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JEV、PRRSV和CSFV TaqMan三重RT-qPCR方法的建立与应用
1
作者 张力 汤德元 +10 位作者 曾智勇 王彬 袁盛林 陈旭 廖正波 周飘 何松 毛茵茗 胡雯雯 周敏 高邡鑫 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第9期1824-1833,共10页
为建立鉴别日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)和猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的TaqMan三重RTqPCR检测方法,本... 为建立鉴别日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)和猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的TaqMan三重RTqPCR检测方法,本研究参照NCBI GenBank中已公开的JEV E、PRRSV ORF6和CSFV E2保守序列,设计并合成3对特异性引物和探针,通过对反应体系以及反应程序的优化,建立检测3种病毒的多重RT-qPCR方法,并将其应用于临床样品的检测。结果显示,建立的TaqMan三重RT-qPCR能特异性扩增出JEV、PRRSV和CSFV的基因片段,而不能扩增其他非目的基因,表明建立的方法特异性良好。组内和组间重复试验结果显示,其Cv值均低于3%,表明所建立的方法具有良好的重复性。敏感性试验结果显示,对3种病毒的重组质粒的最低检测量均为100拷贝/μL。应用该方法对贵州省26个猪场的血液、流产死胎、精液和病死猪等总计969份样品进行检测JEV检出率为34.3%(332/969)、PRRSV检出率为28.3%(274/969)、CSFV检出率为19.8%(192/969)。JEV与PRRSV的混合感染检出率为10.1%(98/969),JEV与CSFV的混合感染检出率为12.1%(117/969),CSFV与PRRSV的混合感染检出率为14.6%(141/969),而JEV、PRRSV和CSFV的三重混合感染检出率为7.9%(77/969)。上述结果显示,本研究成功构建了JEV、PRRSV和CSFV TaqMan三重RT-qPCR检测方法,可适用于猪场对这3种病毒的检测,为鉴别病毒引起的繁殖障碍性疫病提供了技术支持。 展开更多
关键词 JEV PRRSV csfv 三重RT-qPCR 临床检测
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基于转录组分析CSFV感染猪睾丸支持细胞对屏障功能相关基因的影响
2
作者 马尧丹 俞晖 +4 位作者 陈海恩 杨阳开心 葛书君 吴江 康恺 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第5期22-32,共11页
为探究猪瘟病毒(CSFV)感染对猪睾丸支持细胞(ST)mRNA表达谱的影响,本试验以感染CSFV 24和48 h的ST细胞和未感染ST细胞为模型,通过蛋白免疫印迹试验(WB)和间接免疫荧光(IIF)染色检测CSFV E2蛋白的表达;构建4个cDNA文库进行转录组测序,对... 为探究猪瘟病毒(CSFV)感染对猪睾丸支持细胞(ST)mRNA表达谱的影响,本试验以感染CSFV 24和48 h的ST细胞和未感染ST细胞为模型,通过蛋白免疫印迹试验(WB)和间接免疫荧光(IIF)染色检测CSFV E2蛋白的表达;构建4个cDNA文库进行转录组测序,对差异表达基因(DEGs)进行基因本体论(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书数据库(KEGG)富集分析并筛选血睾屏障相关DEGs,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)、WB和IIF对DEGs进行验证。结果显示,CSFV感染24和48 h后,ST细胞均表达了E2蛋白;与Control 24 h相比,CSFV 24 h的ST细胞共鉴定出86个显著差异DEGs(P <0.05);与Control 48 h相比,CSFV 48 h的ST细胞共鉴定出1 481个显著差异DEGs(P <0.05)。DEGs极显著富集在27个GO功能条目上,主要包括生物学过程、细胞组分和分子功能(P <0.01);极显著富集的KEGG信号通路主要包括肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、晚期糖基化终产物受体(AGE-RAGE)信号通路、白细胞介素-17(IL-17)信号通路和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路等(P <0.01)。