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一种基于CRISPR技术的结核分枝杆菌检测试剂盒性能评价
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作者 曹俊 虞忻 +5 位作者 蒋瑜 孙爱娟 姚琳 马赛 唐佩军 潘韵芝 《药学与临床研究》 2025年第6期501-505,共5页
目的:评估成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)技术对结核分枝杆菌复合群的检测性能。方法:收集2023年3月-2024年10月苏州大学附属传染病医院收治的183例疑似结核病患者,对其痰液或舌拭子样本,分别行CRISPR层析法、荧光PCR法和已上市PC... 目的:评估成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)技术对结核分枝杆菌复合群的检测性能。方法:收集2023年3月-2024年10月苏州大学附属传染病医院收治的183例疑似结核病患者,对其痰液或舌拭子样本,分别行CRISPR层析法、荧光PCR法和已上市PCR产品检测,并对CRISPR层析法检测结果进行分析。结果:CRISPR层析法对痰液样本的检测灵敏度为70.00%,特异性为100.00%,对舌拭子样本的检测灵敏度为55.26%,特异性为100.00%。CRISPR层析法与荧光PCR法的灵敏度和特异性相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CRISPR层析法在痰液和舌拭子样本的检测中具有较高的阳性预测值,与传统方法相比减少了大型仪器设备及PCR实验室的使用,为无创筛查和早期检测提供了新的技术途径。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 crispr层析法 痰液检测 舌拭子检测 灵敏度 结核筛查
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A highly efficient method for enriching TALEN or CRISPR/Cas9-edited mutant cells
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作者 Hideyo Yasuda Eunsu Kim +1 位作者 Abu Musa Md Talimur Reza Jin-Hoi Kim 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 2016年第12期705-708,共4页
In recent years,genome editing with site-specific nucleases,such as ZFN(zinc finger nuclease),TALEN(transcription activatorlike effector nucleases),and CRISPR/Cas9(the type II bacterial clustered,regularly inters... In recent years,genome editing with site-specific nucleases,such as ZFN(zinc finger nuclease),TALEN(transcription activatorlike effector nucleases),and CRISPR/Cas9(the type II bacterial clustered,regularly interspaced,short palindromic repeats-associated protein 9),has gained popularity for use in cell lines,animals,and plants(Urnov et al.,2010;Miller et al.,2011;Cong et al. 展开更多
关键词 A highly efficient method for enriching TALEN or crispr/Cas9-edited mutant cells GENE DNA RNA ZFN
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基于CRISPR-Cas12a系统-RCA反应检测重金属汞离子方法的可行性研究
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作者 张玉梅 李德月 江磊 《工业微生物》 2025年第2期76-78,共3页
