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血清2型猪链球菌酪氨酸激酶Cps2C突变株致病力分析
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作者 林苗 倪华 +3 位作者 汪雨荷 郑峰 唐成亮 潘秀珍 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1009-1017,共9页
目的对血清2型猪链球菌酪氨酸激酶Cps2C的生物学功能进行生物信息学预测,并分析其对血清2型猪链球菌致病力的影响。方法利用生物信息学在线工具对Cps2C编码基因定位、蛋白保守结构域、跨膜结构域、蛋白相似性以及蛋白三维结构进行分析... 目的对血清2型猪链球菌酪氨酸激酶Cps2C的生物学功能进行生物信息学预测,并分析其对血清2型猪链球菌致病力的影响。方法利用生物信息学在线工具对Cps2C编码基因定位、蛋白保守结构域、跨膜结构域、蛋白相似性以及蛋白三维结构进行分析和预测。利用BALB/c小鼠感染模型,分别用野毒株05ZYH33和cps2C基因敲除株Δcps2C感染小鼠,对发病小鼠临床表征、小鼠死亡率、血液细菌载量进行比较分析。进一步对受感染小鼠的心脏、大脑和关节组织进行HE染色,对病理切片染色结果进行比较分析。结果Cps2C蛋白编码基因位于荚膜生物合成基因座cps上游,该蛋白无跨膜结构域,属于肺炎链球菌酪氨酸激酶CpsD同源蛋白,与其氨基酸序列相似性为64%,可能参与细菌荚膜合成调控。Cps2C缺失导致S.suis 2对小鼠的致病力显著减弱(P<0.05),与野毒株05ZYH33相比Δcps2C菌株的血液细菌含量降低(P<0.0001)。野毒株05ZYH33和Δcps2C菌株经腹腔注射感染的小鼠心脏、大脑和关节各组织结构完整,未见水肿、出血及炎症细胞浸润,未见心内膜炎、脑膜炎及关节炎等病变特征。结论血清2型猪链球菌酪氨酸激酶Cps2C可能是荚膜生物合成的重要调节因子,Cps2C缺失导致细菌血液存活能力下降,对小鼠致病力降低。 展开更多
关键词 血清2型猪链球菌 酪氨酸激酶 cps2C 致病力 荚膜
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浙江省9株猪链球菌2型分离株Cps2J全基因克隆与序列分析 被引量:3
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作者 姚苹苹 王复甦 +5 位作者 朱函坪 梅玲玲 叶菊连 罗进 张政 姚晨辉 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期62-64,共3页
目的了解浙江猪链球菌2型(SS2)分离株的分子基础及与国内外其他分离株的基因差异程度,确定Cps2J基因变异位点和频率,为该地区的猪链球菌防治提供科学依据。方法提取菌株DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增菌株Cps2J基因全片段,克隆入质粒载... 目的了解浙江猪链球菌2型(SS2)分离株的分子基础及与国内外其他分离株的基因差异程度,确定Cps2J基因变异位点和频率,为该地区的猪链球菌防治提供科学依据。方法提取菌株DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增菌株Cps2J基因全片段,克隆入质粒载体,纯化后采用ABI自动测序仪测定序列,并同国内外其他分离株的基因进行比较。结果扩增出9株菌株的Cps2J基因的完整开放阅读框(ORF)都为999bp,编码333个氨基酸,9株菌株Cps2J片段核苷酸高度同源,同源性在99.7%~100%;与国内外其他的SS2核苷酸的同源性为98.8%~99.0%,与猪链球菌1型的同源性只有56.8%~57.0%。结论9株浙江省猪链球菌2型分离株Cps2J基因序列非常保守,这些不同来源的菌株可能有相同的起源。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 cps2J基因 序列分析
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JMA/MRI-CPS2模式对东亚夏季风系统预测能力的评估 被引量:3
