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基于铁蛋白的GnRH纳米颗粒对雄性BALB/c小鼠的免疫去势
1
作者 郭巾玲 刘冬禹 +5 位作者 张玉蝶 杨丹丹 赵亚楠 徐莹 吴丛梅 殷玉和 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第10期2292-2300,共9页
旨在研究新型免疫去势疫苗,设计并合成重组质粒pET-30a-SF,表达重组蛋白SF,与合成多肽STGP体外偶联制备SF-STPG纳米颗粒疫苗,研究其对小鼠的免疫去势效果。将Spy Catcher与ferritin氨基酸序列通过GGGGS连接,经大肠杆菌密码子优化后构建... 旨在研究新型免疫去势疫苗,设计并合成重组质粒pET-30a-SF,表达重组蛋白SF,与合成多肽STGP体外偶联制备SF-STPG纳米颗粒疫苗,研究其对小鼠的免疫去势效果。将Spy Catcher与ferritin氨基酸序列通过GGGGS连接,经大肠杆菌密码子优化后构建重组质粒pET-30a-SF,转化至大肠杆菌中进行诱导表达。通过Ni柱亲和层析对重组蛋白SF进行纯化,并对其进行表征。多肽STGP由Spy Tag、GnRH、PADRE经GGGS连接,将重组蛋白SF与多肽STGP进行体外偶联,通过透射电子显微镜(TEM)、动态光散射(DLS)观察自组装纳米颗粒。将制备的SFSTGP纳米颗粒与MONTANIDE ISA 206VG以1:1混合制备成疫苗,对雄性BALB/c小鼠进行皮下注射免疫并对其进行免疫去势评价。结果显示,重组蛋白SF在18℃、0.25mmol/L IPTG诱导14h可溶性表达最高,与STGP在1:8摩尔比有最大偶联效率。经TEM、DLS分析,重组蛋白SF和SF-STGP均可以自组装形成平均直径分别为16.2、17.8nm的纳米颗粒。对小鼠免疫结果显示,SF-STGP纳米颗粒疫苗在首免后产生特异性GnRH抗体,在第10周特异性抗体D450达到峰值,其中SF-STGP+ISA 206免疫组特异性抗体D450峰值为2.8,各免疫组特异性抗体水平均显著高于对照组(P<0.05)。此外,SF-STGP纳米颗粒疫苗有效的降低了小鼠血清中的睾酮浓度,免疫组睾酮浓度显著低于对照组(P<0.05),与对照组小鼠相比,免疫组小鼠表现出睾丸萎缩现象。构建的SF-STGP纳米颗粒疫苗是一种高效的免疫原,可导致睾丸萎缩并降低性腺激素浓度,具有良好的去势效果,为哺乳动物免疫去势疫苗提供了新的思路。 展开更多
关键词 GNRH 免疫去势 FERRITIN Spy catcher-spy Tag 纳米颗粒 小鼠
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蛋白质环化的研究进展 被引量：3
2
作者 王心哲 张光亚 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期430-439,共10页
天然蛋白质在生物体内主要以线性形式存在,由于多数蛋白质(酶)热稳定性较差,制约了其在工业催化、食品制造、医药领域的高效应用。自然界中发现的天然环肽类物质具有首尾相连的环化结构,使蛋白质具有较高的稳定性,为改造酶的结构、提高... 天然蛋白质在生物体内主要以线性形式存在,由于多数蛋白质(酶)热稳定性较差,制约了其在工业催化、食品制造、医药领域的高效应用。自然界中发现的天然环肽类物质具有首尾相连的环化结构,使蛋白质具有较高的稳定性,为改造酶的结构、提高其热稳定性及拓宽其应用范围提供了新思路。本文根据国内外在蛋白质环化领域的新动态并结合本实验室的研究,系统介绍了内含肽介导的蛋白质反式剪接、表达蛋白连接、转肽酶催化的转肽作用等几种传统蛋白质环化方法,着重介绍了基于新型超强分子粘合剂Spy Tag/Spy Catcher介导的蛋白质环化的研究。 展开更多
关键词 蛋白质反式剪接 表达蛋白连接 转肽作用 光催化内含肽 SPY Tag/Spy Catcher
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溶剂特性对三臂星型类弹性蛋白多肽相变温度的影响 被引量：1
3
作者 熊紫阳 张丹丹 +1 位作者 张光亚 李夏兰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1141-1148,共8页
