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心力衰竭合并cvb3感染病毒性心肌炎大鼠抗原特异性的自反应T细胞表达分析
1
作者 杜海燕 李长青 包秋红 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第10期1162-1166,共5页
目的 探究心力衰竭合并cvb3感染病毒性心肌炎大鼠抗原特异性的自反应T细胞表达特征。方法 研究对象选取A/J雄性大鼠合计30只,建立慢性心力衰竭模型后随机分为对照组及感染组,感染组使用CVB3菌株感染,比较两组大鼠心脏和胰腺病理学变化;... 目的 探究心力衰竭合并cvb3感染病毒性心肌炎大鼠抗原特异性的自反应T细胞表达特征。方法 研究对象选取A/J雄性大鼠合计30只,建立慢性心力衰竭模型后随机分为对照组及感染组,感染组使用CVB3菌株感染,比较两组大鼠心脏和胰腺病理学变化;获取大鼠淋巴细胞,使用IA k/IE k右旋聚体对细胞染色后进行流式细胞术检测,观察大鼠Myhc 334-352、ANT 21-40、BCKDk 111-130、SERCA2a 971-990和β1 AR 181-200/211-230特异性抗原T细胞表达。结果 感染组大鼠胰腺及心脏组织表现出心房炎症浸润,心肌浸润伴坏死和矿化,胰腺炎症浸润、萎缩和坏死/矿化,呈现炎症损伤;感染组淋巴结淋巴细胞Myhc 334-352、SERCA2a 971-990抗原特异性的自反应T细胞表达高于对照组(P<0.05),两组ANT 21-40、BCKDk 111-130、β1 AR 181-200/211-230抗原特异性的自反应T细胞表达差异无统计学意义(P>0.05);感染组肝脏淋巴细胞Myhc 334-352、SERCA2a 971-990、ANT 21-40抗原特异性的自反应T细胞表达高于对照组(P<0.05),两组BCKDk 111-130、β1 AR 181-200/211-230抗原特异性的自反应T细胞表达差异无统计学意义(P>0.05);感染组心脏淋巴细胞Myhc 334-352、SERCA2a 971-990抗原特异性的自反应T细胞表达高于对照组(P<0.05),两组ANT 21-40、BCKDk 111-130、β1 AR 181-200/211-230抗原特异性的自反应T细胞表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 心力衰竭合并cvb3感染病毒性心肌炎大鼠表现出心脏及胰腺炎性损伤,CVB3感染可能导致具有多种抗原特异性的致病性自身反应性T细胞的产生,其中以Myhc 334-352、SERCA2a 971-990为主,T细胞可能是CVB3感染中心脏自身免疫的主要介质。 展开更多
关键词 心力衰竭 cvb3感染 病毒性心肌炎 抗原特异性 T细胞
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C家族趋化因子XCL1增强CVB3基因疫苗的抗病毒免疫应答及保护作用 被引量：9
2
作者 岳艳 徐薇 +3 位作者 蒋正刚 胡林昆 李康 熊思东 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期91-95,共5页
为提高以往构建的基因疫苗pcDNA3.1-VP1的抗B3型柯萨奇病毒(CVB3)感染的免疫效果,以编码C家族趋化因子XCL1的质粒pcDNA3.1-XCL1共注射,观察诱导的CVB3特异性免疫应答及CVB3病毒性心肌炎预防效果。将两种质粒各50μg混合后分别于0、2、4... 为提高以往构建的基因疫苗pcDNA3.1-VP1的抗B3型柯萨奇病毒(CVB3)感染的免疫效果,以编码C家族趋化因子XCL1的质粒pcDNA3.1-XCL1共注射,观察诱导的CVB3特异性免疫应答及CVB3病毒性心肌炎预防效果。将两种质粒各50μg混合后分别于0、2、4、6周肌注免疫小鼠4次,末次免疫后4周分别以5×LD50剂量CVB3攻击小鼠观察保护率,或以3×LD50剂量CVB3感染小鼠观察病毒性心肌炎的诱生。结果显示,与单纯pcDNA3.1-VP1质粒相比,XCL1质粒共注射可增强血清CVB3特异性IgG以及特异性CTL应答。5×LD50病毒攻击后,共注射组体重降低7.28%,而pcDNA3.1-VP1组体重降低10.97%;共注射组28 d保护率达40%,高于pcDNA3.1-VP1组的30%。3×LD50病毒感染后心肌组织病理显示,共注射组心外膜下仅有轻微炎症,心肌内未见炎症细胞浸润,而pcDNA3.1-VP1组除心外膜下有较多淋巴细胞聚集外,心肌内有少量炎症浸润和坏死灶。提示XCL1质粒共注射可增强CVB3特异性体液和细胞免疫应答及抗病毒保护,可有效预防病毒性心肌炎的发生。 展开更多
关键词 cvb3 基因疫苗 XCL1 共注射 病毒性心肌炎
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柴胡 黄芩 炙甘草对小鼠CVB3心肌炎治疗作用的研究 被引量：11
3
