期刊文献+
共找到176篇文章
< 1 2 9 >
每页显示 20 50 100
人IL-24基因的克隆及在COS-7细胞中的表达 被引量:12
1
作者 陈雄艳 盛伟华 +3 位作者 谢宇锋 缪竞诚 白艳艳 杨吉成 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期672-676,共5页
目的 :克隆人IL 2 4基因 ,构建真核表达载体 ,在COS 7细胞中进行表达 ,并检测重组表达蛋白hIL 2 4的抗肿瘤活性。方法 :分离人外周血单个核细胞 ,提取细胞总RNA ,采用RT PCR技术克隆人IL 2 4基因 ,将其重组于pUC19,双脱氧末端终止法测... 目的 :克隆人IL 2 4基因 ,构建真核表达载体 ,在COS 7细胞中进行表达 ,并检测重组表达蛋白hIL 2 4的抗肿瘤活性。方法 :分离人外周血单个核细胞 ,提取细胞总RNA ,采用RT PCR技术克隆人IL 2 4基因 ,将其重组于pUC19,双脱氧末端终止法测定其核苷酸序列 ,构建真核重组表达载体pcDNA3 hIL 2 4 ,进行双酶切和PCR鉴定 ,以质粒pcDNA3 hIL 2 4转染COS 7细胞进行瞬时表达 ,用RT PCR检测mRNA表达 ,并用MTT法、TUNEL法和流式细胞术检测其诱导肿瘤细胞凋亡的活性。结果 :成功获得 6 2 1bp的人IL 2 4基因 ,测序正确 ,经双酶切和PCR鉴定真核表达质粒构建正确 ,以脂质体转染COS 7细胞后 ,用RT PCR法、MTT法、TUNEL法和流式细胞术检测表明COS 7细胞可表达hIL 2 4 ,且所表达的人IL 2 4具有较强的诱导A5 4 9肺腺癌细胞凋亡的作用。结论 :人IL 2 4基因的瞬时表达和凋亡效应的初步研究已获成功 ,为研究人IL 2 展开更多
关键词 人IL-24 克隆 表达 cos-7细胞 凋亡
暂未订购
Cos-7细胞胞内pH的^(31)P核磁共振测定 被引量:5
2
作者 乔娟 黄荣清 +4 位作者 肖炳坤 骆传环 吴德雨 赵焱 杨建云 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1298-1300,共3页
生物细胞内pH的测定对于细胞内代谢、游离离子及离子通道的研究有重要的意义,而且一些酶的活性也与细胞内pH密切相关。猴的肾细胞cos-7细胞常用于外源基因的转染表达,研究这一细胞株细胞内的pH,可为基因转染提供可靠的依据。本文采用31... 生物细胞内pH的测定对于细胞内代谢、游离离子及离子通道的研究有重要的意义,而且一些酶的活性也与细胞内pH密切相关。猴的肾细胞cos-7细胞常用于外源基因的转染表达,研究这一细胞株细胞内的pH,可为基因转染提供可靠的依据。本文采用31P核磁共振对cos-7细胞胞内的pH进行了分析测定。 展开更多
关键词 ^31P NMR cos-7细胞 pH ^31P核磁共振 分析测定 cos-7细胞 离子通道 基因转染 细胞内
在线阅读 下载PDF
人MUC-1全长cDNA基因真核表达载体构建及在COS-7细胞中的表达 被引量:11
3
作者 袁时芳 李开宗 +2 位作者 韩苇 颜真 张英起 《第四军医大学学报》 北大核心 2002年第13期1231-1234,共4页
目的 构建含人 MUC- 1全长 c DNA序列的真核表达载体 ,并观察其在 COS- 7细胞中的表达 .方法 将目的基因 MUC- 1克隆入 p GEM- 3zf(- )载体中并进行酶切鉴定和DNA序列测定 .亚克隆入真核质粒 pc DNA3.1(+) ,构建真核表达载体 pc DNA3.... 目的 构建含人 MUC- 1全长 c DNA序列的真核表达载体 ,并观察其在 COS- 7细胞中的表达 .方法 将目的基因 MUC- 1克隆入 p GEM- 3zf(- )载体中并进行酶切鉴定和DNA序列测定 .亚克隆入真核质粒 pc DNA3.1(+) ,构建真核表达载体 pc DNA3.1(+) - MU C- 1.用电穿孔法将重组质粒转入 COS- 7细胞 ,以免疫荧光和流式细胞仪检测 MUC- 1的表达 .结果 酶切鉴定和序列分析证实 ,重组质粒含有人MU C- 1全长 c DNA编码序列 ,转染实验表明 MU C- 1基因能在 COS- 7细胞中表达 .结论 人 MU C- 1全长 c DNA基因真核表达载体构建及其在 COS- 7中的表达均获成功 。 展开更多