文章旨在开发一种基于CRISPR-Cas12a系统的高灵敏度和高特异性的重金属汞离子荧光检测方法,以克服现有检测技术耗时长、成本高、灵敏度和特异性差等不足。该方法结合RCA等温扩增技术和CRISPR-Cas12a系统,利用T4 DNA连接酶和phi29 DNA聚... 文章旨在开发一种基于CRISPR-Cas12a系统的高灵敏度和高特异性的重金属汞离子荧光检测方法,以克服现有检测技术耗时长、成本高、灵敏度和特异性差等不足。该方法结合RCA等温扩增技术和CRISPR-Cas12a系统,利用T4 DNA连接酶和phi29 DNA聚合酶快速扩增环状DNA模板,实现了待测靶标的指数增长。在crRNA的引导下,Cas12a可特异性识别目的靶标并激活其反式切割活性,从而检测体系中的ss DNA荧光信号,并通过荧光定量PCR仪读取和分析荧光信号。研究发现,基于CRISPR-Cas12a系统的重金属汞离子荧光检测方法能快速、灵敏地检测汞离子,为重金属污染的快速检测提供新的解决方案。 展开更多
关键词 汞离子检测 crispr-Cas12a系统 RCA技术 检测新方法
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裂谷热病毒RT-RAA-CRISPR/Cas12a核酸可视化检测方法的建立
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作者 牛莉娟 黄培 +5 位作者 靳凯凯 张子莫 武晓瑄 李媛媛 王化磊 张海丽 《实验动物科学》 2025年第5期34-42,共9页
目的针对裂谷热病毒(RVFV),建立快速可视化检测方法,为RVFV早期诊断、实验动物健康监测及疫情防控提供技术支持。方法分析RVFV S基因保守序列,设计并筛选特异性反转录重组酶介导等温扩增(RT-RAA)引物与CRISPR/Cas12a系统的gRNA,建立RT-R... 目的针对裂谷热病毒(RVFV),建立快速可视化检测方法,为RVFV早期诊断、实验动物健康监测及疫情防控提供技术支持。方法分析RVFV S基因保守序列,设计并筛选特异性反转录重组酶介导等温扩增(RT-RAA)引物与CRISPR/Cas12a系统的gRNA,建立RT-RAA-CRISPR/Cas12a核酸可视化检测方法;优化CRISPR/Cas12a反应体系,每个浓度设置3个平行,随后优化RT-RAA反应条件,以提高方法的检测性能;随后评价该方法的敏感性及特异性。所有实验结果均经3次重复实验验证。结果针对RVFV S基因,建立了RT-RAA-CRISPR/Cas12a核酸可视化检测方法;通过条件优化实验确定,当Cas12a蛋白工作浓度为0.053μmol/L、gRNA工作浓度为0.075μmol/L,在39℃条件下完成30 min等温扩增、随后于37℃进行20 min检测反应时,该方法的检测性能最佳;敏感性实验结果显示,该方法可稳定检出浓度低至0.5 copies/μL的RVFV S基因重组质粒,具有高敏感性;特异性实验表明,该方法与尼帕病毒RNA、拉沙病毒重组质粒(N基因)、埃博拉病毒RNA、新布尼亚病毒RNA无交叉反应,具有强特异性。结论本研究成功建立了RVFV RT-RAA-CRISPR/Cas12a核酸可视化检测方法,该方法具有敏感性高、操作简单等优势,有望应用于基层实验室,为RVFV早期检测提供技术支持,助力疫苗研发及疫情防控。 展开更多
关键词 裂谷热病毒 反转录重组酶介导等温扩增 crispr/Cas12a 核酸可视化检测
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肝豆状核变性诊断方法研究进展及展望
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作者 高亚敏 李浩 +2 位作者 韩尧 任锋 孙岩松 《胃肠病学和肝病学杂志》 2026年第2期299-303,共5页
肝豆状核变性(hepatolenticular degeneration, HLD)是由位于13号染色体(13q14.3)上的ATP酶铜转运β(ATPase copper transporting beta, ATP7B)基因突变导致的一种常染色体隐性遗传疾病。由于HLD早期发现并进行治疗可以减缓疾病的发展,... 肝豆状核变性(hepatolenticular degeneration, HLD)是由位于13号染色体(13q14.3)上的ATP酶铜转运β(ATPase copper transporting beta, ATP7B)基因突变导致的一种常染色体隐性遗传疾病。由于HLD早期发现并进行治疗可以减缓疾病的发展,降低患者死亡率、提高患者生命质量,具有高特异性,操作时间短的早期诊断方法对指导该病的早治疗具有重要的意义。本文阐述了HLD现有检测方法,包括针对ATP7B基因突变导致的生理生化,临床异常表现等非基因检测法以及可识别ATP7B突变位点及类型的基因检测法,并分析了相应检测方法的优点及不足之处。现有检测方法存在特异度低、检测时间长、操作复杂等问题,针对以上问题未来需要研究人员探索一种具有高灵敏度、高特异度、用时短、操作简单的检查方法。本文对HLD诊断方法研究进展进行综述并对成簇规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated proteins, CRISPR-Cas)基因检测技术未来应用于HLD检测进行展望。 展开更多
