅对3种目标菌进行特异性扩增;灵敏度高,3种目标菌的检出限均为10^(2) CFU/mL;稳定性好,不同批次内和批次间的重复性检测的变异系数均小于1%;对不同污染乳品的检测结果与国家标准中的培养法一致,检测周期约7 h。本研究建立的SDS-PMA-mRT-qPCR方法可以实现对沙门氏菌、单增李斯特菌和产志贺毒素大肠埃希氏菌的快速检测,为乳品安全提供技术支持。 展开更多
关键词 多重实时荧光定量PCR(mRT-qPCR) 叠氮溴化丙锭 沙门氏菌 单增李斯特菌 产志贺毒素大肠埃希氏菌
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基于反应挤出的聚丁二酸丁二醇酯扩链改性研究
8
作者 陈怡杰 张震 +1 位作者 姜莱 赵世成 《中国塑料》 北大核心 2026年第2期6-10,共5页
基于双螺杆挤出机,以过氧化苯甲酰(BPO)作为扩链剂,对低分子量聚丁二酸丁二醇酯(PBS)进行扩链改性研究。系统探究了BPO添加量对改性PBS的黏均分子量、熔体质量流动速率、熔融结晶行为、力学性能以及流变行为的影响规律。结果表明,当添... 基于双螺杆挤出机,以过氧化苯甲酰(BPO)作为扩链剂,对低分子量聚丁二酸丁二醇酯(PBS)进行扩链改性研究。系统探究了BPO添加量对改性PBS的黏均分子量、熔体质量流动速率、熔融结晶行为、力学性能以及流变行为的影响规律。结果表明,当添加少量BPO时,PBS的黏均分子量从103878 g/mol显著提升至147475 g/mol,熔体质量流动速率从21.1 g/10 min降低至4.5 g/10 min,结晶温度从63.1℃升高至94.3℃;改性后PBS的拉伸强度、弯曲强度、抗冲击强度和弯曲模量分别提升了13.2%、53.9%、40.5%和40.0%,同时其流变行为也得到了明显改善。 展开更多
关键词 聚丁二酸丁二醇酯 反应挤出 扩链 过氧化苯甲酰 双螺杆挤出机
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感染性角膜炎的病原学诊断和防治新进展
9
作者 兰雨帆 徐梅 《国际眼科杂志》 2026年第1期39-44,共6页
感染性角膜炎(IK)是全球重要的致盲性眼病,早期诊断及治疗对改善预后及减轻经济负担至关重要。文章总结了IK诊断及治疗方式的发展,以期为临床诊治提供新思路。在诊断方面,除传统微生物培养与共聚焦显微镜等外,分子诊断技术如高通量测序(... 感染性角膜炎(IK)是全球重要的致盲性眼病,早期诊断及治疗对改善预后及减轻经济负担至关重要。文章总结了IK诊断及治疗方式的发展,以期为临床诊治提供新思路。在诊断方面,除传统微生物培养与共聚焦显微镜等外,分子诊断技术如高通量测序(NGS)和CRISPR、纳米技术系统显著提升了多重病原体检测的灵敏度与特异性,尤其适用于混合感染与罕见病原体的鉴定。治疗上,面对日益严峻的耐药性问题,纳米技术、生物活性敷料等新型递药系统通过增强药物渗透性与滞留性,显著提高抗菌效果;免疫调节和光动力治疗则能有效控制炎症反应改善预后;中西医结合治疗、微生物群疗法在降低复发率上展现出明显优势;干细胞疗法为严重角膜损伤的修复提供了新希望;基因治疗则通过基因编辑或基因的转导,从根源上增强角膜防御能力并减少治疗的副作用。 展开更多
关键词 感染性角膜炎 诊断 共聚焦显微镜 聚合酶链反应 微生物群疗法 纳米技术 治疗
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基于微滴式数字聚合酶链式反应定量检测发酵乳中霉菌
10
作者 陈佳 陈麟丰 +2 位作者 李梦宇 姜邵佳 肖霄 《乳业科学与技术》 2026年第1期41-47,共7页
为解决发酵乳中霉菌检测周期长、定量难的问题,以发酵乳中常见霉菌为对象,通过微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)对样品中的目标序列进行绝对定量的基因拷贝数检测,建立市售发酵乳中霉菌的系... 为解决发酵乳中霉菌检测周期长、定量难的问题,以发酵乳中常见霉菌为对象,通过微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)对样品中的目标序列进行绝对定量的基因拷贝数检测,建立市售发酵乳中霉菌的系统检测方法。确定了适用于发酵乳霉菌检测的最优ddPCR反应体系及扩增程序,所建立的方法在特异性、灵敏度及定量准确性方面均呈现良好性能。特异性检验显示,仅目标霉菌(黑曲霉、橘青霉、产黄青霉)出现阳性扩增,对酵母菌、乳酸菌及致病菌无交叉反应;灵敏度检测表明,最低检测质量浓度(0.625 ng/μL)时,阳性基因拷贝数为9 copies/μL。此外,本方法还确定了菌悬液浓度与DNA质量浓度、DNA质量浓度与基因拷贝数的线性关系式,且相关系数均大于0.99,在此基础上得到菌悬液浓度与基因拷贝数的线性关系式。在人工污染样品检测中,ddPCR方法结果与GB 4789.15—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数》方法具有一致性,且无需标准曲线即可实现绝对定量,有效缩短检测周期。 展开更多
