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LncRNA NEAT1通过抑制miR-98-5p上调CKIP-1影响盆底支持组织成纤维细胞胶原蛋白分泌和细胞凋亡
1
作者 曲思娆 夏志军 +2 位作者 牛菊敏 赵曼曼 雷雨 《现代妇产科进展》 2025年第8期594-600,606,共8页
目的:研究LncRNA NEAT1是否通过抑制miR-98-5p上调CKIP-1表达进而影响盆底支持组织成纤维细胞胶原蛋白分泌和细胞凋亡。方法:收集盆腔器官脱垂(POP)手术切除的阴道壁组织,作为POP组,以其他妇科良性疾病切除子宫患者的阴道壁组织作为对... 目的:研究LncRNA NEAT1是否通过抑制miR-98-5p上调CKIP-1表达进而影响盆底支持组织成纤维细胞胶原蛋白分泌和细胞凋亡。方法:收集盆腔器官脱垂(POP)手术切除的阴道壁组织,作为POP组,以其他妇科良性疾病切除子宫患者的阴道壁组织作为对照组。检测阴道壁组织中LncRNA NEAT1、miR-98-5p、CKIP-1表达;培养阴道壁成纤维细胞,利用细胞转染技术,分别敲低CKIP-1、过表达miR-98-5p、敲低LncRNA NEAT1,Western blot法检测Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3、p-Smad3、Bax和Bcl-2表达。结果:POP组CKIP-1表达增高,降低CKIP-1后,COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TGF-β1、Smad3、p-Smad3、Bcl-2表达升高,Bax表达降低;POP组miR-98-5p表达降低,过表达miR-98-5p后,COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TGF-β1、Smad3、p-Smad3、Bcl-2表达升高,CKIP-1、Bax表达降低,CKIP-1可干扰此结果;POP组LncRNA NEAT1表达增高,敲低NEAT1后,COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TGF-β1、Smad3、p-Smad3、Bcl-2表达升高,CKIP-1、Bax表达降低,miR-98-5p可干扰此结果。结论:LncRNA NEAT1通过抑制miR-98-5p上调CKIP-1表达进而影响盆底支持组织成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白分泌和细胞凋亡。 展开更多
关键词 lncRNA NEAT1 miR-98-5p ckip-1 盆腔脏器脱垂 胶原蛋白
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CKIP-1 siRNA影响膝关节骨性关节炎进展的动物实验研究
2
作者 戴章生 《齐齐哈尔医学院学报》 2024年第17期1601-1605,共5页
目的 探讨CKIP-1 siRNA对膝关节骨性关节炎进展的影响研究。方法 建立大鼠膝关节骨关节炎模型,选取其中一只分离培养实验大鼠骨髓间充质干细胞,分为空白组、阴性对照组和不同浓度的Ckip-1 siRNA组(10 pmol/ml、20 pmol/ml和50 pmol/ml)... 目的 探讨CKIP-1 siRNA对膝关节骨性关节炎进展的影响研究。方法 建立大鼠膝关节骨关节炎模型,选取其中一只分离培养实验大鼠骨髓间充质干细胞,分为空白组、阴性对照组和不同浓度的Ckip-1 siRNA组(10 pmol/ml、20 pmol/ml和50 pmol/ml)检测不同组的Ckip-1 siRNA表达量,确定最佳的Ckip-1 siRNA组为50 pmol/ml;将大鼠模型分为模型组20只、生理盐水组20只、CKIP-1 siRNA组20只,向生理盐水组注射生理盐水,向CKIP-1 siRNA组注射CKIP-1 siRNA干预的骨髓间充质干细胞,空白组不做处置。检测注射后的实验鼠膝关节处成骨相关基因OPN、Runx2的mRNA的相对表达量,检测其成骨能力变化情况。结果 检测注射后的实验鼠膝关节处成骨相关基因OPN、Runx2的mRNA的相对表达量明显增加(P<0.05),检测其成骨能力增强(P<0.05)。结论 Ckip-1基因对骨髓间充质干细胞的负调控作用。CKIP-1 siRNA干预后骨髓间充质干细胞能够增加实验鼠膝关节处骨再生能力,为膝关节骨性关节炎的治疗提供新的方法,期望能够提出新的靶点。 展开更多
关键词 ckip-1 sirna 膝关节骨性关节炎 动物实验 机制进展
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创面siRNA敲降HO-1改善小鼠放创复合伤创面愈合的实验研究 被引量:1
3
作者 吕晓凡 汪国建 +5 位作者 赵娜 龙爽 王双 冉新泽 王军平 王涛 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1194-1205,共12页