DEGs的qPCR验证结果显示,与Control 24 h相比,CSFV 24 h的CLDN11、H2AFX和CDH2表达量极其或极显著上调(P<0.001或P <0.01),TJP1、OCLN和GJA1表达量显著下调(P <0.05);与Control48 h相比,CSFV 48 h的FASLG、TGFB1、IL-6和H2AFX表达量极其或极显著上调(P <0.001或P <0.01),TJP1、OCLN、GJA1、CLDN11和CDH2表达量极显著下调(P <0.01)。差异表达蛋白WB验证结果显示,与Control 24 h相比,CSFV 24 h的TJP1、CLDN11和GJA1蛋白表达量极其或极显著下调(P <0.001或P <0.01),CLDN11蛋白表达量极其显著上调(P <0.001);与Control 48 h相比,CSFV 48 h的TJP1、CLDN11、OCLN和GJA1蛋白表达量极其或极显著下调(P <0.001或P <0.01)。IIF结果显示,与Control 48 h相比,CSFV 48 h的TJP1蛋白相对荧光面积极显著下调(P <0.01),CLDN11、OCLN和GJA1蛋白相对荧光面积显著下调(P <0.05)。以上验证结果与转录组测序结果基本一致。结果表明,CSFV感染24和48 h均会影响ST细胞屏障功能相关基因的表达,本试验为进一步探究CSFV对ST细胞屏障的影响机制提供了数据支持。 展开更多
关键词 猪瘟病毒(csfv) 猪睾丸支持细胞 mRNA差异表达 基因本体论(GO)功能注释 京都基因与基因组百科全书数据库(KEGG)富集分析
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1例CSFV、PCV2和PRRSV混合感染的流行病学调查
3
作者 王翠 《养殖与饲料》 2025年第8期41-45,共5页
[目的]为确诊广西柳州某商品代育肥猪的发病原因并控制疫情。[方法]通过现场调研、观察临床症状和解剖,采集病死猪的脾、肺、肾、淋巴组织、粪便和环境棉拭子进行实验室荧光RT-PCR/PCR检测,并进行流行病学调查与分析。[结果]通过现场调... [目的]为确诊广西柳州某商品代育肥猪的发病原因并控制疫情。[方法]通过现场调研、观察临床症状和解剖,采集病死猪的脾、肺、肾、淋巴组织、粪便和环境棉拭子进行实验室荧光RT-PCR/PCR检测,并进行流行病学调查与分析。[结果]通过现场调研、临床症状观察及剖解初步判断该商品代育肥猪场感染了猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),实验室荧光RT-PCR/PCR检测该商品代育肥猪感染了PRRSV、PCV2型和猪瘟病毒(CSFV)。发病的主要原因为不规范引种、饲养管理不当、环境卫生差、生物安全管理不到位,采取综合防控措施后猪只死亡率降低至0%,腹泻、喘气、呼吸困难等临床症状缓解,疫情得到有效控制。[结论]猪病防控需加强引种把关、定期监测、疫苗防控及生物安全管理等综合性防控措施。 展开更多
关键词 流行病学调查 混合感染 疫苗防控 猪瘟 猪圆环病毒2型 猪繁殖与呼吸综合征
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2021—2023年湖南省无害化处理场CSFV、PRV、PRRSV污染情况调查
4
作者 唐亚新 胡巧云 +8 位作者 唐小明 王卫国 彭志 谢怡灵 张坤 王昌建 鲁杏华 范仲鑫 黎满香 《中国动物检疫》 CAS 2024年第3期5-9,47,共6页
为了解湖南省2021—2023年无害化处理场猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)污染情况,采用RT-qPCR方法对采集的1825份淋巴结、脾脏、耳尖等组织样品进行CSFV、PRV、PRRSV核酸检测,并对2022年衡南县PRRSV... 为了解湖南省2021—2023年无害化处理场猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)污染情况,采用RT-qPCR方法对采集的1825份淋巴结、脾脏、耳尖等组织样品进行CSFV、PRV、PRRSV核酸检测,并对2022年衡南县PRRSV阳性样品进行分型检测及Nsp2基因测序。结果显示:CSFV、PRV、PRRSV的阳性检出率分别为3.01%、1.81%、30.14%;双重污染率为2.52%,以PRRSV与其他2种病原双重污染为主,三重污染率较低,为0.05%。2022年衡南县无害化处理场的PRRSV阳性检出率为24.12%,以春、冬季阳性率较高;北美型(NA-PRRSV)、高致病型(HP-PRRSV)、类NADC30毒株(NADC30-like)阳性检出率分别为98.39%、20.97%、43.55%;经Nsp2基因测序,1条序列存在“1+29”个不连续氨基酸缺失,为HP-PRRSV毒株,17条序列存在“111+1+19”个不连续氨基酸缺失,为类NADC30毒株。结果表明:2021—2023年,湖南省无害化处理场CSFV、PRV污染率维持在较低水平,PRRSV污染率较高,呈逐年上升趋势,其中类NADC30毒株为优势流行毒株,建议持续做好猪瘟及猪伪狂犬病的免疫接种及效果评估工作,加强PRRSV的遗传变异监测及养殖场的饲养管理和生物安全管理,以保障猪群生产安全。 展开更多
