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一种基于CP530R序列非洲猪瘟病毒TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测方法的建立 被引量:13
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作者 王建华 董志珍 +7 位作者 赵丹 王玉玲 肖妍 张俊哲 陈小金 王乃福 陈本龙 赵祥平 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第2期22-26,共5页
为了建立一种快速、敏感和特异地检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的方法,试验根据ASFV CP530R基因序列设计1对特异性引物和探针,通过优化反应条件,建立了一种检测ASFV的TaqMan—MGB探针实时荧光PCR方法,并对... 为了建立一种快速、敏感和特异地检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的方法,试验根据ASFV CP530R基因序列设计1对特异性引物和探针,通过优化反应条件,建立了一种检测ASFV的TaqMan—MGB探针实时荧光PCR方法,并对该方法进行了特异性、定量线性范围、敏感性和重复性等试验评价。结果表明:该方法仅对ASFV发生特异性扩增反应,不与伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)、经典猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪流感病毒(SIV)发生交叉反应,具有良好的特异性。用该方法检测质粒标准对照(PCR2.1-ASFV—CP530R)的线性范围为6.1×10^2-6.1×10^9copies/μL,标准曲线方程为Y=-3.449x+38.10,相关系数(R^2)为0.999,最低可检测到61个拷贝的质粒标准对照分子;对5个不同浓度(6.1×10^3-6.1×10^7copies/μL)的质粒标准对照进行双份样品的4次重复检测,每个浓度质粒标准对照的D值变异系数均小于2.0%,具有良好的重现性;用该方法对126份进口猪的血液样品和38份猪肉样品进行ASFV检测,结果均为阴性。说明本方法可用于活猪临床样品和生猪样品中ASFV的检测。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 cp530r序列 TAQMAN-MGB探针 实时荧光PCR 方法 建立
原文传递
利用Red/ET重组技术构建表达非洲猪瘟病毒CP530R和F317L基因的重组伪狂犬病毒 被引量:2
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作者 孔洁 邵洋洋 +6 位作者 乔延召 赵琪琪 李鸿鑫 张新珩 蔺文成 陈伟国 谢青梅 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1716-1721,共6页
非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的一种高度接触型传染病,由于该病毒感染机制极为复杂,能够引起世界范围内的猪群发生致病性死亡。本研究参考Georgia 2007/1株(GenBank登录... 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的一种高度接触型传染病,由于该病毒感染机制极为复杂,能够引起世界范围内的猪群发生致病性死亡。本研究参考Georgia 2007/1株(GenBank登录号:FR682468)的CP530R和F317L基因序列,人工合成PUC57-CMV-HA-CP530R-F317L-BGH质粒,利用Red/ET重组工程技术和ccdB反向筛选技术,将ASFV特定基因定向插入到伪狂犬病毒TK位点,构建重组毒株rBartha-K61-CP530R-F317L。结果表明,构建成功的感染性克隆在PK-15细胞上完成适应性传代并持续传至20代,PCR扩增得到正确基因条带,测序结果未发现缺失与插入。本研究将外源基因成功插入到pBeloBAC11-Bartha-K61载体上,重组伪狂犬病毒构建成功,为进一步研制新型ASF活载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 cp530r F317L 伪狂犬病毒载体 TK基因 Red/ET重组技术
原文传递
表达非洲猪瘟pp62与Hsp70蛋白重组腺病毒对小鼠的免疫原性分析
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作者 陈长春 吴植 +7 位作者 任冠宇 陈文玉 曹世诺 朱睿 张力 成玉婷 朱善元 卢会鹏 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第6期3027-3031,共5页
本研究旨在开发一种针对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的重组腺病毒疫苗,为ASFV疫苗的临床应用和研发提供科学依据。利用pAdEasy-1系统构建融合表达ASFV CP530R基因和分支结核杆菌热休克蛋白70(Hsp70)的重组腺病毒(rAd-... 本研究旨在开发一种针对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的重组腺病毒疫苗,为ASFV疫苗的临床应用和研发提供科学依据。利用pAdEasy-1系统构建融合表达ASFV CP530R基因和分支结核杆菌热休克蛋白70(Hsp70)的重组腺病毒(rAd-CP530R-Hsp70)。通过间接免疫荧光和Western blot验证目的蛋白的表达。将rAd-CP530R-Hsp70重组腺病毒免疫小鼠,检测小鼠体内产生的抗体和细胞因子水平。结果显示:重组腺病毒成功诱导小鼠产生针对pp62的特异性抗体,免疫后35 d抗体滴度达到1.33。免疫后小鼠脾细胞培养上清中IL-2、IL-4和IFN-γ水平显著升高,显示该疫苗能够有效激活体液和细胞免疫应答。构建的重组腺病毒疫苗可有效诱导小鼠产生免疫应答,为非洲猪瘟疫苗的研发提供数据支持。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 cp530r 重组腺病毒 HSP70
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ASFV pp62 Protein Has 9 Dominant B-T Cell Combined Epitopes 被引量:2
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作者 Cao Qianda Dai Bihong +1 位作者 Yang Yang Cao Xuelian 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2022年第4期13-20,共8页
[Objective]The paper was to study the basic characteristics of the pp62 protein of the African swine fever virus strain Pig/HLJ/2018,and to provide more basic data for the study of the virus.[Method]We used the ProtPa... [Objective]The paper was to study the basic characteristics of the pp62 protein of the African swine fever virus strain Pig/HLJ/2018,and to provide more basic data for the study of the virus.[Method]We used the ProtParam program to analyze the physical and chemical properties of the pp62 protein.TMHMM-2.0 and SignalP-5.0 were used to analyze protein transmembrane region and signal peptide,and Lasergene 7.0 Protean program was used to study protein antigen index,hydrophilicity,surface accessibility and titration curve.Protein N-glycosylation site and O-glycosylation site came out with NetNGlyc-1.0 and NetOGlyc-4.0 online servers.Then,PSIPRED-4.0,NetSurfP-2.0,and PSRSM were used to analyze protein secondary structure,BepiPred1.0 and IEDB tools were used to analyze protein B-cell epitopes,and NetMHC 4.0 and NetMHCpan tools were used to analyze protein T-cell epitopes.And we used Swiss-Model to analyze the high-level structure of the protein,the EzMol tool to visually analyze B-T cell combined epitopes,and finally,MEGA 7.0 to analyze the genetic evolutionary relationship of the protein.[Result]The pp62 protein of African swine fever viral strain Pig/HLJ/2018 had a molecular weight of 60.5 kDa.It was a hydrophilic acid labile protein,and had no transmembrane region and signal peptide.There were 5 N-glycosylation sites and 4 O-glycosylation sites.Analysis of the secondary structure of the protein showed that the proportions of helix,coil and strands were 45.5%,41.7%and 12.8%,respectively.The study of dominant epitopes revealed that there were 14 dominant B-cell epitopes and 16 dominant T-cell epitopes.And 9 dominant B-T cell combined epitopes located on the surface of the protein molecule were found.The phylogenetic tree constructed with the pp62 protein showed that the evolutionary relationship of Pig/HLJ/2018 strain was the closest to Georgia/2007/1,which belonged to genotype II.[Conclusion]The results will provide basic information for pp62 research. 展开更多
关键词 African swine fever virus pp62 cp530r Dominant B-T cell combined epitope Phylogenetic tree Visual analysis
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