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题名茶炭疽菌中CRISPR/Cas 9敲除系统构建
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作者
罗可
王珞
刘思睿
张卫民
姚明勇
潘雪珍
刘辉
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机构
贵州省生物技术研究所/贵州省农业生物技术重点实验室
清镇红枫山韵茶场有限公司
贵州发来地农业科技有限公司
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出处
《贵州农业科学》
CAS
2023年第12期66-74,共9页
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基金
贵州省科技支撑计划项目“贵州茶树炭疽病绿色防控关键技术研究与示范”[黔科合支撑(2021)一般192]
黔南州科技支撑计划项目“生防木霉菌在茶饼病和茶炭疽病绿色防控中的应用研究”[黔南科合(2022)01号]
贵阳市科技创新一般项目“贵阳茶园茶饼病绿色防控关键技术研究与示范”[筑科合同(2022)1001号]。
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文摘
【目的】以调控茶树炭疽病菌(Colletotrichum camelliae)中的植物真菌毒素(Solanapyrones)合成的CcSOL4为例,构建CRISPR-Cas9的基因敲除载体系统,为CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术在茶炭疽菌中的应用奠定基础。【方法】通过对转录因子CcSOL4的基因序列分析,选择5个靶点以PCBC载体为模板扩增目的片段,再与表达载体PKSE401发生重组构建基因标记载体。以携带Cas9编码基因的PKSE401双元双靶点载体系统为骨架,以PCBC载体为模板扩增相应的sgRNA,运用Overlapping PCR以及Golden Gate Cloning技术构建针对炭疽病的双靶点和三靶点CRISPR/Cas9编辑载体。【结果】双靶点载体片段及三靶点载体片段扩增后大小为650~750 bp,将上述PCR片段连入载体PKSE401,双靶点载体1Sol4和2Sol4经阳性鉴定得到650 bp片段,三靶点载体3Sol4经阳性鉴定后得到1200 bp的片段。【结论】重组载体构建成功,并建立了茶炭疽菌C.camelliae的CRISPR/Cas9敲除体系。
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关键词
山茶刺盘孢菌
CRISPR/Cas9
ccsol4
基因编辑
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Keywords
Colletotrichum camelliae
CRISPR/Cas9
ccsol4
gene editing
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分类号
S435.711
[农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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