目的检测血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)在放创复合伤(radiation-wound combined injury,R-W-CI)创面修复中的表达情况,评价通过siRNA敲降HO-1对放创复合伤创面愈合的改善作用。方法将36只8周龄雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法... 目的检测血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)在放创复合伤(radiation-wound combined injury,R-W-CI)创面修复中的表达情况,评价通过siRNA敲降HO-1对放创复合伤创面愈合的改善作用。方法将36只8周龄雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为单纯皮肤创伤组(W组,n=18)和合并全身辐射(6 Gy)损伤的皮肤创伤组(R-W-CI组,n=18),建立单纯皮肤创伤与放创复合伤的小鼠模型。在创面愈合过程中,拍照记录创面愈合情况并通过Image J量化分析残留面积;取材创面组织进行HE染色及病理组织学观察;动态检测外周血象评估造血系统损伤情况。通过创面组织定量PCR及Western blot检测创面HO-1表达水平及变化情况。将26只8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为siRNA敲降HO-1组(si-HO-1组,n=13)和siRNA阴性对照组(si-NC组,n=13)。放创复合伤致伤后,si-HO-1组在每个创面涂抹负载si-HO-1(5μmol/L)的F127凝胶60μL,si-NC组创面涂抹等量负载阴性对照si-NC的F127凝胶。通过创面组织Western blot检测HO-1的敲降情况,观察创面面积变化,对伤后第3天样本进行定量PCR检测IL-1β、IL-6、TNF-α等炎症因子的表达变化,组织切片进行Ki67免疫组织化学和HE染色;对第9天创面组织进行HE染色病理评估;综合评价敲降HO-1对放创复合伤创面愈合的改善作用。结果与W组相比,创面残留面积的半定量分析表明R-W-CI组愈合在伤后第7、10天显著延迟(P<0.01);第7天的HE病理显示R-W-CI组再上皮化延缓,肉芽组织生长不良;同时R-W-CI组外周血白细胞及其分类计数显示在损伤后早期即显著下降(P<0.05)。检测发现,R-W-CI组创面HO-1蛋白在伤后第3、7天表达略高于W组,但无显著差异(P>0.05),而在第10天显著升高(P<0.05),同时伴有全长与截短形式的分布改变;定量PCR显示R-W-CI组在伤后第7天、10天的创面组织HO-1的表达显著高于W组(P<0.05)。放创复合伤创面siRNA干预实验显示:与si-NC组比较,si-HO-1组能有效敲降创面HO-1蛋白含量(P<0.05),促进伤口收缩(P<0.05),减小创面宽度(P<0.01),上调致伤第3天创面IL-6、TNF-α等炎症因子表达,促进创缘组织细胞增殖,改善肉芽组织生长情况。结论放创复合伤创面修复过程中存在HO-1蛋白的持续高表达,创面siRNA敲降HO-1可以改善R-W-CI组小鼠创面乏炎状态,促进创面愈合。 展开更多
关键词 放创复合伤 创面愈合 炎症反应 血红素加氧酶1 小干扰RNA
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极度低氧条件下Ckip-1 siRNA促进骨髓间充质干细胞成骨分化作用 被引量:2
4
作者 刘想忠 宁宇 +3 位作者 胡静 杨傲飞 蔡寒涛 李章华 《中国医药导报》 CAS 2020年第18期10-14,23,共6页
目的探讨极度低氧条件下Ckip-1 siRNA促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化作用。方法差速贴壁法分离培养兔BMSCs,常氧(20%)及极度低氧(1%)条件下培养72 h,实时荧光定量PCR(qPCR)及Western blot检测成骨基因Run相关转录因子2(Runx2)、SM... 目的探讨极度低氧条件下Ckip-1 siRNA促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化作用。方法差速贴壁法分离培养兔BMSCs,常氧(20%)及极度低氧(1%)条件下培养72 h,实时荧光定量PCR(qPCR)及Western blot检测成骨基因Run相关转录因子2(Runx2)、SMAD5及骨形态发生蛋白2(BMP2)表达,培养3、5、7 d后检测上清中碱性磷酸酶(ALP)活性。再将BMSCs置于1%氧浓度下培养72 h,观察Ckip-1 siRNA对Runx2、SMAD5及BMP2表达及ALP活性的影响。结果 1%氧浓度下BMSCs的成骨基因表达及ALP活性明显低于20%氧浓度下,差异有统计学意义(P <0.05);Ckip-1 siRNA转染后BMSCs成骨基因表达及ALP活性明显高于未转染,差异有统计学意义(P <0.05)。结论极度低氧可抑制BMSCs成骨分化能力,而Ckip-1 siRNA促进BMSCs在极度低氧条件下向成骨细胞分化。 展开更多
关键词 低氧 ckip-1 sirna 骨髓间充质干细胞 成骨分化
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靶向抗HSV-1的siRNA研究进展 被引量:1
5
作者 周磊 吕雯雯 +2 位作者 段永忠 钱雯 程继帅 《昆明医科大学学报》 CAS 2024年第9期1-8,共8页