本文利用Spy Tag/Spy Catcher特性构建了三臂星型结构的类弹性蛋白多肽（elastin-like polypeptides,ELPs）,考察其在不同溶剂,如分子拥挤试剂、osmolytes及深共熔溶剂（deep eutectic solvents,DESs）中的相变温度及行为,并与含有相同E... 本文利用Spy Tag/Spy Catcher特性构建了三臂星型结构的类弹性蛋白多肽（elastin-like polypeptides,ELPs）,考察其在不同溶剂,如分子拥挤试剂、osmolytes及深共熔溶剂（deep eutectic solvents,DESs）中的相变温度及行为,并与含有相同ELPs重复数的线性ELPs120作对比。结果表明：在不同浓度拥挤试剂PEG2000作用下,两种结构的ELPs相变温度均降低,当其各自浓度均为25μmol/L时,三臂星型ELPs相变温度降低3℃-13℃,而ELPs120相变温度仅降低1.5℃-10.8℃。此外,在添加PEG2000后,三臂星型ELPs相变缓慢;在不同类型和浓度的osmolytes溶液中,25μmol/L三臂星型ELPs相变温度明显要比线性ELPs高8℃左右;在DESs体系中,三臂星型ELPs有类似与水溶液中的相变行为,且其相变温度受到抑制,另外三臂星型ELPs和ELPs120在DESs/PBS体系中,与在（氯化胆碱＋尿素）/PBS体系中的相变行为一致,其中当DESs体积含量为50%,ELPs120相变温度是最低的。由于ELPs在非单一缓冲液体系中的相变行为不同,这丰富了ELPs作为纯化标签的应用,且在非单一缓冲液体系中因降低了相变温度,节约了纯化融合蛋白的经济成本,同时也为研究ELPs拓扑结构与其相变行为之间的关系奠定理论基础。 展开更多
关键词 类弹性蛋白多肽 相变温度 拥挤试剂 深共熔溶剂 OSMOLYTES SPY Tag/Spy Catcher
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基于80α噬菌体内溶素与SpyCatcher/SpyTag系统的高效金黄色葡萄球菌检测工具设计 被引量：1
4
作者 胡江涛 李之琦 +3 位作者 赵锋 赵瑾 肖茂桃 李建 《食品研究与开发》 CAS 2024年第19期170-176,218,共8页
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)广泛分布于自然界,是导致食源性疾病的主要病原体之一。为构建一种简便且灵敏的检测金黄色葡萄球菌的方法,该文将80α噬菌体内溶素模块中有着特异性宿主识别和结合作用的催化结构域与细胞结合域模... 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)广泛分布于自然界,是导致食源性疾病的主要病原体之一。为构建一种简便且灵敏的检测金黄色葡萄球菌的方法,该文将80α噬菌体内溶素模块中有着特异性宿主识别和结合作用的催化结构域与细胞结合域模块(Amidase 3⁃CBD)利用SpyCatcher/SpyTag蛋白交联系统有方向性的固定在Ni磁珠表面从而构建免疫磁珠Ni⁃SpyCatcher⁃SpyTag⁃Amidase 3⁃CBD用于捕获金葡金黄色葡萄球菌,再利用等温扩增(re⁃combinase polymerase amplification,RPA)和CRISPR/Cas12a显色切割即可在37℃下2 h内完成检测,并且人工污染牛奶样品中金黄色葡萄球菌的最低检测限为1×102 CFU/mL。该技术不需要专业技术人员或辅助设备,便可实现对金黄色葡萄球菌的高效检测。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 细胞壁结合域 免疫磁分离技术 SpyCatcher/SpyTag系统 重组酶聚合酶扩增(RPA) CRISPR/Cas12a
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不同拓扑结构类弹性蛋白相变特性及机理研究 被引量：5
5
作者 张丹丹 蔡征文 +3 位作者 王金丹 王心哲 吴姝羽 张光亚 《中国科学：化学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期881-890,共10页
本文构建了不同拓扑结构的类弹性蛋白多肽（ELPs）融合蛋白,考察了盐的类型及浓度对其相变特性的影响,并与线性ELPs进行比较.结果表明,不同盐浓度类型下,不同拓扑结构ELPs融合蛋白的相变温度平均比相同重复数的线性ELPs高1～10.9℃.其中... 本文构建了不同拓扑结构的类弹性蛋白多肽（ELPs）融合蛋白,考察了盐的类型及浓度对其相变特性的影响,并与线性ELPs进行比较.结果表明,不同盐浓度类型下,不同拓扑结构ELPs融合蛋白的相变温度平均比相同重复数的线性ELPs高1～10.9℃.其中,三臂星型ELPs在0.05 mol/L Na2CO3溶液中与线性ELP（120）相差最大,达到11.5℃;同时,随盐浓度的增加,相变温度均呈线性递减.然而,Spy Catcher-ELP40在低浓度（￡0.4 mol/L）Na2CO3溶液中未发生相变,在相同浓度的Na Cl和Na2SO4溶液中则相变现象明显;在高浓度（30.5 mol/L）Na2CO3溶液中,其相变温度骤降为7.3℃,与等浓度Na2SO4溶液中相变温度仅相差0.15℃,这一现象不符合Hofmeister离子序.其可能的原因与ELPs所融合的Spy Catcher分子表面分布了大量带电荷的氨基酸有关,并探讨了其作用机制. 展开更多
关键词 类弹性蛋白多肽 SpyTag-SpyCatcher Hofmeister离子序 相变温度 蛋白拓扑结构
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