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丹参CYP76AH1转基因毛状根的建立及其蛋白的分离
被引量：
3
1
作者
齐梦蝶
王健
+5 位作者
马晓晶
张权
王方方
康莹
刘勇
林慧馨
《中国中药杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第20期3901-3905,共5页
蛋白质复合物参与植物多种次生代谢物的合成,其分离对阐明植物次生代谢及提高体外催化效率至关重要。该研究构建了过表达丹参酮合成途径关键酶CYP76AH1的转基因毛状根株系,通过Western杂交筛选得到高表达CYP76AH1蛋白的丹参转基因毛状根...
蛋白质复合物参与植物多种次生代谢物的合成,其分离对阐明植物次生代谢及提高体外催化效率至关重要。该研究构建了过表达丹参酮合成途径关键酶CYP76AH1的转基因毛状根株系,通过Western杂交筛选得到高表达CYP76AH1蛋白的丹参转基因毛状根,并以此作为后续提取丹参酮合成途径中蛋白质复合物的组培材料。通过优化蛋白提取缓冲液中的去污剂种类和浓度,筛选出含0.5%Triton X-100的缓冲液为最佳提取缓冲液,并分离得到相对大量的可溶性CYP76AH1蛋白质。该研究为后续进一步分离纯化与CYP76AH1相互作用的蛋白质复合物奠定了基础,也为深度解析丹参酮合成代谢通路提供思路。
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关键词
蛋白质复合物
次生代谢物
丹参酮
cyp76ah1
转基因毛状根
去污剂
原文传递
转化次丹参酮二烯酿酒酵母全细胞催化体系的构建
被引量：
4
2
作者
蔡媛
郭娟
+5 位作者
周雍进
朱志伟
吴文燕
黄璐琦
陈敏
赵宗保
《药学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期1618-1623,共6页
丹参酮是中药丹参的重要活性成分之一,其代谢途径尚未明确。快速筛选和鉴定丹参酮生物合成途径相关基因具有重要意义。铁锈醇作为丹参酮代谢途径中间产物,其产量相对较低,为得到大量铁锈醇用来作为下游P450功能鉴定的底物进行下游途径解...
丹参酮是中药丹参的重要活性成分之一,其代谢途径尚未明确。快速筛选和鉴定丹参酮生物合成途径相关基因具有重要意义。铁锈醇作为丹参酮代谢途径中间产物,其产量相对较低,为得到大量铁锈醇用来作为下游P450功能鉴定的底物进行下游途径解析,迫切需要建立高效转化次丹参酮二烯至铁锈醇的体系。本文以酿酒酵母为宿主,构建了含有催化次丹参酮二烯生成铁锈醇的CYP76AH1及P450还原酶SmCPR1全细胞催化体系,并在DNA及mRNA水平对其进行了表征。通过透性剂处理,实现了一步生物转化合成铁锈醇,转化效率达到了69.9%。该研究证实含有CYP76AH1及来源于丹参的细胞色素还原酶SmCPR1的酿酒酵母能够将次丹参酮二烯转化为铁锈醇,研究结果不仅为生物转化生产铁锈醇提供了一个有效平台,还可以用于鉴定丹参酮下游合成的其他CYP450的功能。
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关键词
丹参
cyp76ah1
酿酒酵母
全细胞催化
原文传递
题名
丹参CYP76AH1转基因毛状根的建立及其蛋白的分离
被引量：
3
1
作者
齐梦蝶
王健
马晓晶
张权
王方方
康莹
刘勇
林慧馨
机构
中国中医科学院中药资源中心道地药材国家重点实验室培育基地
北京中医药大学
出处
《中国中药杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第20期3901-3905,共5页
基金
国家自然科学基金项目(ZZ2016026)
中央本级重大增减支项目(2060302)
文摘
蛋白质复合物参与植物多种次生代谢物的合成,其分离对阐明植物次生代谢及提高体外催化效率至关重要。该研究构建了过表达丹参酮合成途径关键酶CYP76AH1的转基因毛状根株系,通过Western杂交筛选得到高表达CYP76AH1蛋白的丹参转基因毛状根,并以此作为后续提取丹参酮合成途径中蛋白质复合物的组培材料。通过优化蛋白提取缓冲液中的去污剂种类和浓度,筛选出含0.5%Triton X-100的缓冲液为最佳提取缓冲液,并分离得到相对大量的可溶性CYP76AH1蛋白质。该研究为后续进一步分离纯化与CYP76AH1相互作用的蛋白质复合物奠定了基础,也为深度解析丹参酮合成代谢通路提供思路。
关键词
蛋白质复合物
次生代谢物
丹参酮
cyp76ah1
转基因毛状根
去污剂
Keywords
protein complexes
secondary metabolism
tanshinone
cyp76ah1
transgenic hairy root
detergent
分类号
S567.53 [农业科学—中草药栽培]
原文传递
题名
转化次丹参酮二烯酿酒酵母全细胞催化体系的构建
被引量：
4
2
作者
蔡媛
郭娟
周雍进
朱志伟
吴文燕
黄璐琦
陈敏
赵宗保
机构
中国中医科学院中药资源中心
中国科学院大连化学物理研究所生物技术部
出处
《药学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期1618-1623,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(81202871
81072990)
北京市教育委员会科学研究与研究生培养共建项目(学科建设)
文摘
丹参酮是中药丹参的重要活性成分之一,其代谢途径尚未明确。快速筛选和鉴定丹参酮生物合成途径相关基因具有重要意义。铁锈醇作为丹参酮代谢途径中间产物,其产量相对较低,为得到大量铁锈醇用来作为下游P450功能鉴定的底物进行下游途径解析,迫切需要建立高效转化次丹参酮二烯至铁锈醇的体系。本文以酿酒酵母为宿主,构建了含有催化次丹参酮二烯生成铁锈醇的CYP76AH1及P450还原酶SmCPR1全细胞催化体系,并在DNA及mRNA水平对其进行了表征。通过透性剂处理,实现了一步生物转化合成铁锈醇,转化效率达到了69.9%。该研究证实含有CYP76AH1及来源于丹参的细胞色素还原酶SmCPR1的酿酒酵母能够将次丹参酮二烯转化为铁锈醇,研究结果不仅为生物转化生产铁锈醇提供了一个有效平台,还可以用于鉴定丹参酮下游合成的其他CYP450的功能。
关键词
丹参
cyp76ah1
酿酒酵母
全细胞催化
Keywords
Salvia miltiorrhiza
CYP76AH 1
Saccharomyces cerevisiae
whole-cell biocatalyst
分类号
R931 [医药卫生—生药学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
丹参CYP76AH1转基因毛状根的建立及其蛋白的分离
齐梦蝶
王健
马晓晶
张权
王方方
康莹
刘勇
林慧馨
《中国中药杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017
3
原文传递
2
转化次丹参酮二烯酿酒酵母全细胞催化体系的构建
蔡媛
郭娟
周雍进
朱志伟
吴文燕
黄璐琦
陈敏
赵宗保
《药学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
4
原文传递
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