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含第一内含子猪生长激素cDNA基因在COS7细胞中的表达 被引量：5
1
作者 李秀锦 仲飞 齐顺章 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期49-53,共5页
以CMV真核生物启动子构建了含第一内含子猪生长激素(pGH)cDNA基因(pGHcDNA in)的表达载体,经DEAE 葡聚糖介导在COS7细胞进行了瞬时表达,通过PP95生物学测定法测定,证明含第一内含子pGHcDNA基因能够在真核细胞中进行分泌性表达,表达出的... 以CMV真核生物启动子构建了含第一内含子猪生长激素(pGH)cDNA基因(pGHcDNA in)的表达载体,经DEAE 葡聚糖介导在COS7细胞进行了瞬时表达,通过PP95生物学测定法测定,证明含第一内含子pGHcDNA基因能够在真核细胞中进行分泌性表达,表达出的pGH具有生物学活性。这说明通过该基因转录出的前体mR NA能够在COS7细胞中进行正确剪接,从而翻译出具有生物活性的pGH。加入第一内含子在一定程度上可提高pGHcDNA基因的表达效率。 展开更多
关键词 第一内含子 生长激素 猪 CDNA基因 cos7细胞 表达
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SMAD3介导TGF-β1抑制MMP9在COS7细胞中的表达 被引量：4
2
作者 吴忆贫 冯怡 +1 位作者 杨晓 黄翠芬 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期684-687,共4页
用明胶酶谱的方法检查了野生型和Smad3ex8 ex8纯合突变小鼠血清中基质金属蛋白酶(MMP9)的活性 .发现突变小鼠血清中MMP9的含量较正常小鼠的明显增高 ,提示SMAD3有抑制MMP9表达的功能 .通过细胞转染实验证实 ,TGF β1和野生型的SMAD3可... 用明胶酶谱的方法检查了野生型和Smad3ex8 ex8纯合突变小鼠血清中基质金属蛋白酶(MMP9)的活性 .发现突变小鼠血清中MMP9的含量较正常小鼠的明显增高 ,提示SMAD3有抑制MMP9表达的功能 .通过细胞转染实验证实 ,TGF β1和野生型的SMAD3可以抑制COS7细胞分泌MMP9,而C端缺失的突变型Smad3基因过表达可以解除这种抑制作用 ,说明SMAD3介导TGF β1信号抑制MMP9在COS7细胞中的表达 . 展开更多
关键词 SMAD3 TGF-Β1 抑制 MMP9 cos7细胞 表达
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多房棘球绦虫elp基因在真核细胞COS7中的表达 被引量：8
3
作者 王昌源 陈雅棠 +2 位作者 黄爱龙 唐霓 余登高 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2003年第1期38-42,共5页
目的　构建中国四川株多房棘球绦虫 elp基因真核表达载体 ,为核酸疫苗研究奠定基础。　方法　应用 RT-PCR方法从多房棘球绦虫续绦期幼虫 RNA获得 elp基因的编码序列 ,定向克隆于 p GEM- 11zf( +)。经酶切鉴定及测序后将目的基因亚克隆... 目的　构建中国四川株多房棘球绦虫 elp基因真核表达载体 ,为核酸疫苗研究奠定基础。　方法　应用 RT-PCR方法从多房棘球绦虫续绦期幼虫 RNA获得 elp基因的编码序列 ,定向克隆于 p GEM- 11zf( +)。经酶切鉴定及测序后将目的基因亚克隆于真核表达载体 pc DNA3.1( +)。重组真核表达载体 pc D- EL P鉴定后 ,纯化无内毒素的重组质粒 ,电穿孔方法转染哺乳动物细胞 COS7。RT- PCR、dot- EL ISA和免疫组化方法鉴定目的基因在 COS7细胞中的表达。　结果　琼脂糖凝胶电泳、酶切及序列分析证实多房棘球绦虫 elp基因编码区已成功地克隆于真核表达载体 pc DNA3.1( +)。RT- PCR、dot- EL ISA和免疫组化证实 ,重组质粒在哺乳动物细胞 COS7中能够表达多房棘球绦虫 EL P抗原。　结论　成功地构建了中国四川株多房棘球绦虫 elp基因的真核表达载体 ,该载体在 COS7哺乳动物细胞中能表达 EL P抗原 ,为多房棘球绦虫 elp基因疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫 elp基因 真核表达 cos7 RT-PCR DOT-ELISA 免疫组化
