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COMMD7调控肝癌干细胞间充质-上皮转化过程抑制其侵袭转移能力 被引量:1
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作者 谭烨 尤楠 +5 位作者 郑璐 黄小兵 王梁 吴柯 邓昌林 李靖 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第17期1691-1695,共5页
目的探讨抑制COMMD7基因后对肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)侵袭转移能力的影响及其机制。方法使用shRNA慢病毒转染抑制COMMD7在LCSCs中的表达,粘附、Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力,鬼笔环肽染色检测细胞形态学特征,We... 目的探讨抑制COMMD7基因后对肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)侵袭转移能力的影响及其机制。方法使用shRNA慢病毒转染抑制COMMD7在LCSCs中的表达,粘附、Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力,鬼笔环肽染色检测细胞形态学特征,Western blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达。结果抑制COMMD7基因表达可以显著降低LCSCs的侵袭迁移能力,对照组与转染组粘附相对细胞量为(1.00±0.12),(2.35±0.20),转染组粘附细胞数量显著增加(P<0.05)。对照组与转染组每视野迁移相对细胞量为(1.00±0.04),(0.24±0.03),每视野侵袭相对细胞量为(1.00±0.05),(0.24±0.04),转染组迁移侵袭细胞数明显降低(P<0.05),同时导致细胞表现出低侵袭迁移能力的形态学变化,上述改变伴随了间充质-上皮转化(mesenchymal-epithelial transition,MET)相关分子E-cadherin表达上升(P<0.05),N-cadherin、Vimentin表达下调(P<0.05)。结论 COMMD7可能通过调控MET过程抑制LCSCs的侵袭转移能力。 展开更多
关键词 commd7 肝癌干细胞 侵袭转移
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COMMD7基因活化PI3K/AKT信号通路促进HepG2细胞增殖转移的分子机制研究 被引量:1
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作者 顾勋鑫 郑璐 +3 位作者 尤楠 谭晔 邓昌林 李靖 《局解手术学杂志》 2016年第5期313-318,共6页
目的探索肝癌相关基因COMMD7促进HepG2细胞增殖转移的分子机制。方法设计针对COMMD7基因的特异性siR NA(small interference RNA)转染人类肝癌细胞株HepG2,作为干扰组(Si-HepG 2);并设置PTEN抑制剂处理组(Si+BpVHepG2);空白对照组(HepG... 目的探索肝癌相关基因COMMD7促进HepG2细胞增殖转移的分子机制。方法设计针对COMMD7基因的特异性siR NA(small interference RNA)转染人类肝癌细胞株HepG2,作为干扰组(Si-HepG 2);并设置PTEN抑制剂处理组(Si+BpVHepG2);空白对照组(HepG2);空载体对照组(N-HepG2)。qRT-PCR检测转染后各组COMMD7、PTEN基因mR NA的表达变化;Western blot检测各组COMMD7、PTEN、p-AKT和AKT蛋白的表达变化;MSP法检测PTEN基因甲基化水平;CCK8法检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞在转染前后转移及侵袭能力的改变。结果 siRNA-COMMD7转染HepG2细胞后,qR T-PCR检测结果显示,与空白对照组及空载体对照组相比较干扰组COMMD7基因的表达量降低89.9%,PTEN基因的表达量升高2.841倍,差异均有统计学意义(P<0.05);Western blot检测结果显示,siRNA干扰组COMMD7表达明显降低,PTEN表达升高;下游p-AKT表达受到显著抑制;PTEN抑制剂处理组PTEN表达受到显著抑制,下游p-AKT的表达明显增强;MSP法检测结果显示,干扰组与空白对照组及空载体对照组比较,PTEN发生明显的去甲基化,表明抑制COMMD7表达可诱导PTEN去甲基化。CKK8实验结果显示,干扰组细胞较空白对照组、空载体对照组和PTEN抑制剂处理组增殖速度明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);Transwell实验实验结果显示,干扰组穿膜细胞数(17.4±2.7),较空载体对照组(36.2±3.2)、空白对照组(41.6±4.5)及PTEN抑制剂处理组(47.6±1.8)明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 siR NA干扰下调COMMD7基因的表达,可诱导HepG2细胞内抑癌基因PTEN的去甲基化,增加PTEN蛋白的表达而抑制PI3K/AKT信号通路,以降低HepG2细胞的增殖、迁移及侵袭能力。 展开更多