单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)是一种能够在各类人群中携带和传播并能引起包括口唇疱疹、荚膜炎、角膜炎和病毒性脑炎等疾病的重要病原体。虽然已有多种类型的HSV-1疫苗处于研发的不同阶段,但仍没有商业化的疫苗... 单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)是一种能够在各类人群中携带和传播并能引起包括口唇疱疹、荚膜炎、角膜炎和病毒性脑炎等疾病的重要病原体。虽然已有多种类型的HSV-1疫苗处于研发的不同阶段,但仍没有商业化的疫苗上市销售。临床上使用的特异性抗HSV-1药物如阿昔洛韦、伐昔洛韦和喷昔洛韦等也面临严重的抗药性威胁,开发新的特异性抗HSV-1药物是当前所面临的主要任务之一。siRNA是一种长度为20~25核苷酸的双链RNA,通过在转录后水平上沉默基因表达发挥干扰作用。siRNA作为一种新的、有潜力的抗病毒药物备受关注,发展也较为迅速。综述近年来siRNA在抗HSV-1方面的研究进展,包括靶向HSV-1关键基因和HSV-1互作的宿主细胞基因的siRNA设计、递送和靶向策略。 展开更多
关键词 小干扰RNA 单纯疱疹病毒1 靶向调控
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USP8调控TWIST1对卵巢癌细胞上皮间质转化的影响
6
作者 杨贺 蔡娱飞 +6 位作者 马奎丽 周影 李文会 鄢杰 陈雨 马溯阳 马哲 《海南医学》 2025年第6期761-766,共6页
目的探究USP8调控TWIST1对卵巢癌细胞上皮间质转化的影响。方法将卵巢癌OVCAR3细胞和SKOV3细胞均随机分为si NC实验组、si USP8实验组和si TWIST1实验组。采用细胞集落实验分析OVCAR3和SKOV3细胞的增殖能力;采用Transwell实验方法分析OV... 目的探究USP8调控TWIST1对卵巢癌细胞上皮间质转化的影响。方法将卵巢癌OVCAR3细胞和SKOV3细胞均随机分为si NC实验组、si USP8实验组和si TWIST1实验组。采用细胞集落实验分析OVCAR3和SKOV3细胞的增殖能力;采用Transwell实验方法分析OVCAR3和SKOV3细胞的侵袭能力;采用细胞划痕实验分析OVCAR3和SKOV3细胞的迁移能力;采用蛋白免疫印迹方法分析N-cadherin、Vimentin、USP8与TWIST1蛋白的表达。结果抑制USP8表达后,细胞集落实验显示,si USP8以及si TWIST1实验组的OVCAR3和SKOV3细胞增殖能力下降,差异均有统计学意义(P<0.05);Transwell实验显示,si USP8以及si TWIST1实验组的OVCAR3和SKOV3细胞侵袭数量下降,差异均有统计学意义(P<0.05);细胞划痕实验显示,si USP8以及si TWIST1实验组的OVCAR3和SKOV3细胞迁移率下降,差异均有统计学意义(P<0.05);蛋白免疫印迹实验结果显示,si USP8以及si TWIST1实验组的N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平下降,si USP8实验组的USP8、TWIST1蛋白表达水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制USP8表达后,OVCAR3和SKOV3细胞的上皮间质转化过程受到抑制,该机制与USP8调节TWIST1密切相关。 展开更多
关键词 USP8 TWIST1 增殖 卵巢癌 侵袭 迁移 上皮间质转化 sirna
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INTU-siRNA质粒的构建及在人甲状腺Nthy-ori-3-1细胞中的筛选
7
作者 闫淑鑫 张淑静 +4 位作者 袁慧敏 孙逸卓 骈雪 孙燕 汤阳 《现代生物医学进展》 CAS 2024年第6期1001-1006,1043,共7页
目的:构建人源靶向特异INTU-si RNA质粒,转染人源性甲状腺Nthy-ori-3-1细胞以构建INTU基因沉默的Nthy-ori-3-1细胞模型,为探索Graves病的发病机制提供合适的细胞模型。方法:构建四对人源INTU序列(编号分别为INTU-29、INTU-31、INTU-33、... 目的:构建人源靶向特异INTU-si RNA质粒,转染人源性甲状腺Nthy-ori-3-1细胞以构建INTU基因沉默的Nthy-ori-3-1细胞模型,为探索Graves病的发病机制提供合适的细胞模型。方法:构建四对人源INTU序列(编号分别为INTU-29、INTU-31、INTU-33、INTU-35)si RNA质粒和空载体质粒,将空载体和四对INTU-si RNA质粒分别转染Nthy-ori-3-1细胞培养24 h,通过倒置荧光显微镜观察质粒转染细胞后的荧光表达,使用多功能酶标仪检测荧光强度,通过荧光定量PCR法验证INTU基因的沉默效率,通过蛋白质免疫印迹法验证各组细胞内INTU蛋白的表达水平,筛选沉默INTU基因效率最佳的质粒。结果:空载体和INTU-si RNA质粒转染入Nthy-ori-3-1细胞24 h后,倒置荧光显微镜和荧光酶标仪检测结果显示空载体和四组INTU-si RNA组呈现绿色的荧光表达,与正常组相比,空载体与四组INTU-si RNA组的荧光强度均显著高于正常组(P<0.01),提示质粒均转染成功。荧光定量PCR结果显示,与正常组和空载体组相比,四组INTU-si RNA组的INTU基因m RNA相对表达量均显著降低(P<0.01),其中INTU-35组表达降低最显著,INTU的m RNA表达降低了61.02%。蛋白质免疫印迹法结果显示,与正常组和空载体相比,INTU-29组和INTU-31组并无显著降低,INTU-33和INTU-35组较正常组和空载体组明显下降(P<0.05,P<0.01),其中INTU-35组最佳,INTU的蛋白表达降低了44.54%。以上结果提示INTU-35组沉默INTU基因效果最佳。结论:本研究成功构建INTU-si RNA质粒,并将该质粒成功转染人源甲状腺Nthy-ori-3-1的细胞模型。INTU-si RNA甲状腺细胞模型的构建,为进一步探索Graves病的发病机制奠定了实验基础。 展开更多