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作者 程智 杨玮 +1 位作者 徐敏 周昆 《气象》 CSCD 北大核心 2017年第4期434-442,共9页
基于东京气候中心提供的新一代气候预测业务模式(JMA/MRI-CPS2)回报数据,综合多种评估方法,评估了其对于东亚夏季风的预测技巧,结果表明该模式能够模拟出气候场上主要降水中心和夏季风主要成员的位置,但存在明显的系统性偏差。对于年际... 基于东京气候中心提供的新一代气候预测业务模式(JMA/MRI-CPS2)回报数据,综合多种评估方法,评估了其对于东亚夏季风的预测技巧,结果表明该模式能够模拟出气候场上主要降水中心和夏季风主要成员的位置,但存在明显的系统性偏差。对于年际变率的预测,泰勒图分析结果表明,该模式对夏季风指数预测效果总体较好,对于副热带高压指数中的面积、强度和西伸脊点指数预测能力较好,但对于脊线南北位置指数的预测效果较差;分月来看,4和5月起报结果的技巧相对更高。MV-EOF分析的结果表明模式较为准确地把握住了东亚夏季风主要模态的空间分布,滞后相关分析的结果表明其第一模态反映出了厄尔尼诺衰减的影响,第二模态反映出了厄尔尼诺发展的影响,合成分析的结果也显示,模式能够反映出厄尔尼诺发展的不同位相下东亚季风环流响应的差异。这些分析表明该模式对于东亚季风区的预测具有一定技巧,可以作为每年汛期气候预测的有益参考。 展开更多
关键词 模式评估 夏季风 JMA/MRI-cps2 东亚
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3株人源猪链球菌2型湖南株cps2J、gdh、ef基因进化分析 被引量:1
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作者 欧新华 张如胜 +5 位作者 苏良 杨柳青 肖姗 姚栋 宋克云 孙边成 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期369-374,共6页
目的对3株人源猪链球菌2型(S.suis 2)湖南株(HNCS201001、HNCS201101、HNCS201102)cps2J、gdh、ef基因进行序列测定和进化分析,了解其变异和进化状况,为人感染S.suis疫情的防控提供数据。方法设计S.suis 2 cps2J、gdh、ef基因PCR引物,对... 目的对3株人源猪链球菌2型(S.suis 2)湖南株(HNCS201001、HNCS201101、HNCS201102)cps2J、gdh、ef基因进行序列测定和进化分析,了解其变异和进化状况,为人感染S.suis疫情的防控提供数据。方法设计S.suis 2 cps2J、gdh、ef基因PCR引物,对HNCS201001、HNCS201101、HNCS201102株进行PCR扩增和序列测定,测序结果利用Lasergene和Mega5软件进行分析。结果 cps2J、gdh、ef基因包含的完整开放阅读框(ORF)分别为999bp、1 347bp、2 532bp,分别编码333、448、843个氨基酸。在线BLAST同源性分析表明,HNCS201001、HNCS201101、HNCS201102株属于S.suis 2,3菌株cps2J、gdh、ef基因组序列之间的核苷酸同源性均为100%;进化树显示,HNCS201001、HNCS201101、HNCS201102株与国内外猪源和人源S.suis 2菌株属于同一分支,同源性比较显示3株S.suis 2湖南分离株cps2J、gdh、ef基因与其他国内外S.suis株核苷酸序列同源性分别为99.8%~100%、96.4%~100%和99.7%~100%,氨基酸同源性分别为98.5%~100%、98.7%~100%和99.5%~100%。结论 3株人源S.suis 2湖南株cps2J、gdh、ef基因序列与国内外S.suis 2菌株相应基因序列同源性高,变异程度小。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 cps2J基因 gdh基因 ef基因 进化分析
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一种食源性溶血链球菌cps2J毒力基因特异性PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 李春节 胡庭俊 +2 位作者 邢亚丽 肖蕊 韦英益 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期2880-2883,共4页
