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益智清心方调控PKA/CaN通路改善阿尔茨海默病模型小鼠认知功能的机制
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作者 郭晓晨 刘剑刚 +4 位作者 石丹丹 宁梓淇 张瑶瑶 刘方 刘美霞 《中国实验方剂学杂志》 北大核心 2026年第3期97-108,共12页
目的:基于蛋白激酶A(PKA)/钙调磷酸酶(CaN)信号通路,探讨益智清心方调控线粒体Ca^(2+)稳态和动力学平衡改善阿尔茨海默病(AD)线粒体功能障碍的作用机制。方法:将60只3月龄淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)双转基因小鼠随机分为模型组... 目的:基于蛋白激酶A(PKA)/钙调磷酸酶(CaN)信号通路,探讨益智清心方调控线粒体Ca^(2+)稳态和动力学平衡改善阿尔茨海默病(AD)线粒体功能障碍的作用机制。方法:将60只3月龄淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)双转基因小鼠随机分为模型组、多奈哌齐组(0.65 mg·kg^(-1))、益智清心方低剂量组(2.6 g·kg^(-1))、益智清心方中剂量组(5.2 g·kg^(-1))及益智清心方高剂量组(10.4 g·kg^(-1)),每组12只。同遗传背景的C57BL/6J小鼠12只作为正常组。各治疗组每日灌胃给药,模型组与正常组给予等容积生理盐水,连续干预12周。采用新物体识别(NOR)和Morris水迷宫(MWM)实验评估小鼠学习记忆能力;苏木素-伊红(HE)/尼氏(Nissl)染色观察海马组织病理学改变;透射电子显微镜(TEM)观察线粒体超微结构;氟-4乙酰氧甲基酯(Fluo-4 AM)Ca^(2+)探针测定脑组织胞浆内Ca^(2+)浓度;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织中PKA、CaN、钠/钙/锂交换器(NCLX)、线粒体钙单向转运体(MCU)、钙调蛋白(CaM)、动力相关蛋白1(Drp1)、磷酸化(p)-Drp1[丝氨酸637位点(S637)]蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测PKA、CaN、CaM、NCLX、MCU、Drp1 mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠识别指数(RI)降低(P<0.01),穿越原平台区域次数、目标象限停留时间及路程缩减(P<0.01),PKA、NCLX、p-DRP1(ser637)蛋白表达减少(P<0.05),PKA、NCLX mRNA表达减少(P<0.05);而逃避潜伏期延长(P<0.05),细胞内Ca^(2+)水平升高(P<0.01);CaN、CaM、MCU、Drp1蛋白表达及CaN、MCU、Drp1 mRNA表达增加(P<0.05)。经多奈哌齐及益智清心方干预后,与模型组比较,治疗组小鼠RI提升(P<0.05),穿越平台次数、目标象限停留时间增加(P<0.05),PKA、NCLX、p-Drp1(ser637)蛋白表达及PKA、NCLX mRNA表达增加(P<0.05);第4~5天逃避潜伏期缩短(P<0.05),细胞内Ca^(2+)水平降低(P<0.05),CaN、CaM、MCU、Drp1蛋白表达及CaN、MCU、Drp1 mRNA表达减少(P<0.05)。结论:益智清心方通过调控PKA/CaN通路,上调PKA、NCLX、p-Drp1(ser637)蛋白表达,降低CaN、CaM、MCU、Drp1蛋白表达,调节Ca^(2+)稳态和线粒体动力学平衡,从而提升AD小鼠的空间学习与记忆能力。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 益智清心方 蛋白激酶A(PKA)/钙调磷酸酶(caN)信号通路 ca^(2+)稳态 线粒体动力学
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降气平哮方调控CLCA1/Ca^(2+)/SNARE信号改善哮喘气道黏液高分泌的机制研究
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作者 石玲玲 严花 +3 位作者 吴嘉宝 单祎文 董盈妹 赵霞 《南京中医药大学学报》 北大核心 2026年第1期79-89,共11页
目的探讨降气平哮方调控Ca^(2+)与膜融合过程对哮喘气道黏液高分泌的作用机制。方法采用卵清蛋白致敏小鼠建立哮喘模型,设正常组,模型组,降气平哮方低(10.0 g·kg^(-1))、中(20.0 g·kg^(-1))、高(30.0 g·kg^(-1))剂量组,... 目的探讨降气平哮方调控Ca^(2+)与膜融合过程对哮喘气道黏液高分泌的作用机制。方法采用卵清蛋白致敏小鼠建立哮喘模型,设正常组,模型组,降气平哮方低(10.0 g·kg^(-1))、中(20.0 g·kg^(-1))、高(30.0 g·kg^(-1))剂量组,地塞米松组(1.0 mg·kg^(-1))和盐酸氨溴索组(8.0 mg·kg^(-1))。在造模期间通过行为学观察小鼠状态、HE染色和PAS染色评估肺部病理状态,ELISA法检测小鼠肺部炎症因子白细胞介素(IL)-4与IL-13水平,qPCR检测黏蛋白mRNA表达,比色法检测小鼠肺组织中Ca^(2+)浓度,免疫组织化学和Western blot法检测钙激活氯通道调节因子1(CLCA1)和膜融合相关蛋白的表达。结果与正常组相比,模型组气道炎症评分,黏液分泌,IL-13、IL-4水平,Ca^(2+)浓度及CLCA1、突触体相关蛋白23(SNAP23)、可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体(SNARE)、突触融合蛋白(STX3)、囊泡相关膜蛋白(VAMP)8和VAMP2的表达均显著升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001);与模型组相比,降气平哮方可有效改善哮喘小鼠的一般状况,显著减轻小鼠气道炎症和黏液分泌(P<0.05,P<0.001);降低肺组织中IL-4、IL-13水平(P<0.001);抑制黏蛋白基因的过表达(P<0.05,P<0.01,P<0.001);减少细胞内Ca^(2+)浓度(P<0.05,P<0.001);下调CLCA1及SNAP23、SNARE、STX3、VAMP8、VAMP2等膜融合通路关键蛋白表达。结论降气平哮方可能通过抑制CLCA1/Ca^(2+)/SNARE信号减轻哮喘气道黏液高分泌,为降气平哮方治疗提供了新的分子机制靶点。 展开更多
