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CTCF调控绵羊前体脂肪细胞分化的功能研究
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作者 乔利英 徐常松 +5 位作者 张莉 丁毅 潘洋洋 杨凯捷 刘建华 刘文忠 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第12期6130-6144,共15页
旨在研究CTCF对绵羊前体脂肪细胞分化的作用及其调控机制。本研究采集4只8月龄的广灵大尾羊不同部位脂肪组织,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CTCF的表达水平;1只3日龄健康广灵大尾羊中分离原代前体脂肪细胞,在前体脂肪细胞内过表达或干扰... 旨在研究CTCF对绵羊前体脂肪细胞分化的作用及其调控机制。本研究采集4只8月龄的广灵大尾羊不同部位脂肪组织,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CTCF的表达水平;1只3日龄健康广灵大尾羊中分离原代前体脂肪细胞,在前体脂肪细胞内过表达或干扰CTCF基因,每个处理组设置3个重复。采用qRT-PCR、蛋白质印迹法(Western blotting)和油红O染色技术检测该基因对绵羊前体脂肪细胞分化的调控作用;对过表达CTCF的绵羊前体脂肪细胞进行转录组测序分析,筛选差异基因和通路,探索CTCF调控脂代谢相关信号通路的分子机制。结果表明,CTCF在尾部脂肪中的表达量显著高于肾周和皮下脂肪组织(P<0.05);与对照组相比,过表达CTCF后,成脂标志基因的表达水平较对照组显著升高(P<0.05),细胞内脂滴生成量增加;干扰CTCF后结果相反。转录组分析结果显示,两组间筛选出1079个差异表达基因,这些差异表达基因富集到一些脂肪代谢相关通路,包括鞘脂信号通路、FoxO信号通路和AMPK信号通路等,筛选出CCND2、ITGA7、BRCA1、LAMA5和CCNE2等影响脂肪代谢的候选基因。本研究结果表明,CTCF能够促进绵羊前体脂肪细胞的分化,并揭示出影响CTCF脂肪代谢的相关通路及候选基因。 展开更多
关键词 绵羊 ctcf基因 前体脂肪细胞 分化 转录组测序
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一例常染色体显性遗传智力障碍21型患者携带CTCF突变
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作者 丁娟 马明圣 《基础医学与临床》 2025年第12期1639-1642,共4页
目的探讨CCCTC结合因子(CTCF)突变相关常染色体显性遗传智力障碍21型(MRD21)的临床特点。方法回顾性分析1例常染色体显性遗传智力障碍21型患者的临床资料,包括临床表现、实验室检查及遗传学检查,并结合文献探讨。结果6岁男性患儿,新生... 目的探讨CCCTC结合因子(CTCF)突变相关常染色体显性遗传智力障碍21型(MRD21)的临床特点。方法回顾性分析1例常染色体显性遗传智力障碍21型患者的临床资料,包括临床表现、实验室检查及遗传学检查,并结合文献探讨。结果6岁男性患儿,新生儿期喂养困难,自幼便秘。自幼发育落后,表现为智力、语言落后,自闭症样表现。无癫痫发作。头磁共振成像、脑电图未见异常。查体与人眼神交流少,小头畸形,无特殊面容。全外显子组测序及Sanger测序验证患儿CTCF新生杂合突变c.1087-2A>G,患儿父母均无该变异。结论MRD21临床表现缺乏特异性,智力障碍最常见,其他表现还可有小头畸形,喂养困难、便秘等消化系统症状,行为异常也较常见。基因检测有助于明确诊断。 展开更多
关键词 智力障碍 CCCTC结合因子(ctcf) 小头畸形 喂养困难
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原钙粘蛋白基因簇调控区域中成簇的CTCF结合位点分析 被引量:15
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作者 翟亚男 许泉 +1 位作者 郭亚 吴强 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期323-336,共14页
