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稻瘟菌MgCYP51B基因稀有密码子和mRNA二级结构分析与表达优化 被引量:5
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作者 齐婷 刘婧 +3 位作者 李倩 余金辉 袁永泽 刘德立 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2014年第3期392-398,共7页
在大肠杆菌中异源表达稻瘟菌CYP51(P450-14DM,MgCYP51B)基因,通过对MgCYP51B进行跨膜区预测和同源模建分析,并截短稻瘟菌CYP51B基因,构建了9种不同的重组表达质粒以实现蛋白表达.结果表明:只有pET28-MgB-83在3种宿主菌中实现了表达,且在... 在大肠杆菌中异源表达稻瘟菌CYP51(P450-14DM,MgCYP51B)基因,通过对MgCYP51B进行跨膜区预测和同源模建分析,并截短稻瘟菌CYP51B基因,构建了9种不同的重组表达质粒以实现蛋白表达.结果表明:只有pET28-MgB-83在3种宿主菌中实现了表达,且在BL21(DE3)pLysS中表达量最大.通过对稀有密码子和mRNA翻译起始区二级结构进行分析,发现稀有密码子和mRNA翻译起始区二级结构稳定性对MgCYP51B蛋白的表达都有影响,适用于稀有密码子表达的Rossetta(DE3)并不适用于MgCYP51B基因的最优表达.同时只有翻译起始区二级结构自由能最低的pET28-MgB-83才能实现表达.本研究实现了稻瘟菌MgCYP51B基因在大肠杆菌中的异源表达,证实密码子的偏爱性和翻译起始区二级结构稳定性影响MgCYP51B蛋白表达. 展开更多
关键词 Mgcyp51b 翻译起始区 稀有密码子 表达优化
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柑橘青霉菌CYP51B基因和上游调控区克隆及生物信息学分析 被引量:1
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作者 牛玉慧 刘婧 +8 位作者 齐婷 伍志 秦婷婷 李青 钟靖然 张恒 王崇武 袁永泽 刘德立 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期76-87,共12页
【目的】克隆柑橘青霉菌(意大利青霉菌,Penicillium italicum)CYP51的同源基因,并对基因序列进行生物信息学分析。【方法】通过PCR及染色体步移技术得到基因的完整序列及上下游调控序列。通过生物信息学手段对基因的结构进行分析:使用N... 【目的】克隆柑橘青霉菌(意大利青霉菌,Penicillium italicum)CYP51的同源基因,并对基因序列进行生物信息学分析。【方法】通过PCR及染色体步移技术得到基因的完整序列及上下游调控序列。通过生物信息学手段对基因的结构进行分析:使用NNPP分析软件预测转录起始位点,并利用TFSEARCH1.3软件分析转录因子结合位点。利用SWISS-MODEL在线软件对蛋白进行同源模建。【结果】克隆得到了意大利青霉菌CYP51的同源基因,命名为Pi CYP51B。获得的Pi CYP51B及上下游调控区序列总长为3 496 bp,包括上游910 bp和下游834 bp的序列。Pi CYP51B基因的开放阅读框全长1 575 bp,编码524个氨基酸。该基因含有3个分别为74、51、52 bp的内含子,分别位于247 bp与320 bp之间,519 bp与569 bp之间,1 635 bp与1 686 bp之间。Pi CYP51B 5′上游调控区序列的总长为579 bp。生物信息学分析结果显示:转录起始位点位于上游458 bp处;上游调控区不仅包含启动子的核心结构序列TATA盒(位于-25 bp处),也包含多个转录因子结合位点,如Abd-B、ADR1、AP-4、GATA-1、Cdx A、Clox和Oct-1等。在上游调控序列中嘌呤含量高,而且从+387 bp处开始存在4个连续高嘌呤含量的热激转录因子特异性结合位点(HSF);在+106 bp处开始存在3个连续的Cdx A转录因子结合位点。选用人CYP51晶体结构(PDB ID:3LD6)为模板,利用SWISS-MODEL在线软件构建了意大利青霉菌CYP51B蛋白的结构模型。【结论】克隆了意大利青霉Pi CYP51B基因,其上游含有多个热激应答转录因子特异性结合位点(HSF)表明其参与逆境应答。该基因作为意大利青霉菌CYP51的同源基因,可能与青霉菌对真菌药物的抗药性密切相关。 展开更多
关键词 意大利青霉菌 PI cyp51b 5′上游调控序列 同源模建
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禾谷镰孢菌FgCYP51B蛋白Y137H影响分生孢子及子囊孢子发育 被引量:1
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作者 迟梦宇 钱恒伟 +2 位作者 赵颖 赵彦翔 黄金光 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期283-288,共6页
小麦赤霉病(Fusarium Head Blight,FHB),主要是由镰刀菌属真菌引起的一种流行性毁灭性病害。在世界各小麦种植区尤其是温暖潮湿和半潮湿地区发生最为严重[1,2]。它不仅能够降低小麦产量,其染病麦粒中还会产生对人畜健康严重危害的真菌毒... 小麦赤霉病(Fusarium Head Blight,FHB),主要是由镰刀菌属真菌引起的一种流行性毁灭性病害。在世界各小麦种植区尤其是温暖潮湿和半潮湿地区发生最为严重[1,2]。它不仅能够降低小麦产量,其染病麦粒中还会产生对人畜健康严重危害的真菌毒素[3]。在不同的地区由于气候因素和地理环境的不同,分布着不同的致病菌株。 展开更多
关键词 FUSARIUM GRAMINEARUM cyp51b MUTAGENESIS biological PHENOTYPE
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禾谷镰孢FgCYP51B蛋白F511L突变对分生孢子产量及其对烯唑醇敏感性的影响
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作者 孙晓梅 赵彦翔 +1 位作者 迟梦宇 黄金光 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期47-54,共8页
