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CKS2在结直肠癌中的表达和临床意义 被引量:1
1
作者 叶光耀 俞旻皓 钟鸣 《胃肠病学》 2013年第3期159-162,共4页
背景:细胞周期蛋白依赖性激酶亚基(CKS)家族在细胞周期调节中起重要作用。研究发现其家族成员CKS2在一些恶性肿瘤中呈高表达,并与肿瘤的高侵袭性行为和预后不良相关。目前关于CKS2与结直肠癌关系的文献报道较罕见。目的:研究CKS2在结直... 背景:细胞周期蛋白依赖性激酶亚基(CKS)家族在细胞周期调节中起重要作用。研究发现其家族成员CKS2在一些恶性肿瘤中呈高表达,并与肿瘤的高侵袭性行为和预后不良相关。目前关于CKS2与结直肠癌关系的文献报道较罕见。目的:研究CKS2在结直肠癌中的表达和临床意义。方法:应用real time RT-PCR和蛋白质印迹法检测23例临床结直肠癌手术标本癌组织、癌旁非癌组织和正常组织中的CKS2 mRNA和蛋白表达。结果:CKS2mRNA和蛋白在结直肠组织中的相对表达量依次为:癌组织>癌旁组织>正常组织,癌组织与正常组织间差异有统计学意义(P<0.01)。性别对CKS2 mRNA在不同结直肠组织中的表达趋势无明显影响。癌组织中的CKS2蛋白表达与肿瘤大小和pTNM分期呈正相关(P<0.01),与肿瘤部位无关。结论:CKS2蛋白在结直肠癌中呈高表达并与肿瘤临床病理特征相关,有望成为结直肠癌新的分子标记物和治疗靶点。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 基因 cks2 细胞周期 肿瘤标记 生物学
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CKS2 shRNA慢病毒表达载体的构建及其抑制卵巢癌A2780细胞增殖 被引量:4
2
作者 董梦梦 孙倩玲 +2 位作者 张灵芝 张佳乐 袁成福 《基础医学与临床》 CSCD 2016年第2期145-150,共6页
目的构建靶向CKS2的shRNA慢病毒表达载体,并探讨CKS2敲除对卵巢癌细胞A2780增殖的影响。方法根据siRNA原理设计两对靶向CKS2的shRNA序列(shRNA1、shRNA2)及阴性对照NC shRNA,并克隆到慢病毒表达载体PLKO.1/puro中;将上述质粒转染到293T... 目的构建靶向CKS2的shRNA慢病毒表达载体,并探讨CKS2敲除对卵巢癌细胞A2780增殖的影响。方法根据siRNA原理设计两对靶向CKS2的shRNA序列(shRNA1、shRNA2)及阴性对照NC shRNA,并克隆到慢病毒表达载体PLKO.1/puro中;将上述质粒转染到293T细胞并包装出慢病毒,用慢病毒感染卵巢癌细胞A2780,实时定量PCR及Western blot检测CKS2表达;MTT法检测A2780细胞增殖;Western blot检测PARP-1的剪切;流式细胞术检测凋亡。结果成功构建CKS2 shRNA慢病毒表达载体能明显降低A2780细胞中CKS2 mRNA及蛋白表达(P<0.05);能显著抑制A2780靶向CKS2的shRNA慢病毒表达载体,并包装出慢病毒;感染A2780细胞后,细胞增殖受抑(P<0.05);能诱导PARP-1蛋白的剪切及凋亡(P<0.05)。结论成功构建靶向CKS2的shRNA慢病毒表达载体,能显著抑制A2780细胞增殖。 展开更多
关键词 cks2 卵巢癌 细胞增殖 选择性剪接
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胃癌组织中CKS2蛋白表达与患者预后的相关性 被引量:3
3
作者 刘刚 杜华 苏秀兰 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期904-909,共6页
目的探讨胃癌组织中CKS2蛋白表达与临床病理特征及患者预后的相关性。方法应用qRT-PCR和免疫组化法检测CKS2基因及蛋白在胃癌及癌旁组织中的表达水平,并探讨其与胃癌患者预后的相关性。结果胃癌组织中CKS2基因的表达水平(0.97±0.16... 目的探讨胃癌组织中CKS2蛋白表达与临床病理特征及患者预后的相关性。方法应用qRT-PCR和免疫组化法检测CKS2基因及蛋白在胃癌及癌旁组织中的表达水平,并探讨其与胃癌患者预后的相关性。结果胃癌组织中CKS2基因的表达水平(0.97±0.16)高于癌旁组织(0.38±0.11,P<0.05);胃癌组织中CKS2蛋白的表达水平(21/203,59.60%)与Lauren分型、肿瘤浸润深度、淋巴结转移以及TNM分期密切相关(P<0.05)。胃癌患者预后及生物信息学分析结果进一步证实,CKS2蛋白表达水平与胃癌患者不良预后相关(P<0.05)。结论CKS2蛋白在胃癌组织中的高表达水平与胃癌发生、发展密切相关,可作为评估胃癌患者预后的独立因素之一。 展开更多