哺乳动物中原钙粘蛋白(Protocadherin,Pcdh)基因簇包含50多个串联排列的基因,这些基因形成3个紧密相连的基因簇(Pcdh?、Pcdh?和Pcdh?),所编码的原钙粘蛋白质群在神经元多样性(Neuronal diversity)和单细胞特异性(Single cell identity)... 哺乳动物中原钙粘蛋白(Protocadherin,Pcdh)基因簇包含50多个串联排列的基因,这些基因形成3个紧密相连的基因簇(Pcdh?、Pcdh?和Pcdh?),所编码的原钙粘蛋白质群在神经元多样性(Neuronal diversity)和单细胞特异性(Single cell identity)以及神经突触信号转导中发挥重要作用。前期的工作已证实转录因子CTCF(CCCTC-binding factor)与CTCF结合位点(CTCF-binding site,CBS)的方向性结合能够决定增强子和启动子环化的方向以及其远距离交互作用的特异性,并进一步在Pcdh基因座(Locus)形成两个(Pcdh?和Pcdh?)染色质拓扑结构域(CTCF/cohesin-mediated chromatin domain,CCD),而且染色质拓扑结构域对于控制基因表达调控至关重要。本文通过生物信息学方法对比人类和小鼠序列,发现Pcdh??染色质拓扑结构域调控区域中的DNase I超敏位点(DNase I hypersensitive sites,HSs)较为保守。染色质免疫沉淀及大规模测序实验(Chromatin immunoprecipitation and massive parallel sequencing,Ch IP-Seq)揭示CBS位点在Pcdh??调控区域中成簇分布并且具有相同的方向。凝胶电泳迁移实验(Electrophoresis mobility shift assay,EMSA)确定Pcdh??调控区域内具体的42 bp CBS位点并且发现一个CTCF峰包含两个CBS位点。在全基因组范围内,运用计算生物学方法分析CTCF和增强子、启动子等调控元件的关系,发现CBS位点在调控元件附近有较多分布,推测CTCF通过介导增强子和启动子的特异性交互作用,在细胞核三维基因组内形成活性转录枢纽调控基因精准表达。 展开更多
关键词 原钙粘蛋白基因簇 转录因子ctcf ctcf结合位点 染色质拓扑结构域CCD 基因表达调控
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湖羊转录因子CTCF基因序列分析及其对NR5A1基因转录活性的调控 被引量:2
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作者 李隐侠 郭潇潇 +4 位作者 张俊 孟春花 钱勇 仲跻峰 曹少先 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第6期1482-1488,共7页
转录因子CTCF在动物生长发育过程中发挥重要的调控作用,但其在绵羊中的序列特征、组织器官表达及功能目前尚不清楚。本研究以湖羊CTCF基因为研究对象,采用PCR方法克隆获得其编码区全序列,发现其序列全长2187 bp,编码727个氨基酸残基,含... 转录因子CTCF在动物生长发育过程中发挥重要的调控作用,但其在绵羊中的序列特征、组织器官表达及功能目前尚不清楚。本研究以湖羊CTCF基因为研究对象,采用PCR方法克隆获得其编码区全序列,发现其序列全长2187 bp,编码727个氨基酸残基,含有11个连续的锌指结构域。组织器官表达谱分析发现CTCF基因在湖羊各个组织器官中广泛表达,在子宫中表达量相对较低,在胃中表达量相对较高。JASPAR在线软件预测发现核受体NR5A1基因内含子(翻译起始位点ATG前393 bp片段)含有3个CTCF结合位点,双荧光素酶试验结果显示,CTCF结合位点突变后NR5A1基因转录活性显著或极显著下降,表明CTCF可能通过调控NR5A1基因转录参与调控湖羊繁殖性能。 展开更多
关键词 转录因子ctcf 表达特征 NR5A1基因 转录活性
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水牛转录抑制因子CTCF基因克隆分析及不同组织中的表达研究 被引量:2
5
作者 苏节 朱鹏 +3 位作者 刘庆友 雷小灿 石德顺 崔奎青 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第3期1-7,共7页
本研究克隆了水牛转录抑制因子CTCF基因序列,并运用生物信息学方法对其核苷酸序列的保守性和氨基酸的理化性质、蛋白质结构进行了系统分析,此外还对CTCF基因在水牛不同组织中的表达差异进行了检测。结果表明,应用RT-PCR技术克隆获得了长... 本研究克隆了水牛转录抑制因子CTCF基因序列,并运用生物信息学方法对其核苷酸序列的保守性和氨基酸的理化性质、蛋白质结构进行了系统分析,此外还对CTCF基因在水牛不同组织中的表达差异进行了检测。结果表明,应用RT-PCR技术克隆获得了长2239bp水牛CTCF基因序列,其中编码区全长2184bp,编码727个氨基酸,理论蛋白质分子质量82.7ku,等电点为6.57。多重序列比较分析显示,水牛CTCF核苷酸序列与牛、猪、马、人和小鼠相应序列的相似性分别为99%、96%、96%、94%和92%,结合系统进化树分析结果推测,CTCF基因在不同物种及进化的过程中具有高度的保守性。对水牛CTCF蛋白的二级和三级结构分析结果发现,其存在连续11个锌指C2H2结构,预测其为重要的DNA结合蛋白。定量表达分析结果显示,CTCF在水牛肝脏组织中相对表达量最高,大脑、肌肉和肾脏次之,卵巢和皮肤表达量较低。 展开更多
