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Genome-Wide Identification and Expression Analysis of Calmodulin-Like Proteins in Tobacco
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作者 Mengjie Xu Anbin Wang +3 位作者 Tonghong Zuo Hecui Zhang Zhihao Hu Liquan Zhu 《Phyton-International Journal of Experimental Botany》 2025年第1期157-179,共23页
Calmodulin-like (CMLs) proteins are critical in calcium signaling and essential for plant growth, development, and stress responses. In many species, the CMLs families have been identified and described. However, the ... Calmodulin-like (CMLs) proteins are critical in calcium signaling and essential for plant growth, development, and stress responses. In many species, the CMLs families have been identified and described. However, the characterization and expression profiling of CMLs genes in tobacco is retrievable. In this study, a comprehensive whole-genome identification and analysis, and 75 NtCML genes were identified in tobacco, each containing two to four EF-hand domains. Most NtCML proteins exhibited conserved gene structures and motifs. Notably, most NtCML proteins were intron-less and distributed across 18 chromosomes. Two pairs of tandemly duplicated genes and seven pairs of segmentally duplicated genes were identified within the tobacco genome. Furthermore, 22 pairs of orthologous CMLs genes were discovered between Arabidopsis and tobacco. Cis-acting element analysis revealed that elements associated with hormones, stress responses, and plant growth and development were found in the promoter regions. Expression analysis indicated that some NtCML genes displayed tissue-specific expression patterns. Specifically, NtCML12, NtCML18, NtCML27, and NtCML28 showed significant upregulation during cold acclimation treatment. These results indicate that tobacco CMLs act as Ca^(2+) signal transducers, regulating plant growth and abiotic stress responses. 展开更多
关键词 calmodulin-like(CMLs) TOBACCO plant growth abiotic stress
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TaCML36, a wheat calmodulin-like protein,positively participates in an immune response to Rhizoctonia cerealis 被引量:5
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作者 Lin Lu Wei Rong +2 位作者 Ronghua Zhou Naxin Huo Zengyan Zhang 《The Crop Journal》 SCIE CAS CSCD 2019年第5期608-618,共11页
Sharp eyespot,mainly caused by the soil-borne fungus Rhizoctonia cerealis,affects wheat(Triticum aestivum L.)production worldwide.In this study,we isolated TaCML36 gene encoding a wheat calmodulin-like protein,and stu... Sharp eyespot,mainly caused by the soil-borne fungus Rhizoctonia cerealis,affects wheat(Triticum aestivum L.)production worldwide.In this study,we isolated TaCML36 gene encoding a wheat calmodulin-like protein,and studied its defense role in protection against R.cerealis.Transcription of TaCML36 was significantly elevated by both R.cerealis infection and exogenous ethylene treatment.Transcription was higher in resistant wheat lines than in susceptible ones.There were copies of TaCML36 on chromosomes 5A,5B,and 5D.The TaCML36 protein is composed of 183 amino acids and contains two calcium-binding EFhand domains.Subcellular localization assays in wheat indicated that TaCML36 localizes in both the cytoplasm and nucleus.Virus-induced gene silencing and disease assessment indicated that compared to the controls,TaCML36-silenced wheat plants displayed significantly reduced resistance to R.cerealis and had greater fungal biomass,suggesting that knockdown of TaCML36 impaired host resistance.Knockdown of TaCML36 also significantly repressed expression of pathogenesis-related genes such as Chitinase 1,PDF35,and PR17C,the ethylene response factor-encoding gene TaPIE1,and ethylene biosynthesis gene ACO2.Collectively,our results suggest that TaCML36 positively participates in the innate immune response to R.cerealis infection by modulating expression of defense-associated genes possibly in the ethylene signaling pathway. 展开更多
关键词 calmodulin-like protein Defense-associated gene Ethylene signaling SHARP EYESPOT TRITICUM AESTIVUM
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Calmodulin-like 5 promotes PEDV replication by regulating late-endosome synthesis and innate immune response 被引量:2
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作者 Wen-Jun Tian Xiu-Zhong Zhang +3 位作者 Jing Wang Jian-Feng Liu Fu-Huang Li Xiao-Jia Wang 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2024年第3期501-512,共12页