关键词 INTU-si RNA质粒 人甲状腺Nthy-ori-3-1细胞 GRAVES病
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SSTR1对胶质瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响
8
作者 李慧 韩曦 《齐齐哈尔医学院学报》 2025年第21期2013-2020,共8页
目的分析神经胶质瘤细胞中生长抑素受体亚型1(SSTR1)的表达,并探讨沉默SSTR1对胶质瘤细胞增殖、凋亡和迁移相关基因的影响。方法采用qRT-PCR和Western blot技术检测正常人星形胶质细胞(NHA)与五种胶质瘤细胞系(U251、U87MG、U373、A172... 目的分析神经胶质瘤细胞中生长抑素受体亚型1(SSTR1)的表达,并探讨沉默SSTR1对胶质瘤细胞增殖、凋亡和迁移相关基因的影响。方法采用qRT-PCR和Western blot技术检测正常人星形胶质细胞(NHA)与五种胶质瘤细胞系(U251、U87MG、U373、A172和U118MG)中SSTR1的表达水平。利用RNA干扰技术(siRNA)沉默U251细胞中的SSTR1表达,随后通过CCK-8实验、Transwell迁移实验和划痕实验评估SSTR1沉默对胶质瘤细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响。此外,使用裸鼠异种移植模型研究SSTR1沉默对胶质瘤体内生长的影响。结果胶质瘤细胞系中SSTR1的mRNA和蛋白表达水平明显高于NHA细胞,尤其在U251细胞中表达相对较高。沉默SSTR1后,胶质瘤细胞的增殖能力显著下降,细胞周期相关基因cyclin-D1和cyclin-E的表达水平显著降低。同时,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达下降,促凋亡蛋白Bax的表达上升,细胞凋亡率显著增加。沉默SSTR1还导致迁移相关基因MMP-2和MMP-9的表达水平降低,细胞迁移能力显著下降。体内实验显示,沉默SSTR1可减少异种移植小鼠的肿瘤体积和重量,并降低肿瘤组织中Ki67阳性信号,抑制肿瘤增殖。结论SSTR1在胶质瘤细胞中的表达上调,沉默SSTR1能够抑制细胞增殖和迁移,并促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 胶质瘤 SSTR1 sirna 增殖 细胞周期 迁移
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siRNA介导的NFBD1表达沉默对HeLa细胞增殖与凋亡的影响 被引量:7
9
作者 卜友泉 杨正梅 +3 位作者 兰欢 镇磊 刘革力 宋方洲 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期943-949,共7页
NFBD1,也称MDC1,是1个参与细胞内DNA损伤后细胞应答反应的重要分子.为探讨NFBD1在细胞增殖和凋亡中的作用及其作为分子靶点用于肿瘤治疗的潜在价值,本研究采用siRNA技术抑制NFBD1的表达,并观察了其对人宫颈癌细胞HeLa细胞增殖和细胞凋... NFBD1,也称MDC1,是1个参与细胞内DNA损伤后细胞应答反应的重要分子.为探讨NFBD1在细胞增殖和凋亡中的作用及其作为分子靶点用于肿瘤治疗的潜在价值,本研究采用siRNA技术抑制NFBD1的表达,并观察了其对人宫颈癌细胞HeLa细胞增殖和细胞凋亡的影响.半定量RT-PCR和蛋白质印迹分析结果表明,筛选到的短链NFBD1 siRNA能有效抑制内源NFBD1的表达,抑制程度约100%.细胞生长曲线分析结果表明,siRNA介导的NFBD1表达沉默导致HeLa细胞生长增殖的显著抑制.FACS分析结果表明,NFBD1表达抑制导致sub-G1峰的出现,同时蛋白质印迹分析观察到了caspase 3和PARP(poly-ADP-ribose polymerase)的剪接激活,表明NFBD1表达抑制诱发了细胞凋亡.在该凋亡过程中,P53及其下游靶分子Bax和Puma的表达水平均没有发生明显变化,但Noxa的表达在mRNA和蛋白质水平上均显著上调,强烈提示该凋亡过程很可能是1个不依赖P53的凋亡途径,且Noxa的转录激活在该凋亡过程中可能起着重要作用.这些结果表明,NFBD1参与细胞生长增殖和凋亡的调节,是一个潜在的肿瘤治疗新靶点. 展开更多
关键词 NFBD1 sirna 细胞增殖 细胞凋亡
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利用siRNA靶向沉默Jeko-1细胞survivin mRNA基因的实验研究 被引量:6
10
作者 梁伟 张文君 +4 位作者 高青梅 陆惠娜 黄滨滨 修冰 梁爱斌 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期88-92,共5页