关键词 肝豆状核变性 检测方法 突变 crispr技术
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基于RAA-CRISPR/Cas12a快速检测尼帕病毒方法的建立 被引量:7
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作者 徐蛟 王英丽 +5 位作者 王莹 常星 张永强 李金明 包静月 王志亮 《中国动物检疫》 CAS 2023年第10期95-99,111,共6页
本研究建立了一种基于重组酶介导的扩增技术(RAA)以及CRISPR/Cas12a系统快速检测尼帕病毒(NiV)的方法。针对NiV N和F基因分别设计RAA引物和crRNA,构建反应体系,通过前期对引物、crRNA、反应温度以及反应时间等条件筛选优化建立起高效灵... 本研究建立了一种基于重组酶介导的扩增技术(RAA)以及CRISPR/Cas12a系统快速检测尼帕病毒(NiV)的方法。针对NiV N和F基因分别设计RAA引物和crRNA,构建反应体系,通过前期对引物、crRNA、反应温度以及反应时间等条件筛选优化建立起高效灵敏的检测方法,并评估了该方法的敏感性、特异性和重复性。结果显示:建立的方法在37℃恒温条件下,1h即可完成检测,最低检测限能够达到102拷贝/μL,敏感性较高;特异性强,与口蹄疫病毒(FMDV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)等常见猪病毒均无交叉反应;稳定性较好,对低、中、高浓度病毒质粒均能成功检出且一致性较好。结果表明,本试验建立的NiV快速检测方法操作简单、特异性强、灵敏度高、稳定性好,不需要复杂设备,在蓝光下通过肉眼即可观察结果,可为实现NiV早期快速检测提供有力的技术支持。 展开更多
关键词 重组酶介导扩增技术 crispr/Cas12a 尼帕病毒 检测方法
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CRISPR/Cas9技术在节肢动物中的应用研究
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作者 黄津伟 胡乐贞 +2 位作者 齐佳辰 孙金生 李冉 《安徽农业科学》 CAS 2022年第1期1-7,32,共8页
CRSPR/Cas9系统是基于RNA的适应性免疫系统,广泛存在于细菌和古细菌中。其特点在于单个蛋白质Cas9与两个短RNA序列结合后,可作为位点特异性核酸内切酶在体内或体外发挥作用。与传统的由核酸酶介导的DNA编辑技术不同,CRISPR/Cas9对DNA的... CRSPR/Cas9系统是基于RNA的适应性免疫系统,广泛存在于细菌和古细菌中。其特点在于单个蛋白质Cas9与两个短RNA序列结合后,可作为位点特异性核酸内切酶在体内或体外发挥作用。与传统的由核酸酶介导的DNA编辑技术不同,CRISPR/Cas9对DNA的识别不是由蛋白质指定的,而是由20-nt向导RNA(guide RNA)序列指定的。CRISPR/Cas9系统由于其设计过程和使用过程简单高效而被广泛应用。总结CRSPR/Cas9系统作用机理、导入方法及其在节肢动物中不同类群及不同基因的应用进展,以期为重要农业及经济节肢动物的功能基因研究与遗传育种研究提供有价值的参考。 展开更多
关键词 crispr/Cas9 导入方法 节肢动物 基因编辑
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基于CRISPR/Cas系统的病原核酸检测技术研究进展 被引量:1
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作者 李红招 王浩 +2 位作者 尹睿 乐敏 李艳 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期618-632,共15页