The infection caused by porcine epidemic diarrhea virus(PEDV)is associated with high mortality in piglets worldwide.Host factors involved in the efficient replication of PEDV,however,remain largely unknown.Our recent ... The infection caused by porcine epidemic diarrhea virus(PEDV)is associated with high mortality in piglets worldwide.Host factors involved in the efficient replication of PEDV,however,remain largely unknown.Our recent proteomic study in the virus-host interaction network revealed a significant increase in the accumulation of CALML5(EF-hand protein calmodulin-like 5)following PEDV infection.A further study unveiled a biphasic increase of CALML5 in 2 and 12 h after viral infection.Similar trends were observed in the intestines of piglets in the early and late stages of the PEDV challenge.Moreover,CALML5 depletion reduced PEDV mRNA and protein levels,leading to a one-order-of-magnitude decrease in virus titer.At the early stage of PEDV infection,CALML5 affected the endosomal trafficking pathway by regulating the expression of endosomal sorting complex related cellular proteins.CALML5 depletion also suppressed IFN-βand IL-6 production in the PEDV-infected cells,thereby indicating its involvement in negatively regulating the innate immune response.Our study reveals the biological function of CALML5 in the virology field and offers new insights into the PEDV-host cell interaction. 展开更多
关键词 Porcine epidemic diarrhea virus(PEDV) EF-hand protein calmodulin-like 5(CALML5) Late endosomes Innate immune response
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Calmodulins and calmodulin-like proteins-mediated plant organellar calcium signaling networks under abiotic stress 被引量:1
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作者 Shuang Liu Liyan Zhao +4 位作者 Maozi Cheng Jinfeng Sun Xiaomeng Ji Aman Ullah Guosheng Xie 《The Crop Journal》 SCIE CSCD 2024年第5期1321-1332,共12页
Plant calmodulins(CaMs)and calmodulin-like proteins(CMLs)mediate Ca~(2+)signaling in response to abiotic stresses.Manipulation of this signaling in crops could increase stress tolerance.We review methods for detecting... Plant calmodulins(CaMs)and calmodulin-like proteins(CMLs)mediate Ca~(2+)signaling in response to abiotic stresses.Manipulation of this signaling in crops could increase stress tolerance.We review methods for detecting Ca~(2+)signals,regulatory roles of Ca Ms and CMLs,binding targets,and Ca~(2+)networks under abiotic stress in organelles. 展开更多
关键词 Abiotic stress CALMODULIN calmodulin-like protein Organellar calcium signaling pathway
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Mutation of the Arabidopsis Calmodulin-Like Protein CML37 Deregulates the Jasmonate Pathway and Enhances Susceptibility to Herbivory 被引量:12
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作者 Sandra S. Scholz Jyothilakshmi Vadassery +5 位作者 Monika Heyer Michael Reichelt Kyle W. Bender Wayne A. Snedden Wilhelm Boland Axel Mithofer 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2014年第12期1712-1726,共15页
Throughout their life, plants are challenged by various abiotic and biotic stress factors. Among those are attacks from herbivorous insects. The molecular mechanisms underlying the detection of herbivores and the subs... Throughout their life, plants are challenged by various abiotic and biotic stress factors. Among those are attacks from herbivorous insects. The molecular mechanisms underlying the detection of herbivores and the subsequent signal transduction are not well understood. As a second messenger, fluxes in intracellular Ca2+ levels play a key role in mediating stress response pathways. Ca2+ signals are decoded by Ca2+ sensor proteins such as calmodulin-like proteins (CMLs). Here, we demonstrate that recombinant CML37 behaves like a Ca2+ sensor in vitro and, in Arabidopsis, AtCML37 is induced by mechanical wounding as well as by infestation with larvae of the generalist lepidopteran herbivore Spodoptera littoralis. Loss of function of CML37 led to a better feeding performance of larvae suggesting that CML37 is a positive defense regulator. No herbivory-induced changes in secondary metabolites such as glucosinolates or flavonoids were detected in cml37 plants, although a significant reduction in the accumulation of jasmonates was observed, due to reduced expression of JAR1 mRNA and cellular enzyme activity. Consequently, the expression of jasmonate-responsive genes was reduced as well. Summarizing, our results suggest that the Ca2+ sensor protein, CML37, functions as a positive regulator in Ca2+ signaling during herbivory, connecting Ca2+ and jasmonate signaling. 展开更多
关键词 HERBIVORY oral secretion JASMONATES cytosolic calcium calmodulin-like proteins.
