CHO-1助辛烷值剂在催化裂化装置上的应用 被引量：1

1

作者 俞华信 霍永清 《石油炼制》 CSCD 1990年第1期24-29,共6页

本文介绍CHO－1助辛烷值剂在120×1064t／a催化裂化装置上的使用结果。当系统藏是量中助辛烷值剂占13．4％时，加工石蜡基原料，汽油RON从88．6－89．1提高到91－91．3，MON从78．5－78．7提高到79．7－80。对于加工不同种类原油的... 本文介绍CHO－1助辛烷值剂在120×1064t／a催化裂化装置上的使用结果。当系统藏是量中助辛烷值剂占13．4％时，加工石蜡基原料，汽油RON从88．6－89．1提高到91－91．3，MON从78．5－78．7提高到79．7－80。对于加工不同种类原油的重馏分油或掺炼大庆减压渣油，采用不同回炼比或单程裂化，以及使用CO助燃剂或金属钝化剂，CHO－1助辛烷值剂均能适应。 展开更多

关键词 cho-1 助辛烷值剂 催化裂化装置 石油炼制

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CHO-hm_1R工程细胞株的建立及乙酰胆碱对其细胞内钙离子浓度的影响 被引量：3

2

作者 余少平 熊永炎 +5 位作者 王琼 贺艳丽 伍仕敏 高月 高沛永 刘永学 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期17-21,共5页

目的　获得表达人毒蕈碱样乙酰胆碱Ⅰ型受体(hm1 R)的工程细胞株 (CHO hm1 R)并鉴定表达受体是否具有相应的功能活性。方法　以健康人基因组DNA为模板 ,PCR扩增hm1 R之cDNA ,并构建pcDNA3 .1 (+) hm1 R表达载体 ,转染CHO K1 细胞获得CH... 目的　获得表达人毒蕈碱样乙酰胆碱Ⅰ型受体(hm1 R)的工程细胞株 (CHO hm1 R)并鉴定表达受体是否具有相应的功能活性。方法　以健康人基因组DNA为模板 ,PCR扩增hm1 R之cDNA ,并构建pcDNA3 .1 (+) hm1 R表达载体 ,转染CHO K1 细胞获得CHO hm1 R工程细胞株 ,将不同浓度的乙酰胆碱作用于细胞 ,以Fura 2为荧光探针检测细胞内钙离子浓度变化 ;同时 ,观察阿托品预处理对乙酰胆碱作用的影响。结果　成功得到CHO hm1 R工程细胞株 ;乙酰胆碱 1 0 ,1 0 0 μmol·L-1 均可增高细胞内钙离子浓度 ,此反应可被阿托品 50 0 μmol·L-1 完全阻断。结论　CHO hm1 R工程细胞株可以用于hm1 R配基的检测 。 展开更多

关键词 受体 毒草碱样 乙酰胆碱 阿托品 钙离子浓度 细胞 CHO—K1

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猪TOLL样受体2基因在CHO-K1细胞中的表达 被引量：3

3

作者 房永祥 景志忠 +3 位作者 陈国华 段凤云 蒙学莲 窦永喜 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第1期14-17,共4页

将含猪TLR2(猪Toll样受体2,pTLR2)基因的真核表达载体PcDNA3.1/CT-GFP-pTLR2,采用脂质体法转染到CHO-K1细胞,用G418持续筛选获得了阳性细胞克隆.阳性细胞克隆系经PCR和RT-PCR检测表明:pTLR2基因得到稳定整合并能成功地转录.荧光显微镜观... 将含猪TLR2(猪Toll样受体2,pTLR2)基因的真核表达载体PcDNA3.1/CT-GFP-pTLR2,采用脂质体法转染到CHO-K1细胞,用G418持续筛选获得了阳性细胞克隆.阳性细胞克隆系经PCR和RT-PCR检测表明:pTLR2基因得到稳定整合并能成功地转录.荧光显微镜观察,转染细胞可见绿色荧光,表明获得了表达pTLR2的克隆细胞系. 展开更多