关键词 MUC-1基因 真核表达 cos-7细胞 电穿孔法 核酸疫苗 免疫疗法 肿瘤治疗
暂未订购
重组人β-防御素基因在COS-7细胞的转染表达 被引量:10
4
作者 蔡绍晖 杜军 +2 位作者 陈新年 黄宁 王伯瑶 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 2000年第4期433-437,共5页
为探索建立持续稳定表达 h BD- 2的哺乳类动物型工程细胞的可能性 ,作者研究构建真核重组表达载体 p CMV.tag2 B/h BD- 2以进行 COS- 7细胞转染表达实验。将本室克隆获得的 h BD- 2全长 c DNA片段插入带有报告基因的真核表达质粒 p CMV.... 为探索建立持续稳定表达 h BD- 2的哺乳类动物型工程细胞的可能性 ,作者研究构建真核重组表达载体 p CMV.tag2 B/h BD- 2以进行 COS- 7细胞转染表达实验。将本室克隆获得的 h BD- 2全长 c DNA片段插入带有报告基因的真核表达质粒 p CMV.tag2 B构建出 h BD- 2的重组表达载体 p CMV.tag2 B/h BD- 2 ,并经 DNA测序证明h BD- 2 c DNA片段的插入方向和其全长 c DNA的碱基组成顺序均准确无误。通过脂质体转染法将 p CMV.tag2 B/h BD- 2导入 COS- 7细胞。RT- PCR法和免疫印迹法分别从 m RNA水平和蛋白质水平检测到被转染的 COS- 7细胞系能有效表达 h BD- 2。 展开更多
关键词 cos-7细胞 基因转染 重组人β-防御素 抗生素
暂未订购
抗人HBsAg单链抗体基因的构建及其在COS-7细胞中的表达 被引量:5
5
作者 温伟红 赵晶 +4 位作者 于翠娟 许彦鸣 金明 王成济 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期163-167,共5页
目的 :构建抗人HBsAg单链抗体基因 ,并分析其在COS 7细胞中的表达。方法 :以从噬菌体抗体库中筛选的抗HBsAg的Fab抗体基因为模板 ,分别扩增其轻、重链可变区 (VL、VH)基因 ,通过重组PCR方法将轻、重链可变区基因用连接肽(Gly4Ser) 3的... 目的 :构建抗人HBsAg单链抗体基因 ,并分析其在COS 7细胞中的表达。方法 :以从噬菌体抗体库中筛选的抗HBsAg的Fab抗体基因为模板 ,分别扩增其轻、重链可变区 (VL、VH)基因 ,通过重组PCR方法将轻、重链可变区基因用连接肽(Gly4Ser) 3的编码序列连接 ,并引入前导肽编码序列 ,构建具有L VH Linker VL 结构的单链抗体基因。将所构建的单链抗体基因克隆入绿色荧光蛋白 (GFP)融合表达载体pEGFP N3,并转染COS 7细胞进行表达。结果 :经测序表明 ,前导肽、连接肽、VL 及VH 的序列正确。酶切鉴定证实 ,成功地构建了GFP基因融合表达载体。瞬时转染COS 7细胞后 ,通过荧光显微镜观察证实有ScFv融合蛋白的表达。转染细胞的培养上清浓缩后 ,进行SDS PAGE及Westernblot分析 ,可检出ScFv融合蛋白的分泌性表达。培养上清的间接ELISA检测证实 ,所表达的单链抗体具有与HBsAg结合的特异性。结论 :成功地构建了抗人HBsAg单链抗体基因 ,并可在COS 展开更多
关键词 乙型肝炎 HBSAG 单链抗体基因 cos-7细胞 基因表达
原文传递
禽流感H5亚型HA基因在COS-7细胞中的瞬时表达与检测 被引量:5
6
作者 包红梅 姜永萍 +3 位作者 李泽君 李呈军 乔传玲 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期321-323,共3页
检测构建于真核表达载体PCI上的禽流感H5亚型(H5N1)HA基因的基因转染效率及瞬时表达,为基因疫苗的体外表达提供依据。在体外扩增并酶切鉴定PCIHA质粒;常规方法培养COS-7细胞;质粒与脂质体按照不同的比例混合,以脂质体介导法转染PCIHA,... 检测构建于真核表达载体PCI上的禽流感H5亚型(H5N1)HA基因的基因转染效率及瞬时表达,为基因疫苗的体外表达提供依据。在体外扩增并酶切鉴定PCIHA质粒;常规方法培养COS-7细胞;质粒与脂质体按照不同的比例混合,以脂质体介导法转染PCIHA,应用荧光显微镜观察转染效率及瞬时表达情况。结果表明转染效率与质粒和脂质体的比例有关,基因转染在24h后开始表达,48~72h表达量最高。本试验通过以脂质体不同剂量的优化方法转染COS-7细胞,获得了较高效率的表达,证实了AIV HA基因DNA疫苗可在体外表达。 展开更多