关键词 发酵乳 霉菌计数 酵母 微滴式数字聚合酶链式反应 定量检测
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荧光定量PCR技术在母体细胞污染鉴定和快速产前诊断中的应用
11
作者 赵燕玲 戴立华 +1 位作者 朱峰 王红坤 《中国妇幼健康研究》 2026年第1期31-38,共8页
目的评价荧光定量PCR(QF-PCR)技术在母体细胞污染(MCC)鉴定和常见染色体非整倍体快速产前诊断中的临床应用价值。方法建立MCC浓度梯度QF-PCR检测模型,分析不同比例MCC下的短串联重复序列(STR)图谱特点。回顾性分析577例产前羊水样本中MC... 目的评价荧光定量PCR(QF-PCR)技术在母体细胞污染(MCC)鉴定和常见染色体非整倍体快速产前诊断中的临床应用价值。方法建立MCC浓度梯度QF-PCR检测模型,分析不同比例MCC下的短串联重复序列(STR)图谱特点。回顾性分析577例产前羊水样本中MCC发生率,通过与羊水核型分析结果比对,评估QF-PCR对13、18、21、X及Y染色体非整倍体的检测效能。结果在10%及以上的MCC模型中,STR图谱出现明显可辨别“污染峰”特征。577例羊水样本中,4例存在MCC(0.69%,4/577);QF-PCR检出常见染色体异常倍性60例,包括21-三体24例、18-三体11例、XO单体3例、XXX综合征4例、XXY综合征6例和XYY综合征6例,提示倍性异常6例。羊水核型分析检出异常69例,两种检测结果比较显示,QF-PCR对52例染色体非整倍体的检出与核型分析完全一致;2例核型分析结果为Y染色体结构异常的样本,QF-PCR判定为XYY;6例性染色体嵌合的样本,QF-PCR仅能提示倍性异常而无法确定具体构成;另有9例染色体平衡重组和片段异常由于QF-PCR试剂盒的局限性未检出。结论荧光定量PCR技术可有效识别≥10%的母体细胞污染,对常见染色体非整倍体的诊断具有快速和高敏感性的优势,但对染色体嵌合组成、平衡易位和拷贝数变异等检出存在局限性,建议将其作为产前常见染色体非整倍体诊断的辅助技术手段。 展开更多
关键词 母体细胞污染 荧光定量PCR 产前诊断 染色体非整倍体
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膜法改进十六烷基三甲基溴化铵法结合实时荧光聚合酶链式反应检测高色素食品DNA
12
作者 汤一超 段吴燕 +3 位作者 孙思扬 马驰远 夏彪 董永全 《食品安全质量检测学报》 2026年第1期206-217,共12页
目的 建立膜法改进十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide, CTAB)法结合实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)检测高色素食品DNA的方法。方法 以黑芝麻、茶籽粕和菜籽粕为样本,采用0.7μm玻璃纤维膜... 目的 建立膜法改进十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide, CTAB)法结合实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)检测高色素食品DNA的方法。方法 以黑芝麻、茶籽粕和菜籽粕为样本,采用0.7μm玻璃纤维膜结合70%乙醇淋洗液及三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸[tris(hydroxymethyl)aminomethane ethylenediaminetetraacetic acid, TE]缓冲液洗脱3次的优化方案。通过滤膜特异性吸附和选择透过性去除色素,对比传统CTAB法与膜法改进CTAB法的提取效果。利用实时荧光PCR技术检测内源基因,评估DNA纯度和扩增效率。结果 改进方法获得的DNA脱色效果显著优于传统CTAB法,3种样本均成功检测到内源基因, DNA质量浓度均在100 ng/μL以上,循环阈值(cycle threshold, Ct)在20~25之间,而传统CTAB法因色素残留导致实时荧光PCR扩增失败。结论 膜法改进CTAB法通过简化纯化步骤、提升脱色效率,显著提高了高色素食品的DNA提取及检测成功率,为食品安全检测提供了高效可靠的技术支持。 展开更多
关键词 玻璃纤维膜 核酸纯化 脱色 实时荧光聚合酶链式反应 高色素食品
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前列腺癌中tRF-Glu-TTC-2高表达的临床病理意义