关键词 猪Toll样受体2 cho-K1细胞 转染

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人Delta-like-1胞外区在CHO细胞的表达纯化及对造血祖细胞的扩增作用 被引量：7

4

作者 鲁茁壮 吴祖泽 +3 位作者 刘红军 张群伟 贾向旭 王立生 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第3期222-226,共5页

Notch信号通路在调控造血干细胞的增殖分化中具有重要作用。本研究克隆表达人Notch配体Delta like 1(Dll 1)的胞外区 (hDll 1ext) ,并观察其对脐带血造血祖细胞的扩增作用。从人骨髓单个核细胞中提取总RNA ,用RT PCR的方法扩增Delta lik... Notch信号通路在调控造血干细胞的增殖分化中具有重要作用。本研究克隆表达人Notch配体Delta like 1(Dll 1)的胞外区 (hDll 1ext) ,并观察其对脐带血造血祖细胞的扩增作用。从人骨髓单个核细胞中提取总RNA ,用RT PCR的方法扩增Delta like 1基因胞外区 ,克隆到T载体。测序正确后 ,亚克隆到pcDNA3.1/Myc His(+)A表达载体。用脂质体转染CHO细胞 ,G4 18筛选单克隆 ,Western印迹检测hDll 1ext的分泌表达情况。选择表达量高的细胞克隆 ,扩增并收集上清。用金属亲和层析柱从上清中纯化融合蛋白hDll 1ext。利用免疫磁性分离方法分离脐带血CD34+ 细胞。结果表明 ,RT PCR方法检测到脐带血CD34+ 细胞表达Notch 1受体。在含rhIL 3,rhSCF及rhVEGF的脐带血CD34+ 细胞无血清培养体系中 ,加入纯化的hDll 1ext,通过集落培养检测hDll 1ext对造血祖细胞的扩增作用。含hDll 1ext组中CFU Mix和HPP CFC数量是对照组的 1.5倍 ,结论 :重组的hDll 展开更多

关键词 Delta-like-1 NOTCH CHO细胞 造血祖细胞

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人糖基磷脂酰肌醇(GPI)-B7-1真核表达载体的构建及表达 被引量：3

5

作者 熊茂林 宋畅 +4 位作者 罗荣城 罗超权 李民友 李秀英 朱振宇 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期154-158,共5页

目的在仓鼠卵巢细胞CHO细胞中高效表达糖基磷脂酰肌醇GPI-B7-1(B7-1即CD80)融合蛋白,获得大量融合蛋白以研究GPI-B7-1在肿瘤治疗中的应用潜力。方法构建真核表达载体pc31/GPI-B7-1,利用脂质体lipofectamine2000将其转染CHO细胞,G418加... 目的在仓鼠卵巢细胞CHO细胞中高效表达糖基磷脂酰肌醇GPI-B7-1(B7-1即CD80)融合蛋白,获得大量融合蛋白以研究GPI-B7-1在肿瘤治疗中的应用潜力。方法构建真核表达载体pc31/GPI-B7-1,利用脂质体lipofectamine2000将其转染CHO细胞,G418加压筛选抗性克隆,流式细胞仪检测细胞膜上GPI-B7-1融合蛋白的表达情况,SDS-PAGE、Westernblot分析鉴定其免疫活性。结果真核表达载体转染CHO细胞经G418筛选后,流式细胞分析证实为GPI锚定蛋白,SDS-PAGE在60kD左右蛋白表达量明显高于对照组,在Westernblot在60kD左右有一条强的棕色条带,说明GPI-B7-1在CHO中得到表达。结论在CHO细胞中高效表达GPI-B7-1融合蛋白,可获得大量融合蛋白,对进一步研究GPI-B7-1在肿瘤治疗中的应用打下基础。 展开更多

关键词 糖基磷脂酰肌醇类 基因 B7-1 CHO细胞 真核表达 印迹法 蛋白质

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糖基化磷脂酰肌醇锚定型人B7-1融合蛋白在CHO/DHFR-细胞的稳定表达 被引量：2

6

作者 张淑敏 畅继武 +3 位作者 随志方 李振莉 马富玲 王馨 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期532-534,539,共4页