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砂藓耐脱水相关类钙调蛋白基因RcCML1的克隆与表达分析
6
作者 孙天国 谷新颖 +3 位作者 衣兰 沙伟 张梅娟 马天意 《齐齐哈尔大学学报(自然科学版)》 2025年第3期68-74,94,共8页
类钙调蛋白(calmodulin-like protein, CML)是植物的一类钙结合蛋白,在植物生长和抗逆反应中起重要作用。砂藓是具有强耐脱水性的藓类植物,从砂藓脱水胁迫转录组数据中选取一个CML基因,命名为RcCML1,对其进行克隆获得编码序列,并对RcCML... 类钙调蛋白(calmodulin-like protein, CML)是植物的一类钙结合蛋白,在植物生长和抗逆反应中起重要作用。砂藓是具有强耐脱水性的藓类植物,从砂藓脱水胁迫转录组数据中选取一个CML基因,命名为RcCML1,对其进行克隆获得编码序列,并对RcCML1进行功能预测。对RcCML1蛋白质的性质进行预测,利用q PCR技术检测RcCML1在砂藓复水、脱水、高温胁迫下的表达响应。结果显示,RcCML1编码序列长714 bp,预测RcCML1蛋白质含4个EF-hand结构域,相对分子质量约为25.97 k Da,pI为5.30,无跨膜结构和信号肽,为不稳定的亲水性蛋白质,亚细胞定位在细胞质膜上。RcCML1与小立碗藓和角齿藓中的CML有较高的同源性。qPCR分析显示,RcCML1的表达量在干燥砂藓复水处理1 min时迅速上调,后整体下降;在砂藓脱水过程中呈波动变化趋势,脱水1 h时最高;在45℃高温处理中,处理12 h时表达量最高,推测RcCML1可能参与砂藓耐脱水和高温胁迫机制。 展开更多
关键词 砂藓 RcCML1 类钙调蛋白 耐脱水性 高温胁迫 表达分析
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木薯MeCML42基因启动子克隆及激素响应分析
7
作者 侯静怡 甄兴厚 +6 位作者 王亚杰 张慧敏 李瑞梅 刘姣 郭建春 耿梦婷 姚远 《分子植物育种》 北大核心 2025年第18期6001-6009,共9页
钙调素类似蛋白(calmodulin-like proteins,CMLs)是一种植物中特有的钙离子感受器,在植物生长发育过程及响应逆境胁迫中起着重要作用。为了探讨木薯MeCML42的表达调控模式,本研究克隆并分析木薯干旱响应MeCML42基因的启动子。构建启动... 钙调素类似蛋白(calmodulin-like proteins,CMLs)是一种植物中特有的钙离子感受器,在植物生长发育过程及响应逆境胁迫中起着重要作用。为了探讨木薯MeCML42的表达调控模式,本研究克隆并分析木薯干旱响应MeCML42基因的启动子。构建启动子活性鉴定载体pCAMBIA1304-proMeCML42-GUS-GFP,并转化木薯脆性胚性愈伤组织,研究ABA、MeJA、IAA、SA等激素对转基因体胚中MeCML42启动子活性的影响。结果表明:MeCML42启动子活性受ABA、MeJA、IAA、SA激素调控,其中ABA、MeJA、IAA正调控MeCML42启动子活性,而SA对MeCML42启动子活性则为负调控。本研究为解析激素信号调控MeCML42表达影响木薯抗逆性的分子机理提供一定的参考。 展开更多
关键词 木薯 钙调素类似蛋白 MeCML42 启动子 激素
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月季类钙调神经素B亚基蛋白RcCBL3在Na^(+)胁迫下的生物学功能分析
8
作者 杜俊 王换换 +4 位作者 刘蓉 王淞 迟娇娇 奉树成 明凤 《上海农业学报》 2025年第4期1-10,共10页
为探究月季类钙调神经素B亚基蛋白RcCBL3在维持Na^(+)稳态中的作用及其调控机制,成功克隆了月季RcCBL3基因,并分析其结构特征和表达模式。结果表明:RcCBL3蛋白含有4个EF-Hand结构域,定位于液泡膜系统,且在叶片中高表达。在高浓度Na^(+)... 为探究月季类钙调神经素B亚基蛋白RcCBL3在维持Na^(+)稳态中的作用及其调控机制,成功克隆了月季RcCBL3基因,并分析其结构特征和表达模式。结果表明:RcCBL3蛋白含有4个EF-Hand结构域,定位于液泡膜系统,且在叶片中高表达。在高浓度Na^(+)处理下,RcCBL3基因表达显著上调,而在高浓度K^(+)处理下,其表达无显著变化。病毒诱导的基因沉默(VIGS)实验表明,RcCBL3基因沉默株系对Na^(+)胁迫的耐受性显著降低,表现为叶片枯萎和相对电导率升高。酵母双杂交和双分子荧光互补实验进一步证实,RcCBL3蛋白能够与RcCIPK1/2/3蛋白相互作用。沉默RcCBL3基因后,RcCIPK1基因表达量上升,而RcCIPK3基因表达量下降,暗示RcCBL3蛋白可能与RcCIPK1/3蛋白共同参与维持细胞Na^(+)稳态。该研究可为揭示月季细胞Na^(+)稳态调控网络提供理论基础,也可为月季耐盐育种工作提供指导意见。 展开更多