关键词 无害化处理场 PRRSV PRV csfv 混合污染
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PRRSV、CSFV、PRV和PCV2四重实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量：4
5
作者 李欣 杨莉 +4 位作者 刘光亮 王文秀 刘海隆 曹宗喜 张艳 《动物医学进展》 北大核心 2024年第6期7-14,共8页
为建立同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)的四重荧光定量PCR(qPCR)检测方法,针对PRRSV的ORF2基因、CSFV的5′UTR基因、PRV的gB基因、PCV2的ORF2基因设计了引物及Taq Ma... 为建立同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)的四重荧光定量PCR(qPCR)检测方法,针对PRRSV的ORF2基因、CSFV的5′UTR基因、PRV的gB基因、PCV2的ORF2基因设计了引物及Taq Man探针,并进行反应体系优化,敏感性、特异性验证,建立了同时检测上述4种病原的四重实时荧光定量PCR。结果显示,所建立的四重荧光PCR扩增效率(E)、相关系数(R^(2))及曲线斜率均在正常范围内,检测PRRSV、CSFV、PRV、PCV2 E值、R^(2)、斜率分别为92.9%、0.998、-3.504,90.7%、0.998、-3.566,94.3%、0.996、-3.466,94.2%、0.997及-3.470。PRRSV、CSFV、PRV、PCV2重组质粒最低检出限分别达到10^(2)、10^(2)、10^(2)、10^(3) copies/μL;四重qPCR反应体系中的多条引物间不发生交叉反应,经评价该方法特异性良好;批内和批间重复性试验结果显示,变异系数(CV)均在1%以下,具有良好的重复性。分别使用该方法和相应的国标荧光定量检测法对采集的298份临床样品进行检测对比,两种方法检测PRRSV、CSFV、PRV、PCV2阳性符合率分别为96.08%、96.38%、100%、94.95%,均在94%以上。结果表明,建立的检测方法方便、灵敏、高效、特异性强,适用于猪呼吸道疾病病原学、流行病学研究以及临床病例的诊断,并为猪呼吸道疾病的预防和控制提供技术支撑。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒 猪伪狂犬病病毒 猪圆环病毒2型 四重实时荧光定量PCR
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PRRSV GP5蛋白和CSFV E2蛋白在杆状病毒囊膜表面的共展示及展示蛋白的免疫原性分析 被引量：6
6
作者 许信刚 王志昇 +2 位作者 李兆才 张琪 童德文 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期892-898,共7页
本试验旨在构建以杆状病毒表面展示系统为基础的猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟双价基因工程亚单位疫苗候选株。利用杆状病毒表面展示技术构建展示猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白和猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白的重组杆状病毒BacSC-Dual-ORF5... 本试验旨在构建以杆状病毒表面展示系统为基础的猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟双价基因工程亚单位疫苗候选株。利用杆状病毒表面展示技术构建展示猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白和猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白的重组杆状病毒BacSC-Dual-ORF5-E2。该重组病毒带有His6标签,且胞质区域(CTD)和跨膜区域(TM)均来源于杆状病毒囊膜蛋白gp64的CTD和TM。对重组病毒进行Western blot分析、激光共聚焦显微镜观察、免疫金电子显微镜检测、动物免疫试验以及淋巴细胞增殖试验。Western blot分析结果表明,重组杆状病毒中表达了重组GP5和E2蛋白;激光共聚焦显微镜检测表明,重组杆状病毒感染昆虫细胞Sf-9后在细胞膜上展示了重组GP5和E2蛋白;免疫金电子显微镜观察表明,重组GP5和E2蛋白展示在杆状病毒囊膜上;动物免疫试验表明,重组杆状病毒免疫小鼠后产生了抗PRRSV和抗CSFV的特异性抗体;淋巴细胞增殖试验表明,重组杆状病毒能诱发较强的细胞免疫应答。本试验成功构建表面展示PRRSV GP5蛋白和CSFV E2蛋白的重组杆状病毒,为下一步应用该重组杆状病毒作为双价亚单位疫苗预防PRRSV和CSFV的混合感染奠定基础。 展开更多