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大鼠热休克蛋白72基因真核表达载体构建及在COS7细胞中的表达 被引量：3
4
作者 晏春根 黄丹文 +1 位作者 任光圆 朱冬芳 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第18期3357-3360,共4页
背景:体外克隆、表达热休克蛋白,尤其正常时少量或不表达,而应激时大量表达的热休克蛋白72对研究其缺血再灌注损伤中的作用尤为重要。目的:构建热休克蛋白72基因真核表达载体并于COS7细胞内表达,为HSP72蛋白免疫调节功能的研究奠定基础... 背景:体外克隆、表达热休克蛋白,尤其正常时少量或不表达,而应激时大量表达的热休克蛋白72对研究其缺血再灌注损伤中的作用尤为重要。目的:构建热休克蛋白72基因真核表达载体并于COS7细胞内表达,为HSP72蛋白免疫调节功能的研究奠定基础。方法:采用RT-PCR技术从BABL/C大鼠肝细胞中扩增出热休克蛋白72cDNA,经限制性核酸内切酶消化后,插入真核表达载体pcDNA3.1(+)的相应酶切位点,并将重组质粒转染COS7细胞,进行基因表达鉴定。结果与结论:重组质粒插入基因序列检测证实为热休克蛋白72cDNA,并能在COS7细胞稳定表达。成功构建热休克蛋白72真核表达载体,并于COS7细胞中成功转录与表达。 展开更多
关键词 热休克蛋白72 基因表达 cos7细胞 转录 鉴定
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人可溶性IL-6R及其突变体基因在COS7细胞中的表达及活性分析 被引量：2
5
作者 宋伦 任蕴芳 +1 位作者 王建安 沈倍奋 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期203-206,共4页
目的：研究人可溶性ＩＬ６Ｒ（ｈｓＩＬ６Ｒ）的空间构效关系，为小分子拮抗剂设计提供理论依据。方法：首先利用ＰＣＲ技术扩增天然人ｓＩＬ６Ｒ基因片段，然后将第２８０位Ｈｉｓ残基突变成Ｉｌｅ。天然基因和突变体基因分别转... 目的：研究人可溶性ＩＬ６Ｒ（ｈｓＩＬ６Ｒ）的空间构效关系，为小分子拮抗剂设计提供理论依据。方法：首先利用ＰＣＲ技术扩增天然人ｓＩＬ６Ｒ基因片段，然后将第２８０位Ｈｉｓ残基突变成Ｉｌｅ。天然基因和突变体基因分别转染ＣＯＳ７细胞，经ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测证实转染细胞上清中的表达产物，并利用ＢｉｎｄｉｎｇａｓａｙＥＬＩＳＡ和生物学功能分析法检测表达产物与ＩＬ６的结合能力以及它们所介导的ＩＬ６信号转导功能的差异。结果：突变体Ｈ２８０Ｉ比天然ｓＩＬ６Ｒ具有更高的ＩＬ６结合能力，但拮抗ＩＬ６在两种效应细胞系上的信号传递功能。结论：第２８０位Ｈｉｓ残基对ｓＩＬ６Ｒ发挥正常生物学功能具有重要影响，是符合拮抗剂设计要求的一个很好的候选位点。 展开更多
关键词 hsIL-6R 突变体 生物学活性 cos7细胞 表达
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pEGFP-植酸酶基因质粒重组构建及其在COS7细胞中表达分析 被引量：2
6
作者 刘芳 刘臻 +4 位作者 成嘉 符贵红 王欢 黄颖 张建社 《激光生物学报》 CAS CSCD 2006年第6期618-623,共6页
采用PCR技术扩增细菌酸性植酸aPPA2基因ORF序列,其DNA分子为1 299 bp,编码432氨基酸,蛋白质分子量约为48 kD a。此植酸酶基因被克隆到pEGFP-N3表达载体的BamH1和Pst1克隆区域,重组的pEG-FP-aPPA2重组质粒经转化到哺乳类培养细胞COS7中... 采用PCR技术扩增细菌酸性植酸aPPA2基因ORF序列,其DNA分子为1 299 bp,编码432氨基酸,蛋白质分子量约为48 kD a。此植酸酶基因被克隆到pEGFP-N3表达载体的BamH1和Pst1克隆区域,重组的pEG-FP-aPPA2重组质粒经转化到哺乳类培养细胞COS7中。重组的pEGFP-N3-aPPA2在COS7细胞中正常表达并检测出高的植酸酶活性。本研究提出的pEGFP-N3-aPPA2重组质粒构建和在哺乳类COS7细胞表达体系为植酸酶生产提供了新的技术线路。 展开更多
