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CLEC4A基因对THP-1细胞向M1型巨噬细胞极化的影响
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作者 王德隆 高振盛 孙业盈 《滨州医学院学报》 2025年第5期449-454,460,共7页
目的探讨C型凝集素结构域家族4成员A(C-type lectin domain family 4 member A,CLEC4A)基因对THP-1细胞向M1型巨噬细胞极化的影响。方法在THP-1细胞系中采用CRISPR/Cas9基因敲除技术和瞬时转染技术分别敲除和过表达CLEC4A,采用蛋白免疫... 目的探讨C型凝集素结构域家族4成员A(C-type lectin domain family 4 member A,CLEC4A)基因对THP-1细胞向M1型巨噬细胞极化的影响。方法在THP-1细胞系中采用CRISPR/Cas9基因敲除技术和瞬时转染技术分别敲除和过表达CLEC4A,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)以及流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测CLEC4A的敲除情况,采用逆转录定量聚合酶链式反应(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和流式细胞术检测CLEC4A的过表达情况;对THP-1细胞进行M1型诱导,分别采用RT-qPCR法、Western blot、流式细胞术和免疫荧光法检测诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、人类白细胞抗原-DR亚型(human leukocyte antigen-DR isotype,HLA-DR)和CD80的表达变化。结果本研究采用CRISPR/Cas9基因编辑技术实现了CLEC4A基因的高效敲除(敲除效率>95%),通过瞬时转染技术使CLEC4A表达水平上调至200%。基因功能实验显示,CLEC4A的敲除显著降低了脂多糖和干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)诱导的M1型巨噬细胞标志物iNOS、HLA-DR和CD80的表达。相反,CLEC4A过表达组中上述标志物的表达量显著增加。结论CLEC4A基因可以促进THP-1细胞向M1型巨噬细胞极化。 展开更多
关键词 THP-1 C型凝集素结构域家族4成员A M1型巨噬细胞极化
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CLEC4L在人胎盘组织及滋养层细胞的分布与定位 被引量:5
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作者 高禄化 聂青和 王媛媛 《肝脏》 2012年第9期636-639,共4页
目的细胞间黏附分子非整合素蛋白3(human C-type lectin domain family 4,memberL,CLEC4L)为主要分布在树突状细胞(DC)表面的一个外源性凝集素超家族分子,通过依赖Ca2+的碳水化合物识别区域(CRD)形成寡聚糖,增强与抗原的结合能力。CLEC4... 目的细胞间黏附分子非整合素蛋白3(human C-type lectin domain family 4,memberL,CLEC4L)为主要分布在树突状细胞(DC)表面的一个外源性凝集素超家族分子,通过依赖Ca2+的碳水化合物识别区域(CRD)形成寡聚糖,增强与抗原的结合能力。CLEC4L作为丙型肝炎病毒(HCV)受体,对HCV感染和传播起重要作用。本研究旨在明确人胎盘组织及胎盘滋养层细胞中CLEC4L的分布与定位。方法免疫组织化学方法检测CLEC4L在人滋养层细胞内定位以证明CLEC4L的存在,同时免疫组织化学单染及荧光双染法检测不同孕期正常胎盘组织CLEC4L定位与表达。结果人胎盘滋养层细胞中检测到CLEC4L表达,主要分布于滋养层细胞表面;同样在早孕期的绒毛及足月胎盘中均检出CLEC4L的表达,但在足月胎盘中的表达明显低于早孕期的绒毛组织。结论实验显示不同孕期胎盘组织均可见CLEC4L的表达,其在孕早期表达较高。滋养层细胞上该受体可能与HCV胎盘宫内感染有关。 展开更多
关键词 CLEC4L 胎盘组织 滋养层细胞 免疫组织化学 分布与定位 宫内感染 丙型肝炎病毒
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CLEC4M介导HCV感染人PBDC实验研究 被引量:3
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作者 王媛媛 聂青和 高禄化 《肝脏》 2013年第4期224-227,共4页
目的通过对表达CLEC4M的CD14细胞与HCV结合来证实CLEC4M是介导HCV感染的特异性受体。方法应用磁珠分选出健康人的CD14+细胞,检测表达CLEC4M后将细胞共分4组,阳性对照组:CLEC4M+HCV RNA+血清;干扰组:CLEC4M+鼠抗人CLEC4M抗体+HCV RNA+血... 目的通过对表达CLEC4M的CD14细胞与HCV结合来证实CLEC4M是介导HCV感染的特异性受体。方法应用磁珠分选出健康人的CD14+细胞,检测表达CLEC4M后将细胞共分4组,阳性对照组:CLEC4M+HCV RNA+血清;干扰组:CLEC4M+鼠抗人CLEC4M抗体+HCV RNA+血清,每组均与收集到的3份HCV阳性患者血清作用,阴性对照组:CLEC4M+正常人血清;空白对照组:CLEC4M+5%DMEM。干扰组在加入3组HCV RNA+血清之前,先分别加入CLEC4M抗体进行干预,其余3组滴入同体积PBS。培养24h后利用RT-PCR检测细胞表面结合的HCV RNA含量,培养48h后用免疫荧光法检测细胞与病毒结合情况。结果流式结果表明分离出的CD14细胞中CLEC4M阳性率高达80%以上。RT-PCR结果显示干扰组HCV RNA含量明显低于阳性对照组。免疫荧光可直观看到阳性对照组有大量绿色荧光,而干扰组只有很少的部分,空白对照组和阴性对照组无荧光。结论表达CLEC4M的CD14细胞可以与HCV结合,而病毒的结合可以被CLEC4M抗体竞争性抑制。 展开更多