关键词 月季 Na^(+)胁迫 类钙调神经素B亚基(CBL)蛋白 CBL互作蛋白激酶(CIPK) 稳态
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植物钙/钙调素介导的信号转导系统 被引量:26
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作者 曾后清 张亚仙 +3 位作者 汪尚 张夏俊 王慧中 杜立群 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期705-723,共19页
钙离子(Ca^(2+))是一种重要的第二信使,参与调节植物的生长发育和对环境的适应。钙调素(CaM)和类钙调蛋白(CML)是一类最主要的Ca^(2+)感受器,虽然其自身没有催化活性,但可通过调节下游靶蛋白的活性,进而调控细胞的各种生理活动。该文总... 钙离子(Ca^(2+))是一种重要的第二信使,参与调节植物的生长发育和对环境的适应。钙调素(CaM)和类钙调蛋白(CML)是一类最主要的Ca^(2+)感受器,虽然其自身没有催化活性,但可通过调节下游靶蛋白的活性,进而调控细胞的各种生理活动。该文总结了植物体内CaM结合蛋白(CBP)的生理功能、鉴定方法和调控机理,以及CaM介导的信号转导途径,包括蛋白磷酸化与去磷酸化、基因转录、离子运输、活性氧代谢、激素和磷脂信号等,并对今后的研究方向进行了展望。 展开更多
关键词 钙信号 钙调素 类钙调蛋白 钙调素结合蛋白 信号转导
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葡萄类钙调磷酸酶B亚基互作蛋白激酶VvCIPK10的特性与表达 被引量:8
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作者 余义和 李秀珍 +4 位作者 郭大龙 张会灵 杨英军 李学强 张国海 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第19期3798-3806,共9页
【目的】在葡萄中克隆丝苏氨酸蛋白激酶Vv CIPK10,分析其激酶特性和在逆境胁迫下的表达模式,为进一步研究该基因参与逆境胁迫的分子功能,探讨葡萄抗逆分子机制提供理论依据。【方法】利用电子克隆技术获得Vv CIPK10序列,设计特异引物进... 【目的】在葡萄中克隆丝苏氨酸蛋白激酶Vv CIPK10,分析其激酶特性和在逆境胁迫下的表达模式,为进一步研究该基因参与逆境胁迫的分子功能,探讨葡萄抗逆分子机制提供理论依据。【方法】利用电子克隆技术获得Vv CIPK10序列,设计特异引物进行RT-PCR反应,对克隆到的序列进行开放阅读框和保守结构域分析;构建原核表达载体,转化表达菌株后用IPTG进行诱导表达,收集菌体后裂解细胞,制备蛋白上样液,SDS-PAGE电泳对表达产物进行分析,同时对融合蛋白进行可溶性分析;IPTG大量诱导表达融合蛋白,收集菌体后进行超声破碎细胞,用麦芽糖结合蛋白纯化柱纯化MBP-Vv CIPK10融合蛋白,SDS-PAGE电泳进行分析;纯化后的融合蛋白与体外自磷酸化缓冲液进行自磷酸化反应,反应后SDS-PAGE电泳,压磷屏检测体外自磷酸化反应;构建重组瞬时表达载体p BI221-GFP/Vv CIPK10;分离拟南芥原生质体,通过PEG介导的瞬时转化方法将重组表达载体p BI221-GFP/Vv CIPK10转化至原生质体;通过基因枪介导的转化方法将重组表达载体p BI221-GFP/Vv CIPK10转化至洋葱表皮细胞,培养16 h后用激光共聚焦显微镜进行荧光信号检测;选择生长相对一致且健壮的葡萄植株,于干旱、低温和盐胁迫处理后不同时间取样,同时在田间取葡萄不同组织样品,实时荧光定量PCR检测Vv CIPK10在葡萄不同组织中的表达以及在不同逆境胁迫下的表达模式。【结果】PCR克隆获得葡萄Vv CIPK10全长为1 357 bp,5′端非编码区为30 bp,3′端非编码区为156 bp,开放阅读框为1 171 bp,编码436个氨基酸,理论等电点为8.59,分子量为48.7 k Da。保守结构域预测分析显示该蛋白5′端具有一个激酶结构域,3′末端具有一个PPI结构域和一个NAF结构域。BLSATP分析表明葡萄Vv CIPK10与桃树CIPK(XP_007205151)一致性最高(74%)。重组表达载体p MAL-C5X/Vv CIPK10在大肠杆菌中经诱导表达获得与理论分子量(43 k Da+48.7 k Da)相一致的融合蛋白。MBP-Vv CIPK10融合蛋白经柱纯化后获得单一的蛋白条带,Vv CIPK10的自磷酸化活性依赖于Mn^(2+),不依赖于Mg^(2+)和Ca^(2+),EDTA可以抑制Vv CIPK10的自磷酸化活性。亚细胞定位结果显示,Vv CIPK10定位在细胞核、细胞膜和细胞质。Vv CIPK10在葡萄各个组织中均有表达,主要在葡萄根和叶片中大量表达,葡萄茎、花序、果实和卷须中的表达量较低。在干旱、低温和盐胁迫处理后,Vv CIPK10呈现受诱导表达模式。Vv CIPK10的表达在低温胁迫后6 h达到峰值,干旱和盐胁迫后2 h即达到峰值。【结论】葡萄Vv CIPK10能够响应干旱、低温和盐胁迫,推测Vv CIPK10在葡萄抗非生物逆境胁迫中具有重要作用。 展开更多