Phe511是禾谷镰孢甾醇-14α-脱甲基酶FgCYP51B活性口袋中的一个重要氨基酸。本研究中,我们探究了FgCYP51B蛋白中该位点突变后对禾谷镰孢主要生物学表型的影响,并通过分子对接探讨了可能的原因。结果表明禾谷镰孢FgCYP51B-F511L突变体在... Phe511是禾谷镰孢甾醇-14α-脱甲基酶FgCYP51B活性口袋中的一个重要氨基酸。本研究中,我们探究了FgCYP51B蛋白中该位点突变后对禾谷镰孢主要生物学表型的影响,并通过分子对接探讨了可能的原因。结果表明禾谷镰孢FgCYP51B-F511L突变体在菌落形态、生长速率等表型上与野生型菌株PH-1没有明显差异。但是F511L突变导致分生孢子的产量严重降低,对烯唑醇的敏感性增强。分子对接发现突变后亮氨酸的长侧链使得烯唑醇的甲基发生扭转,侧链朝向发生改变,更有利于与蛋白受体形成较强的疏水作用,这可能是导致FgCYP51B-F511L突变体对烯唑醇敏感性增强的原因。 展开更多
关键词 禾谷镰孢 cyp51b 点突变 生物学表型 药剂敏感性
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Sterol demethylation inhibitor fungicide resistance in Colletotrichum siamense from chili is caused by mutations in CYP51A and CYP51B
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作者 Wenchan Chen Lingling Wei +3 位作者 Rongxian Hou Yangyang Zhao Yancun Zhao Fengquan Liu 《Phytopathology Research》 2022年第1期123-138,共16页
Anthracnose,caused by fungi of the genus Colletotrichum,is a serious disease of chili worldwide.Sterol 14α-demethylation inhibitors(DMIs)are a class of chemical fungicides that can effectively control anthracnose dis... Anthracnose,caused by fungi of the genus Colletotrichum,is a serious disease of chili worldwide.Sterol 14α-demethylation inhibitors(DMIs)are a class of chemical fungicides that can effectively control anthracnose diseases.In this study,22 Colletotrichum isolates collected from commercial chili fields in Zhangzhou,Fujian Province,China,were identified as Colletotrichum siamense.The sensitivities of the 22 C.siamense isolates to tebuconazole were determined based on the EC_(50)(50%effective inhibition concentration)value.The results showed that the EC_(50)values of the two isolates to tebuconazole were 0.039±0.0036 and 0.042±0.0012 mg/L,while the other 20 isolates showed significantly decreased sensitivities to tebuconazole,with EC_(50)values ranging from 0.61±0.056 to 1.94±0.11 mg/L.Sequence analysis of CYP51A and CYP51B revealed five genotype mutations(i.e.,CYP51A^(V46L,D115V,P163S,R306K,E397D),CYP51A^(D115V,S164Y,R306K,E397D),CYP51A^(D115V,R306K,P339T,E397D),CYP51A^(D115V,R306K,E397D,S400N),and CYP51A^(D115V,R306K,E397D)CYP51BR266H)in the resistant isolates.The tebuconazole-resistant isolates of five genotypes suffered a fitness penalty and exhibited cross-resistance to difenoconazole,prochloraz,and propiconazole.Additionally,the five genotype mutations were validated as being responsible for tebuconazole-resistance in C.siamense by construction of replacement mutants.Overexpression of CYP51A and CYP51B was not detected in the replacement mutants of the five genotypes.Overall,the present study is the first to report DMI resistance in C.siamense and provides significant information for rational use of DMIs to control chili anthracnose. 展开更多
关键词 ANTHRACNOSE Chili DMI fungicides Fitness CYP51A and cyp51b Resistance mechanism
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