作者 卫文峰 张国成 +1 位作者 许东亮 李小青 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 2003年第3期223-225,共3页
目的　探讨单剂柴胡、黄芩、炙甘草对柯萨奇病毒B3(CVB3)感染的病毒性心肌炎小鼠的治疗作用。方法　用CVB3感染Balb/C小鼠造成病毒性心肌炎模型 ,分别用生理盐水、柴胡、黄芩、炙甘草灌胃治疗 ,观察病毒感染后不同时间点的心肌组织病理... 目的　探讨单剂柴胡、黄芩、炙甘草对柯萨奇病毒B3(CVB3)感染的病毒性心肌炎小鼠的治疗作用。方法　用CVB3感染Balb/C小鼠造成病毒性心肌炎模型 ,分别用生理盐水、柴胡、黄芩、炙甘草灌胃治疗 ,观察病毒感染后不同时间点的心肌组织病理变化。结果　柴胡组小鼠在感染后第 5 ,7,10天心肌病理积分为 1.33±0 .82 ,1.6 0± 0 .6 3和 1.87± 0 .74 ,明显低于对照组 (2 .2 2± 1.37,3.2 7± 0 .96 ,2 .6 0± 1.0 6 ) (P <0 .0 5或 0 .0 1)。炙甘草组小鼠在感染后第 5 ,7天心肌病理积分为 1.2 6± 0 .88和 1.80± 0 .6 8,明显低于相应对照组 (P <0 .0 5或0 .0 1)。黄芩组小鼠在感染第 14 ,2 1天后心肌病理积分 (1.5 3± 0 .74 ,0 .80± 0 .5 6 )与对照组 (2 .33± 0 .98,1.4 0±0 .83)比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　单剂柴胡、黄芩。 展开更多
关键词 柴胡 黄芩 炙甘草 小鼠 cvb3 心肌炎 药物治疗 柯萨奇病毒B3感染
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反复CVB3m感染对小鼠心肌的影响 被引量：8
4
作者 聂宏刚 关振中 +3 位作者 侯桂英 钟学宽 周令望 张丽丽 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期295-297,共3页
目的　研究反复病毒感染对小鼠心肌的损伤 ,观察转化生长因子β1(TGF-β1)在反复病毒性心肌损伤心肌基质胶原重建中的作用。方法　通过 3次反复且增量 CVB3 m病毒感染小鼠 ,建立慢性心肌损伤模型 ,于首次感染后第 74d处死小鼠 ,病理、... 目的　研究反复病毒感染对小鼠心肌的损伤 ,观察转化生长因子β1(TGF-β1)在反复病毒性心肌损伤心肌基质胶原重建中的作用。方法　通过 3次反复且增量 CVB3 m病毒感染小鼠 ,建立慢性心肌损伤模型 ,于首次感染后第 74d处死小鼠 ,病理、组织化学及电镜分析心肌病理损伤和胶原系统改变 ,计算胶原容积分数。用EL ISA法测定血清 TGF-β1含量。结果　反复病毒感染后小鼠心功能降低 ,心肌胶原容积分数高于对照组 (P <0 .0 5) ,基质胶原明显增生重建 ,主要表现为瘢痕修复和间质纤维化。反复病毒感染组血清 TGF-β1含量 (0 .10 3 5± 1.2 70 0 ) μg/L 高于对照组 (P <0 .0 5)。结论　反复病毒感染对小鼠心肌的影响主要是基质胶原系统的增生重建 ,持续病毒感染和 展开更多
关键词 cvb3m感染 小鼠 病毒感染 心肌损伤 转化生长因子Β1 TGF-Β1
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黄芩 柴胡及其配伍提取物对心肌炎小鼠心肌组织CVB3m RNA复制及IFNm RNA表达的影响 被引量：8
5
作者 刘芳 王雪峰 +3 位作者 闫丽娟 南春红 岳志军 杨贵将 《中华中医药学刊》 CAS 2010年第8期1601-1604,共4页
目的:研究黄芩、柴胡及其配伍提取物对心肌炎小鼠心肌组织CVB3mRNA复制及IFNmRNA表达的影响。方法:将Balb/c小鼠随机分为:柴胡组、黄芩组、配伍组,模型组和正常对照组。腹腔注射CVB3m病毒诱导Balb/c小鼠心肌炎模型,采用RT-PCR技术,检测... 目的:研究黄芩、柴胡及其配伍提取物对心肌炎小鼠心肌组织CVB3mRNA复制及IFNmRNA表达的影响。方法:将Balb/c小鼠随机分为:柴胡组、黄芩组、配伍组,模型组和正常对照组。腹腔注射CVB3m病毒诱导Balb/c小鼠心肌炎模型,采用RT-PCR技术,检测各组小鼠给药后不同时间点心肌组织中CVB3m RNA的复制和IFNm RNA的表达情况。结果:3个给药组心肌组织中CVB3m-RNA的量明显低于模型对照组,其中黄芩组和配伍物组抗病毒作用明显;柴胡组和配伍组均可诱生干扰素,与模型组比较有显著差异。结论:黄芩提取物组具有明显抗病毒作用;柴胡在疾病早期具有明显抗病毒作用,且具有明显诱生干扰素的作用;配伍提取物组具有明显抗病毒和诱生干扰素作用,在疾病极期表现明显优势。 展开更多
关键词 病毒性心肌炎 黄芩 柴胡 中药提取物 IFN cvb3M
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酵母双杂交技术筛选与CVB3 VP1直接作用的细胞蛋白 被引量：4