关键词 水牛 ctcf基因 克隆 表达
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多功能转录因子CTCF重组质粒构建及其表达鉴定 被引量:2
6
作者 蒋磊 覃扬 +3 位作者 孙芝琳 武静 杨文理 张军哲 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期1-5,共5页
目的构建人CTCFcDNA全长及N端、Zn指、C端3个片段的原核融合表达载体,纯化融合蛋白并进行鉴定。方法以编码CTCF全长序列的质粒为PCR模板,分别构建GST融合表达重组质粒pGEX-4T-2-CTCF,pGEX-4T-2-CTCF-N,pGEX-4T-2-CTCF-Zn,pGEX-4T-2-CTCF... 目的构建人CTCFcDNA全长及N端、Zn指、C端3个片段的原核融合表达载体,纯化融合蛋白并进行鉴定。方法以编码CTCF全长序列的质粒为PCR模板,分别构建GST融合表达重组质粒pGEX-4T-2-CTCF,pGEX-4T-2-CTCF-N,pGEX-4T-2-CTCF-Zn,pGEX-4T-2-CTCF-C,转化大肠杆菌BL21,酶切、测序鉴定;优化IPTG诱导表达条件,并对亲和层析纯化的GST融合蛋白CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF进行Far-Western blot鉴定。结果重组质粒经双酶切和测序鉴定证实构建成功。GST融合蛋白CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF-C均在大肠杆菌中成功诱导表达,融合蛋白经亲和层析纯化获得纯化蛋白。各纯化蛋白经SDS-PAGE和Far-Western blot鉴定,均为诱导表达蛋白质。结论成功构建了GST融合表达CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF-C的重组质粒,对融合蛋白表达条件进行了优化,获得了高效表达的GST融合蛋白。 展开更多
关键词 ctcf结合因子 融合蛋白 表达
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CTCF在乳腺癌中的表达及其对细胞增殖的影响 被引量:2
7
作者 吴洁 李鹏昌 +5 位作者 庞钧译 刘国友 邱玲 窦亚玲 郭子建 吕湘 《基础医学与临床》 CSCD 2015年第2期157-161,共5页
目的观察抑癌基因CTCF在乳腺癌细胞系、乳腺癌患者肿瘤组织及血清中的表达水平,并初步探讨其对乳腺癌细胞MCF7增殖的影响。方法 Western blot检测人乳腺癌细胞系MCF7、SKBR3和MDA-MB-231及正常乳腺细胞MCF-10A中CTCF蛋白的表达。实时荧... 目的观察抑癌基因CTCF在乳腺癌细胞系、乳腺癌患者肿瘤组织及血清中的表达水平,并初步探讨其对乳腺癌细胞MCF7增殖的影响。方法 Western blot检测人乳腺癌细胞系MCF7、SKBR3和MDA-MB-231及正常乳腺细胞MCF-10A中CTCF蛋白的表达。实时荧光定量PCR和免疫组织化学法分别检测乳腺浸润性导管癌(n=23)、癌旁组织(n=10)及乳腺纤维腺瘤(n=10)中CTCF mRNA和蛋白水平的表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中CTCF的水平。进一步构建包装含CTCF的反转录病毒,感染MCF7细胞,筛选出稳定表达CTCF的细胞系,MTT法检测细胞的增殖。结果 CTCF在MCF-10A中表达最高,MCF7、SKBR3和MDA-MB-231中逐渐降低。乳腺癌组织中CTCF表达显著低于癌旁组织及乳腺纤维腺瘤组织(P<0.01),CTCF在乳腺癌患者血清中表达量也显著低于健康对照(P<0.01)。CTCF过表达能抑制MCF7细胞的增殖。结论 CTCF在乳腺癌细胞系、乳腺癌患者肿瘤组织及血清中表达降低。CTCF可抑制乳腺癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 ctcf 乳腺癌 增殖
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采用DNA片段编辑技术反转CTCF结合位点改变基因组拓扑结构和增强子与启动子功能 被引量:6
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作者 郭亚 吴强 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1073-1074,共2页
