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大鼠体内Pig-a基因突变试验影响因素研究 被引量:1
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作者 朱雪娇 霍娇 +4 位作者 曾珠 刘运杰 彭子豪 陈锦瑶 张立实 《毒理学杂志》 CAS CSCD 2020年第1期31-35,41,共6页
目的为进一步完善和推广应用Pig-a基因突变试验,本研究拟在本实验室建立的试验方法基础上,对影响试验结果稳定性的3种主要影响因素进行探讨。方法15只雄性SD大鼠按照体重随机分为3组:溶媒对照组(PBS,pH=6.0)、N-乙基-N-亚硝基脲(N-Ethyl... 目的为进一步完善和推广应用Pig-a基因突变试验,本研究拟在本实验室建立的试验方法基础上,对影响试验结果稳定性的3种主要影响因素进行探讨。方法15只雄性SD大鼠按照体重随机分为3组:溶媒对照组(PBS,pH=6.0)、N-乙基-N-亚硝基脲(N-Ethyl-N-nitrosourea,ENU)20和80 mg/kg·bw剂量组。连续经口灌胃3 d,于暴露后28 d取血。按照本实验室已建立的流式细胞术Pig-a基因突变试验双染(CD59-APC/SYTO 13)或三染(CD59-APC/CD61-PE/SYTO 13)方案,针对网织红细胞突变频率(RET^(CD59-))、成熟红细胞突变频率(RBC^CD59-)和网织红细胞比例3项指标,分别进行多项影响因素检测:样本贮存液和贮存时间[肝素钠抗凝剂和血液保存液-1(枸橼酸-磷酸-葡萄糖-腺嘌呤,citrate phosphate dextrose adenine-1,CPDA-1),0~6 d]、样本染色前贮存时间(0~24 h)和样本染色后固定和贮存时间(1%多聚甲醛,0~24 h)。结果使用双染方案时,4℃避光保存条件下,CPDA-1保存6 d内RBC^CD59-、RET^(CD59-)和RET比例指标均未见明显影响(P>0.05);而肝素钠溶液第3天即可观察到RETCD59-明显升高,与第0天相比差异具有统计学意义(P<0.05)。肝素钠溶液4℃避光保存24 h时使用三染方案检测,3项指标与第0 h相比差异无统计学意义(P>0.05);而6 h时使用双染方案检测可观察到与第0 h相比,RET^(CD59-)差异具有统计学意义(P<0.05)。双染方案染色后,未固定样本高剂量组在第12 h与第0 h相比,RET^(CD59-)差异具有统计学意义(P<0.05),RET比例在第6 h明显降低(P<0.05),但经1%多聚甲醛固定后导致RET^(CD59-)和RET比例降低幅度更为明显(P<0.05)。结论使用CPDA-1保存血液样本时(避光4℃),可使样本保存时间延长至6 d(双染方案)。使用肝素钠溶液保存血液样本时(避光4℃),双染方案检测时间需在6 h内,而三染方案检测时间可延长至24 h。1%多聚甲醛固定可能不适用于Pig-a基因突变试验。 展开更多
关键词 Pig-a基因突变 流式细胞术 大鼠 cpda-1 样本贮存时间 多聚甲醛
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脐带血随储存时间红细胞损伤变化与微生物安全性评估
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作者 彭梓睿 张普山 +5 位作者 孟擎擎 柳艳丽 刘玉梅 娄琦 袁海云 温树生 《临床输血与检验》 2026年第2期207-215,共9页
目的评估脐带血(UCB)在柠檬酸磷酸葡萄糖腺嘌呤(CPDA-1)保存液中于2~6℃条件下储存35 d内的红细胞稳定性与微生物安全性,为其在新生儿心脏手术等临床场景中的预存式自体输血应用提供实验依据。方法在先天性心脏病产前产后一体化诊疗模式... 目的评估脐带血(UCB)在柠檬酸磷酸葡萄糖腺嘌呤(CPDA-1)保存液中于2~6℃条件下储存35 d内的红细胞稳定性与微生物安全性,为其在新生儿心脏手术等临床场景中的预存式自体输血应用提供实验依据。方法在先天性心脏病产前产后一体化诊疗模式下,采集60例产前诊断为先心病新生儿的UCB样本。将样本随机分为5组,分别在储存7、14、21、28、35 d后,检测其血常规、电解质、游离血红蛋白、溶血率及微生物污染情况。结果储存前各组基线数据无显著差异。储存期间,红细胞计数、血红蛋白、血细胞比容、血小板及钠、钙离子浓度未见显著变化。血钾、游离血红蛋白和溶血率均随储存时间延长而显著升高(P<0.05)。事后检验显示,血钾从第7天起持续显著上升,游离血红蛋白与溶血率则在储存21 d后开始显著增加。所有样本中1例(1.7%)发生大肠埃希菌污染。结论在标准化采集与储存流程下,UCB在CPDA-1保存液中储存35 d内,尽管存在进行性的钾离子积累和溶血加剧,但其关键质量指标仍在可接受范围内,且微生物安全性可控。本研究支持脐带血可作为新生儿,特别是需限期手术的先天性心脏病患儿,一种安全、可行的自体血源。 展开更多
关键词 脐带血 cpda-1保存液 预存式自体输血 溶血率
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