6
作者 刘发娣 余克花 +5 位作者 罗达亚 徐秋芳 莫冰 罗军 刘晶星 黄孝天 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期991-995,共5页
目的以CVB3VP1为诱饵蛋白,筛选与CVB3VP1直接作用的人心脏cDNA文库基因,并对阳性cDNA克隆进行初步分析和鉴定。方法酵母双杂交技术筛选人心脏cDNA文库;经阳性克隆的表型确定、PCR扩增cDNA插入片段和Alu I酶切等试验将阳性克隆归类,并进... 目的以CVB3VP1为诱饵蛋白,筛选与CVB3VP1直接作用的人心脏cDNA文库基因,并对阳性cDNA克隆进行初步分析和鉴定。方法酵母双杂交技术筛选人心脏cDNA文库;经阳性克隆的表型确定、PCR扩增cDNA插入片段和Alu I酶切等试验将阳性克隆归类,并进行测序和同源性比对分析;α-半乳糖苷酶活性定量分析VP1与各阳性蛋白之间相互作用的强弱。结果在人心脏cDNA文库中筛选到5个阳性克隆,分别为:MNAT1(CAK装配因子),GOLGA2(高尔基体基质蛋白GM130),PHR1(视网膜PH结构域蛋白1),LDB1(LI M结构域结合蛋白1),NADH脱氢酶亚单位4。将筛选的GOLGA2cDNA新序列提交给NCBI GenBank数据库,获得Accession Number:AY823636;α-半乳糖苷酶定量分析试验进一步证明了MNAT1、GOLGA2、PHR1和LDB1等4个基因与VP1均有较强的相互作用。结论本研究成功地运用了酵母双杂交技术,以CVB3VP1为诱饵蛋白,从人心脏cDNA文库中获得5种不同类别的阳性基因:MNAT1、GOLGA2、PHR1、LDB1和NADH脱氢酶亚单位4。 展开更多
关键词 酵母双杂交 柯萨奇病毒 cvb3 VP1
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不同免疫途径对chitosan-DNA疫苗诱导CVB3特异性免疫应答的影响及其意义 被引量：3
7
作者 徐薇 沈燕 +2 位作者 张进平 王缨 熊思东 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期250-253,共4页
目的　确定新型chitosan DNA疫苗的有效免疫途径。方法　将chitosan pcDNA3 VP1疫分别苗以肌注、口服、滴鼻 3种免疫方式免疫Balb c小鼠 ;以ELISA检测免疫小鼠血清中IgG、IgM、IgA ,评估其特异性体液免疫应答 ;以特异性淋巴细胞增殖反应... 目的　确定新型chitosan DNA疫苗的有效免疫途径。方法　将chitosan pcDNA3 VP1疫分别苗以肌注、口服、滴鼻 3种免疫方式免疫Balb c小鼠 ;以ELISA检测免疫小鼠血清中IgG、IgM、IgA ,评估其特异性体液免疫应答 ;以特异性淋巴细胞增殖反应和CTL活性反映其诱导细胞免疫 ;以 5LD50 致死剂量CVB3攻击免疫小鼠 ,评价不同免疫途径的免疫保护效果。结果　①在诱导CVB3特异性体液免疫方面 :chitosan pcDNA3 VP1疫苗肌注组诱生了高水平IgM和IgG ,但未能诱生黏膜IgA ;口服免疫组仅诱生低水平的黏膜IgA ,未能诱生特异性IgM和IgG ;滴鼻组可诱生低水平的IgM及高水平的IgG和黏膜IgA。②在诱导CVB3特异性细胞免疫方面 :仅滴鼻组诱导了较高水平的淋巴细胞特异性增殖反应和CTL活性 ;口服组的淋巴细胞增殖活性和CTL活性稍弱 ;肌注组几乎不能诱导特异性细胞免疫应答。③免疫保护作用 :滴鼻组可保护 33.3%小鼠长期存活 ;口服组仅达到 16 .7%的保护率 ;肌注组无保护作用。结论　滴鼻免疫途径可能是chitosan pcDNA3 展开更多
关键词 chitosan-DNA疫苗 诱导 cvb3 特异性 免疫应答 影响 滴鼻
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MDSCs诱导调节性T细胞改善CVB3诱导的病毒性心肌炎 被引量：4
8
作者 苏楠 岳艳 +2 位作者 胡静平 董春升 熊思东 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期742-745,754,共5页
目的探讨骨髓来源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)在CVB3诱导的病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)中的保护作用。方法通过流式细胞术分选获得足量MDSCs,体外证实具有免疫抑制功能后行体内转输实验,观察疗效及免... 目的探讨骨髓来源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)在CVB3诱导的病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)中的保护作用。方法通过流式细胞术分选获得足量MDSCs,体外证实具有免疫抑制功能后行体内转输实验,观察疗效及免疫机制。结果与对照PBS组相比,MDSCs处理组体质量呈上升趋势,肌酸激酶(CK)活性明显降低(P<0.001),心脏局部炎症浸润及坏死病灶显著减少,7天生存率高达70%(P<0.01),而心肌病毒滴度无明显改变,却上调了CD4+FoxP3+调节性T细胞比例。结论 MDSCs可显著改善CVB3诱导的病毒性心肌炎,有望成为心肌炎防治的新型策略和手段。 展开更多