人类的祖先很早就观察到生物性状的遗传现象,但是直到19世纪60年代孟德尔发现遗传因子的分〈br〉 离定律和自由组合定律,遗传学才真正建立并快速发展起来。尽管人类很快有了基因的概念,并认识了核酸和蛋白质,但直到1953年沃森和克... 人类的祖先很早就观察到生物性状的遗传现象,但是直到19世纪60年代孟德尔发现遗传因子的分〈br〉 离定律和自由组合定律,遗传学才真正建立并快速发展起来。尽管人类很快有了基因的概念,并认识了核酸和蛋白质,但直到1953年沃森和克里克阐明了DNA的双螺旋结构之后,人类对基因才有了本质的认识,从而开启了分子遗传学时代。随着人类基因组计划测序工作的完成以及最近大规模测序技术的突破,越来越多的研究发现很多遗传疾病相关位点不仅位于启动子和基因编码区,而且也大量地存在于调控组织发育基因表达的增强子中。更多的遗传疾病相关位点则位于功能未知的基因组区域。近年研究发现这些遗传疾病相关位点可能与三维基因组(3D genome)息息相关并通过染色体高级拓扑架构(Higher-order topological chromosome architec-ture)起作用。 展开更多
关键词 人类基因组计划 启动子功能 DNA片段 拓扑结构 增强子 结合位点 ctcf 编辑技术
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转录因子CTCF对人肝癌干细胞及细胞增殖的影响 被引量:1
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作者 刘秋英 谢晓砚 +5 位作者 魏玲 刘俊 沈文燕 李冉 俞小琴 覃扬 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期196-201,共6页
目的探讨CCCTC结合因子(CTCF)蛋白对人肝癌细胞(HepG2)的肿瘤干细胞的影响以及对HepG2和CNE1(鼻咽癌细胞系)细胞生存能力的影响。方法构建pEGFP-N1/CTCF、CTCFshRNA和GFPshRNA质粒,转染至HepG2和CNE1细胞后,以RT-PCR及Western blot检测C... 目的探讨CCCTC结合因子(CTCF)蛋白对人肝癌细胞(HepG2)的肿瘤干细胞的影响以及对HepG2和CNE1(鼻咽癌细胞系)细胞生存能力的影响。方法构建pEGFP-N1/CTCF、CTCFshRNA和GFPshRNA质粒,转染至HepG2和CNE1细胞后,以RT-PCR及Western blot检测CTCF mRNA和蛋白的表达。采用流式细胞术检测转染CTCF-shRNA质粒后48h的HepG2细胞中携带表面抗原CD90肿瘤干细胞的比例,以转染GFP-shRNA的HepG2细胞和野生型HepG2细胞为对照。采用MTT方法分别检测转染CTCF过表达重组质粒及CTCF-shRNA质粒后24、48、72hHepG2和CNE1细胞的生存能力。结果 pEGFP-N1/CTCF转染后增加HepG2和CNE1细胞中CTCF mRNA和蛋白的表达(与pEGFP-N1相比,P<0.05),CTCF-shRNA转染则降低表达(与GFP-shRNA相比,P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,CD90+细胞的检出率在转染CTCF-shRNA质粒细胞〔(1.733 0±0.417 7)%〕高于野生型HepG2细胞〔(0.575 0±0.062 9)%〕及转染对照GFP-shRNA质粒细胞〔(0.350 0±0.086 6)%〕(P<0.05);MTT实验结果显示CTCF的表达改变对HepG2和CNE1细胞的生存能力的影响不明显(P>0.05)。结论 CTCF可抑制人肝癌干细胞生成,对HepG2和CNE1细胞生长无明显影响。 展开更多
关键词 ctcf 人肝癌干细胞 细胞增殖
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CTCF通过ALAS2调控K562细胞红系分化 被引量:2
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作者 亓合媛 李艳明 +3 位作者 熊倩 谢兵兵 张昭军 方向东 《发育医学电子杂志》 2017年第1期1-6,共6页
目的研究CTCF对红系分化的影响及相应调控机制。方法敲低K562细胞中的CTCF,通过Hemin诱导和荧光实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术,分析Hemin诱导0到4天的对照和CTCF敲低细胞的珠蛋... 目的研究CTCF对红系分化的影响及相应调控机制。方法敲低K562细胞中的CTCF,通过Hemin诱导和荧光实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术,分析Hemin诱导0到4天的对照和CTCF敲低细胞的珠蛋白基因表达水平,研究CTCF敲低对红系分化的影响。利用基因表达芯片全基因组范围分析CTCF敲低造成的影响。