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人CLDN10a启动子的克隆及活性分析
1
作者 周雯 杨智 +5 位作者 时凤敏 符碧薇 吴岩 唐敏 郑琳 王青松 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期1567-1578,共12页
CLDN基因家族编码构成细胞间紧密连接的主要跨膜蛋白Claudins,在维持细胞极性、信号转导和恶性肿瘤复发转移中发挥重要作用。CLDN10基因属于CLDN家族,有包括CLDN10a在内的多个转录本。本研究利用多种生物信息学方法分析CLDN10a的5′侧... CLDN基因家族编码构成细胞间紧密连接的主要跨膜蛋白Claudins,在维持细胞极性、信号转导和恶性肿瘤复发转移中发挥重要作用。CLDN10基因属于CLDN家族,有包括CLDN10a在内的多个转录本。本研究利用多种生物信息学方法分析CLDN10a的5′侧翼序列的特征和转录因子结合位点,采用基因合成、PCR扩增和分子克隆构建5′缺失的不同长度的CLDN10a启动子荧光素酶报告基因载体,瞬时转染HEK-293T细胞,通过双荧光素酶报告基因系统检测不同长度片段的启动子活性。生物信息学分析结果显示,CLDN10a的上游转录调控区序列(-2000~+460 bp)含有TATA box、GC box和CAAT box,存在1个CpG岛,有4个启动子位置,有1个RNA聚合酶Ⅱ核心启动子;MatInspector和Jaspar分析发现,有75种可能的转录因子结合位点(评分≥0.99)。PCR和测序结果显示,成功构建了6个不同长度的CLDN10a启动子的双荧光素酶报告基因质粒。荧光素酶活性检测表明,-1890~-1100 bp、-1000~-890 bp、-890~-150 bp和-150~+460 bp是人CLDN10a启动子的主要活性区域,-150~+460 bp包含CLDN10a的核心启动子区域。本实验为进一步研究CLDN10基因的表达及调控机制提供了依据。 展开更多
关键词 cldn10 启动子 双荧光素酶报告基因系统 生物信息学
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基于数据挖掘分析CLDN10基因在肾透明细胞癌的表达及临床意义 被引量：6
2
作者 徐争光 李灿楦 +2 位作者 李晓 林晏廷 陈洁 《海南医学》 CAS 2021年第20期2589-2596,共8页
目的探索CLDN10在肾透明细胞癌(ccRCC)的表达及临床意义。方法通过Oncomine数据库、Ualcan数据库、GEPIA数据库、HPA数据库、String-DB数据库、Metascape数据库分析CLDN10在正常肾组织与ccRCC中的表达差异、CLDN10表达水平与ccRCC患者... 目的探索CLDN10在肾透明细胞癌(ccRCC)的表达及临床意义。方法通过Oncomine数据库、Ualcan数据库、GEPIA数据库、HPA数据库、String-DB数据库、Metascape数据库分析CLDN10在正常肾组织与ccRCC中的表达差异、CLDN10表达水平与ccRCC患者临床特征的相关性及其对患者预后的影响、CLDN10在正常肾组织与ccRCC的甲基化水平差异、CLDN10与上下游蛋白的相互作用关系以及关联基因的富集通路。结果CLDN10在ccRCC中的mRNA和蛋白质表达水平较正常肾组织低(P<0.05),利用Ualcan数据库分析发现CLDN10在正常肾组织与肿瘤分期(stage1、stage2、stage3和stage4)、ccRCC亚型(ccA和ccB)、淋巴结转移(N0和N1)的表达差异均为P<1E-12(P<0.05),且随着肿瘤分期的增高,CLDN10的表达呈下降趋势,其表达水平与肿瘤进展相关,CLDN10低表达患者生存率较高表达组明显降低(P<0.05)。CLDN10在正常肾组织与stage1、stage2、stage3、stage4中的甲基化表达差异分别为P=1.62E-12、P=3.11E-08、P=1.62E-12、P=1.62E-12,以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。同时,与CLDN10蛋白相关的蛋白有CLDN14、CLDN2、CLDN16、CLDN8、CLDN3、CLDN1、CLDN19等,主要参与了增殖、分化、转移、细胞屏障、细胞紧密连接等生物过程。结论通过挖掘分析肿瘤生物信息数据库发现CLDN10在ccRCC中低表达,且其表达水平与肿瘤进展和患者预后相关,为后续研究ccRCC的诊断标志物和治疗靶点提供理论依据。 展开更多
