[目的]探索CLIC4/ARF6信号通路对SiHa细胞增殖、侵袭能力的影响。[方法]用蛋白免疫印迹实验检测HUCEC细胞、SiHa细胞、C33A细胞以及HeLa细胞中CLIC4与ARF6的蛋白表达水平;将人宫颈癌SiHa细胞分为3组:si NC组、si CLIC4组与si ARF6组。通...[目的]探索CLIC4/ARF6信号通路对SiHa细胞增殖、侵袭能力的影响。[方法]用蛋白免疫印迹实验检测HUCEC细胞、SiHa细胞、C33A细胞以及HeLa细胞中CLIC4与ARF6的蛋白表达水平;将人宫颈癌SiHa细胞分为3组:si NC组、si CLIC4组与si ARF6组。通过CCK-8实验检测SiHa细胞的增殖活性;Transwell实验检测SiHa细胞的侵袭数量;通过TUNEL实验检测SiHa细胞的凋亡率。[结果]与HUCEC细胞相比,SiHa细胞、C33A细胞及HeLa细胞的CLIC4与ARF6的蛋白表达增加(0.13±0.02 vs 0.92±0.11 vs 0.89±0.08 vs 0.87±0.05;0.21±0.05 vs 0.72±0.06 vs 0.81±0.03 vs 0.77±0.03)。与si NC组比较,si CLIC4组及si ARF6组的SiHa细胞的增殖活性降低(P<0.05);si CLIC4组、si ARF6组的SiHa细胞侵袭数量减少(85.23±9.22 vs 36.62±7.75 vs 39.83±11.58);si CLIC4组、si ARF6组的SiHa细胞的凋亡率增加(5.73%±0.76%vs 26.58%±0.29%vs 29.03%±0.58%)。[结论]CLIC4与ARF6在宫颈癌细胞中表达上调,下调CLIC4或ARF6的表达后,宫颈癌SiHa细胞的增殖活性与侵袭数量降低。此外,下调CLIC4或ARF6的表达后,宫颈癌SiHa细胞凋亡率增加。展开更多
目的通过饥饿诱导人神经胶质瘤细胞发生自噬,利用siRNA技术部分沉默细胞内氯通道蛋白4(CLIC4),探讨CLIC4在细胞自噬中的作用。方法根据CLIC4的基因序列构建CLIC4siRNA质粒,建立稳定转染CLIC4siRNA的U251细胞株,分析CLIC4蛋白表达;MTT法...目的通过饥饿诱导人神经胶质瘤细胞发生自噬,利用siRNA技术部分沉默细胞内氯通道蛋白4(CLIC4),探讨CLIC4在细胞自噬中的作用。方法根据CLIC4的基因序列构建CLIC4siRNA质粒,建立稳定转染CLIC4siRNA的U251细胞株,分析CLIC4蛋白表达;MTT法检测转染pSH1Si-CLIC4对细胞生存率的影响;利用Western Blot检测转染CLIC4siRNA在U251细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达;检测饥饿条件下U251细胞LC3蛋白、Bax、Bcl-2的表达;检测抑制CLIC4表达对于饥饿条件下细胞白caspase-3和胞浆cytc以及LC3的表达。结果 Western Blot显示,与空质粒对照组相比,转染CLIC4siRNA的U251细胞CLIC4表达显著下降;与对照组相比,转染空质粒细胞组以及瞬时转染pSH1Si-CLIC4载体细胞组U251细胞生存率均无明显差异;单纯CLIC4siRNA对于U251细胞Bax、Bcl-2表达无影响;与对照组相比,饥饿8h能够诱导U251细胞自噬,LC3水平显著增加,而细胞Bax、Bcl-2表达无明显变化;转染CLIC4siRNA后饥饿8h,caspase-3、cytc以及LC3表达增加。结论单纯CLIC4siRNA对于U251细胞自噬和凋亡均无显著影响,饥饿条件下U251细胞发生自噬的同时并没有明显细胞凋亡过程,抑制CLIC4表达促进了饥饿条件下的U251细胞自噬,同时能够启动线粒体相关途径的细胞凋亡。展开更多
文摘[目的]探索CLIC4/ARF6信号通路对SiHa细胞增殖、侵袭能力的影响。[方法]用蛋白免疫印迹实验检测HUCEC细胞、SiHa细胞、C33A细胞以及HeLa细胞中CLIC4与ARF6的蛋白表达水平;将人宫颈癌SiHa细胞分为3组:si NC组、si CLIC4组与si ARF6组。通过CCK-8实验检测SiHa细胞的增殖活性;Transwell实验检测SiHa细胞的侵袭数量;通过TUNEL实验检测SiHa细胞的凋亡率。[结果]与HUCEC细胞相比,SiHa细胞、C33A细胞及HeLa细胞的CLIC4与ARF6的蛋白表达增加(0.13±0.02 vs 0.92±0.11 vs 0.89±0.08 vs 0.87±0.05;0.21±0.05 vs 0.72±0.06 vs 0.81±0.03 vs 0.77±0.03)。与si NC组比较,si CLIC4组及si ARF6组的SiHa细胞的增殖活性降低(P<0.05);si CLIC4组、si ARF6组的SiHa细胞侵袭数量减少(85.23±9.22 vs 36.62±7.75 vs 39.83±11.58);si CLIC4组、si ARF6组的SiHa细胞的凋亡率增加(5.73%±0.76%vs 26.58%±0.29%vs 29.03%±0.58%)。[结论]CLIC4与ARF6在宫颈癌细胞中表达上调,下调CLIC4或ARF6的表达后,宫颈癌SiHa细胞的增殖活性与侵袭数量降低。此外,下调CLIC4或ARF6的表达后,宫颈癌SiHa细胞凋亡率增加。
文摘目的通过饥饿诱导人神经胶质瘤细胞发生自噬,利用siRNA技术部分沉默细胞内氯通道蛋白4(CLIC4),探讨CLIC4在细胞自噬中的作用。方法根据CLIC4的基因序列构建CLIC4siRNA质粒,建立稳定转染CLIC4siRNA的U251细胞株,分析CLIC4蛋白表达;MTT法检测转染pSH1Si-CLIC4对细胞生存率的影响;利用Western Blot检测转染CLIC4siRNA在U251细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达;检测饥饿条件下U251细胞LC3蛋白、Bax、Bcl-2的表达;检测抑制CLIC4表达对于饥饿条件下细胞白caspase-3和胞浆cytc以及LC3的表达。结果 Western Blot显示,与空质粒对照组相比,转染CLIC4siRNA的U251细胞CLIC4表达显著下降;与对照组相比,转染空质粒细胞组以及瞬时转染pSH1Si-CLIC4载体细胞组U251细胞生存率均无明显差异;单纯CLIC4siRNA对于U251细胞Bax、Bcl-2表达无影响;与对照组相比,饥饿8h能够诱导U251细胞自噬,LC3水平显著增加,而细胞Bax、Bcl-2表达无明显变化;转染CLIC4siRNA后饥饿8h,caspase-3、cytc以及LC3表达增加。结论单纯CLIC4siRNA对于U251细胞自噬和凋亡均无显著影响,饥饿条件下U251细胞发生自噬的同时并没有明显细胞凋亡过程,抑制CLIC4表达促进了饥饿条件下的U251细胞自噬,同时能够启动线粒体相关途径的细胞凋亡。