根据公共数据分析推测CTCF调控红系分化的潜在机制,通过染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)验证。结果随着诱导的进行,对照和敲低细胞中的珠蛋白基因HBE和HBG表达均逐渐升高,但CTCF敲低细胞中HBE和HBG基因水平均低于对照细胞,提示CTCF敲低能够抑制K562细胞分化过程中珠蛋白基因的表达。通过检测全基因组范围的基因表达水平,共筛选到1 128个差异表达基因,其中616个基因在CTCF敲低样本中表达上调,512个基因表达下调。利用IPA软件进行功能富集分析,显示主要相关的生理系统发育与功能包括血液系统的发育与功能。公共数据显示存在CTCF-GATA1-ALAS2作用关系,ALAS2基因上存在GATA1结合;对照和CTCF敲低细胞的ChIP-qPCR结果表明,敲低CTCF能够降低GATA1在ALAS2基因区的结合。结论 CTCF可能通过影响GATA1在ALAS2基因区的结合来调控K562细胞红系分化。 展开更多
关键词 ctcf ALAS2 GATA1 红系分化
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CTCF因子结合位点突变和缺失质粒的构建及其调控效应分析
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作者 张英 金晶 +5 位作者 张昊龙 刘松财 常守印 袁伟 颜彤 尹云厚 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1634-1637,1646,共5页
本研究采用SOE-PCR技术,分别获得了CTCF因子结合序列的突变和缺失的序列,构建2个重组质粒pEGFP-N1/1554M和pEGFP-N1/1549。质粒pEGFP-N1/1554M由CTCF因子的结合序列CCCTC突变为TAAGT后的序列替换pEGFP-N1的CMV启动子构建而成;质粒pEGFP-... 本研究采用SOE-PCR技术,分别获得了CTCF因子结合序列的突变和缺失的序列,构建2个重组质粒pEGFP-N1/1554M和pEGFP-N1/1549。质粒pEGFP-N1/1554M由CTCF因子的结合序列CCCTC突变为TAAGT后的序列替换pEGFP-N1的CMV启动子构建而成;质粒pEGFP-N1/1549由CTCF因子结合序列CCCTC缺失后序列(长1 549bp)替换pEGFP-N1的CMV启动子构建而成。用重组质粒分别转染牛乳腺上皮细胞(BMEC),经筛选获得稳定的单克隆细胞,测定荧光强度并与对照组pEGFP-N1/1554(未缺失)比较荧光强度。结果表明,质粒pEGFP-N1/1554M的启动子活性显著强于对照组(P<0.01),质粒pEGFP-N1/1549的启动子活性显著强于对照组(P<0.01);即CTCF因子结合位点突变和缺失后,bLTF基因启动子活性都显著增强。 展开更多
关键词 ctcf 质粒 构建 调控
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HOXD基因簇内一系列CTCF位点反转揭示绝缘子功能 被引量:1
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作者 何象龙 李金环 吴强 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期758-774,共17页
CTCF(CCCTC-binding factor)是一种重要的染色质架构蛋白,其与绝缘子的方向性结合在哺乳动物基因组三维空间结构形成和维持中起着至关重要的作用。正向–反向相对方向的CTCF结合位点(简称CTCF位点)可以在染色质黏连蛋白(cohesin)的协助... CTCF(CCCTC-binding factor)是一种重要的染色质架构蛋白,其与绝缘子的方向性结合在哺乳动物基因组三维空间结构形成和维持中起着至关重要的作用。正向–反向相对方向的CTCF结合位点(简称CTCF位点)可以在染色质黏连蛋白(cohesin)的协助下,形成染色质环,介导远距离DNA元件之间的相互作用;而在染色质拓扑结构域边界区域的CTCF位点呈现反向–正向相背方向分布,发挥绝缘子的功能。为进一步研究CTCF介导染色质环的形成与其绝缘功能之间的关系,本研究采用DNA片段编辑方法通过设计成对sgRNA(dual sgRNA)构建了一系列HOXD基因簇区域CTCF位点反转的单细胞克隆。定量高分辨率染色质构象捕获实验显示边界区域CTCF位点反转会改变原有的染色质环方向,通过环挤出模型(loop extrusion)形成新的染色质环,引起染色质拓扑结构域边界漂移至新形成的一对反向–正向CTCF位点处。此外,串联排列的CTCF位点可以通过阻碍反方向渗透的黏连蛋白继续滑动发挥绝缘子的功能。RNA-seq实验发现CTCF位点反转引起的局部基因组空间结构变化会进一步影响基因的表达。上述研究表明相邻两个染色质拓扑结构域边界区域的反向-正向CTCF位点可以通过与各自所在拓扑结构域内相向的CTCF位点形成染色质环,阻碍黏连蛋白滑动,该发现为进一步研究CTCF的绝缘功能和其对基因组拓扑结构的影响提供了参考。 展开更多