关键词 杆状病毒表面展示系统 PRRSV csfv GP5蛋白 E2蛋白
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检测CSFV、PRRSV和JEV感染的多重RT-PCR方法的建立及初步应用 被引量：4
7
作者 许信刚 陈光达 童德文 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期645-649,共5页
为了建立1种能够应用于临床样本可以同时检测CSFV、PRRSV、JEV 3种RNA病毒感染的多重RT-PCR方法。根据GenBank收录的CSFV、PRRSV、JEV的基因组全序列,选择3种病毒的特异性保守区序列设计了3对特异性引物,优化多重RT-PCR反应条件,建立了... 为了建立1种能够应用于临床样本可以同时检测CSFV、PRRSV、JEV 3种RNA病毒感染的多重RT-PCR方法。根据GenBank收录的CSFV、PRRSV、JEV的基因组全序列,选择3种病毒的特异性保守区序列设计了3对特异性引物,优化多重RT-PCR反应条件,建立了能够同时检测3种病毒混合感染的多重RT-PCR诊断方法。特异性分析表明,应用该方法分别从CSFV、PRRSV、JEV毒株以及3种病毒的混合物中扩增出大小分别为777、451、605bp的3条特异性条带,其他对照组检测均为阴性;敏感性分析表明,该方法最低检测量分别为14.2、10.0、8.0pg的CSFV、PRRSV、JEV的RNA;初步应用性试验表明,52份疑似病料中PRRSV、CSFV和JEV的阳性率分别为46.1%、21.1%和1.92%;CSFV和PRRSV混合感染阳性率为21.1%。CSFV、PRRSV和JEV混合感染阳性率为3.84%。本试验建立的多重RT-PCR检测方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的特点,可以有效检测CSFV、PRRSV和JEV的混合感染。 展开更多
关键词 csfv PRRSV JEV 多重RT-PCR
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多重RT-PCR同时检测CSFV、PRRSV、HP-PRRSV方法的建立及其临床应用 被引量：5
8
作者 韦正吉 严斯刚 +5 位作者 黄小武 李志源 蒋柳平 黄溢泓 盘美妮 邱新第 《广西农业科学》 CSCD 2009年第11期1476-1480,共5页
根据猪瘟病毒(CSFV)P120基因及高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp2基因缺失区两端的保守区分别设计合成1对特异性引物,建立了一种简便、快速、同时鉴别检测CSFV、PRRSV、HP-PRRSV的多重RT-PCR方法。该方法扩增CSFV基因组时... 根据猪瘟病毒(CSFV)P120基因及高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp2基因缺失区两端的保守区分别设计合成1对特异性引物,建立了一种简便、快速、同时鉴别检测CSFV、PRRSV、HP-PRRSV的多重RT-PCR方法。该方法扩增CSFV基因组时可获得508bp的片段,扩增PRRSV时可获得320bp的片段,扩增HP-PRRSV基因组时可获得230bp的片段,因此,根据多重RT-PCR产物大小可将三者区分开来。利用建立的多重RT-PCR方法,对50份临床可疑病料进行检测,结果发现,CSFV阳性率为8%,PRRSV阳性率为18%,HP-PRRSV阳性率为22%,而CSFV和HP-PRRSV混合感染阳性率达2%,PRRSV和HP-PRRSV混合感染阳性率达16%,说明所建立的多重RT-PCR方法简便、快速、特异,可同时鉴别CSFV、PRRSV及HP-PRRSV,亦可用于感染这3种病毒的临床病料的快速鉴定和分子流行病学调查。 展开更多
关键词 多重RT-PCR csfv PRRSV HP-PRRSV 鉴别诊断
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双重RT-qPCR鉴别CSFV和BVDV方法的建立及初步应用 被引量：2
9
作者 韦雪华 张向东 +2 位作者 谢之景 田夫林 王贵升 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第5期28-31,35,共5页