关键词 CLEC4M CD14细胞 树突状细胞 外周血树突状细胞 丙型肝炎病毒 免疫荧光
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CLEC4D、CARD9在炎症性肠病中的表达及其作用 被引量:5
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作者 杜晓博 赵美华 +6 位作者 马娜 高闯 杨贝贝 王丹丹 耿丽 王许平 冯百岁 《胃肠病学》 2019年第3期144-147,共4页
背景:C型凝集素结构域家族4成员D(CLEC4D)在系统性真菌感染中可诱导Th17细胞分化,调控IL-17A表达,目前国内外尚未见其在肠道免疫中是否发挥作用的报道。目的:探讨CLEC4D、CARD9在炎症性肠病(IBD)患者结肠组织中的表达情况及其临床意义... 背景:C型凝集素结构域家族4成员D(CLEC4D)在系统性真菌感染中可诱导Th17细胞分化,调控IL-17A表达,目前国内外尚未见其在肠道免疫中是否发挥作用的报道。目的:探讨CLEC4D、CARD9在炎症性肠病(IBD)患者结肠组织中的表达情况及其临床意义。方法:收集2016年10月—2018年6月郑州大学第二附属医院收治的IBD患者48例,其中溃疡性结肠炎(UC)患者36例,克罗恩病(CD)患者12例,以30例结肠癌旁正常组织作为对照。采用免疫组化法检测结肠组织中CLEC4D和CARD9表达,并分析其与临床特征的相关性。结果:UC组、CD组结肠组织中CLEC4D和CARD9表达均显著高于对照组(P <0. 05),而UC组与CD组之间无明显差异(P>0. 05)。UC组CLEC4D、CARD9表达与Mayo评分、Baron分级呈正相关(P <0. 05),CD组CLEC4D、CARD9表达与CDAI评分呈正相关(P <0. 05),与SES-CD评分无明显相关性(P> 0. 05);IBD患者CLEC4D、CARD9表达与CRP呈正相关(P <0. 05),而与ESR无明显相关性(P> 0. 05)。结论:CLEC4D、CARD9在IBD患者中的表达升高,且与患者病情密切相关,CLEC4D可能通过CARD9相关途径参与IBD的肠道免疫。 展开更多
关键词 炎症性肠病 外源凝集素类 C型 CLEC4D CARD9 肠道免疫
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大黄鱼C型凝集素受体Clec4e的分子鉴定及凝集特性
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作者 张鑫洛 王永阳 +3 位作者 吴子良 黄小红 陈新华 张伟妮 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期29-43,共15页
为了揭示硬骨鱼C型凝集素受体(C-type lectin receptor,CTLR)的生物学功能,实验以从大黄鱼转录组数据库中筛选出的一个CTLR基因—C型凝集素结构域家族4成员E基因(Clec4e)为研究对象,研究其分子特征、表达分布和凝集特性。结果显示,LcCle... 为了揭示硬骨鱼C型凝集素受体(C-type lectin receptor,CTLR)的生物学功能,实验以从大黄鱼转录组数据库中筛选出的一个CTLR基因—C型凝集素结构域家族4成员E基因(Clec4e)为研究对象,研究其分子特征、表达分布和凝集特性。结果显示,LcClec4e cDNA全长1546 bp,开放阅读框(ORF)771 bp,编码254个氨基酸。LcClec4e的N端有一个跨膜区,无信号肽,C端含有一个糖识别结构域(CRD),其中含有糖结合位点EPN和WFD以及6个可形成二硫键的保守半胱氨酸。系统发育分析表明,LcClec4e与多种鲈形目鱼类Clec4e具有较近的亲缘关系。荧光定量PCR结果显示,LcClec4e在所检测的10种组织中呈组成型分布,且在肝脏中表达量最高;LcClec4e在来源于大黄鱼头肾组织的原代巨噬细胞、淋巴细胞和粒细胞中均有表达,且在巨噬细胞中表达量最高;经灭活溶藻弧菌刺激后,LcClec4e在3种免疫细胞中的表达均极显著上调。原核表达的重组LcClec4e胞外段(recombinant LcClec4e-extracellular domain,rLcClec4e-ex)具有Ca^(2+)依赖性的凝集活性,可凝集小鼠、家兔的红细胞,以及嗜水气单胞菌、变形假单胞菌、溶藻弧菌和坎氏弧菌等4种水产常见的革兰氏阴性菌。D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、D-麦芽糖、α-乳糖和脂多糖均可抑制rLcClec4e-ex对大黄鱼重要病原菌变形假单胞菌的凝集作用,说明LcClec4e可能与变形假单胞菌表面的糖类物质结合。上述结果提示,LcClec4e可能作为一种模式识别受体,通过结合病原菌表面的糖类病原体相关分子模式来识别病原,参与大黄鱼抗细菌感染的免疫防御。 展开更多
关键词 大黄鱼 C型凝集素受体(CTLR) Clec4e 红细胞凝集 细菌凝集
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CLEC4G与CD34及肝细胞癌侵袭转移之间的关系 被引量:4
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作者 唐满玲 蒋最明 +4 位作者 顾敏 杨耀永 谢智钦 黄美园 陈祥 《分子诊断与治疗杂志》 2022年第2期232-236,共5页