关键词 胃肿瘤 cks2 生物信息学分析 预后
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稳定表达可诱导型CKS2 shRNA的卵巢癌OVCAR3细胞系的建立与鉴定 被引量:2
4
作者 董梦梦 孙倩玲 +4 位作者 张灵芝 黄梦庭 卢红艳 张佳乐 袁成福 《基础医学与临床》 CSCD 2016年第3期301-306,共6页
目的建立稳定表达可诱导型CKS2 shRNA的卵巢癌OVCAR3细胞系并研究CKS2敲除对卵巢癌OVCAR3细胞增殖的影响。方法根据siRNA的原理设计2对靶向CKS2的shRNA序列,构建慢病毒表达质粒(p LVTHM/CKS2 shRNA重组质粒);先用p LV-t TR/KRAB-Red空... 目的建立稳定表达可诱导型CKS2 shRNA的卵巢癌OVCAR3细胞系并研究CKS2敲除对卵巢癌OVCAR3细胞增殖的影响。方法根据siRNA的原理设计2对靶向CKS2的shRNA序列,构建慢病毒表达质粒(p LVTHM/CKS2 shRNA重组质粒);先用p LV-t TR/KRAB-Red空载体制备慢病毒并感染OVCAR3细胞;在此基础上再用p LVTHM/CKS2 shRNA重组质粒制备慢病毒并感染上述OVCAR3细胞;对上述两次慢病毒感染的OVCAR3细胞,用强力霉素(DOX)处理72 h后,用real time PCR及Western blot检测CKS2 mRNA及蛋白的表达;用MTT法检测细胞增殖。结果构建靶向CKS2的shRNA慢病毒表达质粒,包装出慢病毒并感染OVCAR3细胞;建立稳定表达可诱导型CKS2 shRNA的OVCAR3细胞系,通过DOX诱导,可明显抑制该细胞系中CKS2在mRNA及蛋白水平的表达(P<0.05,P<0.01);CKS2敲除可明显抑制OVCAR3细胞的增殖。结论建立稳定表达可诱导型CKS2 shRNA的OVCAR3细胞系,DOX诱导的CKS2敲除可明显抑制OVCAR3细胞增殖。 展开更多
关键词 cks2 可诱导型shRNA 卵巢癌
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CKS2蛋白及其在恶性肿瘤中的研究进展 被引量:3
5
作者 王佳佳 张忠英 《国际检验医学杂志》 CAS 2011年第6期670-673,共4页
周期蛋白依赖性激酶亚基CKS(cyclin-dependent kinase subunit)家族广泛存在于真核生物,它由一组相对分子质量为(9~18)×103的小蛋白构成,对细胞分裂周期的调节起重要作用。
关键词 细胞周期 肿瘤 研究 cks2蛋白
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CKS2在口腔鳞状细胞癌中的表达及其细胞生物学意义 被引量:1
6
作者 冯星雨 张伟 赵雅 《口腔生物医学》 2023年第4期233-238,共6页
目的:探索口腔鳞状细胞癌(OSCC)中细胞周期蛋白依赖性激酶调节亚基2(CKS2)的表达模式及OSCC细胞系Cal27中CKS2表达对细胞表型的影响。方法:通过生物信息学分析探索CKS2 mRNA在OSCC及正常黏膜组织中的表达水平;免疫组化染色(IHC)检测91例... 目的:探索口腔鳞状细胞癌(OSCC)中细胞周期蛋白依赖性激酶调节亚基2(CKS2)的表达模式及OSCC细胞系Cal27中CKS2表达对细胞表型的影响。方法:通过生物信息学分析探索CKS2 mRNA在OSCC及正常黏膜组织中的表达水平;免疫组化染色(IHC)检测91例OSCC患者标本和20例口腔正常上皮黏膜中CKS2的表达水平,探究CKS2表达在OSCC患者中的预测价值;siRNA靶向敲减Cal27细胞CKS2并通过Western blot验证其敲低效率,CKS2沉默后通过细胞克隆形成实验检测CKS2对Cal27细胞增殖的影响;通过周期实验和划痕实验分别检测其对细胞周期及迁移的影响。结果:生物信息学分析及IHC结果均显示,CKS2在OSCC组织中高表达(P<0.05);CKS2表达水平与患者肿瘤大小、颈淋巴结转移及患者生存率显著相关(P<0.05);靶向抑制CKS2表达抑制Cal27细胞的增殖及迁移能力,诱导G_(2)期阻滞(P<0.05)。结论:CKS2在OSCC中高表达,其高表达可用来判断患者的生存质量,并正向调控OSCC细胞的增殖、周期及迁移。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞癌 cks2 增殖 迁移 细胞周期