关键词 cldn10 肾透明细胞癌 生物信息学 表达差异 预后
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肿瘤微环境中M2巨噬细胞调控CLDN10通路促进膀胱癌细胞的上皮-间质转化 被引量：5
3
作者 袁刚军 韩娜 +10 位作者 谭星亮 邹园涛 鲜鹏 宋彦平 袁方 戴君勇 唐显力 李俊 王呈 李元 刘南 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第23期2525-2531,共7页
目的探讨膀胱癌微环境中M2巨噬细胞通过CLDN10信号通路对膀胱癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的调控作用及其机制。方法收集2020年3-9月重庆大学附属肿瘤医院收治的10例膀胱癌患者的新鲜癌组织及癌旁组织标... 目的探讨膀胱癌微环境中M2巨噬细胞通过CLDN10信号通路对膀胱癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的调控作用及其机制。方法收集2020年3-9月重庆大学附属肿瘤医院收治的10例膀胱癌患者的新鲜癌组织及癌旁组织标本,免疫组化观测巨噬细胞表面标志物在膀胱癌组织中的表达;对癌和癌旁组织进行转录组测序,筛选出受巨噬细胞调控的潜在基因。采用CCK-8、细胞克隆、Western blot等方法观测CLDN10对膀胱癌细胞生长和增殖的作用。结果巨噬细胞特征性分子CD68和M2型巨噬细胞CD163分子在膀胱癌组织中表达增加。对基因测序结果分析后发现CLDN10基因在膀胱癌组织中表达最显著,对膀胱癌组织免疫组化结果行免疫评分后发现CLDN10的表达与巨噬细胞在膀胱癌组织中的浸润呈正相关。Western blot检测结果表明膀胱癌组织中CLDN10蛋白的表达水平较癌旁组织高(P<0.05)。敲低CLDN10的表达后,与对照组相比,生长曲线结果表明膀胱癌细胞生长能力下降,细胞克隆形成实验结果表明膀胱癌细胞形成细胞克隆数目降低(198.0±10.3 vs 145.0±8.4,P<0.05),Western blot检测结果表明EMT相关指标蛋白snail、twist、vimentin的表达水平降低,而E-cadherin的表达水平升高(P<0.05)。结论巨噬细胞上调膀胱癌细胞CLDN10的表达促进膀胱癌细胞EMT的发生。 展开更多
关键词 巨噬细胞 肿瘤微环境 cldn10 膀胱癌
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巨噬细胞分泌TNF-α调控CLDN10通路促进膀胱癌细胞上皮-间质转化 被引量：2
4
作者 韩娜 陈函 张海燕 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第16期1741-1747,共7页
目的探讨巨噬细胞调控膀胱癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)发生的作用机制。方法收集2000-2015年在重庆大学附属肿瘤医院泌尿肿瘤科行根治性膀胱切除术的137例患者膀胱癌(bladder cancer,BC)组织切片,... 目的探讨巨噬细胞调控膀胱癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)发生的作用机制。方法收集2000-2015年在重庆大学附属肿瘤医院泌尿肿瘤科行根治性膀胱切除术的137例患者膀胱癌(bladder cancer,BC)组织切片,采用免疫组化(immunohistochemical,IHC)实验检测其CLDN10(claudin10)的表达,分析CLDN10的表达与患者临床资料的相关性。SiRNA干扰技术敲低RAW264.7细胞的TNF-α后,将鼠源膀胱癌细胞MB49与鼠源巨噬细胞RAW264.9共培养,运用Western blot实验检测MB49细胞内EMT相关蛋白的表达变化。采用免疫荧光实验检测MB49细胞内CLDN10与β-catenin蛋白的结合变化。用平板克隆形成实验检测MB49细胞与RAW264.7细胞内EMT相关蛋白的表达变化。结果在137例标本中,CLDN10高表达68例,CLDN10高表达与肿瘤分期(P=0.014)、淋巴结转移(P=0.005)呈正相关,与生存时间(P=0.048)、无复发生存时间(P=0.008)呈负相关。