根据GenBank上已发表链球菌cps2J毒力基因序列设计合成了一对可扩增长度为1 152 bp目的片段的引物,成功建立了特异性PCR方法用于食源性溶血链球菌毒力基因cps2J的检测。该方法的特异性和灵敏性试验结果显示,对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄... 根据GenBank上已发表链球菌cps2J毒力基因序列设计合成了一对可扩增长度为1 152 bp目的片段的引物,成功建立了特异性PCR方法用于食源性溶血链球菌毒力基因cps2J的检测。该方法的特异性和灵敏性试验结果显示,对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、绿脓杆菌、粪肠杆菌、变形杆菌以及藤黄微球菌的PCR检测结果均呈阴性,对分离的9株食源性溶血链球菌菌株进行了检测,电泳结果均呈阳性;检测目的菌株DNA的最低敏感度可达3.2×10^(-1)ng/m L。结果表明,此法特异性强,灵敏性高,能准确地检测肉制品中携带毒力基因cps2J的溶血链球菌,可作为食源性溶血链球菌快速诊断和流行病学调查的手段。 展开更多
关键词 食源性 溶血链球菌 cps2j PCR
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猪源2型链球菌福建株cps2j基因PCR检测及序列分析 被引量:1
6
作者 俞伏松 郭长明 +2 位作者 车勇良 林天龙 陈少莺 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2009年第17期10-14,共5页
设计并合成一对扩增2型猪链球菌cps基因的特异性引物,以猪2型链球菌福建株(SS2PFJ07)DNA为模板,筛选最佳反应条件,建立检测cps2j基因的PCR方法,并对PCR扩增产物进行序列测定和同源性比较分析。结果如下:应用该方法对猪2型链球菌福建株... 设计并合成一对扩增2型猪链球菌cps基因的特异性引物,以猪2型链球菌福建株(SS2PFJ07)DNA为模板,筛选最佳反应条件,建立检测cps2j基因的PCR方法,并对PCR扩增产物进行序列测定和同源性比较分析。结果如下:应用该方法对猪2型链球菌福建株和标准阳性株进行扩增,均获得与预期大小一致的675bp特异性目的片段,而对8株非2型猪链球菌的扩增结果均呈阴性;敏感性测定最低可检出100cfu细菌量或50pg细菌DNA;SS2PFJ07cps2j基因部分核苷酸及其推导的氨基酸序列与猪链球菌2型不同菌株的同源性分别达98.7%~100%和97.8%~100%。上述结果表明建立并优化的猪2型链球菌cps2j基因的PCR检测方法敏感性好、特异性高,能用于2型猪链球菌的分子流行病学调查和快速检测;序列分析表明猪2型链球菌福建株与国内外8株标准株之间同源性高、亲缘关系密切。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 福建株 cps2j基因 PCR
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2型猪链球菌河南株cps2J基因的遗传进化关系分析 被引量:2
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作者 张青娴 徐引弟 +3 位作者 王治方 朱文豪 许峰 王克领 《养猪》 2020年第2期121-123,共3页
从河南某猪场断奶仔猪发生疫情的病死猪脑脊液中分离到一株细菌,经革兰氏染色初步确定为猪链球菌,应用PCR方法扩增猪链球菌谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,gdh)和荚膜多糖基因(capsular polysaccharide,cps)进行猪链球菌及血清... 从河南某猪场断奶仔猪发生疫情的病死猪脑脊液中分离到一株细菌,经革兰氏染色初步确定为猪链球菌,应用PCR方法扩增猪链球菌谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,gdh)和荚膜多糖基因(capsular polysaccharide,cps)进行猪链球菌及血清型鉴定,将阳性产物测序,并进行序列比较分析。结果表明,该分离株为2型猪链球菌,与参考菌株同源性在98%以上,其cps2J基因与人源致病性猪链球菌同源性达99.6%。 展开更多