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CKS2在人类部分癌症中的研究进展
7
作者 董梦梦 孙倩玲 袁成福 《生命的化学》 CAS CSCD 2016年第3期303-306,共4页
CKS2是周期蛋白依赖性激酶亚家族(cyclin-dependent kinase subunit family)成员之一。本综述总结了CKS2在癌症标本中的表达及其与临床病理、预后等的相关性;介绍了CKS2在细胞周期、细胞凋亡及癌症侵袭转移等方面的研究进展。
关键词 cks2 癌症 相关性 研究进展
原文传递
Cks2对哺乳动物减数分裂的中后期转换是必需的
8
作者 CharlesH 邢俊平 《现代泌尿外科杂志》 CAS 2003年第3期178-178,共1页
关键词 cks2 哺乳动物减数分裂 中后期 转换
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人结肠癌细胞中CacyBP/SIP核转位差异表达基因的验证 被引量:2
9
作者 王安萍 赵盈盈 +1 位作者 刘欣 翟惠虹 《天津医药》 CAS 北大核心 2014年第5期410-413,共4页
目的验证细胞周期聚合酶链反应(PCR)芯片筛选出来的差异表达基因。方法胃泌素刺激的SW480细胞作为实验组,无胃泌素刺激的SW480细胞作为对照组。用蛋白免疫印迹(Western blot)法对胃泌素刺激前后的钙周期素结合蛋白(CacyBP/SIP)表达定位... 目的验证细胞周期聚合酶链反应(PCR)芯片筛选出来的差异表达基因。方法胃泌素刺激的SW480细胞作为实验组,无胃泌素刺激的SW480细胞作为对照组。用蛋白免疫印迹(Western blot)法对胃泌素刺激前后的钙周期素结合蛋白(CacyBP/SIP)表达定位进行检测;用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术对细胞周期PCR芯片筛选出的差异表达基因周期素依赖性蛋白激酶8(CDK8)和细胞周期蛋白依赖性激酶亚基2(CKS2)进行验证。结果胃泌素刺激前CacyBP/SIP主要表达于细胞质,刺激后可同时表达于细胞质和细胞核;同细胞周期PCR芯片结果一致,基因CDK8和CKS2在实验组的表达量较对照组明显上调(P<0.05)。结论胃泌素刺激可使CacyBP/SIP发生核转位;基因芯片筛选出的差异基因大体可靠,对筛选出的差异基因可以进行进一步研究。 展开更多
关键词 细胞周期蛋白质依赖激酶类 结肠肿瘤 细胞系 肿瘤 胃泌素类 CDK8 cks2 钙周期素结合蛋白 核转位
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重组人蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与测序 被引量:33
10
作者 刘新光 梁念慈 +1 位作者 马涧泉 刘文 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第2期228-231,共4页
蛋白激酶CK2是一种存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶.它是由两个催化亚基(α或α′)和两个调节亚基(β)组成的不均一四聚体.用反转录PCR从HL-60细胞中获得了人蛋白激酶CK2β亚基编码区cDNA,将NdeⅠ/... 蛋白激酶CK2是一种存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶.它是由两个催化亚基(α或α′)和两个调节亚基(β)组成的不均一四聚体.用反转录PCR从HL-60细胞中获得了人蛋白激酶CK2β亚基编码区cDNA,将NdeⅠ/HindⅢ双酶切PCR产物连接到表达载体pT7-7的NdeⅠ/HindⅢ双酶切位点中.转化感受态细菌DH5α获得转化子,阳性筛选率为72%.限制性酶切分析结果表明,插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符.随机挑选4个阳性质粒测定其插入片段DNA序列,结果显示有2个含有正确插入的人蛋白激酶CK2βcDNA,命名为pTCKB.其余2个克隆分别存在1个和2个点突变,即在其编码区condon148的TCA→TTA,结果Ser→Leu;另一个则在Condon143GTG→ATG,Val→Met;Condon170GTG→GCG,Val→Ala.重组质粒(pTCKB)克隆的成功,将为在原核细胞中表达蛋白激酶CK2β亚基以及利用CK2βcDNA作为探针进行深入研究打下基础. 展开更多