关键词 植酸酶 基因重组 酶活性 pEGFP—aPPA2 cos7细胞
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血清对rhIL—6在COS7细胞中表达水平的影响 被引量：1
7
作者 王嘉玺 宋新荣 +2 位作者 彭喜云 马贤凯 金伯泉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1993年第4期202-202,共1页
COS细胞是非洲绿猴肾CV—1细胞被复制起点缺陷的SV40突变病毒转化而成的细胞系,作为哺乳动物细胞,它能有效地识别高等真核生物蛋白质合成、加工和分泌信号,因而能表达出与天然构型一致的产物。
关键词 白细胞介素6 cos7 细胞 血清
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稳定表达绿色荧光蛋白的COS7细胞系的筛选和鉴定 被引量：3
8
作者 龙鼎新 李小玲 温元武 《中南医学科学杂志》 CAS 2012年第1期11-13,50,共4页
目的构建稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的COS-7细胞系,为相关实验对照提供方便。方法常规方法培养COS-7细胞,将含pEGFP-N3基因的质粒转染COS-7细胞,G418抗性筛选,并用荧光显微镜进行跟踪检测,挑选耐药单细胞克... 目的构建稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的COS-7细胞系,为相关实验对照提供方便。方法常规方法培养COS-7细胞,将含pEGFP-N3基因的质粒转染COS-7细胞,G418抗性筛选,并用荧光显微镜进行跟踪检测,挑选耐药单细胞克隆并扩大培养至稳定细胞株。结果 G418筛选的最适浓度为500μg/mL。筛选到的COS7-GFP克隆荧光显微镜下发出明亮的绿色荧光,细胞的生物学性状保持稳定,通过Western blot能检测到GFP蛋白。结论成功筛选并建立了稳定表达的COS7-GFP细胞系。 展开更多
关键词 cos7 GFP 转染 G418筛选 细胞克隆
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突变型和野生型MBL基因在COS7细胞中的瞬时表达 被引量：2
9
作者 刘凤玲 左大明 陈政良 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期310-313,共4页
采用PCR技术,从质粒pMBLm52、pMBLm54和pMBLm57中分别获取含CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA点突变的人甘露聚糖结合凝集素(MBL)突变体全长编码区cDNA序列,将其分别插入质粒pcDNA4/HisMax C中,构建成相应的3种真核表达载体。将各突变型MB... 采用PCR技术,从质粒pMBLm52、pMBLm54和pMBLm57中分别获取含CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA点突变的人甘露聚糖结合凝集素(MBL)突变体全长编码区cDNA序列,将其分别插入质粒pcDNA4/HisMax C中,构建成相应的3种真核表达载体。将各突变型MBL基因的真核表达载体和野生型MBL基因真核表达载体以脂质体法分别转染COS7细胞。72 h后,以双抗体夹心ELISA技术检测各细胞培养上清中目的蛋白的含量分别为0.980μg/ml、0.971μg/ml、0.900μg/ml和1.047μg/ml;用One-way ANOVA分析这些目的蛋白的含量无显著性差异(P>0.05)。因此,MBL结构基因的点突变并不影响MBL蛋白的合成与分泌。 展开更多
关键词 甘露聚糖结合凝集素 点突变 免疫缺损 瞬时表达 cos7细胞
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鸡Igλ轻链基因克隆、序列分析及其在COS7细胞膜上的定位表达 被引量：1
10
作者 张红 王健 +4 位作者 王丽 席俊 易明林 张改平 章金刚 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第8期132-136,共5页