目的探讨C型凝集素结构域家族4成员G(CLEC4G)与肿瘤血管生成标记物CD34之间的表达相关性及其与肝细胞癌(HCC)侵袭转移间的关系。方法收集2019年1月至2019年12月在株洲市中心医院经外科手术切除的40例HCC标本及相应术前血清标本分为转移... 目的探讨C型凝集素结构域家族4成员G(CLEC4G)与肿瘤血管生成标记物CD34之间的表达相关性及其与肝细胞癌(HCC)侵袭转移间的关系。方法收集2019年1月至2019年12月在株洲市中心医院经外科手术切除的40例HCC标本及相应术前血清标本分为转移组和非转移组,同时收集30例健康体检者血清标本,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测CLEC4G、CD34的mRNA水平,免疫组织化学法(IHC)检测CLEC4G、CD34蛋白水平。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清CLEC4G的含量;采用ROC曲线分析血清CLEC4G对HCC转移的预测价值;定义高于均值水平为高表达,低于均值水平为低表达,采用χ;检验分析CLEC4G水平与患者临床资料之间的相关性。结果qRT-PCR、IHC检测结果均显示CLEC4G与CD34之间存在明显负相关关系(R=-0.89,P<0.001;R=-0.817,P<0.05);健康对照组血清CLEC4G含量为(479.4±30.7)pg/mL,HCC非转移组为(303.0±22.1)pg/mL,转移组为260.3±26.6 pg/mL,转移组与健康对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),转移组与非转移组比较,差异有统计学意义(P<0.05);血清CLEC4G对预测HCC转移具有较高的价值,AUC值为0.833(特异性:0.938;灵敏性:0.667);血清CLEC4G含量与HCC患者性别、年龄、HBV感染等无相关性,与患者肿瘤大小(P=0.023)、肿瘤分期(P=0.046)、侵袭转移(P=0.008)有关。结论CLEC4G与CD34的表达在HCC侵袭转移中呈负相关关系,CLEC4G低表达与HCC侵袭转移密切相关,对预测HCC转移有较高的临床应用价值。 展开更多
关键词 肝细胞 肝窦内皮细胞 CLEC4G CD34
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Immunology of a unique biological structure:the Echinococcus laminated layer 被引量:1
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作者 Álvaro Díaz Anabella ABarrios +4 位作者 Leticia Grezzi Camila Mouhape Stephen J.Jenkins Judith E.Allen Cecilia Casaravilla 《Protein & Cell》 SCIE CSCD 2023年第2期87-104,共18页
The larval stages of the cestode parasites belonging to the genus Echinococcus grow within internal organs of humans and a range of animal species.The resulting diseases,collectively termed echinococcoses,include majo... The larval stages of the cestode parasites belonging to the genus Echinococcus grow within internal organs of humans and a range of animal species.The resulting diseases,collectively termed echinococcoses,include major neglected tropical diseases of humans and livestock.Echinococcus larvae are outwardly protected by the laminated layer(LL),an acellular structure that is unique to this genus.The LL is based on a fibrillar meshwork made up of mucins,which are decorated by galactose-rich O-glycans.In addition,in the species cluster termed E.granulosus sensu lato,the LL features nano-deposits of the calcium salt of myo-inositol hexakisphosphate(Insp_(6)).The main purpose of our article is to update the immunobiology of the LL.Major recent advances in this area are(i)the demonstration of LL“debris”at the infection site and draining lymph nodes,(ii)the characterization of the decoy activity of calcium Inp6 with respect to complement,(iii)the evidence that the LL mucin carbohydrates interact specifically with a lectin receptor expressed in Kupffer cells(Clec4F),and(iv)the characterization of what appear to be receptor-independent effects of LL particles on dendritic cells and macrophages.Much information is missing on the immunology of this intriguing structure:we discuss gaps in knowledge and propose possible avenues for research. 展开更多
关键词 MUCIN COMPLEMENT ECHINOCOCCUS MACROPHAGE dendritic cell Clec4F
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