13
作者 王军 王磊 张亚平 《实用医技杂志》 2026年第1期58-61,I0006,共5页
目的通过研究tRNA衍生片段tRF-Glu-TTC-2在前列腺癌(PCa)中的表达和临床病理学意义的研究,探讨其作为PCa诊疗中新靶点的可能性。方法选择扬州大学附属医院2018年1月至2021年12月住院患者3对新鲜PCa组织与正常前列腺组织,委托上海康成生... 目的通过研究tRNA衍生片段tRF-Glu-TTC-2在前列腺癌(PCa)中的表达和临床病理学意义的研究,探讨其作为PCa诊疗中新靶点的可能性。方法选择扬州大学附属医院2018年1月至2021年12月住院患者3对新鲜PCa组织与正常前列腺组织,委托上海康成生物技术有限公司通过tRF和tiRNA微阵列检测PCa的t RF和tiRNA表达谱,选择上调倍数最大的t RF-Glu-TTC-2为研究对象,并经实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)验证,依据所检测的t RF-Glu-TTC-2核苷酸序列设计探针,经RNA原位杂交技术(RISH)的方法检测tRF-Glu-TTC-2在PCa组织的表达以及其表达情况与临床病理参数之间的相关性。结果tRF&tiRNA表达谱和qRT-PCR验证实验显示PCa中t RF-Glu-TTC-2表达水平明显增加;其核苷酸序列是5′-TCCCACATGGTCTAGCGGTTAGGATTCCTGG-3′,选择此核苷酸序列的核心核苷酸序列设计探针,行RISH检测显示tRF-GluTTC-2在PCa细胞中阳性表达于胞质。t RF-Glu-TTC-2高表达与PCa肿瘤大小密切相关(χ^(2)=8.122,P=0.004),但与年龄大小、是否伴有淋巴结转移、TNM临床分期无关(均P>0.05)。结论tRF-Glu-TTC-2可能是一种新的致癌基因,其在PCa组织中的表达与肿瘤大小、Gleason评分密切相关,这为PCa临床诊疗提供了新的思路。 展开更多
关键词 前列腺癌 tRF-Glu-TTC-2 临床和病理学意义 荧光定量聚合酶链反应
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手持式实时荧光定量聚合酶链式反应仪现场快速检测肉类样本猪、鸡、鸭源性成分
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作者 刘晋玎 霍雨美 +2 位作者 高妞 郭相杰 严江伟 《食品安全质量检测学报》 2026年第1期25-34,共10页
目的 建立适用于手持式实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)仪肉类成分检测方法,实现肉源性成分现场快速检测。方法 本研究以猪、鸡、鸭源性成分为研究对象,探索肉类样本前处理工具、裂解液成分、裂解液浓度、... 目的 建立适用于手持式实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)仪肉类成分检测方法,实现肉源性成分现场快速检测。方法 本研究以猪、鸡、鸭源性成分为研究对象,探索肉类样本前处理工具、裂解液成分、裂解液浓度、裂解液添加量等对所提DNA的影响,构建肉类样本快速预处理方法;筛选特异性引物和探针,利用手持式实时荧光定量PCR一体机进行特异性、灵敏度、检出限验证,绘制扩增标准曲线;对真实单一肉类样品和混合样品进行检测。结果 建立的肉类样本快速预处理方法 5 min完成操作,提取DNA耗时10 min,提取的DNA满足后续实验;猪、鸡、鸭检测体系均具有良好的特异性;对猪、鸡、鸭源性DNA成分的检出限分别为0.010、0.001、0.001 ng/µL;所建立的标准曲线线性关系良好,猪肉DNA扩增标准曲线:Y=–3.956X+38.803, r^(2)=0.9956;鸡肉DNA扩增标准曲线:Y=–3.499X+40.491, r^(2)=0.9909;鸭肉DNA扩增标准曲线:Y=–3.961X+39.192, r^(2)=0.9962;对28份肉类样本检测,成功率为100%。结论 本研究建立的方法可用于在手持式实时荧光定量PCR一体机上对猪、鸡、鸭肉类样本的快速、准确检测,为肉类食品的市场监管和相关执法提供有力的技术保障。 展开更多
关键词 快速预处理 手持式实时荧光定量聚合酶链式反应 猪、鸡、鸭源性成分 快速检测 食品真实性 现场检测
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船用PCR实验室空调通风系统的设计与调试
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作者 王小强 张怡敏 +1 位作者 张盈彬 王绅 《造船技术》 2026年第1期50-55,共6页
