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高分辨率熔解曲线分析检测家蝇cyp6d1基因突变 被引量：4
1
作者 王英红 孔庆鑫 +3 位作者 邱丽华 韦凌娅 沈林海 倪晓平 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 2012年第6期499-502,共4页
目的探讨家蝇溴氰菊酯抗性机制。方法使用高分辨率熔解曲线(highresolutionmelting,HRM)分析与半分析定量PCR相结合的方法,分析家蝇抗性基因cyp6d1突变和扩增情况。通过对扩增的PCR产物进行测序来验证HRM准确性。结果与敏感品系相比,抗... 目的探讨家蝇溴氰菊酯抗性机制。方法使用高分辨率熔解曲线(highresolutionmelting,HRM)分析与半分析定量PCR相结合的方法,分析家蝇抗性基因cyp6d1突变和扩增情况。通过对扩增的PCR产物进行测序来验证HRM准确性。结果与敏感品系相比,抗性品系cyp6d1基因的mRNA表达量显著增加(P=0.0002),抗性品系cyp6d1基因的mRNA表达量是敏感品系的50.7倍;使用HRM对cyp6d1进行突变分析,将其分为3种基因型,分别为A型(Tm=85.5℃)、B型(Tm=87.3℃)和C型(Tm=88.5℃);经测序,该HRM分析结果分别与3类基因序列型相对应。A型基因型为纯合的1087G、1101T和1155A(对应GenBank序列号U22367.1);C型基因型为纯合的1087A、1101G和1155G;B型基因型为A型和C型的杂合型。生物信息学分析表明,该突变为无意义突变。结论杭州市家蝇抗性品系cyp6d1基因mRNA表达量显著增加,可能是家蝇抗性增加的原因之一。 展开更多
关键词 高分辨率熔解曲线 家蝇 抗性 基因突变 cyp6d1
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siRNA对家蝇拟除虫菊酯抗性基因cyp6d1沉默效果研究
2
作者 孔庆鑫 韦凌娅 +2 位作者 沈林海 王英红 曹阳 《中国预防医学杂志》 CAS CSCD 2019年第11期1049-1053,共5页
目的利用siRNA对家蝇拟除虫菊酯抗性基因cyp6d1的表达进行干扰,并对基因沉默效果进行评价。方法人工合成家蝇cyp6d1基因的siRNA,编号为C474、C1226、C1446;采用微量注射方式将其导入实验室筛选出的cyp6d1基因高表达家蝇品系个体中;采用... 目的利用siRNA对家蝇拟除虫菊酯抗性基因cyp6d1的表达进行干扰,并对基因沉默效果进行评价。方法人工合成家蝇cyp6d1基因的siRNA,编号为C474、C1226、C1446;采用微量注射方式将其导入实验室筛选出的cyp6d1基因高表达家蝇品系个体中;采用荧光染料PCR法对RNA干扰处理组和对照组家蝇体内mRNA的表达量进行定量测定,观察不同处理组cyp6d1基因的沉默效应。结果微量注射导入C474、C1226、C1446和阴性对照的家蝇cyp6d1基因mRNA表达量组间差异有统计学意义(F=14.948,P=0.000),组内比较显示各处理组与阴性对照组mRNA的表达量差异均有统计学意义。注射C474、C1226、C1466的处理组之间差异无统计学意义(F=2.615,P=0.101)。相对于阴性对照,注射了C474、C1226、C1466的处理组mRNA抑制率分别为63.74%、72.28%和65.99%。结论采用微量注射方式将人工合成的siRNA C474、C1226、C1446导入家蝇体内,可以在mRNA水平上对其cyp6d1基因的表达实现有效沉默。 展开更多
关键词 家蝇 cyp6d1基因 RNA干扰 抗性 荧光定量PCR 拟除虫菊酯
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双链RNA饲喂干扰家蝇CYP6D1基因表达方法的建立
3
作者 孔庆鑫 韦凌娅 +2 位作者 沈林海 王英红 曹阳 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 2020年第4期430-432,共3页
