构建并表达猫杯状病毒(FCV)VP1及其截短体VP1-CDE,并评价其免疫原性。将目标基因克隆至pET28a-SUMO载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导尝试可溶性表达。SDS-PAGE结果显示,VP1蛋白与VP1-CDE蛋白分子质量分别约为60 k Da与15 k Da,...构建并表达猫杯状病毒(FCV)VP1及其截短体VP1-CDE,并评价其免疫原性。将目标基因克隆至pET28a-SUMO载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导尝试可溶性表达。SDS-PAGE结果显示,VP1蛋白与VP1-CDE蛋白分子质量分别约为60 k Da与15 k Da,与理论值相符;用6×His标签抗体进行Western-blot试验证实其正确性。重组蛋白经Ni^(2+)亲和层析纯化后,与弗氏佐剂等体积乳化后免疫BALB/c小鼠,采集血清进行间接ELISA,结果显示,VP1与VP1-CDE组均能诱导高滴度针对相应蛋白的特异性Ig G;在前3次免疫时,抗体水平随免疫次数增加而升高,第4次免疫后第14天测得抗体水平和第3次免疫后第14天的水平无显著差异,抗体水平达到平台期。病毒中和试验结果表明,三免后第14天VP1-CDE组中和抗体滴度达1∶223,VP1组为1∶178,二者水平相当。综上所述,VP1-CDE以较小分子质量实现与全长VP1相当的免疫原性,且表达中更易实现正确折叠、不易形成包涵体,可作为FCV亚单位疫苗的优选抗原,为后续疫苗研发提供了试验依据。展开更多
稳态、饱和条件下,以速度v=0.214 cm min-1和0.470 cm min-1进行混合置换实验,研究大肠杆菌在砂质壤土中的运移,并根据平衡与非平衡假设下,对流-弥散方程数学模型进行数值模拟。结果表明,含非平衡的双点吸附、且含有不可逆滞留项的模型...稳态、饱和条件下,以速度v=0.214 cm min-1和0.470 cm min-1进行混合置换实验,研究大肠杆菌在砂质壤土中的运移,并根据平衡与非平衡假设下,对流-弥散方程数学模型进行数值模拟。结果表明,含非平衡的双点吸附、且含有不可逆滞留项的模型能够较好地模拟大肠杆菌在砂质壤土中的运移。模拟和实验结果均表明,大肠杆菌的BTC(Breakthrough Curve穿透曲线)与示踪剂相比峰值明显降低,拖尾明显,且出现延迟,总的流出量也明显少于示踪剂;当水流速度由0.214 cm min-1增至0.470 cm min-1时,大肠杆菌BTC峰值由0.05增至0.2,且随速度的增加,滞留系数减小。展开更多
文摘构建并表达猫杯状病毒(FCV)VP1及其截短体VP1-CDE,并评价其免疫原性。将目标基因克隆至pET28a-SUMO载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导尝试可溶性表达。SDS-PAGE结果显示,VP1蛋白与VP1-CDE蛋白分子质量分别约为60 k Da与15 k Da,与理论值相符;用6×His标签抗体进行Western-blot试验证实其正确性。重组蛋白经Ni^(2+)亲和层析纯化后,与弗氏佐剂等体积乳化后免疫BALB/c小鼠,采集血清进行间接ELISA,结果显示,VP1与VP1-CDE组均能诱导高滴度针对相应蛋白的特异性Ig G;在前3次免疫时,抗体水平随免疫次数增加而升高,第4次免疫后第14天测得抗体水平和第3次免疫后第14天的水平无显著差异,抗体水平达到平台期。病毒中和试验结果表明,三免后第14天VP1-CDE组中和抗体滴度达1∶223,VP1组为1∶178,二者水平相当。综上所述,VP1-CDE以较小分子质量实现与全长VP1相当的免疫原性,且表达中更易实现正确折叠、不易形成包涵体,可作为FCV亚单位疫苗的优选抗原,为后续疫苗研发提供了试验依据。
文摘稳态、饱和条件下,以速度v=0.214 cm min-1和0.470 cm min-1进行混合置换实验,研究大肠杆菌在砂质壤土中的运移,并根据平衡与非平衡假设下,对流-弥散方程数学模型进行数值模拟。结果表明,含非平衡的双点吸附、且含有不可逆滞留项的模型能够较好地模拟大肠杆菌在砂质壤土中的运移。模拟和实验结果均表明,大肠杆菌的BTC(Breakthrough Curve穿透曲线)与示踪剂相比峰值明显降低,拖尾明显,且出现延迟,总的流出量也明显少于示踪剂;当水流速度由0.214 cm min-1增至0.470 cm min-1时,大肠杆菌BTC峰值由0.05增至0.2,且随速度的增加,滞留系数减小。
