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小分子药物对CRISPR/Cas12i介导的两种绵羊原代细胞基因敲入效率的影响
1
作者
苏大崴
陈秋崇
+4 位作者
苗洱钰
张骐镜
陈哲
王小龙
徐坤
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025年第12期6104-6115,共12页
旨在以绵羊原代细胞为材料,验证CRISPR/Cas12i系统介导的以ssODN为供体进行HDR精准修复的基因编辑效率,以及5种小分子药物对Indels效率和敲入效率的影响。本研究以两种绵羊原代细胞为试验对象,验证CRISPR/Cas12i系统在25个靶基因位点的...
旨在以绵羊原代细胞为材料,验证CRISPR/Cas12i系统介导的以ssODN为供体进行HDR精准修复的基因编辑效率,以及5种小分子药物对Indels效率和敲入效率的影响。本研究以两种绵羊原代细胞为试验对象,验证CRISPR/Cas12i系统在25个靶基因位点的基因编辑效率;然后选取绵羊胎儿成纤维细胞的3个靶点(SOCS2-gRNA1、SOCS2-gRNA3和TBXT-gRNA5),绵羊后腿肌细胞的5个靶点(MSTN-gRNA2、MSTN-gRNA5、Myf6-gRNA4、Myf6-gRNA5和MyoG-gRNA4)检测5种小分子药物(SCR7、Nocodazole、RS-1、Vorinostat及Entinostat)对各靶点Indels效率的影响,最后在MSTN-gRNA2靶点检测5种小分子药物对CRISPR/Cas12i系统介导的以ssODN为供体进行HDR精准修复的基因敲入效率的影响。本研究验证了CRISPR/Cas12i系统在两种绵羊原代细胞的25个不同靶点均具有高基因编辑活性,添加小分子药物处理后,SCR7会降低绵羊原代细胞各靶点Indels效率,而RS-1、Entinostat和Vorinostat处理后对各位点Indels效率均有提升效果,Nocodazole对两种细胞作用效果不一致。在添加5种小分子药物处理后,MSTN-gRNA2位点敲入效率均有不同程度提高,其中2μmol·L-1Vorinostat和4μmol·L-1Entinostat处理组提升效果最高,敲入效率分别为7.67%和7.73%。该试验为CRISPR/Cas12i基因编辑系统的应用与推广提供了借鉴,为创制具有优良性状的基因编辑绵羊提供了新思路,为加速精准分子育种工作提供了技术支撑。
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关键词
cprispr
/Cas12i
同源重组
绵羊
INDELS
基因敲入
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职称材料
CRISPR/Cas9的外膜囊泡转运与无乳链球菌清除
被引量：
1
2
作者
侯国锋
曾家伟
+7 位作者
羊熙春
王爱媛
刘亚欣
曾纪锋
郭桂英
杨诺
李迁
郑继平
《热带生物学报》
2018年第3期295-301,共7页
人工核酸内切酶技术CRISPR(Clustered regulatory interspaced short palindromic repeats)/Cas9是当前最有效的基因编辑工具。外膜囊泡(Outer membrane vesicles,OMVs)是细菌主动分泌和吸收的双层膜结构,具有运载DNA、蛋白等多种物质...
人工核酸内切酶技术CRISPR(Clustered regulatory interspaced short palindromic repeats)/Cas9是当前最有效的基因编辑工具。外膜囊泡(Outer membrane vesicles,OMVs)是细菌主动分泌和吸收的双层膜结构,具有运载DNA、蛋白等多种物质的能力。为探究以OMVs为CRISPR编辑工具的转运载体、用于病原菌清除的可行性,本研究以高致病性无乳链球菌(Streptococcus agalactiae or Group B Streptococcus,GBS)为材料,在原有CRISRR质粒p Cas9的基础上,通过分子克隆,构建穿梭质粒p Cas9-2. 0和具有靶向剪切无乳链球菌cfb基因的毒性质粒p Cas9-cfb,将质粒p Cas9-cfb转入asd缺陷型大肠杆菌X6097后,一方面进行重组菌的OMVs制备、电镜观察和DNA分析,另一方面与GBS混合培养,最后在选择平板上对GBS菌落计数。结果显示,重组了质粒p Cas9-cfb的X6097能够分泌OMVs且内含质粒;实验组平板上没有GBS菌落产生;对照组平板上菌落经鉴定皆为含p Cas9-2. 0的GBS,且菌落数量随共培养时间的延长和卡那霉素(Kan)的浓度升高而增多。综上可见,OMVs可以运载CRISPR为染色体剪切工具、并实现对靶向病原菌的定向清除,但受OMVs分泌量的限制消除效率较低。同传统的预防性疫苗相比,本研究为病原菌清除提供了一个新的研究方向;同当前以噬菌体为载体的研究思路相比,本方法更简便、成本更低。另外,本研究也为难以进行电击转化的菌株提供了一个更简单的质粒转化方法。
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关键词
CRISPR
OMVs
无乳链球菌
病原菌清除
质粒转化
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职称材料
题名
小分子药物对CRISPR/Cas12i介导的两种绵羊原代细胞基因敲入效率的影响
1
作者
苏大崴
陈秋崇
苗洱钰
张骐镜
陈哲
王小龙
徐坤
机构
西北农林科技大学动物科技学院
出处
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025年第12期6104-6115,共12页