为了研究鸡B细胞膜免疫球蛋白(mIg)的功能,深入了解鸡免疫系统抗体基因的特点,从鸡法氏囊B细胞cDNA中扩增出Igλ轻链基因,对其核苷酸序列和氨基酸序列进行了分析和比较。该基因cDNA全长873bp,编码含226个氨基酸的Igλ轻链,N-端21个氨基... 为了研究鸡B细胞膜免疫球蛋白(mIg)的功能,深入了解鸡免疫系统抗体基因的特点,从鸡法氏囊B细胞cDNA中扩增出Igλ轻链基因,对其核苷酸序列和氨基酸序列进行了分析和比较。该基因cDNA全长873bp,编码含226个氨基酸的Igλ轻链,N-端21个氨基酸构成轻链信号肽,随后是2个Ig样结构域。运用融合PCR的方法将该基因与牛IgG Fc受体γRⅡ跨膜区序列嵌合形成重组跨膜分子,构建真核表达载体pcDNA-λR2T,转染COS7细胞,荧光抗体染色及流式细胞术检测到重组鸡Igλ轻链在细胞膜上的表达。所扩增的鸡Igλ轻链基因以及构建表达于细胞膜上的重组鸡Igλ轻链跨膜分子,为研究鸡免疫系统中的抗体轻链基因,探索Igλ轻链和B细胞膜免疫球蛋白的功能奠定技术基础。 展开更多
关键词 鸡Igλ轻链 重组跨膜分子 cos7细胞 膜定位表达 牛IgGFc受体γRⅡ
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HBV基因T1862突变真核表达载体的构建及在Cos7细胞中的表达 被引量：1
11
作者 林裕龙 侯金林 +3 位作者 王战会 阎丽 周福元 骆抗先 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第4期255-257,共3页
目的研究ＨＢＶＴ１８６２变异的生物学意义。方法 采用分子生物学方法，构建 ＨＢＶ前Ｃ／Ｃ基因ＥＢ病毒真核表达 载体，利用体外定点突变技术诱导前Ｃ／Ｃ基因Ｔ１８６２变异，经ＰＣＲ－ＲＦＬＰ初筛并经测序终鉴定出阳性克隆后，... 目的研究ＨＢＶＴ１８６２变异的生物学意义。方法 采用分子生物学方法，构建 ＨＢＶ前Ｃ／Ｃ基因ＥＢ病毒真核表达 载体，利用体外定点突变技术诱导前Ｃ／Ｃ基因Ｔ１８６２变异，经ＰＣＲ－ＲＦＬＰ初筛并经测序终鉴定出阳性克隆后，以脂质体 介导方法将突变前后的重组质粒转染Ｃos７细胞，以 ＥＬＩＳＡ检测 ＨＢeＡg的表达量。结果 未突变的重组质粒可稳定表 达ＨＢｅＡｇ，突变后的重组质粒未能检测到ＨＢｅＡｇ表达。结论ＨＢＶ前Ｃ／Ｃ基因１８６２点突变的真核表达载体的构建， 为体外研究该点突变引起ＨＢＶ的一系列生物学改变奠定基础。 展开更多
关键词 真核表达载体 定点突变 基因转染 乙型肝炎病毒 HBV cos7细胞
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TIF3转基因CHO和COS7细胞株的构建与鉴定 被引量：1
12
作者 雷毅雄 Pius Joseph +1 位作者 刘玉清 Tong-manOng 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期55-57,共3页
目的　构建 TIF3转基因 CHO和 COS7细胞株并对其构建的细胞株进行鉴定。方法　采用磷酸钙介导转染技术和 G4 18细胞筛选法 ,以 pc DNA3.1/ V5 - His- TOPO为表达载体 ,构建 TIF3转基因 CHO和 COS7细胞株 ;并应用 Western Blot技术对转... 目的　构建 TIF3转基因 CHO和 COS7细胞株并对其构建的细胞株进行鉴定。方法　采用磷酸钙介导转染技术和 G4 18细胞筛选法 ,以 pc DNA3.1/ V5 - His- TOPO为表达载体 ,构建 TIF3转基因 CHO和 COS7细胞株 ;并应用 Western Blot技术对转基因表达产物进行分析与鉴定。实验设计分无转染组、载体转染组和目的基因转染组。结果　在 7株转染的 CHO细胞株中 ,有 3株具有高效稳定表达的 TIF3编码蛋白质 ;在 4株转染的 COS7细胞株中有 2株同样具有高效稳定的 TIF3编码蛋白质表达。结论　本研究成功地构建了 3株 TIF3转基因 CHO细胞株和 2株 TIF3转基因 COS7细胞株 。 展开更多
关键词 TIF3cDNA 稳定转染 CHO细胞 cos7细胞 WESTERN BLOT
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hVEGF165基因克隆及其在COS-7细胞中的表达 被引量：1
13
作者 葛建军 周正春 +4 位作者 陈兵 张胜权 罗欣 徐从贞 汪思应 《中国胸心血管外科临床杂志》 CAS 2005年第3期185-188,共4页