本研究旨在探讨Survivin基因在淋巴瘤细胞中的生物学作用,为将来以Survivin为靶点治疗套细胞淋巴瘤提供实验室证据。体外化学合成针对survivin mRNA基因的siRNA片段,通过DMRIE-C转染Jeko-1细胞,以无关siRNA、未转染的细胞为对照,采用RT-... 本研究旨在探讨Survivin基因在淋巴瘤细胞中的生物学作用,为将来以Survivin为靶点治疗套细胞淋巴瘤提供实验室证据。体外化学合成针对survivin mRNA基因的siRNA片段,通过DMRIE-C转染Jeko-1细胞,以无关siRNA、未转染的细胞为对照,采用RT-PCR和Western blot方法检测siRNA的抑制效果,利用流式细胞术检测细胞的凋亡率,用CCK-8法检测转染24、48、72 h对细胞增殖的影响。结果表明,与未转染的空白组相比,siRNA转染Jeko-1细胞后24、48、72 h survivin mRNA的相对表达量分别为0.49±0.03、0.38±0.02和0.17±0.02;细胞增殖抑制率分别为(31.2±2.1)%、(43.3±3.4)%和(52.6±2.5)%;细胞凋亡率分别为(6.3±0.5)%、(13.5±1.1)%和(23.6±1.6)%;survivin蛋白表达水平逐步减低。结论:靶向survivin的siRNA能在体外特异性下调目的基因survivin mRNA和蛋白的表达,表现出抑制Jeko-1细胞增殖和促使其凋亡的生物学效应,survivin基因有望成为淋巴瘤治疗的一个药物靶点。 展开更多
关键词 淋巴瘤 sirna 基因沉默 Jeko-1细胞 SURVIVIN
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siRNA抑制DJ-1基因表达对肺鳞癌SK-MES-1细胞生物学行为的影响 被引量:7
11
作者 魏旺丽 汤参娥 +2 位作者 詹显全 易红 李萃 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期7-13,共7页
目的:采用RNA干扰技术下调DJ-1基因在肺鳞癌细胞SK-MES-1中的表达,探讨DJ-1表达下调对SK-MES-1细胞生物学行为的影响,以期探讨DJ-1基因的功能。方法:构建靶向DJ-1基因siRNA慢病毒载体(重组慢病毒中有绿色荧光蛋白真核表达框),感染SK-ME... 目的:采用RNA干扰技术下调DJ-1基因在肺鳞癌细胞SK-MES-1中的表达,探讨DJ-1表达下调对SK-MES-1细胞生物学行为的影响,以期探讨DJ-1基因的功能。方法:构建靶向DJ-1基因siRNA慢病毒载体(重组慢病毒中有绿色荧光蛋白真核表达框),感染SK-MES-1细胞(DJ-1siRNA组),并设立慢病毒载体对照组(Control-siRNA组)及空白对照组。荧光显微镜下观察并计算感染效率,Western印迹检测各组细胞中DJ-1蛋白表达水平,M法检测细胞增殖能力,流式细胞术测定细胞周期,Transwell小室实验检测细胞体外迁移侵袭能力。结果:与Control-siRNA组及空白对照组比较,DJ-1 siRNA组的DJ-1蛋白表达受到抑制、细胞增殖能力明显减弱(P<0.01)、G1/G2期细胞数增多和S期细胞数减少表明细胞周期受阻、细胞体外迁移和侵袭能力显著减弱(P<0.01)。结论:DJ-1基因具有促进肺鳞癌细胞SK-MES-1细胞的增殖和体外迁移侵袭的作用。 展开更多
关键词 肺癌 DJ-1 sirna 细胞增殖 细胞周期 细胞迁移
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ABCE1基因siRNA表达质粒的构建及鉴定 被引量:7
12
作者 郑毛根 田大力 黄波 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期697-699,共3页
目的:构建针对人ABCE1基因siRNA表达质粒,为进一步研究该基因功能奠定基础。方法:合成含靶向ABCE1基因siRNA转录模板的茎环结构,与两端分别有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点的RNAi-Ready pSIREN-DNR-DsRed-Express质粒连接,大肠杆菌中扩增,测... 目的:构建针对人ABCE1基因siRNA表达质粒,为进一步研究该基因功能奠定基础。方法:合成含靶向ABCE1基因siRNA转录模板的茎环结构,与两端分别有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点的RNAi-Ready pSIREN-DNR-DsRed-Express质粒连接,大肠杆菌中扩增,测序鉴定。结果:转化大肠杆菌涂布平板长出阳性菌落,重组质粒电泳初步说明质粒构建成功,测序结果表明RNAi-Ready pSIREN-DNR-DsRed-Express的酶切位点BamHⅠ、HindⅢ之间有71bp的插入片段,其序列与所设计、合成的ABCE1的siRNA转录模板序列一致。结论:siRNA转录模板完整正确地插入RNAi-Ready pSIREN-DNR-DsRed-Express质粒中。 展开更多
关键词 sirna 质粒 ABCE1基因 构建
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小鼠胰岛素诱导基因1 siRNA稳定表达细胞株的建立及其对细胞胆固醇代谢的影响 被引量:4
13
作者 柯大智 陈庆伟 +2 位作者 李桂琼 邓玮 莫显刚 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第12期1445-1449,共5页