针对船用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)实验室的建造问题,进行主要规范适用性分析。从舱室布置设计、舱室隔热设计和舱室密性设计等方面进行总体布置设计,从舱室负荷、送排风的压差风量和空调通风机组负荷等方面进行... 针对船用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)实验室的建造问题,进行主要规范适用性分析。从舱室布置设计、舱室隔热设计和舱室密性设计等方面进行总体布置设计,从舱室负荷、送排风的压差风量和空调通风机组负荷等方面进行空调通风计算,从送排风设计、供电设计、压差自控设计、空调通风设备排水设计和防污染设计等方面进行空调通风系统设计,并进行空调通风系统调试。该研究可为我国船用PCR实验室规范的制定提供有效支撑。 展开更多
关键词 船用聚合酶链式反应实验室 空调通风系统 医学生物安全二级实验室 送风 排风 压差
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鸭血制品中猪、鸡、鸭源性成分的多重实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法建立与应用
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作者 张从党 王均华 +4 位作者 吴海晶 王亚平 汪仕韬 包静云 张亚清 《肉类研究》 北大核心 2026年第3期62-68,共7页
为应对鸭血制品中动物源性成分的掺杂问题,基于TaqMan探针多重实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,real-time PCR)技术开发一种可同步检测猪、鸡和鸭源性成分的高效检测方法。... 为应对鸭血制品中动物源性成分的掺杂问题,基于TaqMan探针多重实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,real-time PCR)技术开发一种可同步检测猪、鸡和鸭源性成分的高效检测方法。该方法针对上述物种线粒体16S rDNA基因的保守区域设计通用引物(UN-F/R),并在其可变区域设计特异性分子信标探针(Z-Probe、J-Probe、Y-Probe),通过优化反应条件及验证实验(特异性及灵敏度),建立多重real-time PCR检测体系。为评估市场掺假现状,采集本地19份散装鸭血制品进行检测。结果表明,本方法能够在单管反应中同时检测并区分猪、鸡和鸭源性成分的荧光信号,展现出较高的特异性和灵敏度,其在鸭血制品中灵敏度达0.06 ng/μL,检出限为0.10%。实际样品检测显示,19份鸭血样品中1份检出猪源性成分,11份检出鸡源性成分,12份检出鸭源性成分,与GB/T 38164—2019《常见畜禽动物源性成分检测方法 实时荧光PCR法》方法结果一致,但本方法灵敏度更高。因此,本研究建立的方法能有效、准确地鉴别鸭血制品中的猪、鸡源性掺杂成分,为多物种源性鉴别提供了准确、可靠的技术方法。 展开更多
关键词 鸭源性成分 线粒体基因 多重实时荧光定量聚合酶链式反应 TAQMAN探针 物种鉴别
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DNA自组装荧光探针用于miRNA的高通量检测
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作者 李泓延 李玉玲 +2 位作者 凯迪日耶·阿帕尔阿吉 吕尚纹 王瑞珂 《广东化工》 2026年第4期46-50,24,共6页
目的:本实验通过DNA纳米棱镜(DNP)与杂交链式反应(HCR)联用策略设计DNA荧光信号探针,结合阵列生物芯片构建出一种高灵敏检测肿瘤标志物miRNA-21的荧光生物传感方法。方法:将DNP包被于阵列芯片后,DNP可与miRNA-21碱基互补配对,当后者存在... 目的:本实验通过DNA纳米棱镜(DNP)与杂交链式反应(HCR)联用策略设计DNA荧光信号探针,结合阵列生物芯片构建出一种高灵敏检测肿瘤标志物miRNA-21的荧光生物传感方法。方法:将DNP包被于阵列芯片后,DNP可与miRNA-21碱基互补配对,当后者存在时,可触发HCR探针,其由两个可编程的单链DNA组成,两者可循环杂交且负载了大量荧光染料Cy3分子,通过正置荧光显微镜捕获阵列芯片上的荧光图像,对复杂生物样本中痕量miRNA-21进行高灵敏检测。结果:在最优反应参数下,当miRNA-21浓度在0.1 nM~10.0μM范围时,荧光生物传感器检测出的荧光强度与miRNA-21浓度的对数值成正比且有良好的线性关系,样品消耗量为3μL,检测通量达到60 tests/h。结论:本实验所提出的荧光生物传感器具有检测通量高、样品消耗量少、选择性高、灵敏度高等优势,在肿瘤的早期预防、诊断和治疗以及术后监测中展示出较好的应用前景。 展开更多