关键词 哮喘 降气平哮方 气道黏液高分泌 CLca1 ca^(2+) 膜融合
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基于CRISPR/Cas9技术创制优质香味粳稻品系
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作者 段敏 谢留杰 +1 位作者 岳雅妮 黄善军 《中国水稻科学》 北大核心 2026年第2期235-243,共9页
【目的】香味是水稻重要的食味品质性状。本研究选择优质粳稻品系台20-29为研究对象,利用CRISPR/Cas9技术对其香味基因Badh2进行编辑,以期获得具有香味的优质粳稻品系。【方法】选择香味基因Badh2第3、第4外显子上的2段序列作靶位点,构... 【目的】香味是水稻重要的食味品质性状。本研究选择优质粳稻品系台20-29为研究对象,利用CRISPR/Cas9技术对其香味基因Badh2进行编辑,以期获得具有香味的优质粳稻品系。【方法】选择香味基因Badh2第3、第4外显子上的2段序列作靶位点,构建双元表达载体pHUE411-Badh2-gRNA并转入台20-29获得转基因植株。【结果】20株T0植株经过加代、潮霉素标记检测、测序比对,共计获得22个T1代无载体纯合突变株,包括6种突变类型,每种突变体在第3、第4外显子上存在不同程度的碱基变化。6个香味突变体bh62、bh64、bh65、bh67、bh68、bh74在穗长、粒长、粒宽、千粒重等方面与野生型台20-29基本一致,结实率有所下降,每穗粒数稍有提升,稻米品质没有明显变化。利用气相色谱-质谱技术检测突变体bh62、bh64、bh65的糙米中香味物质2-AP含量,结果表明糙米中2-AP含量较台20-29极显著提高,分别达到24.27、33.89、38.96 mg/kg。【结论】对水稻香味基因Badh2进行编辑可以高效获得具有香味的水稻优质品系。 展开更多
关键词 水稻 潮霉素 CRISPR/cas9 香味基因 2-乙酰-1-吡咯啉
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外泌体递送CRISPR/Cas系统在靶细胞内可实现基因编辑
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作者 王白燕 杨树 +5 位作者 王弋鸣 吴梦晴 肖瑀 郭梓璇 张博艺 冯书营 《中国组织工程研究》 北大核心 2026年第7期1839-1849,共11页
背景:CRISPR/Cas基因编辑系统具有精准基因编辑、靶向设计简单、低成本以及高效率等特性,已被广泛应用于科学研究和相关临床治疗。然而,CRISPR/Cas系统如何更安全、更高效、更精准地递送到靶细胞内,仍是一个急需解决的难题。目的:从递送... 背景:CRISPR/Cas基因编辑系统具有精准基因编辑、靶向设计简单、低成本以及高效率等特性,已被广泛应用于科学研究和相关临床治疗。然而,CRISPR/Cas系统如何更安全、更高效、更精准地递送到靶细胞内,仍是一个急需解决的难题。目的:从递送CRISPR/Cas系统的外泌体来源及工程化策略、外泌体对CRISPR/Cas系统的装载方法、CRISPR/Cas系统的生物形式及其在细胞内的作用途径等方面进行全方面综述,为该领域的研究者提供更直观、更系统的视角。方法:以“exosome,drug delivery systems,delivery,CRISPR/Cas,gene editing,engineered exosomes,targeting”为英文检索词,以“外泌体,药物递送,CRISPR/Cas,工程化”为中文检索词,分别检索Pub Med数据库及中国知网,检索时限为2014-2024年。通过仔细阅读文献的标题和摘要进行初步筛选,排除研究内容相关性差及内容重复的文献,最终纳入了78篇文献进行归纳和探讨。结果与结论:(1)外泌体是一种直径30-150 nm的脂质囊泡,具有循环半衰期长、靶向组织的内在能力、良好的生物相容性以及较小的固有毒性等优势,显现出强大的靶向递送能力;(2)CRISPR/Cas系统虽是一种强大的基因编辑工具,然而现有的CRISPR/Cas系统递送载体各有利弊,无法完全满足需求;(3)递送CRISPR/Cas系统的外泌体主要来源于高产外泌体的细胞或组织,但研究者们依然需要根据研究所需进行选择或进一步工程化;(4)递送CRISPR/Cas系统的外泌体主要通过基因工程修饰、化学修饰、外泌体-脂质体杂交等策略实现工程化;(5)外泌体装载CRISPR/Cas系统的方法包括电穿孔、孵育、转染和主动装载途径等,选择合适的装载方法取决于CRISPR/Cas系统的理化性质;(6)外泌体递送CRISPR/Cas系统的生物形式包括质粒和核糖核蛋白复合体,两种形式各具特点,成功递送的CRISPR/Cas系统在靶细胞内实现基因编辑。 展开更多
关键词 外泌体 CRISPR/cas系统 基因编辑 药物负载 靶向递送 工程化
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高职专业群与区域产业集群深度融合的案例研究——基于CAS理论视域
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作者 牛同训 《高等工程教育研究》 北大核心 2026年第1期128-133,139,共7页
产教融合是高职院校和产业高质量发展的重要举措。针对高职专业群与区域产业集群“合而不融”等问题,基于复杂适应系统(CAS)理论,分析了集群系统与CAS的相似性,构建了集群系统产教融合分析框架。采用扎根理论方法对9个集群系统案例进行... 产教融合是高职院校和产业高质量发展的重要举措。针对高职专业群与区域产业集群“合而不融”等问题,基于复杂适应系统(CAS)理论,分析了集群系统与CAS的相似性,构建了集群系统产教融合分析框架。采用扎根理论方法对9个集群系统案例进行了质性研究,设计了以政府-市场为主的外部环境系统驱动的集群系统产教融合行为产生机理和产教深度融合的机理模型。突破产教融合的静态研究视角,指出在集群系统产教深度融合中,外部环境系统是重要推手、多元主体适应系统是实施关键、“流”系统是重要保障。根据研究结论,提出了发挥外部环境对集群系统产教深度融合的推动作用、发挥产教融合实施主体的关键作用、发挥“流”系统的保障作用等对策建议,引领集群系统深度融合。 展开更多