目的克隆人血管内皮生长因子(hVEGF)基因VEGF165片段,构建pcDNA3.1/hVEGF165,观察其在COS-7细胞中的表达,为基因治疗缺血性心脏病的研究奠定基础。方法从合法引产的胎儿心肌组织中提取总核糖核酸(RNA),应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)... 目的克隆人血管内皮生长因子(hVEGF)基因VEGF165片段,构建pcDNA3.1/hVEGF165,观察其在COS-7细胞中的表达,为基因治疗缺血性心脏病的研究奠定基础。方法从合法引产的胎儿心肌组织中提取总核糖核酸(RNA),应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得hVEGF165基因,将其重组入T载体,聚合酶链反应(PCR)法鉴定并测序,双酶切后克隆入真核表达载体pcDNA3.1/myc-his-B中,构建pcDNA3.1/hVEGF165重组体。用脂质体介导将其转染COS-7细胞,蛋白印迹(Westernblotting)法检测rhVEGF165的表达蛋白。结果用RT-PCR方法从胎儿心肌组织中获得了正确的hVEGF165基因序列,并成功构建pcDNA3.1/hVEGF165,且实现转染COS-7细胞的瞬时表达。结论构建的pcDNA3.1/hVEGF165转染真核细胞COS-7能够表达rhVEGF蛋白。 展开更多
关键词 cos-7细胞 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 真核表达载体PCDNA3.1 基因克隆 聚合酶链反应(PCR) 人血管内皮生长因子 VEGF165基因 rhVEGF165 RT-PCR方法 cos7细胞 缺血性心脏病 VEGF蛋白 心肌组织 脂质体介导 基因治疗 核糖核酸
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人骨保护素在COS_7细胞内的瞬时表达 被引量：1
14
作者 李瑞香 孟凡星 +2 位作者 董雅洁 张泓波 高维娟 《承德医学院学报》 2008年第2期117-118,共2页
目的:在COS_7细胞内初步表达人骨保护素(OPG)并观察其表达水平。方法:将OPG的重组表达载体pcDNA3.1/OPG-GFP^-转染COS_7细胞进行瞬时表达,经RT-PCR和ELISA鉴定表达载体的功能及表达水平。结果:以人OPG全长编码序列构建的OPG表达载体pcDN... 目的:在COS_7细胞内初步表达人骨保护素(OPG)并观察其表达水平。方法:将OPG的重组表达载体pcDNA3.1/OPG-GFP^-转染COS_7细胞进行瞬时表达,经RT-PCR和ELISA鉴定表达载体的功能及表达水平。结果:以人OPG全长编码序列构建的OPG表达载体pcDNA3.1/OPG-GFP^-,通过瞬时表达实验证实了该载体具有表达OPG的功能。结论:通过基因克隆技术可以成功构建有表达OPG功能的哺乳类表达载体,为后续的高效、稳定表达OPG奠定了基础。 展开更多
关键词 骨保护素 载体 cos7细胞
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人溶酶体酸性β-葡萄糖脑苷脂酶基因的克隆及其在COS7细胞中的表达
15
作者 张艳丽 许丹 +2 位作者 王子玉 孟立 王锋 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期263-267,共5页
从人胎盘组织提取总RNA,采用RT-PCR扩增人溶酶体酸性β-葡萄糖脑苷脂酶(Lysosomal acid β-glucosidase,GlcCerase)基因编码区的全部序列,并克隆到pMD-19T载体上,构建克隆载体pMD-GlcCerase。经测序验证后,将GlcCerase亚克隆至表达载体p... 从人胎盘组织提取总RNA,采用RT-PCR扩增人溶酶体酸性β-葡萄糖脑苷脂酶(Lysosomal acid β-glucosidase,GlcCerase)基因编码区的全部序列,并克隆到pMD-19T载体上,构建克隆载体pMD-GlcCerase。经测序验证后,将GlcCerase亚克隆至表达载体pEGFP-C1上,构建了人GlcCerase绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-GlcCerase。采用脂质体法将其瞬时转染至COS7细胞系后,在细胞中检测到了GlcCerase基因,并在细胞裂解产物中检测到了GlcCerase生物活性的表达。GlcCerase基因的克隆及其表达,为进一步了解GlcCerase基因的功能以及利用转基因动物乳腺生物反应器高效生产GlcCerase奠定了基础。 展开更多