目的建立稳定表达糖基化磷脂酰肌醇锚定型人B71(GPIB71)的CHO/DHFR-细胞表达体系。方法用Lipofectin介导法将真核细胞高效表达载体pCDNA3GPIB71和pSV40DHFR共转染CHO/DHFR-细胞,经免疫荧光流式细胞术检测,并提取膜蛋白进行Westenblot检... 目的建立稳定表达糖基化磷脂酰肌醇锚定型人B71(GPIB71)的CHO/DHFR-细胞表达体系。方法用Lipofectin介导法将真核细胞高效表达载体pCDNA3GPIB71和pSV40DHFR共转染CHO/DHFR-细胞,经免疫荧光流式细胞术检测,并提取膜蛋白进行Westenblot检测。结果经G418筛选和MTX加压扩增,获得高效表达目的蛋白的细胞株。膜蛋白经WesternBlot检测具有生物活性。结论GPIB71在CHO/DHFR-细胞中高效表达,为临床应用与研究奠定了基础。 展开更多

关键词 GPI-B7-1 CHO/DHFR^-细胞 真核表达

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人MAdCAM-1真核表达载体的构建及其表达细胞株的建立 被引量：1

7

作者 赖燕来 高杰英 +1 位作者 陈志华 孔祥英 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期9-12,共4页

目的:建立表达人MAdCAM-1的细胞模型。方法:从pUC21/hMAdCAM-1质粒酶切下hMAdCAM-1全长cDNA片段,将其克隆于巨细胞病毒载体pCIneo中,构建出由CMV启动子控制的重组真核表达载体pCIneo-hMAd,经脂质体介导转染至CHO细胞,以G418筛选抗性克... 目的:建立表达人MAdCAM-1的细胞模型。方法:从pUC21/hMAdCAM-1质粒酶切下hMAdCAM-1全长cDNA片段,将其克隆于巨细胞病毒载体pCIneo中,构建出由CMV启动子控制的重组真核表达载体pCIneo-hMAd,经脂质体介导转染至CHO细胞,以G418筛选抗性克隆。结果:筛选出的阳性克隆细胞以免疫荧光和免疫酶标染色法检测,表明有人MAdCAM-1分子表达;其细胞裂解物经免疫印迹分析,证实约63 kD的新增蛋白带与抗 hMAdCAM-1抗体有特异性结合反应;淋巴细胞粘附实验结果提示表达产物具有一定的功能活性。结论:成功地获得了表达人MAdCAM-1分子的细胞株,为进一步研究其生物学功能及其作用机制奠定了基础。 展开更多

关键词 粘膜血管地址素 真核表达 中华仓鼠 卵巢细胞 MADCAM-1 真核表达载体

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胰岛素样生长因子1稳定表达CHO细胞株的建立 被引量：1

8

作者 周海斌 郑祖根 +2 位作者 董启榕 周晓中 谢宗刚 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期52-54,共3页

目的建立稳定的高效表达胰岛素样生长因子1(IGF-1)的中国仓鼠卵巢细胞株(CHO),以便于大量生产纯化IGF-1蛋白。方法采用脂质体将IGF-1的表达载体pSec-IGF-1导入CHO-K1细胞中。转染后用含潮霉素B(hygromycinB)的选择性培养液进行筛选,挑... 目的建立稳定的高效表达胰岛素样生长因子1(IGF-1)的中国仓鼠卵巢细胞株(CHO),以便于大量生产纯化IGF-1蛋白。方法采用脂质体将IGF-1的表达载体pSec-IGF-1导入CHO-K1细胞中。转染后用含潮霉素B(hygromycinB)的选择性培养液进行筛选,挑取耐药克隆,收集细胞培养上清,用Westernblot法及ELISA法进行检测,并用免疫组化法对阳性克隆进行分析。结果转染细胞在选择性培养液中生长出多个耐药克隆,Westernblot检测示8个克隆表达上清出现与预计值相符的约7·7kDa的特异性条带;ELISA结果显示有2株表达量在2·0μg/ml以上;免疫组化检测,筛选到的阳性克隆细胞有IGF-1的表达。结论建立了稳定的高效表达IGF-1的CHO细胞株。 展开更多