关键词 高职专业群 区域产业集群 产教融合 caS理论 案例研究
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膀胱癌患者血清CEA、CA19-9、β2-MG水平与预后的相关性分析
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作者 孟佳丽 林海 孟伟 《医学临床研究》 2026年第1期69-72,共4页
【目的】探讨膀胱癌患者血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)和β2-微球蛋白(β2-MG)水平与患者预后的相关性。【方法】检测106例膀胱癌患者(观察组),85例体检健康者(对照组)的血清CEA、CA19-9、β2-MG水平,分析其与膀胱癌患者预... 【目的】探讨膀胱癌患者血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)和β2-微球蛋白(β2-MG)水平与患者预后的相关性。【方法】检测106例膀胱癌患者(观察组),85例体检健康者(对照组)的血清CEA、CA19-9、β2-MG水平,分析其与膀胱癌患者预后的关系及患者死亡的危险因素。【结果】观察组术前、术后的CEA、CA19-9、β2-MG水平高于对照组,且观察组患者术前CEA、CA19-9、β2-MG水平高于术后(均P<0.05)。随访36个月,106例膀胱癌患者中63例存活(生存组),43例死亡(死亡组)。死亡组TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤低分化的比例,以及CEA、CA19-9、β2-MG表达水平均高于生存组(P<0.05)。Logistic多因素回归分析结果显示,TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤低分化,CEA、CA19-9、β2-MG高表达均是膀胱癌患者死亡的危险因素(P<0.05)。CEA、CA19-9、β2-MG高表达组的3年生存率均显著低于低表达组(P<0.05)。【结论】膀胱癌患者血清CEA、CA19-9、β2-MG水平与患者的预后密切相关,其可作为预测膀胱癌患者预后的指标。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 癌胚抗原 ca19-9抗原 Β2微球蛋白 预后
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Tracking a patient with no technetium-99m-pyrophosphate myocardial uptake at surgical valve replacement for aortic stenosis
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作者 Koji Takahashi Daisuke Sasaki +10 位作者 Takaaki Iwamura Shuhei Yamamoto Mitsuharu Ueda Nobuhisa Yamamura Mako Yoshino Daijiro Enomoto Hiroe Morioka Shigeki Uemura Takafumi Okura Tomoki Sakaue Katsuji Inoue 《Journal of Geriatric Cardiology》 2025年第9期828-833,共6页
Aortic stenosis(AS)is the most common valvular heart disease,with a prevalence of over 4%among octogenarians.[1]The prevalence of autopsy-confirmed wild-type transthyretin cardiac amyloidosis(ATTRwt-CA)increases with ... Aortic stenosis(AS)is the most common valvular heart disease,with a prevalence of over 4%among octogenarians.[1]The prevalence of autopsy-confirmed wild-type transthyretin cardiac amyloidosis(ATTRwt-CA)increases with age,accounting for 25%of patients aged 85 years and older in Europe and 12%of patients older than 80 years in Japan.[2,3]Recent studies have reported that ATTRwt-CA coexists in 11%-16%of older patients with AS undergoing transcatheter aortic valve replacement(TAVR).[1,4,5]In a metaanalysis by Ho et al.,[6]the prevalence rates of cardiac amyloidosis,predominantly ATTRwt-CA,in patients with AS and those referred for TAVR or surgical aortic valve replacement(SAVR)were 14.4%and 15.2%,respectively.Conversely,the prevalence of AS in patients with cardiac amyloidosis is 8.7%.Owing to the high surgical risk in patients with both AS and ATTRwt-CA,TAVR may be preferred over SAVR. 展开更多