关键词 人溶酶体酸性β-葡萄糖脑苷脂酶基因 克隆 真核表达载体 cos7细胞 转染
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牛蛙生长激素基因在COS_7细胞中的转染表达
16
作者 尉研 喻麟 +4 位作者 崔佳 杨土凤 刘燕飞 刘世贵 龙章富 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期341-344,共4页
应用RT-PCR技术克隆牛蛙生长激素(BfGH)的cDNA,T-A克隆法构建反向插入的pMD18-T/BfGH重组质粒,回收BamHⅠ酶切的BfGH cDNA片段,并与去磷酸化处理的真核表达载体VR1020/BamHⅠ,酶切鉴定方法筛选BfGH正向插入的重组真核表达质粒VBfGH.脂... 应用RT-PCR技术克隆牛蛙生长激素(BfGH)的cDNA,T-A克隆法构建反向插入的pMD18-T/BfGH重组质粒,回收BamHⅠ酶切的BfGH cDNA片段,并与去磷酸化处理的真核表达载体VR1020/BamHⅠ,酶切鉴定方法筛选BfGH正向插入的重组真核表达质粒VBfGH.脂质体法介导质粒VBfGH转染哺乳动物细胞COS7,对转染后的COS7细胞进行RT-PCR、ELISA和免疫荧光检测,分别在转录和翻译水平证实BfGH基因在COS7细胞中得到了正确的转染表达. 展开更多
关键词 牛蛙生长激素基因 真核表达质粒 转染 cos7细胞
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鸡Igλ轻链绿色荧光蛋白融合分子在COS7细胞膜的表达
17
作者 张红 宋海涛 +5 位作者 张改平 邢广旭 赵东 杨继飞 柴书军 郝青梅 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2006年第11期102-104,109,共4页
将牛IgG Fc受体γRⅡ的跨膜区序列嵌合入鸡Igλ轻链基因中,并将鸡Igλ轻链信号肽与Pegfp-C1载体的绿色荧光蛋白N端融合产生带有信号肽的中间载体Pegfp-C1-SP。鸡Igλ轻链基因嵌合分子定向克隆入载体的多克隆位点,构建了带有信号肽的鸡I... 将牛IgG Fc受体γRⅡ的跨膜区序列嵌合入鸡Igλ轻链基因中,并将鸡Igλ轻链信号肽与Pegfp-C1载体的绿色荧光蛋白N端融合产生带有信号肽的中间载体Pegfp-C1-SP。鸡Igλ轻链基因嵌合分子定向克隆入载体的多克隆位点,构建了带有信号肽的鸡Igλ轻链/GFP融合蛋白真核表达载体。转染COS7细胞后,荧光显微镜观察,重组鸡Igλ轻链/GFP蛋白在COS7细胞膜及膜周围有明显表达,而载体pEGFP-C1转染的COS7细胞GFP则分布在细胞及细胞核。结果表明,牛IgG Fc受体γRⅡ的跨膜区能介导融合蛋白在细胞膜上的表达。 展开更多
关键词 鸡Igγ轻链 牛IgG Fc受体γR Ⅱ跨膜区 cos7细胞 GFP融合蛋白
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鸡免疫球蛋白λ轻链绿色荧光蛋白重组分子在COS7细胞的分泌表达
18
作者 张红 刘钧珂 +4 位作者 张改平 宋海涛 王青 段艳华 赵光辉 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期204-206,241,共4页
将鸡Igλ轻链信号肽与pEGFP-C1载体的绿色荧光蛋白N端融合产生带有信号肽的中间载体pEGFP-C1-SP,通过对鸡Igλ轻链基因的定向克隆,构建了带有纯化标签的鸡Igλ轻链绿色荧光蛋白真核表达载体.转染COS7细胞后,荧光显微镜观察及Western blo... 将鸡Igλ轻链信号肽与pEGFP-C1载体的绿色荧光蛋白N端融合产生带有信号肽的中间载体pEGFP-C1-SP,通过对鸡Igλ轻链基因的定向克隆,构建了带有纯化标签的鸡Igλ轻链绿色荧光蛋白真核表达载体.转染COS7细胞后,荧光显微镜观察及Western blotting检测均证明融合蛋白在COS7细胞的分泌表达. 展开更多
关键词 鸡Igλ轻链 绿色荧光蛋白 cos7细胞 分泌表达