作为一种古老的细菌和古菌免疫系统,规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白[clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated protein(Cas),CRISPR/Cas]系统现已发展为新兴的热门基因编辑工... 作为一种古老的细菌和古菌免疫系统,规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白[clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated protein(Cas),CRISPR/Cas]系统现已发展为新兴的热门基因编辑工具,极大地推动了其他多个生物学相关领域的发展。其中,通过结合CRISPR/Cas系统与核酸恒温扩增技术建立了一些新型的高效、灵敏、不依赖仪器设备的检测方法,如DNA内切酶靶向的CRISPR反式报告系统(DNA endonuclease-targeted CRISPR trans-reporter,DETECTR)、特异性高灵敏度的酶报告器系统(specific high-sensitivity enzymatic reporter unlocking,SHERLOCK)等,不但提高了CRISPR/Cas系统在不同应用场景下的检测性能,更进一步激发了其在现场检测中的应用潜力。本文基于近年来被广泛应用的3种CRISPR/Cas系统(CRISPR/Cas9、CRISPR/Cas12a以及CRISPR/Cas13)的生物核酸检测方法,阐述了CRISPR/Cas系统的生物学意义及一般作用原理,并通过回顾以往开展的CRISPR/Cas系统相关的病原检测研究,比较分析了不同检测系统的特点以及在实际应用过程中可能存在的不足,为针对不同病原在不同应用场景下建立更加高效、合理的CRISPR/Cas系统检测方法提供了有益参考。 展开更多
关键词 crispr/Cas系统 Cas蛋白 病原 核酸 检测方法
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传染性皮下和造血器官坏死病毒RPA与CRISPRCas12a可视化快速检测方法的建立 被引量:1
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作者 周傲白雪 徐博文 +7 位作者 沙才华 邵建宏 赵福振 廖秀云 黄海超 蒋晓霞 罗宝正 陈轩 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期595-601,共7页
根据传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)基因序列的保守区域设计并合成多组RPA引物和特异性crRNA,经过筛选与优化,建立RPA-Cas12a系统荧光检测法和试纸条法2种可视化快速检测IHHNV的方法。结果显示,这2种可视化检测方法在37℃恒温反应... 根据传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)基因序列的保守区域设计并合成多组RPA引物和特异性crRNA,经过筛选与优化,建立RPA-Cas12a系统荧光检测法和试纸条法2种可视化快速检测IHHNV的方法。结果显示,这2种可视化检测方法在37℃恒温反应40 min可检测出IHHNV;与对虾白斑综合征病毒、虾肝肠胞虫和十足目虹彩病毒1无交叉反应;该方法灵敏度较高,最低检测浓度为10 copies/μL;应用该方法对10份IHHNV阳性临床样本进行检测,阳性检出率为100%。综合结果表明,建立的荧光法和试纸条2种可视化检测IHHNV的方法操作简单,反应灵敏,适用于对虾养殖场或基层实验室对IHHNV的定期监测和初筛。 展开更多
关键词 传染性皮下和造血器官坏死病毒 重组酶聚合酶扩增 crispr-Cas12a 检测方法
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CRISPR-Cas系统在动物及植物中不同的递送方式研究进展 被引量:1
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作者 范杏飞 顾晶雯 +3 位作者 顾晓燕 杜丽晶 蒋俊锋 王越 《解剖学杂志》 CAS 2022年第2期153-156,共4页
CRISPR-Cas系统的发现彻底改变了基因编辑技术领域,在多方面都有着广阔的前景。该系统主要有Cas蛋白和单链向导RNA组成,其功能的发挥高度依赖于各组分的有效递送。本篇综述对目前动植物中该系统组分的常用递送方式进行详细总结,并分析... CRISPR-Cas系统的发现彻底改变了基因编辑技术领域,在多方面都有着广阔的前景。该系统主要有Cas蛋白和单链向导RNA组成,其功能的发挥高度依赖于各组分的有效递送。本篇综述对目前动植物中该系统组分的常用递送方式进行详细总结,并分析其目前仍存在的问题。 展开更多
关键词 crispr-Cas 基因编辑 递送方式
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植物CRISPR/Cas无外源DNA基因组编辑技术研究进展 被引量:3