目的利用饲喂双链RNA(dsRNA)对家蝇拟除虫菊酯抗性相关基因CYP6D1的表达进行干扰,并对干扰效果进行评价。方法化学合成家蝇CYP6D1基因,连接入载体质粒L4440,转化入大肠埃希菌DH5α扩增质粒。抽提质粒,将其转化到大肠埃希菌HT115(DE3),... 目的利用饲喂双链RNA(dsRNA)对家蝇拟除虫菊酯抗性相关基因CYP6D1的表达进行干扰,并对干扰效果进行评价。方法化学合成家蝇CYP6D1基因,连接入载体质粒L4440,转化入大肠埃希菌DH5α扩增质粒。抽提质粒,将其转化到大肠埃希菌HT115(DE3),并在异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下表达CYP6D1基因的dsRNA。将含有CYP6D1基因dsRNA的HT115(DE3)饲喂家蝇,72 h后通过荧光相对定量技术评价家蝇体内CYP6D1基因的表达变化。未进行质粒L4440转化的大肠埃希菌菌株HT115(DE3)饲喂家蝇作为对照。结果采用2-△△Ct法对对照组和处理组的mRNA相对表达量进行定量。目的基因和内参基因标准曲线R2值均>0.99,扩增效率M值均在0.90~1.10之间。与对照组相比,处理组CYP6D1基因mRNA相对表达量下降了40.1%,两者之间差异有统计学意义(t=-11.377,P=0.008)。结论初步建立了饲喂dsRNA对家蝇拟除虫菊酯抗性基因CYP6D1表达进行干扰的方法,在mRNA水平上实现基因表达干扰效果。 展开更多
关键词 家蝇 cyp6d1基因 RNA干扰 抗药性
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在无杀虫剂选择下家蝇拟除虫菊酯抗性等位基因频率的变化 被引量：2
4
作者 潘婧 周云辉 +2 位作者 李梅 李保同 邱星辉 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 北大核心 2015年第3期176-180,共5页
家蝇是重要的卫生害虫，拟除虫菊酯杀虫剂的广泛使用导致了家蝇抗药性的产生，家蝇种群演化出了多重的抗性等位基因。为推测抗性等位基因在无杀虫剂选择压下是否存在适合度代价，对来源于野外的北京家蝇种群（ BJ2010）连续饲养25代，... 家蝇是重要的卫生害虫，拟除虫菊酯杀虫剂的广泛使用导致了家蝇抗药性的产生，家蝇种群演化出了多重的抗性等位基因。为推测抗性等位基因在无杀虫剂选择压下是否存在适合度代价，对来源于野外的北京家蝇种群（ BJ2010）连续饲养25代，在不接触杀虫剂的实验室条件下，每隔5代检测基因型频率，测定该种群的钠离子通道等位基因和CYP6D1基因频率随时间的变化。研究结果显示，与拟除虫菊酯抗性相关的钠离子通道抗性等位基因kdr-his和CYP6D1v1频率值随时间有一定的波动，但没有显著的变化，说明kdr-his和CYP6D1v1等位基因在无杀虫剂选择压下不存在明显的适合度代价。另一钠离子通道抗性等位基因kdr起始频率很低，其频率的最终减低可能是由于遗传漂变的结果。因此，伴随拟除虫菊酯杀虫抗药性出现的抗性等位基因在BJ2010品系家蝇中并不表现适合度劣势，提示家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性一旦形成，将难于自然消减。 展开更多
关键词 家蝇 拟除虫菊酯杀虫剂 抗药性 cyp6d1 钠离子通道
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广西北海市家蝇杀虫剂抗性基因频率的检测与分析 被引量：2
5
作者 丁岩 杨婵 +2 位作者 李梅 冯向阳 邱星辉 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 2017年第1期12-15,共4页
目的通过检测杀虫剂抗性基因频率对广西壮族自治区北海市家蝇的抗药性现状进行分析,为该地区家蝇的防治提供依据。方法通过限制性片段长度多态性聚合酶链反应方法对野外采集家蝇的细胞色素P450 CYP6D1基因、钠离子通道基因(Vssc)和乙酰... 目的通过检测杀虫剂抗性基因频率对广西壮族自治区北海市家蝇的抗药性现状进行分析,为该地区家蝇的防治提供依据。方法通过限制性片段长度多态性聚合酶链反应方法对野外采集家蝇的细胞色素P450 CYP6D1基因、钠离子通道基因(Vssc)和乙酰胆碱酯酶(AChE)基因(ace)进行分型,统计其基因型频率。结果北海市的63只家蝇样本经过检测,未发现CYP6D1抗性纯合个体,而敏感纯合个体所占比例高达96.83%(61/63),杂合个体频率为3.17%(2/63),CYP6D1抗性等位基因频率仅为1.59%。