关键词 2型猪链球菌 cps2J基因 遗传进化
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猪链球菌2型荚膜多糖cps2J基因的克隆与原核表达 被引量:3
8
作者 刘燕 刘军 +3 位作者 冯书章 郭学军 孙洋 祝令伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期434-437,共4页
利用PCR方法从猪链球菌2型(SS2)四川资阳分离株449-1扩增出cps2J基因,克隆到pMD18-T载体,经酶切与表达质粒pMAL-p2x构建重组表达质粒pMALp2x-cps2J,转化至宿主菌TB1中诱导表达。SDS-PAGE电泳检测结果表明,重组菌株表达出了约80ku的可溶... 利用PCR方法从猪链球菌2型(SS2)四川资阳分离株449-1扩增出cps2J基因,克隆到pMD18-T载体,经酶切与表达质粒pMAL-p2x构建重组表达质粒pMALp2x-cps2J,转化至宿主菌TB1中诱导表达。SDS-PAGE电泳检测结果表明,重组菌株表达出了约80ku的可溶性目的蛋白MBP-cps2J,约占菌体蛋白总量的13.5%。表达蛋白用Amylose树脂层析柱纯化,将纯化的融合蛋白MBP-cps2J免疫家兔制备抗血清,经ELISA和协同凝集试验检测,其与SS2呈特异性阳性反应。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 cps2J基因 协同凝集试验
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猪链球菌2型广西GX01株Cps2J基因克隆与序列分析 被引量:1
9
作者 熊毅 覃芳芸 +6 位作者 白昀 朱伟 郭建刚 李华明 陆立权 邹联斌 刘棋 《动物医学进展》 CSCD 2006年第11期58-60,共3页
将分离到的广西猪链球菌2型,用针对猪链球菌2型Cps2J序列的引物Cps1/Cps2进行扩增,得到与预期相符的675bp的片段,将PCR产物回收连接转化后测序,得到了675bp的核苷酸序列,经同源性分析表明,GX01株Cps2J序列与猪链球菌2型国内外的... 将分离到的广西猪链球菌2型,用针对猪链球菌2型Cps2J序列的引物Cps1/Cps2进行扩增,得到与预期相符的675bp的片段,将PCR产物回收连接转化后测序,得到了675bp的核苷酸序列,经同源性分析表明,GX01株Cps2J序列与猪链球菌2型国内外的毒株核苷酸同源性在98.7%~100%之间,具有高度的同源性;与猪链球1型的同源性只有66.7%。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 cps2J 序列分析
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2型猪链球菌cps2D基因敲除株的构建及其基本生物学特性的研究 被引量:1
10
作者 刘旭苗 王悄悄 +6 位作者 林苗 倪华 郑峰 王怡雯 汪春晖 潘秀珍 曹祥荣 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期285-290,共6页
目的构建2型猪链球菌荚膜多糖基因簇中cps2D基因敲除株(Δcps2D),比较野毒株05ZYH33与敲除株Δcps2D基本生物学特性的差异。方法设计合成引物L1/L2、R1/R2、Spc1/Spc2,分别扩增cps2D基因上、下游同源臂L片段、R片段及Spc^(R)抗性基因S片... 目的构建2型猪链球菌荚膜多糖基因簇中cps2D基因敲除株(Δcps2D),比较野毒株05ZYH33与敲除株Δcps2D基本生物学特性的差异。方法设计合成引物L1/L2、R1/R2、Spc1/Spc2,分别扩增cps2D基因上、下游同源臂L片段、R片段及Spc^(R)抗性基因S片段,将3个片段连接至pUC19线性载体上,构建敲除质粒pUC19::cps2D。将敲除质粒电转导入05ZYH33感受态细胞后,利用Spc^(R)抗性平板筛选敲除株,并通过组合PCR和RT-PCR进一步验证。