关键词 MDSCS 病毒性心肌炎 cvb3 TREG
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CVB3-VP1基因免疫诱导特异性抗病毒免疫应答及保护作用 被引量：2
9
作者 徐薇 沈燕 +3 位作者 王立新 许从峰 郑秀娟 熊思东 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期239-241,251,共4页
目的 :构建表达柯萨奇病毒B3(CVB3)主要包膜蛋白VP1的基因疫苗 ,并研究该疫苗诱导CVB3特异性免疫应答及免疫保护的作用。方法 :抽提CVB3RNA ,以RT PCR扩增VP1基因 ,克隆于真核表达载体 pcDNA3中 ,构建质粒pcDNA3 VP1。将该质粒转染Hela... 目的 :构建表达柯萨奇病毒B3(CVB3)主要包膜蛋白VP1的基因疫苗 ,并研究该疫苗诱导CVB3特异性免疫应答及免疫保护的作用。方法 :抽提CVB3RNA ,以RT PCR扩增VP1基因 ,克隆于真核表达载体 pcDNA3中 ,构建质粒pcDNA3 VP1。将该质粒转染Hela细胞 ,观察其表达情况 ;以 5 0 μgpcDNA3 VP1质粒DNA肌注免疫BALB/c小鼠 3次 ,检测CVB3特异性体液和细胞免疫应答。间隔 4wk以 5×LD50 的CVB3攻击小鼠 ,观察攻击后小鼠的存活情况。结果 :构建了重组质粒 pcDNA3 VP1,并在体外获得有效表达。以该质粒肌肉免疫BALB/c小鼠 ,可诱生高水平的IgM和IgG ,VP1多肽特异性淋巴细胞增殖反应及CTL活性均显著高于 pcDNA3免疫的对照组。病毒攻击试验表明 ,pcDNA3 VP1免疫组33.3%小鼠可长期存活 ,其心肌组织未见明显的病理学改变 ;而对照小鼠平均仅存活 6 .7d ,心肌显示大量的局灶性坏死和炎性细胞浸润。结论 :pcDNA3 VP1免疫可诱生CVB3特异性体液及细胞免疫应答 。 展开更多
关键词 cvb3 VPI 基因免疫 免疫保护
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黄芪三萜皂苷通过抑制TGF-β1/Smad2、p38MAPK信号抑制CVB3诱导的心肌纤维化 被引量：12
10
作者 张兰 刘晶 +4 位作者 刘天龙 张勇 刘小玲 肖云峰 刘小雷 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2018年第5期2631-2634,共4页
目的本文旨在研究黄芪三萜皂苷(astragalus saponins,AST)对CVB3诱导心肌纤维化的保护作用及机制。方法使用CVB3病毒和BALB/c小鼠制备病毒性心肌炎模型并使用AST进行干预。记录不同处理组小鼠的生存曲线、检测不同干预组小鼠外周血中CK... 目的本文旨在研究黄芪三萜皂苷(astragalus saponins,AST)对CVB3诱导心肌纤维化的保护作用及机制。方法使用CVB3病毒和BALB/c小鼠制备病毒性心肌炎模型并使用AST进行干预。记录不同处理组小鼠的生存曲线、检测不同干预组小鼠外周血中CK-MB水平、心肌组织HE染色和天狼星红染色检测心肌损伤和纤维化水平及通过western blot和qPCR检测心肌组织中TGF-β1、Smad2及p38MAPK水平以研究AST的作用机制。结果 AST能够显著提高小鼠的生存率,显著降低CVB3诱导的心肌损伤和外周血中CK-MB水平。与CVB3组小鼠比较,AST干预组小鼠心肌组织纤维化面积显著减少。无论是RNA水平还是蛋白水平,CVB3能够显著诱导TGF-β1、Smad2及p38MAPK在心肌组织中的表达,而AST对此具有显著地抑制作用。结论 AST对CVB3诱导的心肌组织纤维化具有显著地抑制作用,这种保护作用与抑制CVB3诱导的TGF-β1/Smad2、p38MAPK信号在心肌组织中的活化有关。 展开更多
关键词 黄芪三萜皂苷 cvb3 心肌纤维化 TGF—β1/Smad2 p38MAPK信号
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IL-15基因真核表达质粒的构建及其对CVB3 VP1基因疫苗的免疫增强作用 被引量：4
11
作者 房文亮 王永祥 +2 位作者 金玉怀 金士香 周雪燕 《河北医科大学学报》 CAS 2003年第3期129-132,共4页