为建立猪瘟病毒(CSFV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的鉴别检测方法,本研究根据CSFV Npro基因、BVDV 5'-UTR基因保守区域设计特异性引物和Taq Man探针,构建阳性重组质粒,优化反应条件,建立了双重RT-q PCR检测方法。该方法 CSFV和BVDV的... 为建立猪瘟病毒(CSFV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的鉴别检测方法,本研究根据CSFV Npro基因、BVDV 5'-UTR基因保守区域设计特异性引物和Taq Man探针,构建阳性重组质粒,优化反应条件,建立了双重RT-q PCR检测方法。该方法 CSFV和BVDV的检测灵敏度均为100拷贝/μL,具有良好的特异性和重复性;对206份猪病料进行检测,CSFV阳性59份、BVDV皆为阴性,与本实验室常用单项RT-q PCR试剂盒检测结果一致。本研究建立的双重RT-q PCR整个检测过程不到3 h,采取闭管反应,检测完毕直接处理,避免开盖造成气溶胶污染,具有简单、快捷、灵敏度高、生物安全性好等优点,可用于CSFV和BVDV的临床鉴别检测,为2种病毒的交叉污染的检测提供一种方便、快捷的方法。 展开更多
关键词 RT-QPCR csfv BVDV
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ELISA法探究仔猪CSFV母源抗体消涨规律 被引量：11
10
作者 李儒曙 李静 +3 位作者 陈活草 阳盛福 张健騑 刘宇 《上海畜牧兽医通讯》 2007年第4期30-31,共2页
关键词 母源抗体水平 初生仔猪 ELISA法 csfv 接触性传染病 猪瘟病毒 免疫接种 猪瘟疫苗
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多重PCR检测CSFV和PRRSV与PCV2 被引量：1
11
作者 陶海静 王老七 赵顺喜 《中国动物检疫》 CAS 2010年第6期34-35,共2页
根据GenBank上猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的已发表序列,分别设计并合成了3对特异性扩增引物,建立CSFV、PRRSV和PCV2单项PCR检测方法,分别扩增出预期的466 bp、202 bp和706 bp片段。在优化单项PCR... 根据GenBank上猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的已发表序列,分别设计并合成了3对特异性扩增引物,建立CSFV、PRRSV和PCV2单项PCR检测方法,分别扩增出预期的466 bp、202 bp和706 bp片段。在优化单项PCR反应条件基础上,建立了CSFV-PRRSV-PCV2多重PCR检测方法,为预防和控制上述三种病毒性传染病提供了一种快速、敏感、特异的检测方法。 展开更多
关键词 csfv PRRSV PCV2 多重PCR
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某猪场CSFV、PRRSV、PCV2和PRV多重感染病例的报道 被引量：2
12
作者 徐国 代振江 +4 位作者 曾智勇 叶百川 张爱琼 咸文 何小莉 《猪业科学》 2017年第1期82-83,共2页
贵州省某种猪场一周内连续发生30余头母猪早产和(或)产死胎症状,猪场工作人员向笔者实验室送检同窝流产死胎4只。根据流行情况和临床特征,初步判断与病毒感染有关。为筛查具体病原,本实验室将送检死胎组织混合样品分别对CSFV、PRRSV、P... 贵州省某种猪场一周内连续发生30余头母猪早产和(或)产死胎症状,猪场工作人员向笔者实验室送检同窝流产死胎4只。根据流行情况和临床特征,初步判断与病毒感染有关。为筛查具体病原,本实验室将送检死胎组织混合样品分别对CSFV、PRRSV、PCV2、PRV、PPV和JEV六种常见病毒进行病原核酸检测,结果显示该猪场发病猪存在CSFV、PRRSV、PCV2和PRV的多重感染。 展开更多
关键词 csfv PRRSV PCV2 PRV 多重感染
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猪霍乱沙门菌C500运载CSFV新型基因疫苗的稳定性及免疫安全性
13
作者 韩国全 郭万柱 +6 位作者 林华 王印 颜其贵 徐志文 朱玲 王小玉 王利娜 《畜牧与兽医》 北大核心 2010年第3期9-14,共6页
为研究猪霍乱沙门菌C500(S.C500)运载猪瘟病毒(CSFV)新型基因疫苗的稳定性与免疫安全性,将表达载体pCB-ME2-IL-15、pCC-ME2-IL-15、pCI-ME2-IL-15及pCI-neo转入S.C500,采用体外增殖试验考察不同表达载体在S.C500中的稳定性;采用携质粒S.... 为研究猪霍乱沙门菌C500(S.C500)运载猪瘟病毒(CSFV)新型基因疫苗的稳定性与免疫安全性,将表达载体pCB-ME2-IL-15、pCC-ME2-IL-15、pCI-ME2-IL-15及pCI-neo转入S.C500,采用体外增殖试验考察不同表达载体在S.C500中的稳定性;采用携质粒S.C500对ST细胞的粘附、侵袭力和增殖试验研究不同表达载体对运载体生物学特性的影响;采用BALB/c小鼠口服免疫试验研究表达质粒在体内的稳定性和运载体对小鼠的安全性。结果显示:体外增殖中pCB-ME2-IL-15、pCC-ME2-IL-15和pCI-ME2-IL-15稳定性好于pCI-neo,说明外源目的基因正调表达质粒在运载体内的稳定性;空运载体S.C500对ST细胞的粘附率和侵袭率均高于4组含不同质粒的菌株,而4组含不同质粒的菌株之间亦有差异;空运载菌在ST细胞内的增殖能力与4组含不同质粒的菌株之间亦有显著性差异;分别对携带表达载体pCB-ME2-IL-15、pCC-ME2-IL-15和pCI-ME2-IL-15菌株以每只2×108CFU/0.2 mL的剂量进行小鼠口服免疫,腹泻率依次为0%、8.33%和25%。在第7和14天,使用DHL/Amp琼脂培养平板,均可从肝脏、脾脏、十二指肠和新鲜粪便样品中分离到重组菌。试验提示采用猪霍乱沙门菌C500运载CSFV新型基因疫苗免疫BALB/c小鼠具有相对稳定性和免疫安全性。 展开更多