关键词 葡萄 类钙调磷酸酶B亚基 丝苏氨酸蛋白激酶 VvCIPK10 表达分析
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巴西橡胶树类钙调素蛋白基因HbCML27克隆与表达分析 被引量:14
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作者 刘辉 邓治 +1 位作者 陈江淑 李德军 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2721-2727,共7页
类钙调素蛋白(Calmodulin-like proteins,CMLs)在植物钙信号转导中发挥重要作用。本研究采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)方法,从巴西橡胶树中克隆了CML基因Hb CML27。Hb CML27开放阅读框长度为450 bp,编码149个氨基酸... 类钙调素蛋白(Calmodulin-like proteins,CMLs)在植物钙信号转导中发挥重要作用。本研究采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)方法,从巴西橡胶树中克隆了CML基因Hb CML27。Hb CML27开放阅读框长度为450 bp,编码149个氨基酸。预测Hb CML27蛋白分子量为16.55 k D,等电点为4.10,是一个亲水蛋白。Hb CML27蛋白含有4个保守的EF-hand钙结合结构域,与其它植物CML27蛋白具有较高的同源性。实时荧光定量PCR分析表明,在巴西橡胶树叶片、花、根、树皮及胶乳等组织中均有Hb CML27基因表达,其中,表达量最低的组织是叶片,表达量最高的组织是胶乳。同健康橡胶树胶乳相比,Hb CML27在死皮橡胶树胶乳中的表达量降低。伤害、过氧化氢(H2O2)、乙烯利、茉莉酸甲酯(Me JA)、低温及干旱等处理均能上调Hb CML27的表达。这些结果表明Hb CML27可能参与了巴西橡胶树产排胶调控及响应非生物逆境胁迫。 展开更多
关键词 巴西橡胶树 类钙调素蛋白 死皮 非生物胁迫 表达分析
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小麦类钙调素TaCML79基因的克隆和表达分析 被引量:7
12
作者 周硕 刘永伟 +6 位作者 董福双 杨帆 赵和 柴建芳 吕孟雨 孙果忠 王海波 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第6期1-6,共6页
为了研究小麦类钙调素基因的功能和在植物逆境响应中的分子机制,以电子克隆结合RT-PCR的方法,在小麦中克隆到一个类钙调素基因TaCML79。该基因的开放阅读框长度为588bp,编码的蛋白长度为195个氨基酸,推测的分子量为20.45kDa,等电点为4.6... 为了研究小麦类钙调素基因的功能和在植物逆境响应中的分子机制,以电子克隆结合RT-PCR的方法,在小麦中克隆到一个类钙调素基因TaCML79。该基因的开放阅读框长度为588bp,编码的蛋白长度为195个氨基酸,推测的分子量为20.45kDa,等电点为4.6,属于酸性蛋白,具有2个典型的和一个不完整的EF-hand结构域。多序列比对和系统进化树分析表明,TaCML79与野生稻的ObCML35和水稻的OsCML10亲缘关系较近,相似性分别为84.6%和86.8%。该基因的表达在根和地上部分受到热激、NaCl、渗透和冷胁迫的诱导或抑制,初步推断该基因可能与植物抗逆有密切的关系。 展开更多
关键词 小麦 类钙调素 EF-hand结构域 基因克隆 基因表达
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新疆无苞芥类钙调素蛋白基因OpCML13的克隆与分析 被引量:9
13
作者 赵云霞 魏艳玲 黄先忠 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期431-437,共7页