目的探讨人白细胞介素 15 (humaninterleukin 15 ,hIL 15 )基因佐剂对柯萨奇B3病毒 (CoxsackievirusB3 ,CVB3 )VP1基因疫苗的免疫增强效果。方法从人胚肺二倍体细胞提取hIL 15的mRNA ,用逆转录 聚合酶链反应 (reversetranscriptase pol... 目的探讨人白细胞介素 15 (humaninterleukin 15 ,hIL 15 )基因佐剂对柯萨奇B3病毒 (CoxsackievirusB3 ,CVB3 )VP1基因疫苗的免疫增强效果。方法从人胚肺二倍体细胞提取hIL 15的mRNA ,用逆转录 聚合酶链反应 (reversetranscriptase polymerasechainreaction ,RT PCR)扩增出cDNA ,构建成真核表达克隆 pcDNA3 IL 15。将pcDNA3 VP1、pcDNA3 VP1+ pcDNA3 IL 15、pcDNA3 IL 15、pcDNA3和盐水分别肌内注射Balb/c小鼠 ,每次免疫后 6天取血清用微量中和试验测CVB3中和抗体 ,3次免疫后用 80 0TCID5 0CVB3感染小鼠 ,观察小鼠的生存率。结果 pcDNA3 IL 15重组质粒的目的基因与hIL 15基因序列相同 ;pcDNA3 VP1和pcDNA3 VP1+ pcDNA3 IL 15能诱导小鼠产生中和抗体 ,抗体滴度随免疫次数增加而提高 ;pcDNA3 VP1+ pcDNA3 IL 15组抗体滴度和生存率均高于 pcDNA3 VP1组。结论本研究成功构建了hIL 15重组质粒 ,该质粒对真核表达重组质粒 pcDNA3 展开更多
关键词 IL-15基因 真核表达 质粒 构建 cvb3VPl基因 1基因疫苗 免疫增强效果 柯萨奇病毒B组
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黄芪三萜皂苷对CVB3病毒所致细胞凋亡的保护作用 被引量：2
12
作者 魏青 刘小玲 +3 位作者 郑兰兵 刘小雷 刘天龙 孙建军 《中南药学》 CAS 2012年第10期730-734,共5页
目的应用分子生物学技术探讨黄芪三萜皂苷(total extract of astragalus,TEA)对柯萨奇B组3型病毒(CVB3)致细胞凋亡的保护作用。方法利用CVB3感染Vero细胞建立细胞凋亡模型并使用TEA对模型进行治疗,检测DNA Ladder以了解凋亡细胞DNA断裂... 目的应用分子生物学技术探讨黄芪三萜皂苷(total extract of astragalus,TEA)对柯萨奇B组3型病毒(CVB3)致细胞凋亡的保护作用。方法利用CVB3感染Vero细胞建立细胞凋亡模型并使用TEA对模型进行治疗,检测DNA Ladder以了解凋亡细胞DNA断裂情况;通过TUNNEL标记法、Annexin-V/PI染色、Hoechst33258染色观察细胞凋亡程度,比较各组间细胞凋亡的差异。结果 CVB3感染后,Vero细胞DNA的紫外成像呈现阶梯状条带,TEA组可观察到DNA断裂程度降低;TUNNEL检测可看到凋亡存在,病毒组显色较深,细胞凋亡程度较TEA组严重;Annexin-V/PI染色可见病毒组Vero细胞膜呈绿色荧光,细胞核显红色,核凝聚及裂解,并有凋亡小体存在,TEA组细胞状态改善;Hoechst33258染色结果表明,病毒组Vero细胞核显蓝色荧光,可看到凋亡中期核染色质凝聚、边缘化及晚期凋亡小体的典型变化。TEA组细胞状态改善,凋亡细胞数目减少。正常细胞对照组的细胞贴壁状态良好。流式细胞仪检测结果表明,黄芪三萜皂苷能够显著的降低试验组Vero细胞的凋亡率。结论 TEA对CVB3病毒感染的Vero细胞具有一定的保护作用,抑制细胞凋亡,其作用机制尚需做进一步探讨。 展开更多
关键词 黄芪三萜皂苷 cvb3 细胞凋亡
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CVB3感染通过MCP-1介导病毒性心肌炎小鼠单个核细胞迁移 被引量：1
13
作者 沈燕 陈瑞珍 +2 位作者 储以微 徐焕宾 熊思东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期325-328,共4页
目的:研究B3型柯萨奇病毒(CVB3)感染与病毒性心肌炎(VMC)炎症细胞迁移的关系及机制。方法:采用差异贴壁法分离小鼠心肌细胞;趋化试验分析心肌细胞培养上清对VMC小鼠外周血单个核细胞(PMNC)的趋化性;实时定量RT PCR分析心肌细胞MCP 1的... 目的:研究B3型柯萨奇病毒(CVB3)感染与病毒性心肌炎(VMC)炎症细胞迁移的关系及机制。方法:采用差异贴壁法分离小鼠心肌细胞;趋化试验分析心肌细胞培养上清对VMC小鼠外周血单个核细胞(PMNC)的趋化性;实时定量RT PCR分析心肌细胞MCP 1的表达。结果:( 1)CVB3感染心肌细胞培养上清对VMC小鼠PMNC的趋化性明显增强。( 2 )CVB3感染2小时后MCP 1的表达开始升高,至6小时达到高峰,8小时下降;随着CVB3感染量的增加,MCP 1的表达明显升高。( 3)2 5 μg/ml抗MCP 1抗体处理后,CVB3感染心肌细胞培养上清对VMC小鼠PMNC的趋化性下降5 4 % (P <0 0 1) ;5 μg/ml抗MCP 1抗体处理后,趋化性下降的幅度与2 5 μg/ml抗MCP 1抗体处理的相比未见明显差异(P >0 0 5 )。结论:CVB3感染通过MCP 1介导VMC小鼠单个核细胞迁移。 展开更多