关键词 猪霍乱沙门菌C500 csfv 新型基因疫苗 稳定性 免疫安全性
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同时检测CSFV、PRRSV的二重RT-PCR方法的建立及其在临床样品检测中的初步应用
14
作者 岳丰雄 崔尚金 +3 位作者 冉多良 张超范 周盛华 戚亭 《畜禽业》 2008年第3期32-35,共4页
建立了1种一步法RT-PCR用于同时检测典型猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖呼吸道综合征病毒(PRRSV)的多重PCR诊断方法(Multiplex PCR,mPCR)。根据Genbank上公布的CSFV、PRRSV基因组全序列及部分序列,借助DNAStar和Oligo6.0基因序列和引物设计软件... 建立了1种一步法RT-PCR用于同时检测典型猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖呼吸道综合征病毒(PRRSV)的多重PCR诊断方法(Multiplex PCR,mPCR)。根据Genbank上公布的CSFV、PRRSV基因组全序列及部分序列,借助DNAStar和Oligo6.0基因序列和引物设计软件,设计2对特异性引物分别用于扩增CFSV、PRRSV病毒777bp和434bp的目的片断。该mPCR由RT反应和PCR反应构成。将病毒核酸连接到PMD18-T载体,提取质粒后,以10倍进行倍比稀释,取每个稀释度的病毒核酸进行mPCR反应,对CSFV、PRRSV的最低检测量分别为8.5pg、8.3×10-2pg。以PCV2、PCV1、PPV、PRV、SIV、E.coil和双蒸水为模板进行mPCR反应,扩增结果均为阴性,表明该mPCR具有较好的特异性。对临床样品的检测表明,本研究建立的mPCR诊断方法能够对CSFV和PRRSV进行快速的诊断,同时对CSFV、PRRSV在猪群中的流行病学调查也具有十分重要的意义。 展开更多
关键词 多重PCR RT—PCR PRRSV csfv
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PRRSV+CSFV+PCV2+HPS混感病例的病理学研究
15
作者 梁媛 陈芳芳 温丽霞 《农业与技术》 2012年第8期29-30,共2页
从PCR鉴定为"PRRSV+CSFV+PCV-2+HPS"混合感染的7份猪只病例中选取病变较典型脾、肺、肝以及淋巴结等组织,肉眼观察其剖检病变之后,制成病理切片,在显微镜下观察其病理变化,并将观察结果与PCR鉴定结果相对照。结果显示:"P... 从PCR鉴定为"PRRSV+CSFV+PCV-2+HPS"混合感染的7份猪只病例中选取病变较典型脾、肺、肝以及淋巴结等组织,肉眼观察其剖检病变之后,制成病理切片,在显微镜下观察其病理变化,并将观察结果与PCR鉴定结果相对照。结果显示:"PRRSV+CSFV+PCV-2+HPS"混合感染的7份病例无论是在剖检还是在镜下都具有相似的病变并且与PCR鉴定基本相符;7份病例的病变与其他猪呼吸道疾病引起的病变有很大的共性。可见病理学研究,为我们诊断猪群疫病提供了诊断方向和必不可少的依据,但却不是唯一的依据,更多的时候还要通过临床诊断和实验室诊断。 展开更多
关键词 “PRRSV+csfv+PCV2+HPS” 混感病例 病理学
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山西种猪场CSFV、PRRSV、PRV、PCV2免疫与感染情况调研 被引量：2
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作者 樊振华 孟帆 +6 位作者 吴忻 张娟 刘文俊 韩一超 米瑞娟 薛翼鹏 赵岳 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第8期70-73,77,共5页
猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病、猪圆环病毒2型感染是危害养猪业发展的四大疫病。在2013—2018年间,本课题组深入山西11个地市70多个规模化种猪场进行了猪主要疫病流行情况调查,发现种猪场普遍存在引种隔离检疫不完善、接种疫... 猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病、猪圆环病毒2型感染是危害养猪业发展的四大疫病。在2013—2018年间,本课题组深入山西11个地市70多个规模化种猪场进行了猪主要疫病流行情况调查,发现种猪场普遍存在引种隔离检疫不完善、接种疫苗不科学、生物安全不到位等问题,导致这四大疫病在猪群中普遍存在;同时采集母猪公猪血样900余份,仔猪血样4000余份,病死猪组织800余份,用商业免疫学和分子学检测试剂进行了免疫抗体、感染抗体及病原核酸检测。结果显示:免疫抗体合格率:CSFV为55.89%~76.61%,PRV约为90.00%;感染抗体阳性率:PRRSV为51.11%~64.45%,PCV2为59.16%~62.06%,PRV gE为38.28%;病原核酸阳性检出率:CSFV为12.66%,PRRSV为4.38%,HP-PRRSV为22.40%,PRV为7.14%,PCV2为28.57%;同时证明以PCV2为主的混合感染严重,与其他3种病的混合感染率达到16.23%。本调研通过免疫学和分子生物学实验手段,查明了山西省种猪场CSFV、PRRSV、PRV、PCV2的免疫与感染近况,为有效防控这些疫病的流行提供科学依据。 展开更多
关键词 csfv PRRSV PRV PCV2 特异性抗体 病原核酸
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同时检测CSFV、PRRSV、PRV及PCV2多重荧光定量PCR方法的建立 被引量：7
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作者 何世成 周其伟 +4 位作者 张浩旭 王卫国 鲁信花 唐小明 周玲玲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期850-855,共6页
为建立可以同时检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的快速、敏感的检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的CSFV、PRRSV、PRV和PCV2 4种病毒的基因序列设计引物和探针,建立了... 为建立可以同时检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的快速、敏感的检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的CSFV、PRRSV、PRV和PCV2 4种病毒的基因序列设计引物和探针,建立了一种能够用于同时检测这4种病毒的多重荧光定量PCR方法,并对其反应条件进行优化。结果显示,4种病毒的标准曲线相关系数均达到0.98以上,具有良好的线性关系。对CSFV、PRRSV、PRV和PCV2以外的其他病毒株核酸扩增均呈阴性,具有较强的特异性。灵敏度试验结果显示,该方法对这4种病毒的最低检测量均能达到10拷贝/μL。此外,该检测方法的批内和批间重复性试验变异系数均小于5%,表明所建立的方法具有很好的重复性。利用建立的方法对59例疑似猪繁殖障碍疾病样本进行检测,结果显示,单一病毒感染样本7例,阳性率为11.86%;2种或3种病毒混合感染阳性率为44.07%(26/59);无4种病毒同时感染的样本。以上结果表明所建立的检测方法具有快速、准确、特异性好、灵敏度高等特点,能够对CSFV、PRRSV、PRV和PCV2病毒同时进行检测,可以用于相关疫情的监测及防控。 展开更多
关键词 csfv PRRSV PRV PCV2 荧光定量PCR
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2015-2017年山东地区CSFV、PRRSV和PRV的流行病学调查与分析 被引量：17
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作者 张树金 曾昊 +10 位作者 于江 陈智 张玉玉 王鑫 陈蕾 唐融志 郭立辉 任素芳 邱文彬 李玉保 吴家强 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1064-1069,共6页
为了解山东地区生猪主要病毒性疾病的发生情况,掌握疫病发生及变化规律。本试验对2015-2017年山东省各生猪养殖场送检的病料和血清进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪瘟病毒(CSFV)3种病原抗原和抗体检测及遗... 为了解山东地区生猪主要病毒性疾病的发生情况,掌握疫病发生及变化规律。本试验对2015-2017年山东省各生猪养殖场送检的病料和血清进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪瘟病毒(CSFV)3种病原抗原和抗体检测及遗传演化分析。结果显示:2015-2017年CSFV平均抗原阳性率为9.99%,抗体水平逐年提高,平均抗体阳性率为79.38%;样品序列测定结果显示,目前CSFV的主要流行毒株为2.1d亚型。PRRSV平均抗原阳性率为41.44%,平均抗体阳性率为83.28%,2015-2017年PRRSV抗原和抗体水平均趋于平稳趋势。2017年PRV平均抗原阳性率12.30%,gE平均抗体阳性率为30.95%,gB平均抗体阳性率为74.70%,2017年PRV野毒感染的风险有所提高。结果表明,虽然部分病毒性传染病的发生发展出现一些变化及风险,但仍处于可防可控的范围。该调查分析结果可为山东地区CSFV、PRRSV和PRV的流行和防控提供参考。 展开更多