关键词 人蛋白激酶CK2 Β亚基 DNA测序 重组 CDNA
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CK2β、VEGF和p53蛋白表达对宫颈癌患者预后的预测价值研究 被引量:35
11
作者 陈晓露 张波 吴蓉宜 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第8期1083-1086,共4页
目的探讨蛋白激酶CK2β、血管内皮生长因子(VEGF)和p53蛋白表达对宫颈癌患者预后的预测价值。方法选取成都市第六人民医院妇科宫颈癌手术患者123例作为研究组,同期选取慢性宫颈炎手术患者119例作为对照组,采用免疫组化法检测CK2β、VEGF... 目的探讨蛋白激酶CK2β、血管内皮生长因子(VEGF)和p53蛋白表达对宫颈癌患者预后的预测价值。方法选取成都市第六人民医院妇科宫颈癌手术患者123例作为研究组,同期选取慢性宫颈炎手术患者119例作为对照组,采用免疫组化法检测CK2β、VEGF和p53蛋白表达水平,比较两组阳性表达差异和分析3者对预后的预测价值。结果研究组CK2β、VEGF和p53蛋白阳性表达率明显高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05),CK2β、VEGF和p53蛋白表达与临床分期、病理分级、淋巴结转移具有明显的相关性,其中临床分期和病理分级越高,合并淋巴结转移者CK2β、VEGF和p53蛋白阳性表达率越高,差异具有统计学意义(P<0.05),宫颈癌患者5年生存率为47.97%(59/123),其中预后状况与临床分期、病理分级、淋巴结转移、CK2β、VEGF及p53表达显著相关,临床分期和病理分级越高,合并淋巴结转移及CK2β、VEGF与p53阳性表达者5年生存率更低,差异具有统计学意义(P<0.05),其中Cox多因素分析显示,CK2β、VEGF与p53表达是预后状况的独立影响因素。结论宫颈癌组织CK2β、VEGF和p53阳性表达显著上调,其中三者阳性表达预示疾病预后欠佳,对疾病的预后状况具有重要的预测价值。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 CK2β 血管内皮生长因子 预后
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山奈酚抑制蛋白激酶CK2活性 被引量:16
12
作者 林小聪 刘新光 +1 位作者 陈小文 梁念慈 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期894-901,共8页
研究体外以及HL-60细胞内山奈酚对蛋白激酶CK2的抑制作用及机制.通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨山奈酚对重组人CK2全酶以及细胞内CK2活性的影响;采用多重RT-PCR检测CK2α、α′和β亚基的mRNA... 研究体外以及HL-60细胞内山奈酚对蛋白激酶CK2的抑制作用及机制.通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨山奈酚对重组人CK2全酶以及细胞内CK2活性的影响;采用多重RT-PCR检测CK2α、α′和β亚基的mRNA表达水平;通过Lineweaver-Burk作图法,分析CK2的酶动力学机制.山奈酚能显著抑制重组人CK2活性(IC50=1.88μmol/L)和HL-60细胞内的CK2活性,对细胞内CK2的作用效果强于阳性对照四溴-2-氮杂苯并咪唑(TBB).山奈酚作用2h,对CK2各亚基的mRNA表达水平均没有影响.山奈酚对重组人CK2的酶动力学分析表明,山奈酚与ATP(Ki=1.14μmol/L)及酪蛋白(Ki=1.03μmol/L)均呈非竞争性抑制作用.结果提示,山奈酚是一种有效的蛋白激酶CK2的抑制剂,其作用机制可能与其阻碍CK2与ATP以及底物的结合有关. 展开更多
关键词 蛋白激酶CK2 山奈酚 酶动力学
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槲皮素及其水溶性衍生物对HL-60细胞生长影响的比较 被引量:13