关键词 人胰岛素样生长因子1 基因转染 CHO细胞株

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人胰岛素样生长因子-1的真核表达及其生物学功能研究 被引量：6

9

作者 周海斌 郑祖根 董启榕 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期27-29,共3页

目的:构建人胰岛素样生长因子1(IGF-1)分泌型真核表达载体,并检测表达产物的生物活性。方法:用RT-PCR法从人肝细胞克隆IGF-1基因,并将其连入Psec Tag/FRT/V5-His载体,用脂质体法转染CHO细胞,将转染细胞上清培养骨髓基质干细胞,用MTT法... 目的:构建人胰岛素样生长因子1(IGF-1)分泌型真核表达载体,并检测表达产物的生物活性。方法:用RT-PCR法从人肝细胞克隆IGF-1基因,并将其连入Psec Tag/FRT/V5-His载体,用脂质体法转染CHO细胞,将转染细胞上清培养骨髓基质干细胞,用MTT法测定骨髓基质干细胞的增殖情况。结果:成功扩增210bp的IGF-1基因,表达产物经SDS-PAGE分析及Western blotting检测具有7.7kD特异性条带。骨髓基质干细胞的增殖随转染细胞上清的浓度、转染细胞上清培养时间的增加而增加。结论:成功构建分泌型IGF-1真核表达载体,其表达产物对骨髓基质干细胞具有促增殖作用。 展开更多

关键词 骨髓间质干细胞 真核表达 CHO细胞 胰岛素样生长因子I

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S1P1受体细胞模型的构建及其功能特性的初步研究 被引量：1

10

作者 胡为民 唐恩洁 +2 位作者 杨健 敬保迁 任碧轩 《西部医学》 2008年第6期1147-1149,共3页

目的构建1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1P1)的细胞模型,初步探讨其介导的功能特性。方法用PolyFect,将包含全长人S1P1编码区与EGFP融合基因的载体HA-S1P1-Myc-EGFP-N1转入CHO细胞,经G418筛选,获得S1P1-EGFP-CHO稳定细胞株。以空载体pEGFP-N1转... 目的构建1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1P1)的细胞模型,初步探讨其介导的功能特性。方法用PolyFect,将包含全长人S1P1编码区与EGFP融合基因的载体HA-S1P1-Myc-EGFP-N1转入CHO细胞,经G418筛选,获得S1P1-EGFP-CHO稳定细胞株。以空载体pEGFP-N1转染的CHO稳定细胞株作为阴性对照,镜下观察细胞的形态。100nM FTY720处理S1P1-EGFP-CHO细胞5、24小时后用荧光显微镜观察S1P1在细胞上的表达。结果成功构建S1P1-EGFP-CHO细胞模型,表达S1P1的细胞变圆,FTY720导致该细胞模型的S1P1长时间内化。结论S1P1-EGFP-CHO细胞可作为S1P1功能特性研究的细胞模型,S1P1能使细胞变圆,FTY720能导致S1P1长时间内化。 展开更多

关键词 1型1-磷酸鞘氨醇受体 FTY720 内化 细胞变圆 CHO细胞

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hOP-1全长基因在CHO细胞的表达及活性检测

11

作者 岳玲 史俊南 +3 位作者 柴玉波 孙叶方 荫俊 文玲英 《重庆医学》 CAS CSCD 2007年第10期952-954,共3页

目的对hOP-1全长基因在真核CHO细胞的表达产物进行鉴定及活性检测,为临床和科研工作获得稳定高活性OP-1蛋白质提供依据。方法采用ELISA、SDS-PAGE和Western Blot免疫印迹法鉴定目的基因表达产物;并进行表达产物小鼠肌肉内埋置活性成骨... 目的对hOP-1全长基因在真核CHO细胞的表达产物进行鉴定及活性检测,为临床和科研工作获得稳定高活性OP-1蛋白质提供依据。方法采用ELISA、SDS-PAGE和Western Blot免疫印迹法鉴定目的基因表达产物;并进行表达产物小鼠肌肉内埋置活性成骨实验。结果经ELISA、SDS-PAGE、Western Blot鉴定筛选,得到稳定表达hOP-1的CHO细胞株。小鼠肌肉内埋植实验,证实有骨细胞形成。结论hOP-1全长基因转染真核CHO细胞,表达产物rhOP-1具有良好的生物学活性。 展开更多