目的构建并筛选针对小鼠胰岛素诱导基因1(insulin induced gene 1,insig1)siRNA的特异性表达质粒,建立稳定转染细胞株,并观察其对小鼠巨噬细胞RAW264.7胆固醇代谢的影响。方法根据GenBank中登录的insig1基因序列及RNA干扰原则,设计3个... 目的构建并筛选针对小鼠胰岛素诱导基因1(insulin induced gene 1,insig1)siRNA的特异性表达质粒,建立稳定转染细胞株,并观察其对小鼠巨噬细胞RAW264.7胆固醇代谢的影响。方法根据GenBank中登录的insig1基因序列及RNA干扰原则,设计3个阳性克隆及1个阴性克隆序列,定向克隆入pGenesil-1质粒,构建insig1 shRNA真核表达质粒,测序鉴定后,脂质体法转染RAW264.7细胞,筛选干扰效果最佳的质粒,将其转染入RAW264.7细胞,经G418筛选建立稳定转染细胞株,采用RT-PCR及Western blot法检测转染细胞中insig1基因的转录水平及蛋白的表达水平,油红O染色观察转染细胞中胆固醇含量的变化。结果酶切及测序结果证实,insig1基因shRNA表达质粒构建正确,其中si-2为干扰效果最佳的质粒;在稳定转染的RAW264.7细胞中,si-2组insig1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平较阴性质粒组和未转染组明显降低(P<0.05),油红O颗粒含量最多。结论成功建立了insig1 siRNA稳定表达细胞株,体外模型证明了对insig1基因的干扰可促进细胞胆固醇摄取。 展开更多
关键词 胰岛素诱导基因1 sirna RAW264.7细胞 胆固醇 代谢
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siRNA抑制人高迁移率族蛋白1表达对前列腺癌PC-3增殖的影响 被引量:5
14
作者 宋登新 陈安民 +4 位作者 郭风劲 谢柏臻 廖晖 祝文涛 王江 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期339-343,共5页
目的:研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因的表达对人前列腺癌细胞PC-3增殖的影响。方法:构建真核表达载体Pgenesil-1/HMGB1 siRNA,在脂质体Lipofectamine 2000的介导下转染前列腺癌PC-3细胞株,... 目的:研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因的表达对人前列腺癌细胞PC-3增殖的影响。方法:构建真核表达载体Pgenesil-1/HMGB1 siRNA,在脂质体Lipofectamine 2000的介导下转染前列腺癌PC-3细胞株,通过RT-PCR和Western Blot检测HMGB1的mRNA及蛋白质的变化;流式细胞仪检测细胞周期;噻唑蓝(MTT)检测细胞生长曲线。观察转染后PC-3细胞HMGB1基因表达和体外增殖活性的变化。结果:成功构建siRNA表达载体Pgenesil-1/HMGB1 siRNA,所获表达载体转染可使PC-3细胞HMGB1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),并能有效抑制PC-3增殖活性(P<0.05)。结论:应用siRNA干扰技术能有效的抑制HMGB1基因的表达,同时也可有效抑制癌细胞的体外增殖活性,为肿瘤的生物学治疗提供新思路。 展开更多
关键词 高迁移率族蛋白1 sirna 人前列腺癌细胞
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siRNA抑制HIV-1基因表达的研究 被引量:5
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作者 魏玲 刘萱 曹诚 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1007-1013,共7页
RNA干扰(RNAinterfering,RNAi)现象是动植物体内的一种序列特异性的、转录后基因沉默的过程.在哺乳动物细胞中,19~25个核苷酸长短的双链siRNA(smallinterferingRNA)可有效地抑制基因表达.利用pBS/H1SP载体,它表达的双链RNA的转录产物... RNA干扰(RNAinterfering,RNAi)现象是动植物体内的一种序列特异性的、转录后基因沉默的过程.在哺乳动物细胞中,19~25个核苷酸长短的双链siRNA(smallinterferingRNA)可有效地抑制基因表达.利用pBS/H1SP载体,它表达的双链RNA的转录产物可以用来抑制特异性HIV-1基因的表达.在siRNA实验中,为了比较由H1启动子转录的siRNA在细胞内的作用,使用以绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因的载体——pEGFP-C1质粒,在荧光显微镜下,很容易地看到EGFP在细胞中表达.将HIV-1siRNA表达载体与表达相应EGFP-HIV融合基因的质粒,共转染人胚肾293细胞,结果表明,和对照质控载体相比,转染了pHIV-siRNA质粒的细胞中EGFP-HIV的表达得到显著抑制.通过该途径,筛选出能抑制HIV-1基因表达的有效siRNA.此外,还在同一载体上表达两种或三种siRNA,分别针对不同的HIV基因,获得了良好的抑制效果. 展开更多
关键词 sirna 双链RNA 基因沉默 HW-1
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siRNA靶向沉默MALAT-1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K/ATK通路的影响 被引量:5