比较野毒株05ZYH33和敲除株Δcps2D细菌生长特性、溶血活性、革兰染色、细菌链长、荚膜形态等方面的异同。结果L1/L2、R1/R2、Spc1/Spc2三组引物分别扩增出L(1030 bp)、R(1030 bp)以及S(1130 bp)基因片段;通过无缝克隆的方法成功构建出敲除质粒pUC19::cps2D;电转入感受态细胞后获得69个克隆,筛选出26个疑似敲除株;组合PCR以及RT-PCR筛选后获得cps2D基因敲除株Δcps2D;与野毒株05ZYH33相比,Δcps2D对数期生长变缓,链长显著变短,荚膜稀疏变薄。结论成功构建cps2D基因敲除株,为后续进一步研究其调控荚膜合成的作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 2型猪链球菌 荚膜多糖 酪氨酸激酶cps2D 基因敲除 生物学性状
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2型猪链球菌酪氨酸激酶Cps2C基因过表达株的构建
11
作者 王悄悄 郑峰 +6 位作者 刘旭苗 林苗 倪华 王怡雯 曹祥荣 汪春晖 潘秀珍 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2022年第7期770-773,778,共5页
目的构建2型猪链球菌酪氨酸激酶Cps2C基因过表达株,为cps2C基因功能研究提供实验材料。方法使用重叠延伸PCR技术将延伸因子TufA(又名EF-Tu,编码基因为SSU05_0530)的启动子(命名为P0530)与cps2C基因连接为P0530cps2C片段,将P0530cps2C酶... 目的构建2型猪链球菌酪氨酸激酶Cps2C基因过表达株,为cps2C基因功能研究提供实验材料。方法使用重叠延伸PCR技术将延伸因子TufA(又名EF-Tu,编码基因为SSU05_0530)的启动子(命名为P0530)与cps2C基因连接为P0530cps2C片段,将P0530cps2C酶切后连接至猪链球菌-大肠埃希菌穿梭质粒pSET2,构建过表达质粒pSET2::P0530cps2C。将pSET2::P0530cps2C电转化导入S.suis 2野生毒株05ZYH33感受态细胞,抗性及组合PCR筛选得到cps2C过表达株。qRT-PCR检测过表达株cps2C基因的转录水平。结果重叠延伸PCR成功将P0530启动子片段(300 bp)和cps2C基因片段(696 bp)拼接为P0530cps2C(996 bp),片段及载体经BamH I和EcoR I酶切后连接,成功构建出过表达质粒pSET2::P0530cps2C;将pSET2::P0530cps2C电转化导入S.suis 205ZYH33感受态细胞,抗性筛选及组合PCR检测结果显示cps2C过表达株构建成功。提取野生株05ZYH33和cps2C过表达株总RNA后进行qRT-PCR实验,结果显示过表达株cps2C基因的相对表达水平较05ZYH33株上调2.4倍。结论本研究选用S.suis 205ZYH33的延伸因子TufA强启动子P0530作为启动子,成功构建过表达质粒pSET2::P0530cps2C并导入S.suis 2感受态细胞,成功获得cps2C过表达株,为进一步研究酪氨酸激酶Cps2C功能提供实验材料。 展开更多
关键词 2型猪链球菌 酪氨酸激酶cps2C 过表达株
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CPS2传说
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《软件》 2001年第9期44-46,共3页
据说在我们这个模拟器小圈子里呆得时间稍长一点的人都会染上同一种心病,那就是CPS2情结。这虽然是一个笑话,但的的确确是有几分道理的。和CPS2的问题比起来,什么SS模拟器、Jaggar模拟器甚至DC模拟器都要靠边站。首先我来给各位介绍一下... 据说在我们这个模拟器小圈子里呆得时间稍长一点的人都会染上同一种心病,那就是CPS2情结。这虽然是一个笑话,但的的确确是有几分道理的。和CPS2的问题比起来,什么SS模拟器、Jaggar模拟器甚至DC模拟器都要靠边站。首先我来给各位介绍一下CPS2的主板: Main Processor(处理器主频):Custom68000 at 12Mhz,Address Bus:24,bitDataBus:16,bitSound Processor(声频):ZilogZ80 at 8Mhz,Sound Channels(声道):16Stereo,ChannelsSound Format(声音格式): 展开更多