关键词 禽流感 H5亚型 HA基因 cos-7细胞 瞬时表达 检测方法
在线阅读 下载PDF
牛IgG2 Fc受体在COS-7细胞表面的稳定表达 被引量:4
7
作者 李青梅 郭军庆 +5 位作者 张改平 杨艳艳 王选年 张华 乔松林 王丽 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期121-124,共4页
将牛IgG2 Fc受体(boFcγ2R)编码区cDNA亚克隆到真核表达载体pcDNA3的巨细胞病毒启动子下游,构建了重组表达质粒pc3bo2R;以重组质粒转染COS-7细胞,用玫瑰花环试验检测boFcγ2R在转染细胞表面的表达,通过G418抗性筛选和连续克隆化,在转染... 将牛IgG2 Fc受体(boFcγ2R)编码区cDNA亚克隆到真核表达载体pcDNA3的巨细胞病毒启动子下游,构建了重组表达质粒pc3bo2R;以重组质粒转染COS-7细胞,用玫瑰花环试验检测boFcγ2R在转染细胞表面的表达,通过G418抗性筛选和连续克隆化,在转染细胞表面稳定表达了boFcγ2R受体分子,转染细胞的玫瑰花环形成率达90%。最后获得稳定表达boFcγ2R受体分子的COS-7转染细胞系,为受体的功能研究提供了良好的技术平台。 展开更多
关键词 牛IgG2 FC受体 cos-7细胞 细胞表面表达 玫瑰花环试验
在线阅读 下载PDF
CTLA-4/Ig融合蛋白在COS-7中的表达、纯化及鉴定 被引量:6
8
作者 易绍萱 吴军 +6 位作者 王锡华 李彦 刘志刚 姜庆 罗高兴 周立新 肖光夏 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期523-526,共4页
目的 探讨pCTLA 4/Ig融合蛋白表达载体在哺乳动物细胞中的表达及表达产物的鉴定、纯化 ,为其功能研究和临床应用奠定基础。方法 将pCTLA 4/Ig表达质粒转染COS 7细胞 ,双抗体夹心ELISA检测细胞培养上清中融合蛋白表达 ;ProteinA亲和层... 目的 探讨pCTLA 4/Ig融合蛋白表达载体在哺乳动物细胞中的表达及表达产物的鉴定、纯化 ,为其功能研究和临床应用奠定基础。方法 将pCTLA 4/Ig表达质粒转染COS 7细胞 ,双抗体夹心ELISA检测细胞培养上清中融合蛋白表达 ;ProteinA亲和层析纯化 ,SDS PAGE、Western印迹、3H TdR掺入等进行分子量、纯度、抗原特异性及生物学活性鉴定。结果 在pCTLA 4/Ig质粒转染后的 48h和 96h上清中 ,均能检测到CTLA 4/Ig融合蛋白表达 ;经亲和层析纯化后 ,在SDS PAGE胶上出现一条分子量约 5 0× 10 3 的与预期分子量大小相符的蛋白条带 ,该蛋白能与抗人CTLA 4单抗特异结合 ;该纯化融合蛋白能抑制人MLR ,抑制率为6 0 %~ 70 %。结论 在哺乳动物细胞中成功地表达并纯化了有生物学活性的重组人CTLA 4/Ig融合蛋白。 展开更多
关键词 CTLA-4融合蛋白 cos-7细胞 脂质体转染法
在线阅读 下载PDF
弓形虫和乙型肝炎病毒混合核酸疫苗的研究Ⅱ.pcDNA3-HBsAg-GRA1在COS-7细胞中的表达及鉴定 被引量:5
9
作者 王丹静 舒衡平 +3 位作者 秦志强 蔡力汀 吴翔 蒋立平 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第1期49-51,共3页