通过对无苞芥幼苗cDNA文库的随机克隆测序分析,获得1条与拟南芥编码类钙调素13(calmodulin-likel3,CMLl3)高度相似的EST(GenBank登录号为JZl52285)。利用RT-PCR技术从无苞芥cDNA中克隆了该基因,命名为OpCMLl3,该基因开放阅读框... 通过对无苞芥幼苗cDNA文库的随机克隆测序分析,获得1条与拟南芥编码类钙调素13(calmodulin-likel3,CMLl3)高度相似的EST(GenBank登录号为JZl52285)。利用RT-PCR技术从无苞芥cDNA中克隆了该基因,命名为OpCMLl3,该基因开放阅读框(ORF)为447bp,编码148个氨基酸。生物信息学分析表明,OpCMLl3蛋白的二级结构含有4个ca^2+结合基序(EF-hands)结构,是一个亲水蛋白,无信号肽,无跨膜区域,为非跨膜蛋白;同源建模发现该蛋白包含8个α-螺旋结构和10个β-转角。系统进化树分析表明,OpCMLl3编码产物与拟南芥AtCMLl3和AtCMI。14进化关系较近,属于同一进化分支。半定量RTPCR结果显示,OpCMLl3基因在无苞芥的不同组织中都有表达,在根中表达量最高;高盐胁迫处理6~24h,OpCMLl3基因的表达明显增强,随后逐渐恢复正常表达水平;低温、干旱和ABA处理6h后基因表达明显上调,并且一直保持较高的表达水平。研究表明,OpCMLl3基因在无苞芥逆境胁迫中可能起着重要作用。 展开更多
关键词 无苞芥 类钙调素蛋白13 基因表达 抗逆
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氧化铕对玉米种子和茶叶中内生细菌的影响及机理 被引量:7
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作者 柴瑞娟 王玉良 吴琼 《稀土》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第6期9-13,共5页
采用LB固体培养基富集培养法,分别从苏玉糯4号玉米种子和安徽池州一某茶园幼嫩茶树叶片中分离到一株内生细菌,经细菌16 srDNA全序列测定为Bacillus cereus,表明苏玉糯4号玉米种子和此地茶叶中细菌种类较单一;为了探讨稀土元素对此细菌... 采用LB固体培养基富集培养法,分别从苏玉糯4号玉米种子和安徽池州一某茶园幼嫩茶树叶片中分离到一株内生细菌,经细菌16 srDNA全序列测定为Bacillus cereus,表明苏玉糯4号玉米种子和此地茶叶中细菌种类较单一;为了探讨稀土元素对此细菌的生理功能及作用机理,在LB培养基中附加一定浓度氧化铕,滤纸片法显示氧化铕可以使分离得到的B.cereus增强对0.135%升汞、9%苯酚、75%乙醇和80万单位/mL青霉素溶液的抗性,抑菌圈直径与不加氧化铕的对照相比有显著差异(p<0.05),但氧化铕浓度太大(500 mg/L)时,又会使分离到的细菌对上述四种供试化学物质的抗性下降。光电比浊法和扫描电镜显示,氧化铕可以促进分离得到的内生细菌个体生长和繁殖;氧化铕促进细菌分裂的作用可被钙调蛋白抑制剂氯丙嗪抑制,表明氯丙嗪也可以调节原核生物体内类钙调蛋白的功能,氧化铕促进细菌繁殖的机理可能与类钙调蛋白有关。 展开更多
关键词 玉米和茶叶 内生细菌 氧化铕 类钙调蛋白 机理
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微小隐孢子虫类钙调蛋白基因真核表达质粒的构建及在Hela细胞中的表达 被引量:4
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作者 杨晓娇 周鹏 +7 位作者 米荣升 黄燕 石凯 王晓娟 王向佩 刘宇轩 雷晓思 陈兆国 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期485-491,共7页
为了构建微小隐孢子虫类钙调蛋白(calmodulin-like protein,CML)基因的真核表达质粒,并在Hela细胞中实现表达,以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板,通过PCR扩增CML基因,插入到克隆载体pMD18-T中。对经鉴定的pMD-CML重组质粒进行双酶切,将目的... 为了构建微小隐孢子虫类钙调蛋白(calmodulin-like protein,CML)基因的真核表达质粒,并在Hela细胞中实现表达,以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板,通过PCR扩增CML基因,插入到克隆载体pMD18-T中。对经鉴定的pMD-CML重组质粒进行双酶切,将目的基因连接到经同样内切酶双酶切的真核表达载体pVAX1上。重组质粒经双酶切分析和测序鉴定后,用FuGENE HD转染试剂介导的方法,将重组表达质粒转染Hela细胞,用Western-blot技术和间接免疫荧光法检测外源基因的表达。结果显示,成功构建了微小隐孢子虫CML基因的真核表达质粒pVAX-CML,重组质粒在Hela细胞中实现了表达,表达产物具有良好的反应原性,为研究CML的特性和功能、寻找新的防控技术奠定了基础。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 类钙调蛋白基因 真核表达质粒