13
作者 翁云 佘戟 +1 位作者 蔡康荣 梁念慈 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期154-157,共4页
目的 研究并比较槲皮素及其硫酸酯钠盐衍生物 (槲皮素单硫酸酯钠、槲皮素二硫酸酯钠 )对HL 6 0细胞生长的影响。方法 细胞存活力以台盼兰染色法测定 ;蛋白激酶CK 2活性以连接到CK 2底物上的 [γ 3 2 P]GTP的3 2 P放射活度来检测 ;细... 目的 研究并比较槲皮素及其硫酸酯钠盐衍生物 (槲皮素单硫酸酯钠、槲皮素二硫酸酯钠 )对HL 6 0细胞生长的影响。方法 细胞存活力以台盼兰染色法测定 ;蛋白激酶CK 2活性以连接到CK 2底物上的 [γ 3 2 P]GTP的3 2 P放射活度来检测 ;细胞周期变化以流式细胞仪检测。结果 槲皮素、槲皮素单硫酸酯钠和槲皮素二硫酸酯钠均可抑制HL 6 0细胞的生长 ,槲皮素和槲皮素单硫酸酯钠对HL 6 0细胞生长的抑制作用差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,槲皮素二硫酸酯钠的作用则比槲皮素弱得多 (P <0 0 1) ;槲皮素可抑制HL 6 0细胞中蛋白激酶CK 2的活性 ,而槲皮素单硫酸酯钠和槲皮1999 0 5 14收稿 ,1993 0 7 15修回 广东省自然科学基金资助课题 (No 940 5 86)和广东省高教厅重点学科资助课题 (No 93 0 4)作者简介 :翁 云 ,女 ,2 7岁 ,硕士 ;梁念慈 ,男 ,5 8岁 ,教授 ,博士生导师 ,广东医学院院长。研究方向 :生化药理学素二硫酸酯钠对HL 6 0细胞内CK 2活性无明显影响 ;槲皮素阻断HL 6 0细胞于G2 /M期 ,而槲皮素单硫酸酯钠和槲皮素二硫酸酯钠均阻断细胞于G0 /G1期。结论 槲皮素、槲皮素单硫酸酯钠和槲皮素二硫酸酯钠均为潜在的肿瘤细胞生长抑制剂 ,但它们的抑制机制却不相同 ,槲皮素 7 OH对维持槲皮素的功能有重要作用。 展开更多
关键词 槲皮素 单硫酸酯钠 HL-60细胞周期 蛋白激酶CK2
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人蛋白激酶CK2α′亚基在大肠杆菌中的克隆、表达及其重组蛋白的纯化与性质鉴定 被引量:24
14
作者 陈小文 刘新光 +1 位作者 梁景耀 梁念慈 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期176-182,共7页
通过RT PCR从HL 6 0细胞获得人蛋白激酶CK2α′亚基编码区cDNA ,将NdeⅠ HindⅢ双酶切的PCR产物和pT7 7表达载体进行定向克隆、细菌转化、电泳初筛和限制性酶切分析鉴定 .随机挑选阳性克隆进行DNA测序确证 ,筛选含与已知序列完全相符... 通过RT PCR从HL 6 0细胞获得人蛋白激酶CK2α′亚基编码区cDNA ,将NdeⅠ HindⅢ双酶切的PCR产物和pT7 7表达载体进行定向克隆、细菌转化、电泳初筛和限制性酶切分析鉴定 .随机挑选阳性克隆进行DNA测序确证 ,筛选含与已知序列完全相符的重组质粒 (命名为pTCKA′) .将其转化BL2 1(DE3)菌 ,IPTG诱导后未见高效特异表达 .然后将人CK2α′cDNA亚克隆至GST融合蛋白表达载体 ,经同样转化和诱导步骤后可见一蛋白特异高效表达 .Western印迹结果证明 :该蛋白能与兔抗人CK2α′3 3 3 3 50 肽段抗血清发生特异性免疫反应 .采用GSH Sepharose 4B柱纯化 ,凝血酶酶切 ,最后从 4g细菌获 4 4mg纯化重组蛋白 .通过性质鉴定和酶动力学分析证明 :克隆、表达和纯化的重组蛋白是有生物学活性的人CK2α′亚基 . 展开更多
关键词 人蛋白激酶CK2α'亚基 大肠杆菌 克隆 表达 纯化 重组蛋白 鉴定
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9种蒽醌类衍生物对重组人蛋白激酶CK2活性的影响及构效浅析 被引量:7
15
作者 林小聪 李春梅 +2 位作者 刘新光 陈小文 梁念慈 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期733-737,共5页