目的 鉴定pcDNA3 HBsAg GRA1在哺乳动物细胞内是否表达目的蛋白。 方法 提取pcDNA3 HBsAg GRA1质粒 ;体外培养COS 7细胞 ;pcDNA3 HBsAg GRA1经脂质体转染体外培养的COS 7细胞 ;取转染后的细胞培养上清进行SDS PAGE ,Western blot鉴定... 目的 鉴定pcDNA3 HBsAg GRA1在哺乳动物细胞内是否表达目的蛋白。 方法 提取pcDNA3 HBsAg GRA1质粒 ;体外培养COS 7细胞 ;pcDNA3 HBsAg GRA1经脂质体转染体外培养的COS 7细胞 ;取转染后的细胞培养上清进行SDS PAGE ,Western blot鉴定。结果 成功将pcDNA3 HBsAg GRA1转染入COS 7细胞。转染的细胞能高效表达分子为 4 7kD分泌性融合蛋白 (HBsAg GRA1)。HBsAg GRA1能同时被HBsAb阳性人血清及弓形虫免疫兔血清所识别。 结论 pcDNA3 HB sAg GRA1在体外培养的COS 7细胞中高效表达与预期分子量大小相同 ,且具有免疫学活性的融合蛋白。 展开更多
关键词 pcDNA3-HBsAg—GRA1 表达 cos-7细胞 弓形虫
暂未订购
COS-7细胞中小发卡RNA介导的RNA干涉 被引量:3
10
作者 汤富酬 杨红波 +4 位作者 孟国良 李成建 尚克刚 张博 薛友纺 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第4期295-300,共6页
利用U6启动子转录小发卡RNA介导的RNA干涉是最近发展起来的在哺乳动物细胞中特异性抑制指定基因表达的新技术 ,已有实验证明它在小鼠畸胎瘤P19等细胞系中具有强烈的抑制基因表达的作用。本文对COS 7细胞系中U6启动子转录GFP基因的小发卡... 利用U6启动子转录小发卡RNA介导的RNA干涉是最近发展起来的在哺乳动物细胞中特异性抑制指定基因表达的新技术 ,已有实验证明它在小鼠畸胎瘤P19等细胞系中具有强烈的抑制基因表达的作用。本文对COS 7细胞系中U6启动子转录GFP基因的小发卡RNA介导的RNA干涉现象进行了研究 ,结果表明 :U6启动子转录的小发卡RNA具有RNA干涉作用 ,即可以在COS 7细胞中特异性地抑制含有对应序列的基因GFP的表达 ,这一结果为今后在COS 7细胞系中利用RNA干涉技术研究目的基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 小发卡RNA RNA干涉 cos-7 绿色荧光蛋白
在线阅读 下载PDF
狂犬病病毒糖蛋白真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达 被引量:3
11
作者 姚为民 舒适 +3 位作者 周华 隋红 刘原舒 王志武 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第9期656-657,663,共3页
目的构建狂犬病病毒糖蛋白基因的真核细胞表达载体,并在COS-7细胞中表达。方法培养狂犬病病毒,提取负链RNA,采用RT-PCR的方法扩增糖蛋白基因,并将该基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(A)上,通过脂质体介导的方法,转染COS-7细胞,用ELISA及... 目的构建狂犬病病毒糖蛋白基因的真核细胞表达载体,并在COS-7细胞中表达。方法培养狂犬病病毒,提取负链RNA,采用RT-PCR的方法扩增糖蛋白基因,并将该基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(A)上,通过脂质体介导的方法,转染COS-7细胞,用ELISA及间接免疫荧光法检测狂犬病病毒糖蛋白在COS-7细胞中的瞬时表达。结果成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(A)/G,转染COS-7细胞后,在其培养上清中未检测到狂犬病病毒糖蛋白的表达。间接免疫荧光试验表明,pcDNA3.1(A)/G能有效地表达狂犬病病毒糖蛋白于转染的COS-7细胞膜上。结论真核细胞表达载体pcDNA3.1(A)/G能够在COS-7细胞中表达狂犬病病毒糖蛋白,为开发狂犬病病毒糖蛋白基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 糖蛋白 cos-7细胞 真核表达
在线阅读 下载PDF
小鼠白细胞介素12双顺反子真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达 被引量:7
12
