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黄连转录因子CcWRKY40调控生物碱生物合成的研究
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作者 何沐 余晶晶 +5 位作者 张可迪 刘雨翔 孙莎 平姿涵 李学刚 张迎春 《中国中药杂志》 北大核心 2025年第19期5373-5381,共9页
黄连生物碱的生物合成通路已初步阐明,但其合成调控机制还有待深入研究。该研究从黄连转录组数据中筛选到1个茉莉酸甲酯诱导下高表达的转录因子CcWRKY40。为探究CcWRKY40对生物碱生物合成的调控机制,克隆CcWRKY40基因并进行生物信息学分... 黄连生物碱的生物合成通路已初步阐明,但其合成调控机制还有待深入研究。该研究从黄连转录组数据中筛选到1个茉莉酸甲酯诱导下高表达的转录因子CcWRKY40。为探究CcWRKY40对生物碱生物合成的调控机制,克隆CcWRKY40基因并进行生物信息学分析;通过烟草转化实验对CcWRKY40进行亚细胞定位分析;实时荧光定量PCR分析CcWRKY40组织特异性表达;酵母单杂交实验筛选CcWRKY40与5个主要功能基因启动子的互作关系;双荧光素酶实验进一步验证CcWRKY40的转录激活功能;分子对接预测CcWRKY40与启动子可能的结合位点。结果表明CcWRKY40基因开放阅读框(ORF)为951 bp,编码316个氨基酸;亚细胞定位结果显示CcWRKY40存在于细胞核中;RT-PCR结果表明CcWRKY40在一至五年生黄连须根中表达量最高;酵母单杂交和双荧光素酶实验表明CcWRKY40可与CcCNMT和Cc4′OMT的启动子结合并能激活其转录表达;同时分子对接结果显示CcWRKY40与CcCNMT、Cc4′OMT启动子具有相互作用,其结合位点在CcWRKY40的核心结构域上(RKYGQK)。综上,CcWRKY40可结合生物碱生物合成通路功能基因CcCNMT和Cc4′OMT的启动子,激活其转录表达。该研究为阐明CcWRKY40调控黄连生物碱的生物合成机制奠定了基础。 展开更多
关键词 黄连 ccwrky40 酵母单杂交 双荧光素酶 转录因子
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