关键词 surgical valve replacement aortic stenosis valvular heart diseasewith transcatheter aortic valve replacement tavr transcatheter aortic valve replacement cardiac amyloidosis attrwt ca increases transthyretin cardiac amyloidosis myocardial uptake
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鲍曼不动杆菌CRP蛋白通过调控cas3基因表达增强细菌毒力的机制
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作者 黄佳媛 黄心悦 +5 位作者 於亭 袁文杰 陈平 胡健 谢军 李国才 《微生物学报》 北大核心 2026年第2期867-880,共14页
【目的】探究鲍曼不动杆菌转录调控因子cAMP受体结合蛋白(cAMP receptor protein,CRP)对cas3基因的功能调控作用。【方法】利用原核表达系统表达并纯化CRP蛋白,采用电泳迁移率变动分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)实验... 【目的】探究鲍曼不动杆菌转录调控因子cAMP受体结合蛋白(cAMP receptor protein,CRP)对cas3基因的功能调控作用。【方法】利用原核表达系统表达并纯化CRP蛋白,采用电泳迁移率变动分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)实验探究CRP对cas3启动子的结合作用,并通过q PCR明确CRP对cas3基因的调控作用。为进一步确认CRP对cas3的功能调控作用,构建Δcrp突变株,通过生物被膜实验、黏附侵袭实验、大蜡螟毒力实验以及小鼠细菌感染模型分析crp对鲍曼不动杆菌毒力的影响。【结果】EMSA实验表明CRP蛋白可与cas3基因启动子特异性结合;qPCR结果表明,Δcrp突变株cas3转录水平显著下降(P<0.001)。与野生株相比,Δcrp突变株在生长能力方面无明显差异,但生物被膜形成能力显著增强(P<0.001),对A549细胞的黏附(P=0.003<0.050)和侵袭(P<0.001)能力也明显增强。Δcrp突变株在72 h内对大蜡螟的致死率显著提高,且小鼠感染实验结果表明,Δcrp突变株在肺部的定殖能力显著高于野生株(P<0.001)。【结论】CRP作为一种转录激活因子,可直接结合cas3启动子并激活其转录表达,进而降低鲍曼不动杆菌的毒力和致病性。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 caMP受体结合蛋白 cas3 毒力
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CA125+CA153+CEA三联动态监测在乳腺癌术后转移预警中的模型构建
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作者 韦冬群 《首都食品与医药》 2026年第5期79-81,共3页
目的评估肿瘤标志物CA125、CA153和CEA的动态变化规律,并构建联合检测模型,以提高乳腺癌术后转移的早期预测准确性。方法回顾性分析2024年7月-2025年7月期间在广西科技大学第二附属医院接受手术治疗的278例乳腺癌患者的临床资料,对患者... 目的评估肿瘤标志物CA125、CA153和CEA的动态变化规律,并构建联合检测模型,以提高乳腺癌术后转移的早期预测准确性。方法回顾性分析2024年7月-2025年7月期间在广西科技大学第二附属医院接受手术治疗的278例乳腺癌患者的临床资料,对患者进行定期随访监测。动态监测患者术后CA125、CA153及CEA水平,结合病理结果确定转移状态。通过受试者工作特征(ROC)曲线评估各标志物单独及联合检测的敏感度、特异度及曲线下面积(AUC),并采用多因素Logistic回归分析构建转移风险预测模型。结果在随访期间,共84例(30.22%)患者出现远处转移。动态监测显示,转移组患者CA125、CA153和CEA水平均高于非转移组,除了术后3个月的CEA、术后6个月CA125指标组间比较没有显著差异外,其他均有明显差异(P<0.05)。三联联合检测的敏感度、特异度及AUC均优于单一标志物(P<0.05)。多因素分析表明,术后6个月内CA125+CA153+CEA持续升高是转移的独立预测因素(OR=4.12,95%CI:2.15-7.89)。联合模型预测准确率达89.57%。结论CA125、CA153和CEA的动态联合监测能够有效提高乳腺癌术后转移的早期预警能力,其预测模型具有较高的敏感性和特异性,可作为临床辅助诊断工具。 展开更多
关键词 ca125 ca153 CEA 术后转移 乳腺癌
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Versatile bioluminescence CRISPR/Cas platform for point-of-care detection of biomarkers in whole blood
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作者 Xuhua Zhao Hanxiao Zhang +6 位作者 Yunhua Wang Minzhi Liao Siyu Liu Baofeng Yu Xinyao Yi Mengyi Xiong Xiao-Bing Zhang 《Science China Chemistry》 2026年第2期994-1001,共8页
Clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)systems have achieved significant advancements in precise molecular diagnosis.However,their applications in whole blood detection remain challenging due... Clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)systems have achieved significant advancements in precise molecular diagnosis.However,their applications in whole blood detection remain challenging due to signal interference from blood autofluorescence.Here,we proposed a universal and accessible bioluminescent CRISPR/Cas(bioLUCas)platform for direct detection of disease biomarkers in whole blood.By employing a specially designed cpHNLucMB reporter,the bioLUCas system converts CRISPR/Cas12a trans-cleavage activity into a ratiometric bioluminescent signal,producing a distinct emission color change.Compared to conventional CRISPR/Cas12a-based sensors,this platform eliminates the need for external light excitation,effectively bypassing blood autofluorescence and offering high sensitivity.Additionally,the visual signal of bioLUCas system allows user-friendly readout methods,such as smartphone.The platform successfully facilitated point-of-care test(POCT)for myeloperoxidase(MPO)in clinical acute myelogenous leukemia(AML)blood samples and hepatitis C virus(HCV)RNA in synthetic blood samples.This work may advance CRISPR/Cas technology for accessible whole-blood disease diagnostics. 展开更多
关键词 nucleic acid sensor BIOLUMINESCENCE CRISPR/cas blood analysis point-of-care test
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Production of ^(287,288)Mc isotopes in the ^(48)Ca+^(243)Am reaction at China Accelerator Facility for Superheavy Elements
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作者 X.Y.Huang Z.Y.Zhang +38 位作者 J.G.Wang L.Ma C.L.Yang M.H.Huang X.L.Wu Z.G.Gan H.B.Yang M.M.Zhang Y.L.Tian Y.S.Wang J.Y.Wang Y.H.Qiang G.Xie S.Y.Xu Z.Zhao Z.C.Li L.C.Sun L.Zhu X.Zhang H.Zhou F.Guan Z.H.Li W.X.Huang Z.Qin Y.Wang X.J.Yin Y.F.Cui Z.W.Lu Y.He L.T.Sun Z.Z.Ren S.G.Zhou V.K.Utyonkov A.A.Voinov Yu.S.Tsyganov A.N.Polyakov D.I.Solovyev N.D.Kovrizhnykh M.V.Shumeiko 《Chinese Physics Letters》 2026年第1期9-16,共8页
We report the results of the experiment on synthesizing ^(287,288)Mc isotopes (Z=115) using the fusionevaporation reaction ^(243)Am(^(48)Ca,4n,3n)^(287,288)Mc at the Spectrometer for Heavy Atoms and Nuclear Structure-... We report the results of the experiment on synthesizing ^(287,288)Mc isotopes (Z=115) using the fusionevaporation reaction ^(243)Am(^(48)Ca,4n,3n)^(287,288)Mc at the Spectrometer for Heavy Atoms and Nuclear Structure-2(SHANS2),a gas-filled recoil separator located at the China Accelerator Facility for Superheavy Elements(CAFE2).In total,20 decay chains are attributed to ^(288)Mc and 1 decay chain is assigned to ^(287)Mc.The measured oa-decay properties of ^(287,288)Mc as well as its descendants are consistent with the known data.No additional decay chains originating from the 2n or 5n reaction channels were detected.The excitation function of the ^(243)Am(^(48)Ca,3n)^(288)Mc reaction was measured at the cross-section level of picobarn,which indicates the promising capability for the study of heavy and superheavy nuclei at the facility. 展开更多