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在PEG模拟干旱下水稻根系几个疑似PEG毒害响应转录本研究 被引量:3
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作者 马廷臣 陈荣军 +2 位作者 余蓉蓉 曾汉来 张端品 《分子植物育种》 CAS CSCD 2010年第6期1090-1094,共5页
通过差别显示的方法,利用Affymetrix水稻60K芯片研究2个不同耐旱性的水稻品种(湘丰早119和爱华5号)根系对PEG毒害响应的转录本表达变化,结果表明:共发现了17个疑似对PEG毒害响应的转录本,它们均表现为下调表达,且大部分功能是假设的或... 通过差别显示的方法,利用Affymetrix水稻60K芯片研究2个不同耐旱性的水稻品种(湘丰早119和爱华5号)根系对PEG毒害响应的转录本表达变化,结果表明:共发现了17个疑似对PEG毒害响应的转录本,它们均表现为下调表达,且大部分功能是假设的或未知的;其中5个功能假设为水解酶相关的转录本表达活性被PEG抑制;3个功能假设为编码蛋白酶的转录本表达活性被PEG抑制。 展开更多
关键词 水稻 基因组芯片 PEG毒害 水解酶相关基因 钙调素相关蛋白基因 根系
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植物CaMs/CMLs家族研究进展 被引量:2
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作者 赵芊 赵雪萌 +3 位作者 宋聪 黄媛媛 贾振华 宋水山 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1357-1366,共10页
钙离子作为真核细胞中重要的第二信使,介导了真核生物对几乎所有环境和发育相关刺激信号的响应。在长期进化过程中,植物进化出多种钙信号解码器以实现细胞对特异刺激作出恰当的响应。钙调素(calmudulins, CaMs)与类钙调蛋白(calmodulin-... 钙离子作为真核细胞中重要的第二信使,介导了真核生物对几乎所有环境和发育相关刺激信号的响应。在长期进化过程中,植物进化出多种钙信号解码器以实现细胞对特异刺激作出恰当的响应。钙调素(calmudulins, CaMs)与类钙调蛋白(calmodulin-like proteins, CMLs)家族蛋白是Ca^(2+)感受器,在植物生长发育和胁迫抗性中发挥重要调控作用。本文总结了植物CAMs/CMLs家族蛋白的结构、遗传进化、作用机制、生物学功能等方面的最新研究进展,以期为钙信号网络研究提供参考。 展开更多
关键词 钙调素 类钙调蛋白 钙离子 植物
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结球甘蓝类钙调蛋白CMLs与花粉萌发NPG1及NPGRs相互作用研究 被引量:2
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作者 许彬 曹绍玉 +5 位作者 苏甜 彭梦玲 吕霞 李振林 张国平 许俊强 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期2934-2944,共11页
类钙调蛋白作为钙调蛋白的家族之一,调控植物生长发育、激素调控及各种胁迫,对类钙调蛋白对参与花粉萌发及伸长的深入研究具有重要意义。为研究结球甘蓝花粉CMLs与NPG1及相关蛋白互作关系,探索CMLs在花粉发育及萌发过程的功能,本研究以... 类钙调蛋白作为钙调蛋白的家族之一,调控植物生长发育、激素调控及各种胁迫,对类钙调蛋白对参与花粉萌发及伸长的深入研究具有重要意义。为研究结球甘蓝花粉CMLs与NPG1及相关蛋白互作关系,探索CMLs在花粉发育及萌发过程的功能,本研究以结球甘蓝ZG为材料,克隆到12个花粉发育及萌发相关CMLs基因,及花粉萌发基因NPG1、NPGR1和NPGR2,通过酵母双杂交试验检测编码蛋白相互之间的互作关系,并检测NPG1、NPGR1和NPGR2在不同授粉时间后的表达水平。