目的观察9种蒽醌类衍生物对重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响,并进行构效分析。方法将利用基因工程技术获得的重组人CK2α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,... 目的观察9种蒽醌类衍生物对重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响,并进行构效分析。方法将利用基因工程技术获得的重组人CK2α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨蒽醌类衍生物对重组人CK2全酶活性的抑制作用,并采用半数效量概率单位法计算其IC50值。结果米托蒽醌、2-羧基蒽醌、1,2-二氨蒽醌、1,8-二羟蒽醌和醌茜能明显抑制重组人CK2全酶活性,其IC50值分别是0.66、0.81、8.81、28.76和61.26μmol·L-1;其中米托蒽醌、2-羧基蒽醌和1,2-二氨蒽醌的作用效果均强于目前已知的CK2抑制剂DRB和A3。1-氨基蒽醌和1-氯蒽醌对CK2的作用效果较弱,其IC50值分别为143.38和221.18μmol·L-1;而蒽醌和2-乙基蒽醌对CK2的活性则没有明显的影响。构效分析表明:C2上的-COOH、C8位上的-OH以及C2上的-NH2可能分别是2-羧基蒽醌、1,8-二羟蒽醌和1,2-二氨基蒽醌的药效基团;而C2上的-CH2CH3和C1上的-Cl可能分别是2-乙基蒽醌和1-氯蒽醌的非必需基团。结论米托蒽醌、2-羧基蒽醌和1,2-二氨蒽醌是3种较强的重组人蛋白激酶CK2的抑制剂。 展开更多
关键词 蛋白激酶CK2 蒽醌类衍生物 IC50 构效分析
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蛋白激酶CK2抑制剂TBB对甲状腺鳞癌细胞株SW579 CK2β和Akt表达的影响 被引量:5
16
作者 刘超 刘洋 +2 位作者 赵颂 王翠瑶 肖建英 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期276-280,共5页
目的:观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺鳞癌SW579细胞株CK2β和Akt表达的影响,探讨TBB抗甲状腺癌的作用机制。方法:体外培养SW579细胞,实验分为对照组(未加任何处理组和DMSO组)、TBB组(终浓度为25μmol·L-1)和Wortmannin组(终浓度为100... 目的:观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺鳞癌SW579细胞株CK2β和Akt表达的影响,探讨TBB抗甲状腺癌的作用机制。方法:体外培养SW579细胞,实验分为对照组(未加任何处理组和DMSO组)、TBB组(终浓度为25μmol·L-1)和Wortmannin组(终浓度为100 nmol·L-1)。MTT比色法测定细胞生长抑制率,同时测定蛋白激酶CK2的活性。采用RT-PCR方法检测SW579细胞CK2β及Akt的mRNA表达,分析各处理组CK2β及Akt基因表达变化。采用Western blotting方法检测SW579细胞CK2β及Akt的蛋白表达,分析各处理组CK2β及Akt的蛋白表达变化。结果:与对照组比较,TBB组SW579细胞生长抑制率明显增加(P<0.01),细胞内CK2的活性明显降低(P<0.01)。RT-PCR结果表明,与对照组比较,TBB组CK2β的mRNA表达水平显著降低(P<0.01),Akt的mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。Western blotting结果表明,与未处理组比较,Wortmannin组内源性CK2的活性无明显变化(P>0.05),TBB组CK2β的表达明显降低(P<0.01),同时Akt Thr308和Ser473磷酸化状态受到抑制(P<0.01),总Akt水平无明显变化。结论:TBB可降低SW579细胞蛋白激酶CK2β的表达,进而再下调Akt的活性。 展开更多
关键词 四溴苯三唑 甲状腺鳞癌 CK2β AKT/PKB SW579
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重组人蛋白激酶CK 2α亚基的原核表达、纯化与鉴定 被引量:17
17
作者 刘新光 梁念慈 马涧泉 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第1期17-22,共6页