关键词 spectrometer heavy atoms fusionevaporation reaction China Accelerator Facility Superheavy Elements PRODUCTION decay chains ISOTOPES ca am reaction mc
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CRISPR/Cas基因编辑技术在艾滋病治疗中的研究现状与挑战
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作者 杨灿 刘真 +5 位作者 张敏 张清燕 邓博文 李承乘 李杰 郭会军 《中国艾滋病性病》 北大核心 2026年第1期114-119,共6页
艾滋病基因治疗一直是研究者们关注的热点。成簇规律间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白系统(CRISPR/Cas)设计简单、操作方便、靶向性强、灵敏度高,是新颖有效的第三代“基因组定点编辑技术”。本文综述了CRISPR/Cas系统的历史由来、作... 艾滋病基因治疗一直是研究者们关注的热点。成簇规律间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白系统(CRISPR/Cas)设计简单、操作方便、靶向性强、灵敏度高,是新颖有效的第三代“基因组定点编辑技术”。本文综述了CRISPR/Cas系统的历史由来、作用机理及艾滋病治疗中的CRISPR/Cas类型,在此基础之上,聚焦于该系统在艾滋病治疗领域的研究进展和应用,从干扰病毒复制周期,清除潜伏前病毒以及调节宿主免疫三方面进行深入分析。同时提出目前存在的诸多挑战:HIV对CRISPR/Cas系统的逃逸、HIV感染细胞中CRISPR/Cas系统的高效递送、针对HIV的CRISPR/Cas独特且多靶点设计、AIDS患者Cas免疫炎症交错复杂。探讨其可能策略,以期为艾滋病基因治疗的开发和临床应用提供方向。 展开更多
关键词 艾滋病 基因治疗 CRISPR/cas基因编辑
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CRISPR-Cas系统的小型化研究进展 被引量:1
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作者 董颖 马孟丹 黄卫人 《合成生物学》 北大核心 2025年第1期105-117,共13页
CRISPR-Cas基因编辑技术由于其简便性和高效性,已被广泛应用于生物学、医学、农学等领域的基础与应用研究。目前广泛使用的Cas核酸酶均具有较大的分子量(通常大于1000个氨基酸),而广泛应用于基因治疗中的腺相关病毒(AAV)载体的承载容量... CRISPR-Cas基因编辑技术由于其简便性和高效性,已被广泛应用于生物学、医学、农学等领域的基础与应用研究。目前广泛使用的Cas核酸酶均具有较大的分子量(通常大于1000个氨基酸),而广泛应用于基因治疗中的腺相关病毒(AAV)载体的承载容量却十分有限,在容纳CRISPR核酸酶与gRNA的编码序列之余往往难以承载更多其他功能元件,如碱基编辑、转录调控、多基因编辑等相应元件,这严重限制了其在基因治疗等领域的应用。使用紧凑型Cas蛋白变体的CRISPR-Cas系统可能有助于用AAV产生和传递基因组编辑和调节工具到人类细胞。因此,小型化的CRISPR-Cas系统开发是解决这一技术难题的重要途径,本文主要概括了基于Cas9、Cas12和Cas13蛋白系统在小型化方面的研究进展,包括筛选新型Cas蛋白、缩减蛋白结构域以及引导RNA的改造等,旨在为开发微型精准基因编辑和调控工具提供新思路。目前小型化的CRISPR-Cas系统的局限性主要体现在蛋白分子量的大小和基因编辑的效率、特异性不可兼得上,在未来的研究中若能解决这一问题,获得更小型化的结构域,相信不仅能够优化该系统在体内的传递,更有望为临床带来高效率且低损害的治疗方法。 展开更多
关键词 CRISPR-cas系统 小型化cas蛋白 cas蛋白工程化改造 紧凑型cas蛋白 基因调控工具
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基于CRISPR/Cas9技术构建猪GRSF1基因敲除细胞系及其对细胞活性的影响分析
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作者 杜鹏飞 彭听雨 +3 位作者 范双旗 郑海学 朱紫祥 陈金顶 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第2期161-167,共7页
利用CRISPR/Cas9技术构建鸟嘌呤富含序列因子1(GRSF1)基因敲除的PK-15细胞并探究GRSF1基因敲除对于细胞活性的影响。首先,设计了4条靶向猪源GRSF1基因的sgRNAs(sgRNA-1、sgRNA-2、sgRNA-3和sgRNA-4),经退火后与慢病毒载体质粒(Lenti-CRI... 利用CRISPR/Cas9技术构建鸟嘌呤富含序列因子1(GRSF1)基因敲除的PK-15细胞并探究GRSF1基因敲除对于细胞活性的影响。首先,设计了4条靶向猪源GRSF1基因的sgRNAs(sgRNA-1、sgRNA-2、sgRNA-3和sgRNA-4),经退火后与慢病毒载体质粒(Lenti-CRISPR v2)连接。随后将构建成功的慢病毒载体与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染人胚胎肾细胞(HEK-293T),获得慢病毒并感染PK-15细胞。最终经嘌呤霉素筛选和梯度稀释法获得GRSF1敲除的PK-15单克隆细胞系。通过Western-blot及测序验证GRSF1的敲除效率,然后进行单克隆细胞活性检测及IL-6水平检测。结果表明,本研究成功获得3株GRSF1基因敲除成功的PK-15单克隆细胞系,并证实GRSF1基因敲除影响PK-15细胞中IL-6表达的上调,为后续研究猪GRSF1的生物学功能提供细胞模型。 展开更多
关键词 GRSF1 PK-15 CRISPR/cas9 基因敲除
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水稻抗ACCase抑制剂类除草剂两系不育系种质资源的创制
