目的探讨焦磷酸测序法检测丙肝分型在临床应用中的准确性和敏感性,评价其方法的优缺点。方法收集100例丙肝患者的血浆标本,分装相同的2份,通过焦磷酸测序法和Sanger测序法分别进行丙型肝炎病毒基因分型的检测,对两种测序方法的结果进行...目的探讨焦磷酸测序法检测丙肝分型在临床应用中的准确性和敏感性,评价其方法的优缺点。方法收集100例丙肝患者的血浆标本,分装相同的2份,通过焦磷酸测序法和Sanger测序法分别进行丙型肝炎病毒基因分型的检测,对两种测序方法的结果进行比较。结果焦磷酸测序法和Sanger测序法检测HCVR N A基因分型时,100例标本中,92例结果一致,8例结果不一致,一致率为92%。其中,HCV-R N A病毒载量>1×104IU/ml有80例,其测序结果完全一致为100%,HCV-R N A病毒载量<1×104 IU/ml有20例,其中焦磷酸测序共检测20例,Sanger测序法共检测14例,12例结果相同。结论焦磷酸测序法检测丙型肝炎病毒基因分型,不仅结果准确可靠,而且与Sanger测序法比较,其敏感性更高。此外,焦磷酸测序还可以进行定量分析。展开更多
文摘【目的】早发性肌无力综合征(early onset muscle weakness syndrome,MW)是新近发现的一种荷斯坦牛遗传缺陷,患病犊牛表现为出生后趴卧不起、后肢肌肉萎缩等,其遗传机制与L型钙通道蛋白α1S亚基编码基因CACNA1S的单碱基突变相关。本研究旨在建立该遗传缺陷的分子检测方法,并探究其在国内荷斯坦牛群体中的扩散情况。【方法】基于MW致病位点特异性DNA序列,设计扩增阻滞突变系统-聚合酶链式反应(ARMS-PCR)检测引物,对317份荷斯坦牛冻精和毛囊样本进行MW遗传缺陷基因筛查,通过Sanger测序对ARMS-PCR检测结果进行验证,并利用系谱数据追溯MW突变源头。【结果】ARMS-PCR检出MW携带者21头,携带率为6.62%(21/317),未发现缺陷基因纯合子,提示该突变为隐性纯合致死。Sanger测序与ARMS-PCR所得基因型完全一致,证明该技术具有高度准确性。系谱追溯表明,MW携带者的遗传来源可追溯至1984年出生的荷斯坦公牛Southwind Bell of Bar-Lee。【结论】MW遗传缺陷已在中国荷斯坦牛群体中扩散且携带率较高,建议牧场应尽早开展MW遗传缺陷基因检测和风险评估,采取科学的选种选配措施以减少遗传缺陷导致的经济损失。
文摘目的探讨焦磷酸测序法检测丙肝分型在临床应用中的准确性和敏感性,评价其方法的优缺点。方法收集100例丙肝患者的血浆标本,分装相同的2份,通过焦磷酸测序法和Sanger测序法分别进行丙型肝炎病毒基因分型的检测,对两种测序方法的结果进行比较。结果焦磷酸测序法和Sanger测序法检测HCVR N A基因分型时,100例标本中,92例结果一致,8例结果不一致,一致率为92%。其中,HCV-R N A病毒载量>1×104IU/ml有80例,其测序结果完全一致为100%,HCV-R N A病毒载量<1×104 IU/ml有20例,其中焦磷酸测序共检测20例,Sanger测序法共检测14例,12例结果相同。结论焦磷酸测序法检测丙型肝炎病毒基因分型,不仅结果准确可靠,而且与Sanger测序法比较,其敏感性更高。此外,焦磷酸测序还可以进行定量分析。