将构建成功的人蛋白激酶 CK2 α亚基 c DNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌 BL2 1 ( DE3) ,IPTG诱导后获特异高效表达 ,表达蛋白占菌体总蛋白的 30 % ,但大多数重组蛋白以不溶形式存在 .表达产物依次进行 DE- 5 2、P1 1磷酸纤维素和肝素 - Sep... 将构建成功的人蛋白激酶 CK2 α亚基 c DNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌 BL2 1 ( DE3) ,IPTG诱导后获特异高效表达 ,表达蛋白占菌体总蛋白的 30 % ,但大多数重组蛋白以不溶形式存在 .表达产物依次进行 DE- 5 2、P1 1磷酸纤维素和肝素 - Sepharose柱层析分离 ,最后从 30 9mg可溶性蛋白质中得到 6.1 mg纯化蛋白 . SDS- PAGE显示纯化的蛋白质为一分子量 4 2 k D的单一蛋白带 .Western- blot的结果证明 :纯化的表达产物与抗人 CK2α抗体可发生特异性免疫反应 . CK2α和β亚基等摩尔分子混合可组成有完全活性的全酶 .重组的 CK2全酶的性质和功能与该酶的已知特性一致 .这些结果证明重组蛋白是人蛋白激酶 CK2 展开更多
关键词 人蛋白激酶CK2α亚基 原核表达 纯化 鉴定
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CIP2A和CK2β蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及其与预后的关系 被引量:5
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作者 李红伟 李多杰 +3 位作者 柴大敏 江浩 汪朝歌 马莉 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期200-205,共6页
目的探讨CIP2A和CK2β蛋白在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达意义及对患者预后的影响。方法采用免疫组织化学法检测155例ESCC组织(实验组)、50例癌旁正常黏膜组织(对照组)中CIP2A和CK2β蛋白的表达,分析CIP2A和CK2β蛋白表达水平及与... 目的探讨CIP2A和CK2β蛋白在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达意义及对患者预后的影响。方法采用免疫组织化学法检测155例ESCC组织(实验组)、50例癌旁正常黏膜组织(对照组)中CIP2A和CK2β蛋白的表达,分析CIP2A和CK2β蛋白表达水平及与临床病理参数之间的关系,应用Kaplan-Meier生存分析和Cox多因素分析对ESCC患者的生存情况进行分析。结果 CIP2A和CK2β蛋白在ESCC组织中的表达阳性率分别为76.67%和66.45%,均明显高于正常对照组的16.00%和12.00%,差异有统计学意义(均P=0.000)。CIP2A蛋白与ESCC的淋巴结转移及临床分期有关(P=0.005,P=0.000),而与患者的年龄、性别、组织学分级和浸润深度等无相关性。CK2β蛋白的表达与ESCC的组织学分级、淋巴结转移和临床分期有关(P=0.000,P=0.004,P=0.000),而与患者的年龄、性别和浸润深度无相关性。CIP2A与CK2β蛋白表达呈正相关(r=0.611,P=0.000)。ESCC患者总体5年生存率为23.33%。CIP2A蛋白表达阳性患者的5年生存率为8.11%(9/111),阴性者为66.67%(26/39),差异具有统计学意义(P=0.000)。CK2β蛋白表达阳性患者的5年生存率为6.06%(6/99),阴性者为56.86%(29/51),差异具有统计学意义(P=0.000)。Cox多因素预后分析显示,TNM临床分期和CIP2A及CK2β蛋白表达水平是影响ESCC患者预后的独立因素(P=0.008,P=0.013,P=0.000)。结论 CIP2A和CK2β的表达与ESCC发生及发展密切相关,其可能参与了ESCC的浸润及转移,阳性表达者预后较差。联合检测2种蛋白的表达对判断ESCC的预后具有重要意义。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 CIP2A CK2β 预后
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大黄素对顺铂耐药卵巢癌细胞的逆转作用及其相关基因表达研究 被引量:7