关键词 cvb3 MCP-1 心肌细胞 趋化作用
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酵母双杂交筛选与CVB33A相互作用的人心脏蛋白 被引量：1
14
作者 张静怡 赵颖洁 +5 位作者 李秀珍 方舒 何冰清 刘曦 罗军 黄孝天 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期146-149,共4页
目的以CVB3非结构蛋白3A为诱饵,从人心脏cDNA文库中筛选与其相互作用的宿主蛋白,对阳性cDNA克隆进行初步分析和鉴定。方法构建pGBKT7-3A重组质粒,Western Blot检测3A融合蛋白的表达;利用酵母双杂交技术筛选人心脏cDNA文库,经PCR扩增cDN... 目的以CVB3非结构蛋白3A为诱饵,从人心脏cDNA文库中筛选与其相互作用的宿主蛋白,对阳性cDNA克隆进行初步分析和鉴定。方法构建pGBKT7-3A重组质粒,Western Blot检测3A融合蛋白的表达;利用酵母双杂交技术筛选人心脏cDNA文库,经PCR扩增cDNA插入片段和Alu I酶切等实验将阳性克隆归类,并通过测序、相似性比对分析和回返配合实验去除假阳性蛋白。结果成功构建诱饵质粒pGBKT7-3A,Western Blot结果表明,pGBKT7-3A重组质粒在酵母菌中成功表达3A融合蛋白;经双杂交筛选和回返配合实验,获得了7个相互作用的蛋白,分别为:兰尼碱受体2(Ryanodine Receptor 2,RyR2),信号肽酶2(Signal peptidase complex subunit 2,SPCS2),跨膜蛋白emp24(Transmembrane emp24protein transport domain containing 4,TMED4),细胞色素c氧化酶亚基I(Cytochrome c oxidase subunit I,COX1),细胞色素c氧化酶亚基III(Cytochrome c oxidase subunit III,COX3),肌球蛋白重链(Myosin heavy chain,MYH7)和琥珀酸脱氢酶亚基D(Succinate dehydrogenase complex subunit D,SDHD)。结论应用酵母双杂交技术,以CVB3 3A为诱饵蛋白,从人心脏cDNA文库中获得7种不同的阳性基因:RyR2、SPCS2、TMED4、COX1、COX3、MYH7和SDHD,在分子水平上探索3A蛋白的新功能。 展开更多
关键词 酵母双杂交 cvb3 3A
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FasL在CVB3心肌炎小鼠心肌浸润细胞中表达及其与心肌病变关系 被引量：2
15
作者 熊丁丁 杨英珍 +1 位作者 胡英 陈灏珠 《上海医科大学学报》 CSCD 1998年第3期205-208,共4页
目的探讨Ｆａｓ／Ｆａｓ配体（ｌｉｇａｎｄ，Ｌ）介导的细胞毒效应在小鼠柯萨奇Ｂ３病毒（ＣＶＢ３）性心肌炎发病中的作用。方法４０只小鼠等分为实验组即ＣＶＢ３感染组及对照组即非感染组；所有小鼠于感染后第１０天处死并取其心脏... 目的探讨Ｆａｓ／Ｆａｓ配体（ｌｉｇａｎｄ，Ｌ）介导的细胞毒效应在小鼠柯萨奇Ｂ３病毒（ＣＶＢ３）性心肌炎发病中的作用。方法４０只小鼠等分为实验组即ＣＶＢ３感染组及对照组即非感染组；所有小鼠于感染后第１０天处死并取其心脏；采用ＲＴ－ＰＣＲ及免疫组化技术检测心肌浸润细胞中ＦａｓＬ的表达，并用原位杂交方法检测心肌中ＣＶＢ３ＲＮＡ；半定量分析ＦａｓＬ抗原及ＣＶＢ３ＲＮＡ水平，并分析ＦａｓＬ表达水平与心肌中ＣＶＢ３复制及病变程度的关系。结果①实验组存活小鼠心肌均可见单核细胞浸润和坏死等病变，而对照组小鼠心肌均未见任何损害；②实验组存活小鼠心肌中均见ＦａｓＬ抗原阳性细胞浸润，而对照组则无；③ＲＴ－ＰＣＲ检测显示实验组ＦａｓｍＲＮＡ阳性率明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）；④ＦａｓＬ抗原阳性信号指数与ＣＶＢ３ＲＮＡ杂交阳性信号指数无显著相关（ｒ＝－０．２５，Ｐ＞０．０５），与心肌病变积分呈显著负相关（ｒ＝０．７２，Ｐ＜０．０５）。结论ＣＶＢ３心肌炎小鼠心肌浸润细胞可表达ＦａｓＬ；Ｆａｓ／ＦａｓＬ介导的细胞毒效应可能无抗病毒作用，但可能通过调节细胞介导的细胞毒作用对心肌细胞起一定的保护作用。 展开更多
关键词 病毒性心肌炎 CMC FAS/FASL 小鼠 cvb3
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CVB3m病毒致低硒低维生素E鼠心肌损伤的发病机制 被引量：2
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作者 郭玲 钟学宽 +2 位作者 周令望 高彦辉 刘红 《中国地方病防治》 CAS 2002年第1期7-8,共2页