关键词 ctcf 染色质环 HOXD 绝缘子 ctcf位点反转
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PML通过转录调控CTCF影响C-Myc表达的机制研究
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作者 周菁 胡清华 +2 位作者 易丽君 付晶晶 李红 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2018年第11期1839-1846,共8页
该研究探讨了PML(promyelocytic leukemia protein)对多功能转录因子CTCF(CCCTCbinding factor)的转录调控及其下游靶基因C-Myc的功能影响。通过荧光定量PCR方法分析儿童急性淋巴细胞白血病样本中PML和CTCF基因的表达水平,并分析二者之... 该研究探讨了PML(promyelocytic leukemia protein)对多功能转录因子CTCF(CCCTCbinding factor)的转录调控及其下游靶基因C-Myc的功能影响。通过荧光定量PCR方法分析儿童急性淋巴细胞白血病样本中PML和CTCF基因的表达水平,并分析二者之间的相关性。构建了PML与CTCF真核表达载体,在共转染细胞中,利用荧光定量PCR方法和Western blot分析PML对CTCF表达水平的影响。通过双荧光素报告基因系统分析了PML对CTCF启动子区的调控,并研究了其对CTCF下游靶基因C-Myc的表达水平的影响。结果显示,在临床样本中PML与CTCF表达水平存在负相关性,PML通过抑制CTCF的转录降低CTCF的表达水平,干扰CTCF对下游靶基因C-Myc的调控功能。同时,在CTCF的启动子区域可能存在着PML的结合区域,从而导致CTCF的启动子活性被抑制。 展开更多
关键词 ctcf PML 转录因子 转录调控
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利用RNA干扰抑制HeLa细胞中CTCF基因的表达
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作者 何莉 朱旭东 +2 位作者 党颖 李涛 黄培堂 《生物技术通讯》 CAS 2006年第4期506-508,共3页
目的:CTCF是一种多功能的转录因子,参与启动子调控、绝缘子功能和遗传印记等过程。利用RNA干扰技术抑制CTCF在体细胞中的表达。方法:以CTCF为靶基因,利用ShortCutRNaseⅢ切割体外转录的长双链RNA制备esiRNA,转染HeLa细胞,用RTReal-Time... 目的:CTCF是一种多功能的转录因子,参与启动子调控、绝缘子功能和遗传印记等过程。利用RNA干扰技术抑制CTCF在体细胞中的表达。方法:以CTCF为靶基因,利用ShortCutRNaseⅢ切割体外转录的长双链RNA制备esiRNA,转染HeLa细胞,用RTReal-TimePCR检测CTCF的mRNA水平,用免疫印迹检测CTCF水平。结果:转染CTCFesiRNA后,细胞内的CTCFmRNA被抑制了70%左右,CTCF水平明显下降。结论:CTCF的esiRNA可以明显抑制CTCF在HeLa细胞中的表达,从而为进一步研究CTCF的未知功能打下了基础。 展开更多
关键词 ctcf 转录因子 RNA干扰 基因表达
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转录因子CTCF在肿瘤发展中的调控机制研究进展
15
作者 侯玉丽 王培昌 《临床检验杂志》 CAS 2019年第12期931-933,共3页
CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)是一种高度保守的多功能转录因子,含有11-锌指结构,可与DNA、蛋白质和RNA相互作用,参与基因的表达调控。CTCF可通过基因DNA甲基化水平的改变、基因突变、CTCF/Cohesin复合体、BORIS/CTCF系统调... CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)是一种高度保守的多功能转录因子,含有11-锌指结构,可与DNA、蛋白质和RNA相互作用,参与基因的表达调控。CTCF可通过基因DNA甲基化水平的改变、基因突变、CTCF/Cohesin复合体、BORIS/CTCF系统调控CTCF的功能,参与肿瘤的发生和发展。该文就转录因子CTCF在肿瘤发展中的调控机制作一综述。 展开更多
关键词 CCCTC结合因子 转录因子 ctcf/Cohesin复合体 BORIS/ctcf系统 肿瘤