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作者 郭金梦 陶开亮 +10 位作者 朱俊 赵学宇 李康 甘泉 林翠香 汪楠胜 于豪 宋丰顺 李娟 石英尧 倪大虎 《中国水稻科学》 北大核心 2026年第2期223-234,共12页
【目的】创制抗除草剂水稻新种质是培育抗除草剂水稻新品种的前提。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以安9S不育系为材料,编辑乙酰辅酶A羧化酶OsACC1基因,创制具有抗除草剂特性的两系不育系水稻新种质。【方法】利用CRISPR/Cas9技术,以乙... 【目的】创制抗除草剂水稻新种质是培育抗除草剂水稻新品种的前提。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以安9S不育系为材料,编辑乙酰辅酶A羧化酶OsACC1基因,创制具有抗除草剂特性的两系不育系水稻新种质。【方法】利用CRISPR/Cas9技术,以乙酰辅酶A羧化酶OsACC1为靶基因,构建单碱基突变载体e PE2-ACC-I1879V,以安9S为转化材料,利用农杆菌介导法转化获得转基因植株,通过对转基因植株的突变位点进行测序结合除草剂喷施试验、农艺性状分析,鉴定基因型及表型。【结果】经分子水平检测验证,T_(0)代获得ACC1^(I1879V)突变植株24株;经分离筛选,T_(1)代24个株系共获得96株纯合突变单株,均具有除草剂抗性。高通量测序结果显示,三个试验组株系(NS512、NS513、NS514)均不含外源转基因成分,且喷施4%甲禾灵存活率仍达到100%。与对照安9S相比,NS512株系株高增加,剑叶变宽;NS513株系株高增高,剑叶变长变宽;NS514株系剑叶变窄;三个试验组株系的育性未发生改变,单株有效穗数、穗长、均没有显著差异。转基因安全性评价分析表明,OsACC1基因编码蛋白与已知毒蛋白、抗营养因子及过敏原均无相似序列,不存在毒性、致敏性问题。【结论】利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,能够获得具有抗ACCase抑制剂类除草剂特性、稳定遗传、不含转基因成分、育性不发生改变、安全无害的纯合株系,可为水稻抗除草剂育种提供材料基础。 展开更多
关键词 CRISPR/cas9 基因编辑 乙酰辅酶A羧化酶 不育系
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利用CRISPR/Cas9技术创制糯稻新种质
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作者 潘月云 黄雨青 +3 位作者 丁正权 施扬 黄海祥 李白 《浙江农业学报》 北大核心 2026年第1期17-23,共7页
稻米直链淀粉含量直接影响其蒸煮食味品质,该性状主要由Waxy(Wx)基因控制。本研究基于Wx基因上SNP的表型关联分析,选择其第3、第4外显子设计编辑靶点。利用CRISPR/Cas9技术,以水稻品种嘉禾香1号为受体,对Wx基因进行编辑。经PCR与Sanger... 稻米直链淀粉含量直接影响其蒸煮食味品质,该性状主要由Waxy(Wx)基因控制。本研究基于Wx基因上SNP的表型关联分析,选择其第3、第4外显子设计编辑靶点。利用CRISPR/Cas9技术,以水稻品种嘉禾香1号为受体,对Wx基因进行编辑。经PCR与Sanger测序验证,获得4个不同类型的双位点纯合突变体。4个双位点纯合T 2代突变体株系的稻米均呈蜡质状,其直链淀粉含量由野生型的16.9%降至0.83%~1.23%,达到糯稻水平。结果表明,利用CRISPR/Cas9技术可快速创制优质香糯型水稻种质资源。 展开更多
关键词 水稻 WX基因 CRISPR/cas9 直链淀粉
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基于CRISPR/Cas9技术的西方蜜蜂AmBgb敲除及功能分析
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作者 赖雨 许瑞鑫 +8 位作者 朱雅楠 傅云熙 田林艳 吴胜利 陈志杰 单简 付艳芳 苏松坤 聂红毅 《昆虫学报》 北大核心 2026年第1期34-41,共8页
【目的】核心结合因子(core binding factor,CBF)β亚基(CBFβ)是一种重要的转录因子,在昆虫胚胎发育和免疫调节等过程中发挥关键作用,但是其在西方蜜蜂Apis mellifera中尚未报道。本研究旨在利用CRISPR/Cas9技术探究CBFβ在西方蜜蜂中... 【目的】核心结合因子(core binding factor,CBF)β亚基(CBFβ)是一种重要的转录因子,在昆虫胚胎发育和免疫调节等过程中发挥关键作用,但是其在西方蜜蜂Apis mellifera中尚未报道。本研究旨在利用CRISPR/Cas9技术探究CBFβ在西方蜜蜂中的生理功能。【方法】克隆西方蜜蜂Bgb(big brother)基因AmBgb的编码序列(coding sequence,CDS),并进行生物信息学分析;运用qRT-PCR检测AmBgb在西方蜜蜂不同发育发育阶段(1-3日龄工蜂卵,1,3和5日龄工蜂幼虫,工蜂预蛹,1,3,5,7和9日龄工蜂蛹,刚出房工蜂,10日龄哺育蜂以及21日龄采集蜂)的表达量;采用CRISPR/Cas9敲除西方蜜蜂卵中AmBgb,监测卵的发育和存活情况,并通过PCR和测序的方法检测靶位点,验证AmBgb在西方蜜蜂中的生理功能。【结果】西方蜜蜂AmBgb的CDS全长为759 bp,编码252个氨基酸,第39-201位氨基酸存在1个CBFβ结构域;AmBgb分子量为28982.37 D,无信号肽和跨膜结构,预测其为胞内蛋白;系统进化树显示西方蜜蜂AmBgb与东方蜜蜂A.cerana的Bgb高度同源(氨基酸序列一致性为99.21%),且亲缘关系最密切。AmBgb在2和3日龄工蜂卵中的表达量明显高于其他发育阶段的。基于CRISPR/Cas9处理的西方蜜蜂43粒卵中,有5粒卵孵化为幼虫且AmBgb靶位点无突变;随机对7粒死亡卵进行检测,发现6粒卵中AmBgb的靶位点出现基因编辑,包括不同长度插入、缺失或替换。【结论】西方蜜蜂AmBgb在2和3日龄卵中高量表达,敲除AmBgb导致卵不能正常孵化为幼虫。这些结果表明AmBgb在西方蜜蜂胚胎发育过程中发挥重要作用,这将为其他膜翅目(Hymenoptera)昆虫中该基因的生理功能研究提供理论指导。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 核心结合因子β亚基 基因克隆 时期表达谱 CRISPR/cas9