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作者 陆地 胡春华 +10 位作者 盛鸥 杨乔松 窦同心 何维弟 邓贵明 高慧君 刘思文 李春雨 董涛 易干军 毕方铖 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1927-1948,共22页
CRISPR/Cas基因组编辑技术已成为作物遗传改良的重要工具。常见的农杆菌介导或基因枪投送DNA基因组编辑方式会导致外源载体片段整合到植物基因组中,引发消费者对其潜在生物安全的担忧。目前已有部分植物建立了无外源DNA基因组编辑体系,... CRISPR/Cas基因组编辑技术已成为作物遗传改良的重要工具。常见的农杆菌介导或基因枪投送DNA基因组编辑方式会导致外源载体片段整合到植物基因组中,引发消费者对其潜在生物安全的担忧。目前已有部分植物建立了无外源DNA基因组编辑体系,但存在投送效率低、编辑效率低和再生困难等问题。本文中主要对植物CRISPR/Cas无外源DNA基因组编辑体系建立和应用研究中编辑元件载体、介导投送方式及常用的编辑策略等3个方面的进展进行了归纳,总结了存在的主要问题并对未来努力方向进行了展望。 展开更多
关键词 crispr/Cas 基因组编辑 无外源DNA 编辑元件载体 介导投送方式 生物安全
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基于CRISPR-Cas12a系统的鼠伤寒沙门氏菌可视化检测方法的建立 被引量:1
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作者 林冬媛 谢龙飞 +2 位作者 李芙蓉 梁玮珩 熊文广 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第8期68-76,共9页
为了建立一种特异性强、灵敏度高的鼠伤寒沙门氏菌可视化检测方法,试验将聚合酶链式反应(PCR)与成簇的有规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR-associated, CRISPR-... 为了建立一种特异性强、灵敏度高的鼠伤寒沙门氏菌可视化检测方法,试验将聚合酶链式反应(PCR)与成簇的有规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR-associated, CRISPR-Cas)系统相结合,首先根据鼠伤寒沙门氏菌的spy基因序列3′末端的保守区设计crRNA及靶标序列扩增引物,根据可视化检测原理设计单链DNA(single-stranded DNA, ssDNA)荧光报告探针;然后对靶标序列进行PCR扩增,将扩增产物加入CRISPR-Cas12a系统,在蓝光下通过肉眼观察是否产生绿色荧光实现对靶标的检测;最后进行特异性试验和灵敏度试验。结果表明:建立的方法仅能检测到鼠伤寒沙门氏菌,检测不到除鼠伤寒沙门氏菌外其他血清型的沙门氏菌及大肠杆菌、巴氏杆菌、鸭疫里默氏杆菌,能检测到循环数为14个的PCR产物和0.53 copies/μL的重组质粒,灵敏度优于常规PCR方法和实时荧光定量PCR方法。说明本试验建立的方法可以实现鼠伤寒沙门氏菌的可视化检测,具有特异性强、灵敏度高的特点。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门氏菌 成簇的有规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白12a(crispr-Cas12a)系统 可视化 检测方法 聚合酶链式反应(PCR)
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非洲猪瘟病毒的RPA-CRISPR-Cas12a快速检测方法的建立 被引量:8
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作者 徐博文 周傲白雪 +2 位作者 林志达 梁基壮 罗宝正 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第14期86-90,137-139,共8页
为了建立一种特异性好、灵敏度高的非洲猪瘟病毒(ASFV)快速检测方法,试验针对ASFV B646基因保守片段设计并合成特异性crRNA(crRNA1、crRNA2、crRNA3),并根据crRNA所在的基因序列区域设计重组酶聚合酶扩增(RPA)引物(RPA1-F/RPA1-R、RPA2F... 为了建立一种特异性好、灵敏度高的非洲猪瘟病毒(ASFV)快速检测方法,试验针对ASFV B646基因保守片段设计并合成特异性crRNA(crRNA1、crRNA2、crRNA3),并根据crRNA所在的基因序列区域设计重组酶聚合酶扩增(RPA)引物(RPA1-F/RPA1-R、RPA2F/RPA2-R),通过筛选最佳RPA引物-crRNA序列组合和crRNA浓度建立ASFV的RPA-CRISPR-Cas12a快速检测方法,在评估该方法的特异性和灵敏度后对ASFV阳性临床样本进行验证。