作者 唐展云 赖冠华 陈诗书 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第1期48-53,共6页
克隆小鼠白细胞介素12(IL-12)p40及p35cDNA,并构建同时含mIL-12p40和p35cDNA的双顺反子真核表达载体及其在哺乳动物细胞中的表达.白细胞介素12是由巨噬细胞,树突状细胞等抗原提呈细胞产生的一... 克隆小鼠白细胞介素12(IL-12)p40及p35cDNA,并构建同时含mIL-12p40和p35cDNA的双顺反子真核表达载体及其在哺乳动物细胞中的表达.白细胞介素12是由巨噬细胞,树突状细胞等抗原提呈细胞产生的一种异二聚体细胞因子,对机体的细胞免疫功能起着重要的调节作用.利用脂多糖(100pg/ml)和小鼠重组干扰素(IFN-γ500U/ml)体外联合刺激小鼠腹腔巨噬细胞,从中提取总RNA,经RT-PCR扩增出含信号肽的小鼠白细胞介素12(mIL-12)p40及p35全长cD-NA.PCR产物经酶切后,分别克隆至pBluescriptⅡSK载体中,序列测定结果与文献报道序列一致.然后利用脊髓灰质炎(Polio)病毒内核糖体进入位点(IRES)连接mIL-12p40及p35cDNA,亚克隆至pcDNA3载体中,构建成含mIL-12p40及p35cDNA双顺反子真核表达载体,即pcDNA3/mIL-12,p40及p35cDNA同时受pcDNA3中hCMV启动子驱动,将p40及p35转录至同一mR-NA上.通过LipofectAMINE将pcDNA3/mIL-12转染COS-7细胞,72h收集培养上清,测定m? 展开更多
关键词 白细胞介素12 PCDNA3 真核表达载体 cos-7细胞
在线阅读 下载PDF
人FL基因高效真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达 被引量:3
13
作者 王冠军 马俐君 +1 位作者 李梁 裴雪涛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期305-308,共4页
目的 :构建人FL真核表达载体 pIRES1neo/hFL ,观察其在COS 7细胞中的表达。方法 :采用RT PCR方法自人白血病细胞系TF 1中克隆可溶型FL(Flt3 ligand)cDNA片段 ,测序鉴定正确后 ,插入真核表达载体 pIRES1neo中的EcoRI和BamHI位点 ,构建hF... 目的 :构建人FL真核表达载体 pIRES1neo/hFL ,观察其在COS 7细胞中的表达。方法 :采用RT PCR方法自人白血病细胞系TF 1中克隆可溶型FL(Flt3 ligand)cDNA片段 ,测序鉴定正确后 ,插入真核表达载体 pIRES1neo中的EcoRI和BamHI位点 ,构建hFL真核表达载体 pIRES1neo/hFL。脂质体介导法将其转染COS 7细胞 ,72h以RT PCR检测转染细胞中外源hFL基因的转录、ELISA法及脐血CD34 + 细胞增殖实验测定转染细胞上清中hFL的含量和活性。结果 :酶切鉴定表明成功构建了重组真核表达载体 pIRES1neo/hFL ;外源hFL基因能在转染细胞中有效转录 ;ELISA法测得 72h后培养上清中的hFL含量为每 2 4小时 2 5 1ng/ 10 6cells,并且分泌的hFL具有良好的生物学活性。结论 :构建hFL真核表达载体在COS 7细胞中具有良好的表达活性。 展开更多
关键词 FL 真核表达载体 cos-7细胞 表达活性 生物学活性 专职抗原递呈细胞 APC
暂未订购
pcDNA3.1/hTSHR真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达 被引量:6
14
作者 詹升华 张徽 刘纯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期390-393,共4页