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多功能转录因子CTCF结构域的转录活性研究
16
作者 何莉 朱旭东 黄培堂 《生物技术通讯》 CAS 2006年第5期700-702,共3页
目的:CTCF是广泛存在于真核生物中的多功能转录因子。利用细胞瞬时表达实验在HeLa细胞系中研究CTCF各结构域的转录活性。方法:借用CheckMate哺乳动物双杂交系统的2个质粒pBIND和pG5LUC,将CTCF的N、M、C段及全长编码序列克隆至pBIND质粒... 目的:CTCF是广泛存在于真核生物中的多功能转录因子。利用细胞瞬时表达实验在HeLa细胞系中研究CTCF各结构域的转录活性。方法:借用CheckMate哺乳动物双杂交系统的2个质粒pBIND和pG5LUC,将CTCF的N、M、C段及全长编码序列克隆至pBIND质粒的GAL4DNA结合结构域编码序列后的多克隆位点,将表达GAL4DNA结合结构域-CTCF融合蛋白的pBIND重组质粒与由腺病毒晚期主要启动子控制的报告基因质粒pG5LUC共转染HeLa细胞系,检测CTCF各结构域对报告基因表达水平的影响。结果:转染含CTCFN段的质粒可使报告基因的表达量增长至3.5倍以上;转染含CTCF其他片段的质粒对报告基因的表达没有明显的影响。结论:在HeLa细胞中,对启动子具有转录激活活性的主要是CTCF的N段,而M段和C段几乎没有转录激活活性。 展开更多
关键词 ctcf 转录因子 细胞瞬时表达实验 转录激活
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GST-CTCF融合蛋白原核表达载体的构建及表达
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作者 付晶晶 易丽君 李红 《南昌大学学报(医学版)》 CAS 2015年第1期1-3,14,共4页
目的构建人CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)与谷胱甘肽转移酶(glutathione S-transferase,GST)重组蛋白的原核表达载体,并进行诱导表达。方法以pEASY-T1-SIMPLE-CTCF为模板,设计引入限制性酶切位点的CTCF引物,PCR方法扩增目... 目的构建人CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)与谷胱甘肽转移酶(glutathione S-transferase,GST)重组蛋白的原核表达载体,并进行诱导表达。方法以pEASY-T1-SIMPLE-CTCF为模板,设计引入限制性酶切位点的CTCF引物,PCR方法扩增目的片段,产物经限制性内切酶酶切后与原核表达载体pGEX-4T-1连接,构建成pGEX-4T-1-CTCF原核表达载体,转化至大肠埃希菌BL21中,经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)进行诱导,Western blot检测GST-CTCF融合蛋白的表达情况。结果经菌液PCR、质粒双酶切分析、基因测序分析证实重组表达质粒pGEX-4T-1-CTCF构建成功,GST-CTCF融合蛋白产物经Western blot鉴定为特异性表达。结论成功构建了pGEX-4T-1-CTCF原核表达质粒,获得特异性的GST-CTCF融合蛋白,为进一步研究转录因子CTCF的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 ctcf 原核表达载体 谷胱甘肽转移酶 重组蛋白表达
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CTCF基因突变致胎儿不良妊娠结局的遗传学分析
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作者 谢潇潇 蒋晓莹 +4 位作者 胡凌云 周红辉 汪龙霞 游艳琴 卢彦平 《中国产前诊断杂志(电子版)》 2023年第1期18-22,共5页
目的探讨CTCF基因致病突变的产前遗传学分析及咨询。方法运用染色体核型分析、荧光原位杂交技术(FISH)、染色体微阵列分析(CMA)及全外显子组测序技术(WES)对一例产前超声发现双侧肾脏回声增强结构模糊的胎儿进行产前遗传学检测。结果核... 目的探讨CTCF基因致病突变的产前遗传学分析及咨询。方法运用染色体核型分析、荧光原位杂交技术(FISH)、染色体微阵列分析(CMA)及全外显子组测序技术(WES)对一例产前超声发现双侧肾脏回声增强结构模糊的胎儿进行产前遗传学检测。结果核型分析、荧光原位杂交技术、染色体微阵列分析未见异常,家系全外显子测序检测到胎儿CTCF基因存在新发变异c.944_951dup,为移码突变,导致318位甘氨酸密码子(GGT)被替换为组氨酸密码子(CAC),并在第18个密码子后终止(p.Gly318Hisfs*18),产生截短蛋白质。CTCF基因突变可致罕见常染色体显性智力障碍21型,胎儿期尚未见报道。结论本例为首次在胎儿期检出CTCF基因致病突变,推测双肾回声增强结构模糊为该基因突变相关的一种新的胎儿期表型。全外显子组测序技术在产前检测出罕见致病突变的病例需重视检测前后的咨询。 展开更多