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作者 秦春明 侯华新 +4 位作者 程道海 李力 黎丹戎 刘瑛 宋慧 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2011年第4期638-642,共5页
为了研究大黄素对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP细胞耐药逆转作用及其机制,本研究以卵巢癌SK-OV3和多药耐药细胞株SKOV3/DDP为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法测定SKOV3/DDP细胞的耐药指数和大黄素在无细胞毒浓度下对卵巢癌细胞耐受顺铂(DDP... 为了研究大黄素对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP细胞耐药逆转作用及其机制,本研究以卵巢癌SK-OV3和多药耐药细胞株SKOV3/DDP为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法测定SKOV3/DDP细胞的耐药指数和大黄素在无细胞毒浓度下对卵巢癌细胞耐受顺铂(DDP)的逆转作用;采用Real-time PCR技术检测耐药相关基因HIF-1α、STAT1、CK2α、GSTP1 mRNA表达情况。结果发现无细胞毒作用浓度的7.8 mg/L和3.9 mg/L大黄素能逆转SKOV3/DDP细胞对DDP的耐药性,对DDP的逆转倍数分别为1.91倍和1.30倍,与SKOV3比较,SKOV3/DDP细胞的HIF-1α、STAT1、CK2α、GSTP1 mRNA表达明显升高(P<0.01)。3.9 mg/L和7.8 mg/L大黄素作用均可下调HIF-1α、CK2α、STAT1 mRNA表达,存在剂量-效应依赖关系。7.8 mg/L大黄素作用可下调GSTP1 mR-NA表达,但3.9 mg/L大黄素作用不明显。7.8 mg/L和3.9 mg/L大黄素联合IC50浓度的DDP时,四个耐药相关基因的表达与单独化疗药组作用相比明显下调(P<0.01)。提示无细胞毒浓度的大黄素对卵巢癌细胞耐药逆转的作用可能是通过下调HIF-1α、STAT1、GSTP1、CK2α的表达起作用。 展开更多
关键词 大黄素 卵巢癌耐顺铂细胞 耐药逆转 HIF-1α STAT1 GSTP1 CK2α
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黄芩甙对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析 被引量:4
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作者 林小聪 刘新光 +2 位作者 陈小文 陈伟珠 梁念慈 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第8期874-878,共5页
背景与目的蛋白激酶CK2是一种在真核细胞中普遍存在的多功能的丝/苏氨酸蛋白激酶。在许多实体瘤、白血病细胞中CK2的活性均增高。其α及α'基因是原癌基因。CK2作为一种具有潜在抗肿瘤作用的分子靶点正日益受到重视。为了寻找肿瘤... 背景与目的蛋白激酶CK2是一种在真核细胞中普遍存在的多功能的丝/苏氨酸蛋白激酶。在许多实体瘤、白血病细胞中CK2的活性均增高。其α及α'基因是原癌基因。CK2作为一种具有潜在抗肿瘤作用的分子靶点正日益受到重视。为了寻找肿瘤细胞内CK2的特异性抑制剂,本研究观察黄芩甙体外对重组人蛋白激酶CK2的抑制效果,并进行酶动力学分析以确定其抑制作用类型。方法利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化,获得重组人CK2的α'及β亚基并在体外等摩尔混合构成CK2全酶,测定不同条件下CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度来检测。结果黄芩甙能显著抑制重组人蛋白激酶CK2的活性(IC50=2.54μmol/L)。酶动力学分析表明,黄芩甙与ATP呈非竞争性抑制CK2的活性(Ki=7.73μmol/L),与酪蛋白则呈混合性抑制CK2的活性(Ki=3.07μmol/L)。结论黄芩甙是一种较强的体外蛋白激酶CK2的抑制剂。 展开更多
关键词 蛋白激酶CK2 重组蛋白 全酶 黄芩甙 酶动力学
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