结果表明:最佳RPA引物-crRNA序列组合为RPA2-crRNA3,最佳crRNA浓度为5μmol/L;该方法仅能检测出ASFV,不能检测出猪瘟病毒(CSFV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2),特异性良好;最低检测病毒浓度为5.8 copies/μL,灵敏度较高;应用该方法对20份ASFV阳性临床样本进行检测,结果均为阳性,符合率为100%。说明成功建立了ASFV的RPA-CRISPR-Cas12a快速检测方法,该方法特异性好、灵敏度高,可用于ASFV的现场快速检测。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(ASFV) 重组酶聚合酶扩增(RPA) crispr-Cas12a系统 快速检测 方法建立
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微小隐孢子虫RPA-CRISPR/Cas12a可视化检测方法的建立及应用 被引量:5
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作者 王丽 李珊 +5 位作者 李璐 张西臣 王晓岑 李新 张楠 宫鹏涛 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期4793-4804,共12页
【目的】建立一种快速、准确、灵敏的微小隐孢子虫可视化检测方法。【方法】本研究将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术与CRISPR/Cas12a系统相结合,通过荧光检测法和侧流层析试纸条读取结果。针对微小隐... 【目的】建立一种快速、准确、灵敏的微小隐孢子虫可视化检测方法。【方法】本研究将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术与CRISPR/Cas12a系统相结合,通过荧光检测法和侧流层析试纸条读取结果。针对微小隐孢子虫的小亚基核糖体RNA(small subunit ribosome RNA,SSU rRNA)基因设计和筛选crRNA和RPA引物,利用两种不同的单链DNA报告分子以荧光数值和侧流层析试纸条呈现检测结果。通过检测微小隐孢子虫和7个其他病原体评估RPA-CRISPR/Cas12a检测方法的特异性。通过梯度稀释的重组质粒和微小隐孢子虫基因组评估RPA-CRISPR/Cas12a检测方法的敏感性,并将该方法应用于临床样本的检测。【结果】本研究建立的RPA-CRISPR/Cas12a检测方法可在90 min内完成对样本中微小隐孢子虫的检测,与大肠杆菌、十二指肠贾第虫、华支睾吸虫、弓形虫、肝片吸虫、人五毛滴虫、沙门菌均无交叉反应,可特异性检测出微小隐孢子虫;敏感性试验结果显示,该方法的最低检测限为10个卵囊/mL。利用此方法对70份牛粪便样本和50份人粪便样本进行检测,经荧光检测法和侧流层析试纸条读取结果,微小隐孢子虫的阳性率分别为15.7%(11/70)和6.0%(3/50),与套式PCR检测结果完全一致。【结论】本研究建立的微小隐孢子虫RPA-CRISPR/Cas12a可视化检测方法具有高特异性和高灵敏度,且检测结果直观,不依赖昂贵的仪器设备,在微小隐孢子虫的现场检测和风险监测方面具有广阔的应用价值。 展开更多
关键词 crispr/Cas12a 微小隐孢子虫 重组酶聚合酶扩增 可视化检测
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CRISPR/Cas9系统技术难关:脱靶效应及其优化方法 被引量:1
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作者 于宗菲 翁丽涵 +2 位作者 孙诚诚 曹晓钰 叶振 《山东第一医科大学(山东省医学科学院)学报》 CAS 2023年第1期74-80,共7页
近年来,基因编辑新技术CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/associated nuclease 9)颇受关注,可用于在体内或体外编辑多种细胞中的单个或多个基因,为基因功能研究提供了新思路。Cas9核酸酶可以通... 近年来,基因编辑新技术CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/associated nuclease 9)颇受关注,可用于在体内或体外编辑多种细胞中的单个或多个基因,为基因功能研究提供了新思路。Cas9核酸酶可以通过改变其引导的单一向导RNA(single-guideRNA,sgRNA)序列,结合到新的特定基因序列进行靶向编辑。研究发现,CRISPR/Cas9系统存在的脱靶风险已成为该技术实际应用过程中的一个挑战。本文对CRISPR/Cas9系统作用机制、肿瘤临床应用进行简要综述,重点关注该系统存在的脱靶效应,并总结归纳减少或避免脱靶的方法,以期为相关领域研究提供参考。 展开更多