在同一样本中,检测到Vssc杂合子(1014L/F)的基因频率为6.35%(4/63),敏感纯合子(1014L/L)的个体基因频率高达93.65%(59/63),未发现1014F的纯合个体及1014H突变个体。在北海市的38只家蝇样本中,检测到342G/A和342A/V两种AChE基因型个体,其频率分别为5.26%和94.74%,抗性等位基因频率总和(342A+342V)高达97.37%。结论北海市家蝇样本中的CYP6D1和Vssc抗性等位基因频率均较低,而AChE抗性等位基因频率极高,提示目前北海市可使用拟除虫菊酯类杀虫剂防治家蝇;同时在该地区减少使用有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂进行灭蝇,避免家蝇种群抗性基因频率继续升高,以延缓抗性的发展。 展开更多
关键词 家蝇 抗药性 cyp6d1 钠离子通道 乙酰胆碱酯酶 北海市
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莆田市蝇类与甲乙类肠道传染病相关性及其抗药性特点 被引量：5
6
作者 黄婧雯 李玉伟 +2 位作者 陈斌 章灿明 林姿 《环境卫生学杂志》 2023年第5期352-356,共5页
目的分析蝇类与甲乙类肠道传染病的相关性,调查莆田市蝇类的抗药性水平以及抗性基因频率。方法用笼诱法监测2019—2022年莆田市蝇类密度,从中国疾病预防控制中心疾病监测信息系统导出甲乙类肠道传染病数据,并用相关性分析二者的关系。... 目的分析蝇类与甲乙类肠道传染病的相关性,调查莆田市蝇类的抗药性水平以及抗性基因频率。方法用笼诱法监测2019—2022年莆田市蝇类密度,从中国疾病预防控制中心疾病监测信息系统导出甲乙类肠道传染病数据,并用相关性分析二者的关系。采用点滴法、测序和PCR-RFLP(限制性片段长度多态性聚合酶链反应)鉴定抗药性水平以及相关基因型。结果蝇类密度与肠道传染病发病率有一定相关性。莆田市家蝇对毒死蜱表现为敏感,抗性倍数为1.438;对氯菊酯表现出抗性,抗性倍数为8.489。未检测到Vssc(电压门控钠离子通道)基因的突变;CYP6D1v1(细胞色素P450)抗性基因频率为18.57%。结论蝇类密度与甲乙类肠道传染病具有一定相关性,降低蝇类密度有助于减少其发病率。莆田市家蝇对毒死蜱尚未产生抗性,对氯菊酯已产生抗性。 展开更多
关键词 蝇 肠道传染病 抗药性 钠离子通道Vssc 细胞色素P450 cyp6d1v1
暂未订购
不同家蝇种群拟除虫菊酯杀虫剂抗性基因频率的比较研究 被引量：4
7
作者 潘婧 邱星辉 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 2015年第5期443-446,共4页
目的家蝇是一种广泛分布的重要公共卫生害虫,开展其遗传学、分子生物学的研究为认识和利用家蝇,有效地控制蝇传疾病提供科学依据。方法检测我国5个家蝇种群中拟除虫菊酯类杀虫剂抗性等位基因的频率,通过分析在无杀虫剂选择条件下抗性等... 目的家蝇是一种广泛分布的重要公共卫生害虫,开展其遗传学、分子生物学的研究为认识和利用家蝇,有效地控制蝇传疾病提供科学依据。方法检测我国5个家蝇种群中拟除虫菊酯类杀虫剂抗性等位基因的频率,通过分析在无杀虫剂选择条件下抗性等位基因频率的变化,推测抗性等位基因适合度效应。结果研究数据显示,与拟除虫菊酯类代谢抗性相关联的细胞色素P450(CYP6D1v1)抗性等位基因在广东、上海和北京家蝇种群中频率上升,表明CYP6D1v1抗性等位基因不存在适合度代价;而CYP6D1v1等位基因在起始频率很低的山东和吉林种群中消失,可能是遗传漂变的结果。家蝇钠离子通道(Vssc)抗性等位基因(kdr-his)频率在广东、山东和吉林种群中下降,而在上海和北京种群中则有所上升,其中变化最大的是山东种群,kdr-his基因频率由起始较高的0.33降至0,表明kdr-his等位基因的适合度因种群的不同而不同。进一步的序列分析表明,kdr-his等位基因可以区分为不同的单倍型,上述kdr-his基因频率的变化因种群而异,可能是因为不同家蝇种群其钠离子通道基因单倍型有所不同。结论不同的抗性基因或相同基因的不同单倍型具有不同的适合度,提示家蝇抗药性检测和抗性治理要因地制宜。 展开更多
关键词 家蝇 抗药性 拟除虫菊酯 细胞色素P450 钠离子通道 等位基因频率
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