结果表明, 12个CMLs基因开放阅读框(open reading frame, ORF)在447~1095bp之间,其中CML20、CML48、CML49、CML50均含有4个内含子, CML21含有2个内含子,其余均不含内含子;编码蛋白均不含信号肽和跨膜域,均为胞外蛋白,且均为亲水性蛋白;分别含有2~4个EF-Hands结构域,氨基酸数目在148~364个氨基酸之间,亚细胞定位预测主要定位于细胞膜、液泡及细胞核中;结球甘蓝NPG1、NPGR1、NPGR2分别聚类到不同的进化枝上,与油菜、白菜的亲缘关系最近,与拟南芥亲缘关系较近;酵母双杂交试验表明, CML13、CML21、CML24、CML42不能与NPG1、NPGR1及NPGR2在体外发生相互作用, CML15、CML20、CML25、CML39、CML41、CML48、CML49均能与NPG1、NPGR1及NPGR2在体外发生相互作用, CML50可与NPGR1、NPGR2互作,而不能与NPG1发生互作。表达分析表明, NPG1表达量在授粉后的柱头中呈显著上升趋势, NPGR1、NPGR2表达量变化均不显著;CMLs在不同授粉时间均有不同的表达量变化,其中CML15、CML20、CML39、CML41、CML49均呈现出先升高后下降的趋势。本研究在结球甘蓝中筛选得到能与NPG1、NPGRs互作的CMLs蛋白,说明多个CMLs能参与花粉萌发及花粉管伸长过程,期望为Ca^(2+)信号系统参与花粉萌发及花粉管伸长的机制研究提供参考。 展开更多
关键词 结球甘蓝 花粉 CMLs NPG1 NPGRs 蛋白互作
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拟南芥中一个类似钙调素蛋白的基因结构及其缺磷、缺钾诱导表达 被引量:3
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作者 段瑞君 易可可 吴平 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期520-526,共7页
通过拟南芥芯片杂交分析发现推测的钙调素基因(GenBankaccessionNo.At1g76650)与低磷胁迫有关。对该基因的结构研究确认了该基因编码一个含有三个EF-hand结构域的类似钙调素的蛋白,Northern检测表明该基因在缺钾、缺磷条件下诱导表达,... 通过拟南芥芯片杂交分析发现推测的钙调素基因(GenBankaccessionNo.At1g76650)与低磷胁迫有关。对该基因的结构研究确认了该基因编码一个含有三个EF-hand结构域的类似钙调素的蛋白,Northern检测表明该基因在缺钾、缺磷条件下诱导表达,但在缺氮、高盐等胁迫条件下不受影响。经RT-PCR和启动子融合GUS转基因植株的组织化学染色分析,表明该基因在拟南芥中为全株表达,但各器官中表达丰度不尽相同。 展开更多
关键词 拟南芥 类似钙调素蛋白的基因 磷或钾缺乏
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杜氏盐藻cDNA文库的构建及KCBP基因的克隆 被引量:4
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作者 柳丽平 李杰 +2 位作者 王翠 阎赟梦 薛乐勋 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2010年第6期907-910,共4页
目的:构建杜氏盐藻cDNA文库并从该文库中筛选类驱动蛋白钙调素结合蛋白(KCBP)基因cDNA序列。方法:取对数生长期的杜氏盐藻细胞,提取总RNA并分离纯化mRNA,反转录合成双链cDNA,连接到pAP3neo载体上,采用电转化法将重组质粒转化大肠杆菌DH... 目的:构建杜氏盐藻cDNA文库并从该文库中筛选类驱动蛋白钙调素结合蛋白(KCBP)基因cDNA序列。方法:取对数生长期的杜氏盐藻细胞,提取总RNA并分离纯化mRNA,反转录合成双链cDNA,连接到pAP3neo载体上,采用电转化法将重组质粒转化大肠杆菌DH10B。计算平板上单菌落数,测定文库的滴定度和重组率。运用PCR法筛选含有KCBP基因特异片段的质粒。结果:文库滴定度为5.6×106pfu/mL,重组率在90%左右,插入片段长度在0.4~6.0kb,平均长度为1.9kb。利用PCR法从该文库中筛选到了含有新基因KCBP特异片段的单菌落,经测序与cDNA末端快速扩增(RACE)-PCR获得的杜氏盐藻KCBP基因cDNA序列相符,此序列属于kine-sin-14家族。结论:成功构建杜氏盐藻cDNA文库,并从该文库筛选出一个kinesin样cDNA序列。 展开更多
关键词 杜氏盐藻 CDNA文库 类驱动蛋白钙调素结合蛋白
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