关键词 计算机游戏 cps2模拟器 游戏模拟器
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把街机搬回家 PSP上的CPS1/CPS2模拟器
13
作者 雷雷 《数字通信》 2006年第18期90-90,共1页
听到CPS这个名字也许很多玩家部感到陌生,这是一系列街机主机板的名称,在这种机板上诞生的游戏可是大名鼎鼎,《超级街霸2》、《名将》、《圆桌武士》、《块打旋风》、《三国志》……这些游戏伴随我们度过了美好的时光。现在我们在PSP上... 听到CPS这个名字也许很多玩家部感到陌生,这是一系列街机主机板的名称,在这种机板上诞生的游戏可是大名鼎鼎,《超级街霸2》、《名将》、《圆桌武士》、《块打旋风》、《三国志》……这些游戏伴随我们度过了美好的时光。现在我们在PSP上也能运行这些游戏了,这就是CPS模拟器的作用。 展开更多
关键词 cps2模拟器 PSP 街机 《三国志》 PS模拟器 《名将》 主机板 游戏 旋风
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CPS2考核电网调频分析
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作者 陈汝昌 何金定 朱欣春 《云南电力技术》 2014年第3期29-31,46,共4页
阐述了CPS标准下的南方电网联络线功率与偏差考核标准,分析、研究了基于CPS2考核指标的互联电网调频工作,结合云南电网的实际情况,提出了相应的改进措施建议,并在电网实际运行调控中验证了相应措施的有效性。
关键词 cps2考核 电网调频 云南电网 改进措施
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基于CRISPR/Cas9技术的烟草CPS2基因敲除及功能分析 被引量:8
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作者 张思琦 何佳 +5 位作者 贺凌霄 薛刚 孙聚涛 李晓辉 段杜薇 徐世晓 《烟草科技》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第5期17-25,共9页
为明确柯巴基焦磷酸合酶基因(CPS2)的功能和调控机制,利用CRISPR/Cas9技术对高香气烤烟品系8306中的CPS2基因进行定向编辑,得到了7株靶位点单碱基A/T/C插入的转化植株。利用q-PCR技术分析转化植株二萜类关键基因的表达,并利用GC/MS分析... 为明确柯巴基焦磷酸合酶基因(CPS2)的功能和调控机制,利用CRISPR/Cas9技术对高香气烤烟品系8306中的CPS2基因进行定向编辑,得到了7株靶位点单碱基A/T/C插入的转化植株。利用q-PCR技术分析转化植株二萜类关键基因的表达,并利用GC/MS分析叶面分泌物成分及香叶基香叶基焦磷酸(GGPP)含量(质量分数)。结果表明:①T0代转化植株CPS2及ABS表达量显著降低,冷杉醇和赖百当烯二醇含量也显著降低。②DXR表达量均显著升高,GGPP含量也大幅提高。③CYC-1和CYP71D16表达量差异较大,西柏三烯二醇出现小幅降低。④T0代转化植株的株高、茎围、叶间距、最大叶长、最大叶宽均增加。因此,敲除CPS2能够抑制赖百当类化合物合成,有助于上游途径中萜类合成前体GGPP的积累,可能抑制西柏三烯二醇积累,同时使植株表型性状发生变化。 展开更多
关键词 烟草 CRISPR/Cas9 cps2 冷杉醇 基因编辑 GGPP
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高致病性猪链球菌2型多重实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:9
16
作者 朱静 张锦海 +5 位作者 胡丹 石洁 张先云 李先富 潘秀珍 王长军 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2012年第5期325-328,共4页
