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表达红斑丹毒丝菌SpaA和CbpB蛋白的重组枯草芽孢杆菌的构建及其在小鼠上的免疫原性评价 被引量：2
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作者 程中林 黄浩 +3 位作者 曹思艺 石华辉 高继业 李继祥 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期4521-4532,共12页
为了构建表达红斑丹毒丝菌SpaA和CbpB蛋白的口服重组枯草芽孢杆菌活载体候选疫苗菌株,经融合PCR及无缝克隆构建了重组整合质粒pDG1730-CBJA,使用自然法转化枯草芽孢杆菌KC菌株,通过壮观霉素抗性平板筛选、淀粉降解实验及PCR检测获得重组... 为了构建表达红斑丹毒丝菌SpaA和CbpB蛋白的口服重组枯草芽孢杆菌活载体候选疫苗菌株,经融合PCR及无缝克隆构建了重组整合质粒pDG1730-CBJA,使用自然法转化枯草芽孢杆菌KC菌株,通过壮观霉素抗性平板筛选、淀粉降解实验及PCR检测获得重组菌KC-spaA-cbpB。用免疫印迹及间接免疫荧光实验检测重组菌表达的SpaA和CbpB蛋白,并测定了重组菌在小鼠体内的遗传稳定性。构建壮观霉素抗性基因敲除质粒pMAD-△spe^(r),转化KC-spaA-cbpB,筛选、鉴定获得KC-spaA-cbpB::△spe^(r),并进行了小鼠的口服免疫实验。实验结果显示,重组菌KC-spaA-cbpB在菌体表面表达SpaA蛋白,在芽孢表面表达CbpB蛋白,在小鼠体内稳定。壮观霉素抗性基因敲除菌KC-spaA-cbpB::△spe^(r)能表达SpaA和CbpB蛋白,其芽孢经灌胃免疫小鼠42d后,小鼠血清中SpaA和CbpB蛋白的特异性抗体IgG和粪便中特异性sIgA均极显著高于阴性对照(P<0.01),攻毒保护率为67.5%。本研究成功构建了表达红斑丹毒丝菌SpaA和CbpB蛋白的重组枯草芽孢杆菌,为研究猪丹毒口服活载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 红斑丹毒丝菌 SpaA蛋白 cbpb蛋白 枯草芽孢杆菌
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猪丹毒丝菌CbpB蛋白对小鼠的免疫效果分析 被引量：2
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作者 刘君雯 吴琼娟 +5 位作者 邢刚 占松鹤 魏建忠 孙裴 刘雪兰 李郁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1689-1699,共11页
探究猪丹毒丝菌(ER)CbpB蛋白的免疫原性和保护作用,为深入研制ER基因工程亚单位疫苗提供新的思路和技术储备。以表达的ER重组蛋白CbpB、SpaA、CbpB+SpaA以及ER灭活全菌体(V-AEr21)、商品化弱毒疫苗、商品化灭活疫苗分别免疫小鼠。利用间... 探究猪丹毒丝菌(ER)CbpB蛋白的免疫原性和保护作用,为深入研制ER基因工程亚单位疫苗提供新的思路和技术储备。以表达的ER重组蛋白CbpB、SpaA、CbpB+SpaA以及ER灭活全菌体(V-AEr21)、商品化弱毒疫苗、商品化灭活疫苗分别免疫小鼠。利用间接ELISA检测小鼠血清中IgG抗体,血清杀菌试验测定功能性抗体水平,攻毒试验测定免疫保护率,组织荷菌数试验测定ER定植情况,并采集小鼠组织脏器(脾、肺、肝、肾)制备切片,观察病理变化。结果显示:与免疫原性最优的商品化弱毒疫苗相比,CbpB和SpaA虽产生的IgG抗体均仅为1∶6400,但血清杀菌效果强;对小鼠的免疫攻毒保护率与商品化弱毒疫苗相同,均为100%,且在脾、肺、肝、肾组织中均无细菌定植,病理组织学观察与空白对照无明显区别。CbpB重组蛋白具有良好的免疫原性和保护作用,能刺激机体产生体液免疫和细胞免疫,可以作为猪丹毒基因工程亚单位疫苗的候选抗原。 展开更多
关键词 猪丹毒丝菌 cbpb蛋白 小鼠 免疫原性 免疫保护力
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