关键词 基因定点编辑 crispr/Cas9 肿瘤 脱靶 优化方法
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CRISPR-Cas基因编辑技术在微生物组工程中的应用 被引量:3
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作者 胡玉灿 曹朝辉 +3 位作者 郑灵刚 沈俊涛 赵维 戴磊 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2023年第3期57-69,共13页
微生物组工程是对复杂微生物群落进行改造,在基因组、代谢组及群落生态结构等多个层次上实现微生物组的精准调控.成簇规律间隔短回文序列(CRISPR)及其相关蛋白(CRISPR-Cas)系统是近期发展迅速的高效基因编辑工具.本文回顾了微生物组工... 微生物组工程是对复杂微生物群落进行改造,在基因组、代谢组及群落生态结构等多个层次上实现微生物组的精准调控.成簇规律间隔短回文序列(CRISPR)及其相关蛋白(CRISPR-Cas)系统是近期发展迅速的高效基因编辑工具.本文回顾了微生物组工程领域CRISPR-Cas系统的重要研究工作,重点关注CRISPR-Cas系统在微生物组的基因编辑和生态调控方面的应用.针对CRISPR-Cas系统在微生物组工程领域的应用挑战,本文从外源DNA递送方式和基因表达调控元件两个方面总结了微生物组工程的关键辅助方法与发展趋势,展望了微生物组工程领域所面临的挑战与机遇. 展开更多
关键词 成簇规律间隔短回文序列(crispr)及其相关蛋白(crispr-Cas)系统 微生物组工程 基因编辑技术 递送方法 基因表达调控元件
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白菜类蔬菜遗传转化研究进展
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作者 张家新 张文静 +9 位作者 路翠玲 苏贺楠 赵艳艳 魏小春 杨双娟 王志勇 冯健起 张晓伟 原玉香 袁敬平 《中国瓜菜》 北大核心 2025年第2期1-6,共6页
遗传转化技术是研究白菜类蔬菜基因功能和开展遗传育种的重要手段。通过适宜的遗传转化方法,可以将目标基因导入生物基因组,实现对其生物学特性和经济性状的改良。然而,白菜类蔬菜的遗传转化面临着再生能力差、转化效率低等问题。通过... 遗传转化技术是研究白菜类蔬菜基因功能和开展遗传育种的重要手段。通过适宜的遗传转化方法,可以将目标基因导入生物基因组,实现对其生物学特性和经济性状的改良。然而,白菜类蔬菜的遗传转化面临着再生能力差、转化效率低等问题。通过查阅国内外白菜类蔬菜遗传转化相关文献,对影响白菜类蔬菜遗传转化效率的因素(基因型、再生体系、转化方法等)进行了分析和总结,探讨了CRISPR/Cas9在遗传转化中的应用,并对其再生与遗传转化的前景进行了展望。 展开更多
关键词 白菜类蔬菜 遗传转化 再生体系 转化方法 crispr/Cas9
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基因组编辑植物的监管与检测技术 被引量:1
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作者 潘志文 张旭冬 +4 位作者 高洁儿 刘鹏程 姚涓 张秀杰 姜大刚 《科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期87-92,共6页
基因组编辑技术是利用人工核酸酶对生物体目标基因序列进行修饰的技术。近年来,以CRISPR/Cas系统为代表的基因组编辑技术由于高效、简单的操作发展迅速,为研究动植物基因功能、疾病治疗、植物分子育种等方面提供重要的方法。同时,由于... 基因组编辑技术是利用人工核酸酶对生物体目标基因序列进行修饰的技术。近年来,以CRISPR/Cas系统为代表的基因组编辑技术由于高效、简单的操作发展迅速,为研究动植物基因功能、疾病治疗、植物分子育种等方面提供重要的方法。同时,由于基因编辑产品的不断出现,为政府监管提出了更高的要求。通过介绍植物基因组编辑技术及其产品的种类,重点说明了主要国家、经济体在植物基因组编辑产品的安全监管的异同,概述了科学界对基因编辑作物的基本原则,并介绍了几种植物基因组编辑产品的检测方法。 展开更多
关键词 基因组编辑 crispr 监管 检测方法 转基因
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基于RPA-CRISPR/Cas12b的一管式H5亚型禽流感病毒快速检测方法的建立