目的 :构建pcDNA3.1(+)人促甲状腺激素受体 (hTSHR)基因真核表达载体 ,并在COS 7细胞中进行表达。方法 :以限制性内切酶EcoRI和XbaI双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR ,获得hTSHRcDNA的全长片段 ,在以低熔点琼脂糖回收纯化后 ,定向插入真... 目的 :构建pcDNA3.1(+)人促甲状腺激素受体 (hTSHR)基因真核表达载体 ,并在COS 7细胞中进行表达。方法 :以限制性内切酶EcoRI和XbaI双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR ,获得hTSHRcDNA的全长片段 ,在以低熔点琼脂糖回收纯化后 ,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆酶切位点中 ,构建重组体pcDNA3.1/hTSHR ,进行酶切、PCR及测序鉴定。通过脂质体介导 ,转染COS 7细胞进行瞬时表达 ,并用RT PCR和免疫细胞化学染色法检测hTSHR的表达。结果 :双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR得到约 2 70 0bp含TSHR全长cD NA的片段 ,同预期片段的大小相符。所构建的pcDNA3.1/hT SHR经双酶切及PCR鉴定同预期大小相符 ;测序结果与Gen Bank中收录的hTSHR全长序列一致 ,表明真核表达质粒构建正确。以脂质体转染COS 7细胞后 ,用RT PCR和免疫细胞化学染色法检测表明 ,细胞可表达hTSHR。结论 :成功地构建真核重组表达质粒pcDNA3.1/hTSHR ,为进一步研究TSHR的功能 ,以及利用hTSHR真核表达载体建立Graves实验动物模型奠定了基础。 展开更多
关键词 人促甲状腺激素受体 PCDNA3.1 cos-7细胞 转染 动物模型
原文传递
COS-7细胞上转染的人类三型酸敏感离子通道的生理学和药理学特性 被引量:3
15
作者 郑云洁 唐明 +4 位作者 刘长金 宋元龙 骆红艳 胡新武 Jurgen Hescheler 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期421-425,共5页
目的研究人类三型酸敏感离子通道(hASIC3)的生理学和药理学特性。方法应用全细胞电压钳技术检测转染在COS-7细胞上的hASIC3通道的生理学和药理学特性。结果hASIC3通道能通过迅速降低胞外pH值而被激活,并在酸性环境中迅速脱敏。脱敏后的h... 目的研究人类三型酸敏感离子通道(hASIC3)的生理学和药理学特性。方法应用全细胞电压钳技术检测转染在COS-7细胞上的hASIC3通道的生理学和药理学特性。结果hASIC3通道能通过迅速降低胞外pH值而被激活,并在酸性环境中迅速脱敏。脱敏后的hASIC3通道恢复到50%备用状态时所需的时间为(618±21)ms。胞外pH值在(6.40±0.05)时可使50%的hASIC3通道激活。pH值低于8时hASIC3通道的利用率降低,在生理状态pH值条件下,通道利用率降低了大约50%。阿米洛利能特异性阻断快速激活快速失活hASIC3通道且半数抑制浓度为(12.5±3.0)μmol/L。hASIC3通道的电流电压(I-V)关系曲线在很宽广的电压范围内呈线性关系(-80^+80 mV),翻转电位为(+43±5)mV。结论hASIC3通道作为一种酸感受器,可能对感受人体pH值的变化起很重要的作用。 展开更多
关键词 酸敏感离子通道 cos-7细胞 pH值 阿米洛利
暂未订购
pNEgr-mIL-12真核表达重组质粒的构建及在COS-7细胞和黑色素瘤B16细胞中的表达 被引量:4
16
作者 杨英 付士波 刘树铮 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期17-20,共4页
目的 :构建含辐射敏感启动子的 p NEgr- m IL- 1 2真核表达载体 ,转染哺乳动物细胞后经不同剂量 X射线照射 ,检测 m IL- 1 2的表达。方法 :限制性内切酶酶切构建 p NEgr- m IL- 1 2表达载体 ;脂质体转染法转染 COS- 7细胞和 B1 6细胞 ;E... 目的 :构建含辐射敏感启动子的 p NEgr- m IL- 1 2真核表达载体 ,转染哺乳动物细胞后经不同剂量 X射线照射 ,检测 m IL- 1 2的表达。方法 :限制性内切酶酶切构建 p NEgr- m IL- 1 2表达载体 ;脂质体转染法转染 COS- 7细胞和 B1 6细胞 ;ELISA法检测 m IL- 1 2 p70表达。