关键词 肝细胞癌 commd7 PI3K/AKT信号通路 PTEN 去甲基化
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COMMD7基因通过细胞外调节蛋白激酶/丝裂原活化蛋白激酶信号通路促进肝癌细胞HepG2增殖的研究 被引量:3
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作者 商阳阳 郑璐 +3 位作者 尤楠 黄小兵 顾勋鑫 李靖 《中华消化外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期316-320,共5页
目的 采用RNA干扰沉默COMMD7基因,观察人肝癌细胞HepG2的变化,探讨其相关作用机制.方法 设计COMMD7基因的干扰RNA片段(shRNA),构建COMMD7-shRNA质粒.将肝癌细胞HepG2分为3组:空白组不做转染,control-shRNA组转染空载体,COMMD7-shRNA... 目的 采用RNA干扰沉默COMMD7基因,观察人肝癌细胞HepG2的变化,探讨其相关作用机制.方法 设计COMMD7基因的干扰RNA片段(shRNA),构建COMMD7-shRNA质粒.将肝癌细胞HepG2分为3组:空白组不做转染,control-shRNA组转染空载体,COMMD7-shRNA组转染阳性载体.转染结束后在荧光显微镜下观察细胞形态.采用Western blot检测COMMD7蛋白的表达.采用CCK-8检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡.采用Western blot检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中的下游分子ERK1/2和MEK1/2蛋白的表达及其磷酸化水平.符合正态分布的计量资料以x^-±s表示,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 荧光显微镜下转染成功的细胞为椭圆形或梭形,呈绿色荧光.Western blot检测结果显示:空白组、control-shRNA组和COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2中COMMD7蛋白的相对表达量分别为0.90±0.18、1.03±0.05和0.23 ±0.03,3组比较,差异有统计学意义(F=152.08,P<0.05);COMMD7-shRNA组COMMD7蛋白相对表达量低于空白组和control-shRNA组,两组比较,差异有统计学意义(t=20.74,21.16,P<0.05).CCK-8检测结果显示:空白组、control-shRNA组和COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2细胞活力分别为1.193±0.024、1.225±0.034和1.147 ±0.021,3组比较,差异有统计学意义(F=6.90,P<0.05);COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2细胞活力低于空白组和control-shRNA组,两组比较,差异有统计学意义(t=3.53,3.69,P<0.05).流式细胞仪检测结果显示:空白组、control-shRNA组和COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2凋亡率分别为6.1%±0.3%、7.8%±0.5%和20.9%±1.4%,3组比较,差异有统计学意义(F=270.80,P<0.05);COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2凋亡率高于空白组和control-shRNA组,两组比较,差异有统计学意义(=21.77,19.36,P<0.05).Western blot检测结果显示:空白组、control-shRNA组和COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2中磷酸化-ERK1/2蛋白相对表达量分别为0.932±0.046、0.945±0.017和0.553±0.052,磷酸化-MEK1/2蛋白相对表达量分别为0.452±0.031、0.468±0.027和0.263±0.022,3组比较,差异均有统计学意义(F =93.61,49.16,P<0.05);COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2中磷酸化-ERK1/2蛋白相对表达量低于空白组和control-shRNA组,两组比较,差异有统计学意义(t=11.94,12.17,P<0.05);磷酸化-MEK1/2蛋白相对表达量也低于空白组和control-shRNA组,两组比较,差异有统计学意义(=9.33,8.65,P<0.05).结论 COMMD7基因可通过活化ERK/MAPK信号通路促进肝癌细胞HepG2增殖,其作用机制可能是促进了ERK/MAPK信号通路中ERK1/2、MEK1/2的磷酸化. 展开更多
关键词 肝肿瘤 HEPG2细胞 commd7基因 细胞外调节蛋白激酶 丝裂原活化蛋白激酶
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