关键词 DNA纳米棱镜 杂交链式反应 荧光信号 生物传感器 MIRNA-21
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基于“链式反应”的高架桥下失落空间改造策略研究——以长春市为例
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作者 杨舒淼 《城市建筑》 2026年第3期90-92,共3页
为探讨城市存量规划中高架桥下失落空间的利用策略和发展路径,文章以“链式反应”为切入点探索长春市高架桥下空间的更新策略,从“链式反应”原理、运行机制和案例研究出发为高架桥下失落空间活力塑造提供利用策略。分析长春市高架桥下... 为探讨城市存量规划中高架桥下失落空间的利用策略和发展路径,文章以“链式反应”为切入点探索长春市高架桥下空间的更新策略,从“链式反应”原理、运行机制和案例研究出发为高架桥下失落空间活力塑造提供利用策略。分析长春市高架桥下空间现状及问题,结合“链式反应”原理提出功能、社区、文化三类触媒案例,以及弹性功能空间、多元城市客厅和空间文化情感表达三个维度的失落空间优化策略。以期推动城市动态治理实践及微更新,带动城市空间存量建设。 展开更多
关键词 链式反应 高架桥下空间 更新改造
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毒力基因表达差异的致泻大肠埃希氏菌聚合酶链反应检测方法的优化
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作者 张平 陆英 《食品安全质量检测学报》 2026年第1期155-160,共6页
目的优化GB 4789.6—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验》中的致泻大肠埃希氏菌聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。方法选取9株致泻大肠埃希氏菌标准菌株,针对13种毒力基因和1个管家基因... 目的优化GB 4789.6—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验》中的致泻大肠埃希氏菌聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。方法选取9株致泻大肠埃希氏菌标准菌株,针对13种毒力基因和1个管家基因,采用PCR扩增结合琼脂糖凝胶电泳进行检测分析;电泳染色采用GelRed泡染法。结果GB 4789.6—2016中提示为等效基因的escV/eae和ipaH/invE毒力基因在部分标准菌株中存在表达差异;采用GelRed泡染法的琼脂糖凝胶电泳可获得更清晰、特异性更强的电泳图谱。结论建议在使用国家标准方法鉴定致泻大肠埃希氏菌型别时,应同时靶向escV和eae基因、ipaH和invE基因,并采用GelRed泡染技术,以提高检测结果的准确性和可靠性。 展开更多
关键词 致泻大肠埃希氏菌 毒力基因 聚合酶链反应 凝胶电泳
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单细胞PCR技术及其应用
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作者 张丽桐 朱建华 《生命的化学》 2026年第1期38-44,共7页
聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)是分子生物学实验的基础,而单细胞聚合酶链式反应(single-cell polymerase chain reaction,sc-PCR)是在单细胞水平上解析基因表达和基因组差异的技术,避免了多细胞水平研究带来的诸多问题... 聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)是分子生物学实验的基础,而单细胞聚合酶链式反应(single-cell polymerase chain reaction,sc-PCR)是在单细胞水平上解析基因表达和基因组差异的技术,避免了多细胞水平研究带来的诸多问题,为揭示细胞异质性、追踪细胞谱系和解析复杂生物系统提供了强大工具,为生命科学研究开辟了新的视野。近年来,sc-PCR技术在灵敏度、特异性和多重检测能力等方面都取得了显著进展,已成为一种较成熟的研究方法。本文系统综述了sc-PCR技术的操作流程、关键技术难点,并重点结合其在基因表达谱构建与基因分析中的研究方法与应用成果,为相关领域研究提供更具参考价值的综述内容。 展开更多
关键词 单细胞聚合酶链式反应 膜片钳 基因表达谱 基因分析
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