目的　为深入研究CVB3m病毒感染导致的低Se低VE鼠心肌病变中氧化损伤的作用。方法　 1周龄乳鼠给予低Se低VE饲料喂养 ,4周后腹腔接种病毒 ,7d后处死 ,测定全血谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)活性以及肝脏中脂质过氧化物 (LPO)含量 ,光镜... 目的　为深入研究CVB3m病毒感染导致的低Se低VE鼠心肌病变中氧化损伤的作用。方法　 1周龄乳鼠给予低Se低VE饲料喂养 ,4周后腹腔接种病毒 ,7d后处死 ,测定全血谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)活性以及肝脏中脂质过氧化物 (LPO)含量 ,光镜下观察心肌的病理改变。结果　Se和VE联合缺乏鼠感染CVB3m病毒 7d后 ,小鼠全血GSH -Px活性下降 ,肝脏中LPO水平增加 ,光镜下小鼠心肌病变检出率和严重程度均高于补Se常VE病毒组。 展开更多
关键词 低硒 低维生素E 氧化应激 心肌损伤 发病机制 cvb3m病毒 克山病
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Chitosan-DNA基因免疫诱导粘膜特异性免疫应答及其抗CVB3感染作用
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作者 徐薇 沈燕 +3 位作者 王立新 许从峰 储以微 熊思东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期813-817,共5页
目的 :构建新型粘膜基因疫苗 ,诱生CVB3VP1特异性粘膜免疫应答 ,探讨粘膜免疫抗CVB3感染的作用 ,为病毒性心肌炎的特异性防治奠定基础。方法 :抽提CVB3RNA ,以RT PCR扩增得VP1基因 ,插入真核表达载体pcDNA3中 ,构建质粒pcDNA3 VP1,以Chi... 目的 :构建新型粘膜基因疫苗 ,诱生CVB3VP1特异性粘膜免疫应答 ,探讨粘膜免疫抗CVB3感染的作用 ,为病毒性心肌炎的特异性防治奠定基础。方法 :抽提CVB3RNA ,以RT PCR扩增得VP1基因 ,插入真核表达载体pcDNA3中 ,构建质粒pcDNA3 VP1,以Chitosan多糖包裹形成Chitosan DNA基因疫苗。将该质粒转染Hela细胞 ,观察其体外表达情况。以 5 0 μgDNA剂量的Chitosan DNA疫苗滴鼻免疫BALB C小鼠 3次 ,检测CVB3特异性体液和细胞免疫应答 ;隔 4周以 5LD50 活CVB3致死攻击小鼠 ,观察攻击后存活情况。结果 :制备了直径为 80～ 10 0nm的Chitosan DNA复合物颗粒 ,体外转染证实Chitosan DNA复合物中VP1的表达高于pcDNA3 VP1质粒 Lipofectamine的表达水平。该疫苗滴鼻 3次免疫后 ,不仅诱生了高水平的IgG ,而且诱生了高水平的粘膜IgA抗体 ,第 6周抗体P N值分别达 3.5和 3.2。特异性细胞免疫应答研究发现 ,该疫苗诱生了较强的VP1特异性CTL杀伤作用 ,并显著高于pcDNA3 VP1和pcDNA3组。CVB3攻击后 ,可保护 33.3%小鼠长期存活 ,而pcDNA3和pcDNA3 VP1质粒滴鼻免疫对照组的平均存活天数分别为 8.5和 10 .8天。病理学研究显示 :Chitosan DNA免疫小鼠心肌组织基本正常 ,而对照小鼠死亡前心肌显示大量的灶性坏死和炎性浸润。结论 展开更多
关键词 cvb3 VP1 Chitosan-DNA疫苗 滴鼻 免疫保护
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酵母双杂交筛选与CVB3 VP3相互作用的人心脏蛋白
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作者 张志勤 赵颖洁 +4 位作者 夏燕华 王静 项国仕 邹叶青 黄孝天 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1014-1019,共6页
目的从人心脏cDNA文库中筛选与B3型柯萨奇病毒(coxsackievirus group B type 3,CVB3)结构蛋白VP3相互作用的蛋白,为进一步研究CVB3分子致病机制提供新的线索。方法构建酵母双杂交重组质粒(pGBKT7-VP3),转化至感受态酵母菌AH109,检测BD-c... 目的从人心脏cDNA文库中筛选与B3型柯萨奇病毒(coxsackievirus group B type 3,CVB3)结构蛋白VP3相互作用的蛋白,为进一步研究CVB3分子致病机制提供新的线索。方法构建酵母双杂交重组质粒(pGBKT7-VP3),转化至感受态酵母菌AH109,检测BD-cMyc-VP3融合蛋白自激活,应用酵母双杂交筛选与CVB3VP3相互作用的人心脏蛋白。对阳性候选克隆进行测序和同源性比对分析;α-半乳糖苷酶活性定量分析VP3与各阳性蛋白之间相互作用的强弱。结果诱饵质粒pGBKT7-VP3构建成功,检测到BD-cMyc-VP3融合蛋白在AH109中表达,且诱饵蛋白VP3在酵母中不存在自激活,从人心脏cDNA文库中筛选到10个与CVB3VP3相互作用的蛋白:真核翻译起始因子4A2、羟酰辅酶A脱氢酶三官能蛋白转录变体3、肌钙蛋白I3型、平滑肌蛋白3、线粒体乙醛脱氢酶2等。结论本研究成功应用酵母双杂交技术筛选出与CVB3VP3相互作用的10个蛋白。为研究CVB3引起心肌炎和心肌疾病的分子致病机制提供了一些新的线索。 展开更多