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类食品乳杆菌LBM 12001基于CRISPR/Cas9技术多基因编辑平台的构建
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作者 黄宗潇 侯倩 +2 位作者 徐岩 黄卫宁 穆晓清 《食品与发酵工业》 北大核心 2026年第3期11-19,共9页
作为传统发酵食品的核心功能菌株,类食品乳杆菌(Lactobacillus paralimentarius)的代谢调控网络解析常受限于低效的遗传操作体系。该研究旨在开发一种高效、无痕的CRISPR/Cas9基因编辑平台,以解决类食品乳杆菌多基因编辑的技术瓶颈。通... 作为传统发酵食品的核心功能菌株,类食品乳杆菌(Lactobacillus paralimentarius)的代谢调控网络解析常受限于低效的遗传操作体系。该研究旨在开发一种高效、无痕的CRISPR/Cas9基因编辑平台,以解决类食品乳杆菌多基因编辑的技术瓶颈。通过优化质粒大小以及引入λ-Red重组酶辅助同源重组,构建了双质粒系统(pCRI01/pCRI02)。实验结果表明,该系统显著提升了转化效率[单基因敲除转化子达(63±11)个,阳性突变率75%],并实现了三基因同步敲除[转化子(57±8)个,突变率(46±7)%]。创新性整合BioBricks模块化组装、温度敏感型复制子及自靶向诱导型sgRNA技术,使多基因编辑周期缩短40%以上。该体系突破了传统方法的效率限制,成功实现多基因无痕编辑,为构建类食品乳杆菌高效细胞工厂提供了关键性技术支撑。 展开更多
关键词 类食品乳杆菌 CRISPR/cas9 多基因编辑 λ-Red重组酶 BioBricks组装
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左侧海马CA4区血脑屏障通透性升高与卒中后认知障碍的关系
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作者 王帅国 王子豪 +2 位作者 荆京 林金嬉 孟霞 《首都医科大学学报》 北大核心 2026年第1期54-61,共8页
目的探索左侧海马阿蒙角4(cornu ammonis 4,CA4)区血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性与卒中后认知障碍(post-stroke cognitive impairment,PSCI)之间的关系。方法本研究为多中心前瞻性队列研究,连续纳入97例短暂性脑缺血发作(tra... 目的探索左侧海马阿蒙角4(cornu ammonis 4,CA4)区血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性与卒中后认知障碍(post-stroke cognitive impairment,PSCI)之间的关系。方法本研究为多中心前瞻性队列研究,连续纳入97例短暂性脑缺血发作(transient ischemic attack,TIA)/轻型缺血性卒中患者。入院7 d内行动态对比增强磁共振成像,基于Patlak模型计算海马亚区BBB通透性参数——容积转运常数(volume transfer constant,K trans)。根据随访6个月时蒙特利尔认知评估量表(Montreal Cognitive Assessment,MoCA)评分,将患者分为PSCI与卒中后非认知障碍(post-stroke non-cognitive impairment,PSNCI)组。采用多因素Logistic回归探讨左侧海马CA4区BBB通透性与认知结局的关系。结果65例患者完成随访,其中PSCI组13例(20.0%)。PSCI组患者年龄大、教育年限短、基线MoCA评分低(P<0.05)。左侧海马CA4区BBB通透性升高与MoCA总分下降相关,并与执行功能和命名能力评分呈负相关。左侧海马CA4区BBB通透性升高是PSCI的独立危险因素。结论左侧海马CA4区BBB通透性升高与TIA/轻型缺血性卒中患者6个月时的认知评分较低独立相关,可作为预测PSCI的潜在影像学标志物。 展开更多
关键词 卒中后认知障碍 短暂性脑缺血发作 轻型缺血性卒中 血脑屏障 海马ca4区 动态对比增强磁共振成像
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CRISPR/Cas系统在分子诊断领域的应用研究进展
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作者 王珂 陈文慧 +1 位作者 雷春阳 聂舟 《合成生物学》 北大核心 2026年第1期3-31,共29页
CRISPR/Cas系统因其高特异性、可编程性和便捷性,已成为分子诊断领域的重要工具。本文综述了CRISPR/Cas系统的技术原理、诊断平台优化及其在精准医学中的应用进展。概述了CRISPR/Cas系统的作用机制与分类,重点讨论了CRISPR诊断技术的创... CRISPR/Cas系统因其高特异性、可编程性和便捷性,已成为分子诊断领域的重要工具。本文综述了CRISPR/Cas系统的技术原理、诊断平台优化及其在精准医学中的应用进展。概述了CRISPR/Cas系统的作用机制与分类,重点讨论了CRISPR诊断技术的创新优化策略,包括基于核酸预扩增[如SHERLOCK(specific highsensitivity enzymatic reporter unlocking)、DETECTR(DNA endonuclease targeted CRISPR trans reporter)]和免扩增的检测方法。探讨了CRISPR/Cas技术在感染性疾病(病原体筛查、耐药性检测)、肿瘤分子分型(癌症早筛、遗传变异分析)及非核酸标志物检测中的临床应用。最后展望了该技术的未来发展方向,包括微型化设备开发、高通量智能化诊断体系构等,并分析了其在临床转化中面临的关键挑战(如灵敏度标准化、成本控制等)。通过总结目前研究,为CRISPR/Cas技术在分子诊断领域的进一步优化和医学应用提供理论参考。 展开更多
关键词 CRISPR/cas系统 即时检测 临床转化应用 微型化设备 人工智能辅助分子诊断
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