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作者 孔玉方 王慧煜 +2 位作者 许晓琳 袁向芬 吴绍强 《中国兽医科学》 2026年第3期342-348,共7页
针对H5亚型禽流感病毒相对保守的3个区域,分别设计了sgRNA和逆转录重组酶聚合酶恒温快速检测技术(RT-RPA)的特异性扩增引物,建立了基于RPA-CRISPR/Cas12b检测H5亚型禽流感病毒的方法,并对该检测方法的敏感性、特异性、重复性和可行性进... 针对H5亚型禽流感病毒相对保守的3个区域,分别设计了sgRNA和逆转录重组酶聚合酶恒温快速检测技术(RT-RPA)的特异性扩增引物,建立了基于RPA-CRISPR/Cas12b检测H5亚型禽流感病毒的方法,并对该检测方法的敏感性、特异性、重复性和可行性进行验证。结果显示,重组质粒阳性标准品检测的灵敏度达到了1.0 copies/μL,是荧光RT-PCR灵敏度的10倍;该方法与H7亚型禽流感病毒、H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒(NDV)和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的核酸均无交叉反应;用该方法检测50份临床模拟样品并与国标推荐的实时荧光RT-PCR进行比较,结果两种检测方法符合率达100%。上述结果表明,本研究建立的H5亚型禽流感病毒RPA-CRISPR/Cas12b检测方法可为口岸基层的快速筛检工作提供技术支撑。 展开更多
关键词 一管式 RT-RPA crispr/Cas12b H5亚型禽流感病毒 检测方法
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基于RAA-CRISPR/Cas12a水痘-带状疱疹病毒核酸检测方法的建立
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作者 李子怡 王瑞晨 +11 位作者 刘昊泽 张天姿 史添鑫 崔倩倩 殷启凯 李樊 聂凯 付士红 王环宇 宋灿磊 徐秋芳 许松涛 《中华实验和临床病毒学杂志》 2025年第2期242-249,共8页
目的建立一种重组酶介导的等温扩增(recombinase-aid amplification,RAA)联合CRISPR/Cas12a系统快速检测水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)的方法。方法收集2023—2024年山东省及上海市疑似带状疱疹患者的临床样本,提取阳... 目的建立一种重组酶介导的等温扩增(recombinase-aid amplification,RAA)联合CRISPR/Cas12a系统快速检测水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)的方法。方法收集2023—2024年山东省及上海市疑似带状疱疹患者的临床样本,提取阳性样本核酸,针对VZV保守区域设计RAA特异性引物及crRNA(CRISPR RNA,crRNA),利用Cas12a非特异性切割单链荧光探针ssDNA产生的荧光强度筛选高敏感性的crRNA并优化crRNA、Cas12a和ssDNA探针的浓度,评价RAA-CRISPR/Cas12a检测方法的灵敏性、特异性及重复性。同时使用本研究方法与荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qPCR)方法对临床样本分别进行检测,比较两种方法的检出率和一致性。结果从设计的四条crRNA中筛选出高灵敏性的crRNA-4,并建立基于荧光强度测量的RAA-CRISPR/cas12a的VZV检测方法,该方法在37℃条件下,45 min即可完成检测,检测的灵敏度可达到10拷贝/μl,最低能检测到Ct值为38.980的临床样本;该方法特异性较强,与腺病毒7型、单纯疱疹病毒Ⅰ型、单纯疱疹病毒Ⅱ型、柯萨奇病毒A组16型、巨细胞病毒、EB病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、肠道病毒71型及流行性乙型脑炎病毒5型病毒核酸均无交叉反应;稳定性较好,对低中高浓度的病毒阳性质粒均能成功检出且一致性较好。临床阳性样本的检出率为100%,与qPCR检测结果完全一致。结论将RAA等温扩增技术结合CRISPR-CAS12a技术,建立了一种准确检测出VZV的方法,该方法灵敏度高、特异性强、对实验条件要求低,45 min内即可完成检验,可为实现VZV快速检测提供有力的技术支持。 展开更多
关键词 水痘-带状疱疹病毒 RAA crispr/cas12a 检测方法
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