基金
农业科技重大专项
农业生物育种重大专项(2023ZD04074,2023ZD04051)。
文摘
旨在以绵羊原代细胞为材料,验证CRISPR/Cas12i系统介导的以ssODN为供体进行HDR精准修复的基因编辑效率,以及5种小分子药物对Indels效率和敲入效率的影响。本研究以两种绵羊原代细胞为试验对象,验证CRISPR/Cas12i系统在25个靶基因位点的基因编辑效率;然后选取绵羊胎儿成纤维细胞的3个靶点(SOCS2-gRNA1、SOCS2-gRNA3和TBXT-gRNA5),绵羊后腿肌细胞的5个靶点(MSTN-gRNA2、MSTN-gRNA5、Myf6-gRNA4、Myf6-gRNA5和MyoG-gRNA4)检测5种小分子药物(SCR7、Nocodazole、RS-1、Vorinostat及Entinostat)对各靶点Indels效率的影响,最后在MSTN-gRNA2靶点检测5种小分子药物对CRISPR/Cas12i系统介导的以ssODN为供体进行HDR精准修复的基因敲入效率的影响。本研究验证了CRISPR/Cas12i系统在两种绵羊原代细胞的25个不同靶点均具有高基因编辑活性,添加小分子药物处理后,SCR7会降低绵羊原代细胞各靶点Indels效率,而RS-1、Entinostat和Vorinostat处理后对各位点Indels效率均有提升效果,Nocodazole对两种细胞作用效果不一致。在添加5种小分子药物处理后,MSTN-gRNA2位点敲入效率均有不同程度提高,其中2μmol·L-1Vorinostat和4μmol·L-1Entinostat处理组提升效果最高,敲入效率分别为7.67%和7.73%。该试验为CRISPR/Cas12i基因编辑系统的应用与推广提供了借鉴,为创制具有优良性状的基因编辑绵羊提供了新思路,为加速精准分子育种工作提供了技术支撑。
关键词
cprispr
/Cas12i
同源重组
绵羊
INDELS
基因敲入
Keywords
CRISPR/Cas12i
homologous recombination
sheep
Indels
gene knock-in
分类号
S826.2 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
CRISPR/Cas9的外膜囊泡转运与无乳链球菌清除
被引量：
1
2
作者
侯国锋
曾家伟
羊熙春
王爱媛
刘亚欣
曾纪锋
郭桂英
杨诺
李迁
郑继平
机构
海南大学热带农林学院
海南大学教务处
海南大学网络与教育技术中心
出处
《热带生物学报》
2018年第3期295-301,共7页
基金
国家自然科学基金(31460699)
海南自然科学基金创新研究团队项目(2017CXTD005)
海南自然科学基金面上项目(317071)
文摘
人工核酸内切酶技术CRISPR(Clustered regulatory interspaced short palindromic repeats)/Cas9是当前最有效的基因编辑工具。外膜囊泡(Outer membrane vesicles,OMVs)是细菌主动分泌和吸收的双层膜结构,具有运载DNA、蛋白等多种物质的能力。为探究以OMVs为CRISPR编辑工具的转运载体、用于病原菌清除的可行性,本研究以高致病性无乳链球菌(Streptococcus agalactiae or Group B Streptococcus,GBS)为材料,在原有CRISRR质粒p Cas9的基础上,通过分子克隆,构建穿梭质粒p Cas9-2. 0和具有靶向剪切无乳链球菌cfb基因的毒性质粒p Cas9-cfb,将质粒p Cas9-cfb转入asd缺陷型大肠杆菌X6097后,一方面进行重组菌的OMVs制备、电镜观察和DNA分析,另一方面与GBS混合培养,最后在选择平板上对GBS菌落计数。结果显示,重组了质粒p Cas9-cfb的X6097能够分泌OMVs且内含质粒;实验组平板上没有GBS菌落产生;对照组平板上菌落经鉴定皆为含p Cas9-2. 0的GBS,且菌落数量随共培养时间的延长和卡那霉素(Kan)的浓度升高而增多。综上可见,OMVs可以运载CRISPR为染色体剪切工具、并实现对靶向病原菌的定向清除,但受OMVs分泌量的限制消除效率较低。同传统的预防性疫苗相比,本研究为病原菌清除提供了一个新的研究方向;同当前以噬菌体为载体的研究思路相比,本方法更简便、成本更低。另外,本研究也为难以进行电击转化的菌株提供了一个更简单的质粒转化方法。
关键词
CRISPR
OMVs
无乳链球菌
病原菌清除
质粒转化
Keywords
cprispr
out membrane vesicles（ OMVs）
Streptococcus agalactiae
elimination of pathogenic bacteria
plasmid transformation
分类号
Q819 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小分子药物对CRISPR/Cas12i介导的两种绵羊原代细胞基因敲入效率的影响
苏大崴
陈秋崇
苗洱钰
张骐镜
陈哲
王小龙
徐坤
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
CRISPR/Cas9的外膜囊泡转运与无乳链球菌清除
侯国锋
曾家伟
羊熙春
王爱媛
刘亚欣
曾纪锋
郭桂英
杨诺
李迁
郑继平
《热带生物学报》
2018
1
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职称材料
已选择
0
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参考文献
引证文献
统计分析
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