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作者 曹亚莉 李宏慧 +3 位作者 邵渊 朱云 黄建华 张鹏飞 《现代肿瘤医学》 CAS 2020年第6期892-896,共5页
目的:探究siRNA靶向沉默MALAT-1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响。方法:分别以10、20、30、40、50 nmol/L浓度的siRNA靶向沉默体外培养的人鼻咽癌细胞株CNE的基因MALAT-1,以实时荧光定量(qRT-PCR)分别在24、48 h后检测MALAT... 目的:探究siRNA靶向沉默MALAT-1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响。方法:分别以10、20、30、40、50 nmol/L浓度的siRNA靶向沉默体外培养的人鼻咽癌细胞株CNE的基因MALAT-1,以实时荧光定量(qRT-PCR)分别在24、48 h后检测MALAT-1 mRNA表达水平,筛选合适的siRNA作用浓度和时间。将CNE细胞分为三组:空白对照组、siRNA阴性对照组和siRNA组,siRNA处理细胞后,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,采用流式细胞技术检测细胞凋亡情况,Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、caspase-3)及PI3K/AKT通路蛋白(PI3K、ATK、p-AKT)表达情况。结果:选定30 nmol/L浓度的siRNA作用于CNE细胞48 h;siRNA处理细胞后,与空白对照组相比,siRNA组细胞增殖率明显降低,凋亡率明显升高,Bax、caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);AKT蛋白表达无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。siRNA阴性对照组各指标均无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:siRNA可靶向沉默MALAT-1,抑制鼻咽癌细胞增殖,促进其凋亡,可能是通过抑制PI3K/AKT通路实现的。 展开更多
关键词 sirna沉默 增殖 凋亡 PI3K/AKT通路 MALAT-1 鼻咽癌细胞
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叶酸修饰的聚乙烯亚胺聚合物载PD-L1 siRNA体外靶向胃癌细胞的研究 被引量:3
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作者 罗信 彭霞 +3 位作者 陈广成 侯婧瑛 吴淑云 王凌云 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2179-2187,共9页
目的:构建高效的siRNA纳米载体靶向SGC-7901胃癌细胞,并下调胃癌表达的程序性死亡配体1(PD-L1)。方法:检测叶酸(FA)-PEG-SS-PEI-SPION纳米载体与siRNA复合后的粒径、电位等表征;体外实验检验siRNA的结合能力、复合物细胞毒性、细胞摄入... 目的:构建高效的siRNA纳米载体靶向SGC-7901胃癌细胞,并下调胃癌表达的程序性死亡配体1(PD-L1)。方法:检测叶酸(FA)-PEG-SS-PEI-SPION纳米载体与siRNA复合后的粒径、电位等表征;体外实验检验siRNA的结合能力、复合物细胞毒性、细胞摄入能力及转染效率;磁共振(MR)成像检测示踪能力;检验胃癌细胞PD-L1下调效应及共培养T细胞的细胞因子水平。结果:N/P比值为10时,FA-PEG-SS-PEI-SPION完全复合siRNA,形成电位为(9.14±0.80)m V、粒径为(116.7±2.5)nm的多聚复合物。靶向组的转染率为(95.06±0.44)%,与非靶向组的(93.87±1.05)%相当;平均荧光强度为1 892.67±81.51,高于非靶向组的1 324.33±186.58(P<0.05)。普鲁士蓝染色和激光共聚焦显微镜成像证实了复合物的细胞摄入。体外MR成像验证了聚合物的MR造影成像能力。靶向组PD-L1的mRNA最低相对表达量为9.07%±0.79%,Western blot显示PD-L1的表达显著降低。共培养实验显示IFN-γ和TNF-α的分泌水平增加,IL-10的分泌水平降低(P<0.05)。结论:本研究构建了FA-PEG-SS-PEI-SPION纳米载体,并证明了其体外靶向细胞及载siRNA下调PD-L1表达的能力和MR示踪的能力,是一种高效和安全的靶向治疗纳米载体。 展开更多
关键词 程序性死亡配体1 胃癌 叶酸 磁共振成像 sirna
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siRNA诱导CyclinB1沉默增加HePG2细胞对柔红霉素的敏感性(英文) 被引量:2
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作者 张勇 祖旭宇 +2 位作者 罗唯师 唐圣松 蒋宇扬 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第6期551-557,共7页
