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含Coiled-coil结构的PML结构域与CNPY2蛋白相互作用的胞内外验证 被引量：2
1
作者 吴秀娟 刘北忠 +3 位作者 鈡梁 初晨 朱丹 吴燕 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第5期553-556,共4页
目的通过胞内外试验验证含Coiled-coil结构的PML结构域(PML-C)与CNPY2蛋白的相互作用。方法将质粒pACT2-CNPY2和pGBKT7-PML-C共转化入酵母菌AH109,通过酵母双杂交技术检测CNPY2蛋白和PML-C在AH109细胞内的相互作用;构建重组质粒pCMV-HA-... 目的通过胞内外试验验证含Coiled-coil结构的PML结构域(PML-C)与CNPY2蛋白的相互作用。方法将质粒pACT2-CNPY2和pGBKT7-PML-C共转化入酵母菌AH109,通过酵母双杂交技术检测CNPY2蛋白和PML-C在AH109细胞内的相互作用;构建重组质粒pCMV-HA-PML-C和pCMV-Myc-CNPY2,共转染HEK293细胞,采用Western blot法检测细胞中CNPY2蛋白的表达;免疫共沉淀技术从胞外验证两种蛋白的相互作用。结果 pACT2-CNPY2和pGBKT7-PML-C质粒共转化入AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆;重组质粒pCMV-HA-PML-C和pCMV-Myc-CNPY2共转染的HEK293细胞的全细胞裂解液可与鼠抗c-MYC单抗特异性结合;经免疫共沉淀可检测到与PML-C相互作用的蛋白复合体。结论通过酵母双杂交试验和免疫共沉淀技术证实,PML-C与CNPY2蛋白存在相互作用。 展开更多
关键词 PML-C cnpy2蛋白 酵母双杂交系统 免疫共沉淀
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CNPY2调控内质网应激PERK/eIF2α通路在有氧运动干预非酒精性脂肪性肝病中的作用 被引量：1
2
作者 李军汉 王佳倩 +1 位作者 李亚龙 蒋昌君 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期783-792,共10页
目的:探讨有氧运动通过冠层成纤维细胞生长因子信号调节器2(CNPY2)调控内质网应激在PKR样内质网状激酶(PERK)/真核细胞翻译起始因子2α(eIF2α)通路改善非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的可能机制。方法:30只8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分... 目的:探讨有氧运动通过冠层成纤维细胞生长因子信号调节器2(CNPY2)调控内质网应激在PKR样内质网状激酶(PERK)/真核细胞翻译起始因子2α(eIF2α)通路改善非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的可能机制。方法:30只8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为普通饮食组(普饮组)、高脂饮食组(高脂组)和高脂饮食运动组(高脂运动组),每组10只。普饮组给予普通饲料喂养,高脂组和高脂运动组给予高脂饲料喂养,连续喂养18周,直至实验结束,取小鼠肝脏。从第10周开始,高脂运动组小鼠进行有氧跑台训练干预(12 m/min,60 min/次,5 d/周),普饮组和高脂组小鼠静置于没有开机的跑步机上,静置时间和频率与高脂运动组相同。HE染色观察各组小鼠肝组织病理学形态,Western Blotting法检测肝组织CNPY2、PERK、p-eIF2α蛋白表达。另培养人肝癌细胞系HepG2细胞,使用棕榈酸孵育肝细胞,在诱导NAFLD体外模型后,采用腺苷磷酸活化蛋白激酶(AMPK)激动剂模拟细胞水平运动效应,通过AMPK激动剂、CNPY2重组蛋白和(或)PERK抑制剂干预,Western Blotting检测各组肝细胞CNPY2、PERK、peIF2α、血红素加氧酶-1(HO-1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、NADPH氧化酶-1(NOX-1)蛋白表达、qRT-PCR检测各组肝细胞CNPY2 mRNA和PERK mRNA表达,ELISA检测各组肝细胞上清液白介素-1α(IL-1α)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)浓度。结果:(1)与普饮组比较,高脂组小鼠肝脏有明显脂肪性变,肝组织CNPY2、PERK、p-eIF2α蛋白表达显著升高(P<0.05);与高脂组比较,高脂运动组小鼠肝脏脂肪性变显著改善,肝组织CNP Y2、PERK、p-eIF2α蛋白表达显著降低(P<0.05)。(2)棕榈酸诱导肝细胞CNPY2、PERK、p-eIF2α、HO-1、Nrf2、NOX-1蛋白表达、CNPY2 mRNA、PERK mRNA表达和肝细胞上清液IL-1 α、IL-6、TNF-α浓度显著升高;CNPY2重组蛋白干预显著上调肝细胞以上指标水平,加重棕榈酸作用效应;AMPK激动剂和(或)PERK抑制剂干预显著下调肝细胞以上指标水平,抑制棕榈酸和CNPY2重组蛋白作用效应。结论:有氧运动可有效改善NAFLD,其机制可能与其通过下调CNPY2表达,抑制PERK/eIF2α通路活性,从而降低PERK/eIF2α通路相关分子表达,减少肝细胞氧化应激和炎症有关。 展开更多
关键词 cnpy2重组蛋白 AMPK激动剂 PERK抑制剂 有氧运动 非酒精性脂肪肝
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