目的建立对高致病性猪链球菌2型毒力基因SalK、virB4-89K、cps2J同步检测的多重实时荧光定量PCR检测方法。方法根据SalK、virB4-89K、cps2J基因保守区域设计并合成3对引物及其探针;通过反应体系和扩增条件优化,建立快速鉴定高致病性猪... 目的建立对高致病性猪链球菌2型毒力基因SalK、virB4-89K、cps2J同步检测的多重实时荧光定量PCR检测方法。方法根据SalK、virB4-89K、cps2J基因保守区域设计并合成3对引物及其探针;通过反应体系和扩增条件优化,建立快速鉴定高致病性猪链球菌2型的方法,并对方法的特异性、敏感性、重复性指标进行评估。结果反应体系具有良好的扩增效率,全部扩增检测可在60min内完成。SalK、virB4-89K、cps2J基因检测灵敏度分别为19cfu/ml、27cfu/ml和32cfu/ml。重复性试验中变异系数均小于3%。用该方法考核33株猪链球菌,包括1/2型、1型、3型至33型,以及9株常见对照菌株,仅猪链球菌1/2型检测到cps2J基因荧光信号增强。对疫情现场获得的SS2感染者血液进行检测,3个基因均阳性。结论建立的多重实时荧光定量PCR方法可快速检测高致病性猪链球菌2型,并能鉴定是否含有89K毒力岛基因SalK、virB4-89K,具有敏感、特异、重复性好的特点。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 多重实时荧光定量PCR SalK基因 virB4-89K基因 cps2J基因
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应用多重荧光Real-time PCR快速鉴定猪链球菌2型 被引量:5
17
作者 王君玮 王志亮 +5 位作者 王伟伟 赵永刚 孙承英 李林 赵云玲 张维 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1083-1087,共5页
目的建立能同时鉴定链球菌2型(S.suis2)和确定主要毒力标志MRP的快速检测方法。方法根据S.suis2CPS2J与MRP的保守序列,设计并合成了2对引物及其相应探针。通过优化各反应物的浓度、配比和循环程序,建立能从组织中直接检测CPS2J和MRP的... 目的建立能同时鉴定链球菌2型(S.suis2)和确定主要毒力标志MRP的快速检测方法。方法根据S.suis2CPS2J与MRP的保守序列,设计并合成了2对引物及其相应探针。通过优化各反应物的浓度、配比和循环程序,建立能从组织中直接检测CPS2J和MRP的实时荧光PCR方法。结果能在3h内对送检组织样品检测确定S.suis2型和MRP毒力基因,最低检测菌体浓度24CFU/ml。与普通PCR相比,敏感性在检测CPS2J时比普通PCR高至少10倍以上,而在检测MRP时比其高100倍。与葡萄球菌、化脓链球菌、沙门氏菌、S.suis1型、9型等无交叉反应。同一人在试剂放置0d、20d和60d检测,以及不同人用同一方法检测,变异系数均小于5%,差异不显著。用于检测SSsc0501攻毒后的样品,结果在心、肝、脾、肺、肾、淋巴结、脑中均检测到S.suis2阳性,MRP阳性。而在肌肉中,S.suis2和MRP均为阴性。结论建立的多重荧光Real-timePCR敏感性高、特异性强,稳定性和重复性好,能用于可疑S.suis2型组织样品的快速定型和毒力鉴定。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 多重荧光PCR MRP cps2J
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环介导等温扩增技术结合横向流动试纸条检测猪链球菌2型的应用研究 被引量:4
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作者 张莉 王利丽 +4 位作者 魏财文 杨春蕾 路超 池晶晶 鄢明华 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1077-1082,1090,共7页