探讨了CyclinB1在肝癌药物耐受形成中的作用.用siRNA技术沉默CyclinB1在细胞中的表达,使用流式细胞仪技术分析细胞的凋亡和周期分布,用细胞克隆形成能力分析和细胞毒性实验分析细胞的增殖能力.由siRNA诱导的CyclinB1下调导致40%~50%肝... 探讨了CyclinB1在肝癌药物耐受形成中的作用.用siRNA技术沉默CyclinB1在细胞中的表达,使用流式细胞仪技术分析细胞的凋亡和周期分布,用细胞克隆形成能力分析和细胞毒性实验分析细胞的增殖能力.由siRNA诱导的CyclinB1下调导致40%~50%肝癌细胞阻滞在G2/M期,并显著抑制肝癌细胞的单克隆形成能力;柔红霉素联合CyclinB1 siRNA较单独使用柔红霉素能更加有效地导致肝癌细胞凋亡,而在人正常肝细胞HL-7702中这种现象不明显.实验结果表明针对于CyclinB1的靶向性下调与肝癌药物的联合使用将有可能成为肝癌治疗的新策略. 展开更多
关键词 CYCLINB1 sirna 柔红霉素 药物协同作用 耐药性
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Caveolin-1 siRNA对与乳腺癌细胞共培养的成纤维细胞自噬体表达影响的研究 被引量:3
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作者 石小玉 肖亮 +3 位作者 熊丽霞 孟闯 齐观云 李文林 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2015年第2期212-220,共9页
为了探索乳腺癌相关的人成纤维细胞中窖蛋白-1(Caveolin-1,Cav-1)与自噬体的相关性及其对乳腺癌细胞的作用,该研究采用si RNA技术干扰成纤维细胞株ESF表达Cav-1,q RTPCR和Western blot确定si RNA干扰Cav-1表达的效果;Transwell insert... 为了探索乳腺癌相关的人成纤维细胞中窖蛋白-1(Caveolin-1,Cav-1)与自噬体的相关性及其对乳腺癌细胞的作用,该研究采用si RNA技术干扰成纤维细胞株ESF表达Cav-1,q RTPCR和Western blot确定si RNA干扰Cav-1表达的效果;Transwell insert方法共培养乳腺癌细胞株BT474和ESF细胞,单丹磺酰戊二胺(monodansylcadaverin,MDC)染色、激光共聚焦显微镜观察Cav-1 si RNA对自噬体表达的影响;q RT-PCR和Western blot检测Cav-1 si RNA对微管相关蛋白1轻链3II(microtubule-associated protein 1 light chain 3 II,LC3II)表达的影响;CCK-8方法检测BT474细胞的增殖和活力。结果显示,靶向Cav-1的si RNA下调了ESF细胞中Cav-1的表达;Cav-1 si RNA促进ESF细胞自噬体和LC3II的表达,转染了Cav-1 si RNA的ESF细胞与BT474细胞共培养对自噬体和LC3II的作用更为显著;BT474细胞在ESFsi Cav-1(ESF cells transfected with Cav-1 si RNA)细胞共培养条件下增殖显著加快。研究表明,Cav-1 si RNA促进了与乳腺癌细胞共培养的成纤维细胞自噬体和LC3II的表达,同时加快了与成纤维细胞共培养的乳腺癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 CAVEOLIN-1 成纤维细胞 乳腺癌 自噬体 sirna LC3Ⅱ
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组蛋白去乙酰化酶1 siRNA对HeLa细胞生长和凋亡的影响 被引量:9
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作者 李娜 于世英 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期47-49,58,共4页
目的研究组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases-1,HDAC-1)siRNA对宫颈癌HeLa细胞HDAC-1蛋白表达、细胞生长和凋亡的影响。方法HDAC-1 siRNA沉默HDAC-1蛋白;Western blot技术检测HDAC-1蛋白;MTT法和克隆形成实验检测细胞生长抑制情况... 目的研究组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases-1,HDAC-1)siRNA对宫颈癌HeLa细胞HDAC-1蛋白表达、细胞生长和凋亡的影响。方法HDAC-1 siRNA沉默HDAC-1蛋白;Western blot技术检测HDAC-1蛋白;MTT法和克隆形成实验检测细胞生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果HDAC-1 siRNA转染48 h可明显下调HeLa细胞HDAC-1蛋白表达;下调HDAC-1表达明显降低HeLa细胞克隆形成率,抑制细胞增殖;下调HDAC-1诱导HeLa细胞凋亡。结论HDAC-1 siRNA可能通过诱导凋亡抑制HeLa细胞生长。 展开更多
关键词 组蛋白去乙酰化酶1 sirna 子宫颈癌 细胞凋亡
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