关键词 ctcf基因 双肾回声增强 全外显子组测序 胎儿
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利用CRISPR/Cas9技术构建CTCF蛋白降解细胞系 被引量:4
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作者 谢德健 师明磊 +7 位作者 张彦 王天艺 沈文龙 叶丙雨 李平 何超 张香媛 赵志虎 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期651-657,共7页
CTCF是脊椎动物关键的绝缘子蛋白,在细胞生命过程中发挥重要作用,敲除CTCF基因会导致小鼠胚胎死亡。为进一步探讨CTCF的功能,本文利用CRISPR/Cas9介导的同源重组,在内源性CTCF表达框上游敲入一个有丝分裂期降解结构域(Mitosis-special d... CTCF是脊椎动物关键的绝缘子蛋白,在细胞生命过程中发挥重要作用,敲除CTCF基因会导致小鼠胚胎死亡。为进一步探讨CTCF的功能,本文利用CRISPR/Cas9介导的同源重组,在内源性CTCF表达框上游敲入一个有丝分裂期降解结构域(Mitosis-special degradation domain,MD),该结构域可以带动CTCF融合蛋白在M期降解。作为对照,将MD结构域的第42位的精氨酸突变为丙氨酸,形成无降解活性的MD*,可使MD*-CTCF融合蛋白始终稳定存在。将嘌呤霉素与融合蛋白同时表达,即可利用抗生素筛选,高效地筛选到纯合克隆。利用蛋白印迹技术和免疫荧光检测3种细胞在不同细胞周期的CTCF蛋白变化情况,发现MD-CTCF细胞系CTCF蛋白含量约为野生型细胞的10%,MD*-CTCF细胞系的CTCF含量与野生型没有显著差别;通过流式细胞术观测降解CTCF对细胞的影响,发现MD-CTCF细胞系G1期明显延长。总之,利用CRISPR/Cas9技术在CTCF表达框上游高效地插入MD,首个CTCF特异性降解的人类细胞系获得成功构建。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 基因组编辑 ctcf 蛋白质稳定性 蛋白降解
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同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞CTCF表达的影响
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作者 李丽娟 徐海燕 +2 位作者 唐薇薇 刘佳云 张冬 《合肥医学院学报》 2010年第6期528-534,534,共4页
目的以动脉粥样硬化(AS)的独立危险因子同型半胱氨酸(Hcy)处理人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMCs),观察Hcy对VSMCs多价核因子CTCF表达的影响,探讨Hcy致AS发病的可能机制。方法 将培养的VSMCs分为0、50、100、200、500及1000 mol/L Hcy处理... 目的以动脉粥样硬化(AS)的独立危险因子同型半胱氨酸(Hcy)处理人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMCs),观察Hcy对VSMCs多价核因子CTCF表达的影响,探讨Hcy致AS发病的可能机制。方法 将培养的VSMCs分为0、50、100、200、500及1000 mol/L Hcy处理组,以0 mol/L Hcy组为空白对照。在VSMCs覆盖瓶底70%时,将不同浓度的Hcy加入培养液,继续培养VSMCs 48 h,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组织化学方法分别检测VSMCsCTCF的mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较,Hcy刺激48h后,VSMCs CTCF的mRNA和蛋白表达皆明显增加,以高浓度组为著(500、1000 mol/LHcy,<0.05)。CTCF免疫组织化学阳性染色以细胞核为主。结论 Hcy升高可诱导VSMCs CTCF的表达上调。 展开更多
关键词 同型半胱氨酸 血管平滑肌细胞 ctcf 动脉粥样硬化 DNA甲基化
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