目的建立一种猪链球菌2型的快速检测方法。方法以猪链球菌2型cps2J基因序列为检测靶标设计6条环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,其中2条促环引物分别标记异硫氰酸荧光素(FITC)和地高辛(Dig),用横向流动试纸条(LFD)检测扩增产物,建立猪链... 目的建立一种猪链球菌2型的快速检测方法。方法以猪链球菌2型cps2J基因序列为检测靶标设计6条环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,其中2条促环引物分别标记异硫氰酸荧光素(FITC)和地高辛(Dig),用横向流动试纸条(LFD)检测扩增产物,建立猪链球菌2型LAMP-LFD检测方法。结果所建立的检测方法能够特异性的检测出猪链球菌2型,与试验对照菌株不存在交叉反应,其最低检测限为76cfu/mL,在对100份样品的检测中,LAMP-LFD方法检测出14份阳性样品,培养法检测出12份阳性样品,LAMP-LFD方法检测阳性率略高于病原培养法,两者间的P>0.05无统计学差异。结论所建立LAMP-LFD检测方法具有特异性好、敏感性高、操作简单、快速等特点,适合于动物食品中猪链球菌2型的检测。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 cps2J基因 环介导等温扩增 横向流动试纸条
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琼脂糖凝胶电泳与核酸印迹杂交法检测细菌毒力基因PCR产物的灵敏度比较研究 被引量:3
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作者 綦廷娜 刘志广 +2 位作者 王涛 李培京 叶长芸 《疾病监测》 CAS 2011年第8期651-653,共3页
目的探讨核酸印迹杂交法在检测细菌毒力基因方面的应用价值。方法分别以10倍连续稀释的O157∶H7肠出血性大肠埃希菌和血清2型猪链球菌染色体提取物为模板,与志贺毒素2基因(stx2)和荚膜多糖2J基因(cps2J)特异性引物进行聚合酶链式反应(P... 目的探讨核酸印迹杂交法在检测细菌毒力基因方面的应用价值。方法分别以10倍连续稀释的O157∶H7肠出血性大肠埃希菌和血清2型猪链球菌染色体提取物为模板,与志贺毒素2基因(stx2)和荚膜多糖2J基因(cps2J)特异性引物进行聚合酶链式反应(PCR)。用1%琼脂糖凝胶电泳及核酸印迹杂交法检测PCR产物,比较两种方法的最低检测限。结果 1%琼脂糖凝胶电泳对EDL933菌株stx2基因PCR产物的最低检测限为6.7×102cfu(56.87 pg)/PCR体系,对SC84菌株cps2J基因PCR产物的最低检测限为4.3×102 cfu(12.65 pg)/PCR体系;核酸印迹杂交法对EDL933菌株stx2基因PCR产物的最低检测限为6.7×10-1 cfu(56.87 fg)/PCR体系,对SC84菌株cps2J基因PCR产物的最低检测限为4.3×10-1 cfu(12.65 fg)/PCR体系。结论用核酸印迹杂交法检测肠出血性大肠埃希菌stx2基因和猪链球菌cps2J基因PCR产物的灵敏度均比普通琼脂糖凝胶电泳检测法高了1000倍。 展开更多
关键词 核酸印迹杂交 琼脂糖凝胶电泳 肠出血性大肠埃希菌O157∶H7 猪链球菌2型 stx2基因 cps2J基因 检测灵敏度
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浙江电网联络线功率交换考核指标(CPS)优化研究 被引量:8
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作者 赵良 王涛 张锋 《浙江电力》 2004年第6期22-25,34,共5页
详细介绍了华东电网联络线功率交换考核指标CPS1、CPS2的具体标准 ,分析了浙江电网功率交换调节(即守口)的特殊情况和难点 ,并就控制地区小火电方式、考虑电网实际负荷追踪能力的超短期负荷预测 ,基于统计分析的CPS控制策略进行了分析 ... 详细介绍了华东电网联络线功率交换考核指标CPS1、CPS2的具体标准 ,分析了浙江电网功率交换调节(即守口)的特殊情况和难点 ,并就控制地区小火电方式、考虑电网实际负荷追踪能力的超短期负荷预测 ,基于统计分析的CPS控制策略进行了分析 ,提出了具体的优化应对方法。 展开更多
关键词 CPS1 cps2 SPSS 小火电 调节因子 相关系数
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