关键词 酵母双杂交 cvb3 VP3 蛋白相互作用
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心肌特异性microRNA修饰型CVB3病毒诱导小鼠免疫保护作用的研究
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作者 何峰 肖宗慧 +3 位作者 刘卓 姚海兰 冯淼 刘哲伟 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期207-212,共6页
利用基因组中含肌肉特异性miRNA互补序列的修饰型CVB3病毒感染小鼠,研究修饰型病毒在小鼠体内的复制状况以及诱导小鼠免疫保护作用的能力。前期我们在CVB3m株病毒基因组中插入miRNA-133和miRNA-206的互补序列获得修饰型CVB3病毒,命名为C... 利用基因组中含肌肉特异性miRNA互补序列的修饰型CVB3病毒感染小鼠,研究修饰型病毒在小鼠体内的复制状况以及诱导小鼠免疫保护作用的能力。前期我们在CVB3m株病毒基因组中插入miRNA-133和miRNA-206的互补序列获得修饰型CVB3病毒,命名为CVB-3*T。以对照组(CVB-CON)和紫外灭活野生型CVB3m株病毒组(UV-CVB3-WT)作为对照,测定各组病毒对小鼠的LD50剂量、CVB-3*T对小鼠的致死率、感染小鼠心脏和胰腺的病毒滴度以及心脏病理损伤情况,并检测小鼠血清中炎性细胞因子及中和抗体表达水平以及免疫后小鼠抗病毒能力。结果显示,CVB-3*T对小鼠的LD50明显高于对照组;以相同剂量病毒感染小鼠,CVB-3*T可以明显改善小鼠的生存率,心肌部位的病毒量较对照组明显降低,心肌处病理损伤减轻,而胰腺部位的病毒滴度无明显改变;CVB-3*T组小鼠血清中IFN-γ和TNF-α的含量较UV-CVB3-WT组明显升高,IL-4含量无差异;免疫后,CVB-3*T可诱发机体产生高效价抗CVB3中和抗体,可提高小鼠抵抗病毒再次感染的能力。修饰型CVB3病毒感染可以降低病毒对心肌的亲嗜性,激发小鼠抗病毒免疫,还可以诱导小鼠产生抵抗病毒再次感染的能力。本研究为探索制备CVB3疫苗新途径提供了实验证据。 展开更多
关键词 cvb3 miRNA靶序列 小鼠 细胞因子 中和抗体
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紫外灭活CVB3病毒诱导BALB/c小鼠产生免疫保护作用的研究
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作者 何峰 肖宗慧 +4 位作者 刘卓 肖萍 姚海兰 冯淼 刘哲伟 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第20期3801-3805,共5页
目的:探讨紫外灭活型CVB3病毒诱导BALB/c小鼠产生特异性免疫应答及保护作用的评估。方法:采用紫外灭活的方法处理野生型CVB3m株,按照0.1 LD50(10~4 PFU)的剂量免疫小鼠,设置PBS免疫组作为对照,免疫后第3,5,7天收集小鼠血清,检测细胞因... 目的:探讨紫外灭活型CVB3病毒诱导BALB/c小鼠产生特异性免疫应答及保护作用的评估。方法:采用紫外灭活的方法处理野生型CVB3m株,按照0.1 LD50(10~4 PFU)的剂量免疫小鼠,设置PBS免疫组作为对照,免疫后第3,5,7天收集小鼠血清,检测细胞因子含量;在第3,5,7,14天分离小鼠脾脏,流式分析T细胞亚群的分布比例;在免疫后一个月分离小鼠血清,检测中和抗体的滴度;同时间给予小鼠100LD 50野生型CVB3感染,观察小鼠的死亡率。结果:与对照组相比,在检测日期内紫外灭活型CVB3组小鼠血清中细胞因子IL-1α,TNF-α,IL-6的表达量明显增高(P<0.05),IL-4的表达量没有明显差异;免疫后第14天CD3^+CD4^+T细胞的分布较对照组明显升高(P<0.05);在免疫后一个月,紫外灭活型CVB3免疫组可以诱导机体产生高滴度中和抗体,同时,小鼠应对高致死量CVB3感染时有较高的存活率。结论:紫外灭活型CVB3感染能诱导机体产生特异性免疫应答,同时,产生的中和抗体可以提高小鼠应对致死剂量CVB3感染时的生存率,对机体有明显的保护作用。 展开更多
关键词 紫外灭活型cvb3 细胞因子 中和抗体 免疫保护作用
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