外源性TNF-α作用膀胱癌细胞后,免疫荧光结果显示CLDN10在膀胱癌细胞的表达增加,Western blot结果显示EMT相关蛋白Vimentin、Snail、Twist的表达上调(P<0.05);抑制巨噬细胞TNF-α后与膀胱癌细胞共培养,发现膀胱癌细胞内Vimentin、Snail、Twist的表达下调(P<0.05)。将RAW264.7细胞与MB49细胞共同培养后,MB49细胞内Vimentin、Snail、Twist的表达上调,E-cadherin表达下调(P<0.05)。结论巨噬细胞通过分泌TNF-α调控CLDN10/β-catenin信号通路促进膀胱癌细胞的增殖和EMT发生。 展开更多
关键词 巨噬细胞 cldn10 TNF-Α 膀胱癌
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基于公共数据库分析CLDN10与MYH10在肾透明细胞癌中表达及预后的意义 被引量：4
5
作者 刘波 姚雪婷 +1 位作者 路卯 王辰飞 《实用癌症杂志》 2021年第2期231-235,共5页
目的探讨CLDN10与MYH10在肾透明细胞癌中表达及预后的意义。方法通过GEO数据库分析获取肾透明细胞差异基因,并使用DAVID数据库对差异基因进行富集分析和功能注释,通过HPA数据库获取CLDN10与MYH10在正常肾脏组织蛋白表达图谱,再通过GEPI... 目的探讨CLDN10与MYH10在肾透明细胞癌中表达及预后的意义。方法通过GEO数据库分析获取肾透明细胞差异基因,并使用DAVID数据库对差异基因进行富集分析和功能注释,通过HPA数据库获取CLDN10与MYH10在正常肾脏组织蛋白表达图谱,再通过GEPIA数据库获取CLDN10与MYH10表达差异及肾透明细胞癌患者的预后信息。结果GEO数据库分析表达谱数据集GSE105261共得到438个差异基因,DAVID数据库富集分析表明这些差异基因主要富集在分泌过程、细胞外的外泌体、细胞外基质结构组分以及抗生素的生物合成。GEPIA数据库分析显示:CLDN10与MYH10在正常对照组中表达较肿瘤组显著增高(P<0.05),差异具有统计学意义。CLDN10表达与MYH10表达呈显著正相关(P<0.05),并且CLDN10、MYH10表达量与肾透明细胞癌患者的病理分期呈负相关(P<0.05),与总生存及无病生存呈明显正相关(P<0.05)。结论CLDN10与MYH10在肾透明细胞癌组织中低表达,并且与患者的生存预后明显相关,CLDN10与MYH10有望成为预测肾透明细胞癌患者预后的生物标志物及治疗的靶点。 展开更多
关键词 cldn10 MYH10 肾透明细胞癌 GEO数据库 GEPIA数据库
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CLDN10基因检测在甲状腺癌诊疗的相关性研究及应用
6
作者 俞科 黄婷 +2 位作者 刘异 俞俊锋 吴晓芳 《浙江临床医学》 2019年第4期479-480,共2页
目的 研究CLDN10基因的表达水平与甲状腺肿瘤发生发展的相关性.方法 观察2015年7月至2018年5月接受手术治疗的50例甲状腺结节患者、50例甲状腺癌、50例健康人的 CLDN10基因的表达水平,利用ELISA法及real time -PCR进行检测,并通过单因... 目的 研究CLDN10基因的表达水平与甲状腺肿瘤发生发展的相关性.方法 观察2015年7月至2018年5月接受手术治疗的50例甲状腺结节患者、50例甲状腺癌、50例健康人的 CLDN10基因的表达水平,利用ELISA法及real time -PCR进行检测,并通过单因素方差分析以及多因素统计分析方法.结果 ELISA法测CLDN10蛋白甲状腺乳头状癌组阳性率(40%,P<0.05)明显高于甲状腺结节(0.06%,P<0.05)及正常健康人组(0.04%,P<0.05).CLDN10表达与甲状腺癌患者年龄、性别、肿瘤大小无相关性(P>0.05),与淋巴结转移(P<0.05)、是否浸润腺体(P<0.05)、钙化点(P<0.05)相关.结论 CLDN10基因的表达水平与甲状腺结节和甲状腺乳头状癌的发生、发展进行关联性研究,对于甲状腺结节和甲状腺乳头状癌的诊断、临床治疗及预后判断有重要意义. 展开更多
关键词 cldn10 甲状腺肿瘤 转移
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