结果 :1 p NEgr-m IL- 1 2重组质粒转染瞬时表达细胞 COS- 7细胞 ,经不同剂量 X射线照射后 ,照射组 m IL- 1 2表达量比未照射组明显增高 ( P<0 .0 5 ,P<0 .0 0 1 ) ,约为未照组的 1 .5~ 2 .5倍 ;在 2 .0 Gy照后表达增高最为明显 ,表达于照后 4h达峰值 ,在观察的 72 h内保持于较高水平 ;2转染 p NEgr- m IL- 1 2的B1 6细胞于 2 .0 Gy照后增高明显 ,为未照射组的 1 .5倍 ;并且经 2 .0 Gy X射线照射后随时间延长表达水平逐渐增高 ;低至 0 .0 5 Gy的剂量对两种细胞亦均有激活作用。结论 :p NEgr- m IL- 1 2重组质粒具有辐射激活下游基因表达的功能 ,且经不同剂量 X射线照射后表达均有增强 ,尤以 2 .0 Gy照射组作用明显 ,但在低剂量 5 0、75、1 0 0 m 展开更多
关键词 EGR-1启动子 IL-12 电离辐射 转染 cos-7细胞 黑色素瘤
在线阅读 下载PDF
小鼠富含半胱氨酸分泌蛋白-1真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达 被引量:4
17
作者 罗金 杨菁 +1 位作者 徐望明 尹太郎 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期509-513,共5页
目的:构建小鼠富含半胱氨酸分泌蛋白-1(Crisp-1)真核表达载体,并观察其在COS-7细胞中的表达。方法:从小鼠附睾组织中提取总RNA,RT-PCR扩增Crisp-1基因开放阅读框(ORF),将目的基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1上,经脂质体介导转染COS-7细... 目的:构建小鼠富含半胱氨酸分泌蛋白-1(Crisp-1)真核表达载体,并观察其在COS-7细胞中的表达。方法:从小鼠附睾组织中提取总RNA,RT-PCR扩增Crisp-1基因开放阅读框(ORF),将目的基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1上,经脂质体介导转染COS-7细胞,并利用间接免疫荧光和RT-PCR检测其在COS-7细胞中的表达。结果:酶切电泳鉴定结果显示Crisp-1基因克隆入载体中,测序结果证实克隆的基因序列与基因库(GeneBank)中的Crisp-1序列相符。脂质体转染后,间接免疫荧光和RT-PCR结果均表明重组质粒pcDNA3.1-Crisp-1能在COS-7细胞中表达。结论:成功获得了能在COS-7细胞中表达的小鼠Crisp-1DNA疫苗的真核表达质粒pcDNA3.1-Crisp-1,为后续研究其生物学活性及免疫避孕效应奠定了基础。 展开更多
关键词 半胱氨酸分泌蛋白-1(Crisp-1) 真核表达载体 cos-7细胞 避孕疫苗
原文传递
人CD40-Ig融合蛋白表达载体的构建及其在COS-7细胞的表达 被引量:2
18
作者 刘荷中 毛宁 +3 位作者 侯春梅 李秀森 沈倍奋 唐佩弦 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期14-19,共6页
CD4 0 /CD4 0L途径是除B7/CD2 8途径之外的重要的共刺激信号转导途径 ,在T细胞活化过程中扮演着十分关键的角色。因而 ,该途径可能在同种移植排斥的诱导和效应阶段的不同时期发挥关键作用。本研究旨在获得人CD4 0分子胞外区和人IgG 1Fc... CD4 0 /CD4 0L途径是除B7/CD2 8途径之外的重要的共刺激信号转导途径 ,在T细胞活化过程中扮演着十分关键的角色。因而 ,该途径可能在同种移植排斥的诱导和效应阶段的不同时期发挥关键作用。本研究旨在获得人CD4 0分子胞外区和人IgG 1Fc段的融合蛋白 ,以探索阻断CD4 0 /CD4 0L共刺激途径在免疫治疗中的潜在应用。首先 ,从人B淋巴瘤细胞系Daudi中提取细胞总RNA ,利用RT PCR技术扩增人CD4 0分子胞外区基因 ,将扩增产物连接入pGEMTEasy载体中构建克隆载体 pGE4 0 ,利用全自动DNA测序仪进行序列测定。将测序正确的胞外区片段插入至含人IgG 1类抗体重链基因组序列的 pIG 1载体中构建瞬时表达载体 ,命名为 pIG/ 4 0Ig。