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TIF3转基因CHO和COS7细胞株的构建与鉴定
19
作者 雷毅雄 刘玉清 +2 位作者 徐培渝 Pius Joseph Tong-man Ong 《环境与职业医学》 CAS 北大核心 2002年第3期183-183,共1页
[目的 ]TIF3(MouseTranslationInitiationFacfor 3)是从镉转化BALB/c 3T3细胞中克隆出来的新基因 ,其在基因文库 (Gen Bank)的新添编号为AF2 710 72。为了对该基因的生物学功能进行研究 ,构建了TIF3转基因CHO和COS7细胞株并作了鉴定。[... [目的 ]TIF3(MouseTranslationInitiationFacfor 3)是从镉转化BALB/c 3T3细胞中克隆出来的新基因 ,其在基因文库 (Gen Bank)的新添编号为AF2 710 72。为了对该基因的生物学功能进行研究 ,构建了TIF3转基因CHO和COS7细胞株并作了鉴定。[方法 ]采用磷酸钙介导转染技术和G418细胞筛选法 ,以pcD NA3 1/V5 His TOPO为表达载体 ,构建TIF3转基因CHO和COS7细胞株 ;应用WesternBlot技术对转基因表达产物进行分析与鉴定。实验设计分无转染组 (空白对照 )、载体转染组 (载体对照 )和目的基因转染组 (载体 +TIF3cDNA )。 [结果 ]结果显示 ,无论在CHO细胞还是COS7细胞 ,经转染和G418筛选后 ,无转染组的细胞 10 0 %死亡 ,而载体转染组和TIF3cDNA转染组的细胞形成较多的细胞集落。提示克隆化基因的细胞转染及G418筛选效果良好。经WesternBlot分析与鉴定 ,在 7株转染和经G418反复筛选的CHO细胞株中 ,有 3株具有高效稳定表达约 36kDa的TIF3编码蛋白质 ;在 4株转染和经G418反复筛选的COS7细胞株中有 2株也具有高效稳定的TIF3编码蛋白质表达 ,而无转染组和载体对照组的CHO和COS7细胞均缺乏此蛋白质表达。 [结论 ]本研究成功地构建了 3株TIF3转基因CHO细胞株和 2株TIF3转基因COS7细胞株。这两类TIF3转基因哺乳动物细胞稳定? 展开更多
关键词 TIF3cDNA 转染 CHO细胞 cos7细胞 WESTERN BLOT 编码蛋白质表述
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SV40载体在COS7细胞中的复制及外源基因的表达
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作者 刘定燮 周晓巍 黄培堂 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期79-83,共5页
为评价SV4 0载体 COS7稳定表达系统的可能应用价值 ,将含人组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)编码区的SV4 0载体pctPA转染COS7细胞 ,并以G4 18选择培养 2 8d ,得到稳定的抗性细胞库 .Southern印迹和溶圈法分别分析该细胞库在随后的细胞传代... 为评价SV4 0载体 COS7稳定表达系统的可能应用价值 ,将含人组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)编码区的SV4 0载体pctPA转染COS7细胞 ,并以G4 18选择培养 2 8d ,得到稳定的抗性细胞库 .Southern印迹和溶圈法分别分析该细胞库在随后的细胞传代中细胞内附加体拷贝数及t PA表达水平的变化 .在经选择培养 2 8d的COS7细胞库中 ,质粒pctPA以染色体外附加体的形式存在 (30 0拷贝 细胞 ) ,t PA的表达水平为 1 1μg d(10 6细胞 ) .在随后 3个月的动态观察中 ,随着细胞传代 ,该COS7细胞库tPA的表达水平虽逐渐递减 ,但在第 1个月内可保持在 1μg d(10 6细胞 )以上 .基于SV4 0载体 COS7稳定表达系统无需筛选克隆 ,在稳定的抗性细胞库形成后的 1个月内可能保持目的基因的高水平表达 ,因而较适合于需同时制备多种重组蛋白的实验 . 展开更多
关键词 SV40载体 cos7细胞 复制 外源基因 表达
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