关键词 流行病学调查 猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 伪狂犬病病毒
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CSFV免疫状态下外周血T淋巴细胞亚群变化及对PRRS的免疫保护作用 被引量：10
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作者 屈雪琪 白雪 +2 位作者 王异民 赵建增 高英杰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1089-1094,共6页
建立CSFV疫苗免疫状态下猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染动物模型。测定CSFV抗体阻断率和PRRSV抗体S/P值,根据CSFV抗体阻断率和PRRSV感染情况分析猪外周血中T淋巴细胞亚群变化和对PRRS的保护促进作用。采用流式细胞术(FAC)检测猪外周... 建立CSFV疫苗免疫状态下猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染动物模型。测定CSFV抗体阻断率和PRRSV抗体S/P值,根据CSFV抗体阻断率和PRRSV感染情况分析猪外周血中T淋巴细胞亚群变化和对PRRS的保护促进作用。采用流式细胞术(FAC)检测猪外周血T淋巴细胞CD3、CD4、CD8亚群的变化。结果,CSFV高抗体组中感染PRRSV比率小于CSFV低抗体组;感染PRRSV与未感染PRRSV组比较,CD3+,CD4++CD8+细胞表达量及CD4+/CD8+比值降低;CSFV高抗体组CD3+细胞数量低于CSFV低抗体组,差异显著(P<0.05),CD4++CD8+数量高于CSFV低抗体组,差异显著(P<0.05),CD4+/CD8+比值高于CSFV低抗体组,CSFV高抗体未感染PRRSV组平均值达到1.07,与各组差异显著(P<0.05);CD4+CD8+细胞数量各组没有明显变化,CD4-CD8-细胞数量CSFV低抗体组高于CSFV高抗体组,差异显著(P<0.05)。感染PRRSV组和未感染PRRSV组中,CSFV高抗体组CD3+细胞表达量显著低于CSFV低抗体组,CD4++CD8+及CD4+/CD8+细胞比值显著高于CSFV低抗体组,CD4-CD8-明显低于CSF低抗体组。结果表明免疫CSFV疫苗后,CSFV高抗体组和CSFV低抗体组及每组中感染PRRSV情况不同外周血T淋巴细胞亚群有明显变化,获得CSFV抗体保护的猪体对PRRSV感染产生一定的保护作用。 展开更多
关键词 猪瘟疫苗 猪繁殖与呼吸综合征病毒 流式细胞术 淋巴细胞亚群 保护作用
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PCR检测临床病例中PCV-2、PRRSV和CSFV的混合感染 被引量：9
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作者 何后军 陆承平 罗咏梅 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期177-179,共3页
参照GenBank中已发表的有关基因序列,分别设计合成针对PCV-2、PRRSV和CSFV的3对引物,分别建立检测临床病例中PCV-2、PRRSV和CSFV感染的PCR或RT-PCR方法。结果显示,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,分别各呈现1条大小约1154,372,375bp的特异条... 参照GenBank中已发表的有关基因序列,分别设计合成针对PCV-2、PRRSV和CSFV的3对引物,分别建立检测临床病例中PCV-2、PRRSV和CSFV感染的PCR或RT-PCR方法。结果显示,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,分别各呈现1条大小约1154,372,375bp的特异条带。采用建立的PCR方法对江西各地发病猪和死亡猪的133份临床病料进行PCV-2检测,结果总检出率53.38%(71/133)。在71份PCV-2阳性的病料中检测出PRRSV20份,阳性率28.17%(20/71);CSFV9份,阳性率12.68%(9/71);PRRSV和CSFV共同感染9份,阳性率12.68%(9/71)。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒 混合感染
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