用DEAE Dextran/Chloroquine法转染COS 7细胞 ,夹心ELISA法和Western印迹分析鉴定培养上清中CD4 0 Ig融合蛋白的表达及免疫学活性。在重组载体 pIG/ 4 0Ig转染COS 7细胞后 ,ELISA法检测到细胞培养上清中有融合蛋白的表达 ;Western印迹鉴定发现在相对分子量 5 0kD左右有一特异条带 ,该分子可同时被抗人CD4 0单抗G2 8 5和抗人Igγ链的单抗识别。本研究成功地扩增人CD4 0基因并构建了人CD4 0 Ig融合基因表达载体 ,在C0S 7细胞中获得功能性表达 ,为进一步研究CD4 0 /CD4 展开更多
关键词 CD40-Ig 融合蛋白 cos-7细胞 基因表达
暂未订购
t-PA突变体真核表达载体的构建及其在COS-7细胞的瞬时表达 被引量:3
19
作者 李敏 王玉炯 +1 位作者 扈荣良 禹化胜 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第4期71-75,共5页
根据t PAcDNA的全长序列 ,设计了扩增t PA信号肽cDNA的引物 ,并进而获得了信号肽cDNA片段。将其回收纯化后 ,作为上游引物 ,结合原有的t PA下游引物 ,分别以t PA的缺失性原核表达载体pErA ,以及后者的点突变体pErA(K)为模板 ,进行PCR反... 根据t PAcDNA的全长序列 ,设计了扩增t PA信号肽cDNA的引物 ,并进而获得了信号肽cDNA片段。将其回收纯化后 ,作为上游引物 ,结合原有的t PA下游引物 ,分别以t PA的缺失性原核表达载体pErA ,以及后者的点突变体pErA(K)为模板 ,进行PCR反应 ,从而使二者各自增加了信号肽部分。进一步将其分别克隆至pcDNA3 0 ,构建了相应的真核表达载体pCSRA与pCSRK。酶切及测序结果均证明了构建的正确性。经LIPOFECTAMINE[TM] 2 0 0 0Reagent将其分别转染至COS 7细胞 ,并同时设以pCDNA3 0为阴性对照。取转染后不同时间培养上清 ,以FAPA法进行检测。结果表明 ,上述构建载体的表达产物具有良好的溶圈活性。本实验为t 展开更多
关键词 溶栓制剂 T-PA 突变体 真核表达载体 cos-7细胞 瞬时表达 生物学活性
在线阅读 下载PDF
硅壳纳米颗粒对COS-7细胞的生物效应 被引量:2
20
作者 刘芳 何晓晓 +2 位作者 王柯敏 葛佳 谭蔚泓 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1857-1862,共6页
从硅壳纳米颗粒对细胞存活率、细胞周期及细胞生长曲线的影响等方面系统地考察了包裹RuBpy染料的硅壳荧光纳米颗粒(FSiNPs)对美洲绿猴肾细胞(COS-7)的生物效应.结果表明,FSiNPs对COS-7细胞的影响是浓度依赖性的,低浓度(<0.2μg/μL)... 从硅壳纳米颗粒对细胞存活率、细胞周期及细胞生长曲线的影响等方面系统地考察了包裹RuBpy染料的硅壳荧光纳米颗粒(FSiNPs)对美洲绿猴肾细胞(COS-7)的生物效应.结果表明,FSiNPs对COS-7细胞的影响是浓度依赖性的,低浓度(<0.2μg/μL)的FSiNPs对细胞的存活率、细胞周期及整个生长过程均无负面影响,但随着与COS-7细胞作用的FSiNPs浓度的增大,FSiNPs对COS-7细胞的毒性也逐渐增大,尤其是对细胞周期及细胞生长曲线的影响更为敏感.同时,利用FSiNPs的荧光信号同步指示作用,考察了COS-7细胞对FSiNPs的吞噬作用,发现FSiNPs通过细胞膜的吞噬作用随机地进入到细胞内,一部分FSiNPs被细胞当成异物外排到细胞培养基中,另一部分则进入到下一代细胞中.随着细胞传代次数的增多和新生胞质的产生,FSiNPs在细胞内的含量逐渐减少,最后消失.在这一过程中,细胞的形态和生长状况依然良好.上述研究结果有望为FSiNPs在细胞生物学的研究和应用提供一定的安全标准,并为开展基于新型纳米颗粒的纳米颗粒器件的研究与应用打下了基础. 展开更多
关键词 硅壳纳米颗粒(SiNPs) cos-7细胞 生物效应
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 9 下一页 到第
使用帮助 返回顶部