关键词 rhOP-1全长基因 CHO细胞 生物学活性

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抗人B7-1及B7-2双特异性抗体的构建、表达及与抗原结合的特性分析

12

作者 沈立军 孔永 +5 位作者 王婧 朱莹 蔡磊 朱玉强 沈辉 邱玉华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期927-931,共5页

目的:构建及表达抗人B7-1及B7-2双特异性抗体(anti-B7-1/B7-2-Bs Ab),并分析其与相应抗原结合的特性。方法:采用PCR的方法分别从重组质粒中克隆出抗人B7-1及B7-2单链抗体基因,将其克隆入p IRES2-EGFP表达载体,并用6×His为纯化的标... 目的:构建及表达抗人B7-1及B7-2双特异性抗体(anti-B7-1/B7-2-Bs Ab),并分析其与相应抗原结合的特性。方法:采用PCR的方法分别从重组质粒中克隆出抗人B7-1及B7-2单链抗体基因,将其克隆入p IRES2-EGFP表达载体,并用6×His为纯化的标签。用脂质体法将两个基因转染入中华仓鼠卵巢细胞(CHO),经G418加压筛选高表达株,扩大培养并收集上清纯化。分析抗体对膜型B7-1及B7-2的识别及与其相应抗原的结合能力。以天然高表达B7-1及B7-2分子的Raji细胞用丝裂霉素处理后作为APC,人PBMC为效应细胞,分析抗体通过阻断B7-CD28共刺激信号对PBMC增殖的影响。结果:获得了稳定表达抗人B7-1/B7-2-Bs Ab的CHO细胞株及相应的抗体。该抗体与B7-1及B7-2基因转染细胞株L929-B7-1及L929-B7-2的阳性结合率分别为99.5%及62.0%。Anti-B7-1/B7-2-Bs Ab对抗人B7-1及B7-2单链抗体的竞争结合率分别为0.4%及32.4%。Anti-B7-1/B7-2-Bs Ab通过阻断B7-CD28共刺激信号使PBMC的增殖效应仅为阴性对照组的59.7%。结论:成功构建了稳定分泌抗人B7-1/B7-2-Bs Ab的CHO细胞株(命名为SA-VI)。该抗体可以识别B7-1及B7-2分子并具有良好的生物学活性。 展开更多

关键词 B7-1 B7-2 双特异性抗体 CHO 共表达

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人黑色素浓集激素1型受体真核表达载体的构建及稳定转染CHO细胞系的建立

13

作者 袁成福 杨俊霞 +5 位作者 魏丽丽 石华 陈济 易发平 马永平 宋方洲 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期5-8,共4页

目的构建人黑色素浓集激素1型受体(MCHR1)真核表达载体,转染CHO细胞,建立稳定转染的CHO细胞系。方法采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR1基因的全长cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),... 目的构建人黑色素浓集激素1型受体(MCHR1)真核表达载体,转染CHO细胞,建立稳定转染的CHO细胞系。方法采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR1基因的全长cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染CHO细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的CHO细胞系,用RT-PCR、Westernblot及免疫荧光法检测MCHR1的表达。结果成功构建了pcDNA3.1(+)/MCHR1真核表达载体,并建立了稳定转染的CHO细胞系,成功地表达了目的基因。结论真核表达载体的构建和稳定转染CHO细胞系的建立为进一步研究MCHR1功能奠定了良好的实验基础。 展开更多

关键词 受体 黑色素浓集激素 1型 真核表达载体 CHO细胞 基因表达 转染

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ICAM-1-GFP的构建及其与Molt-4细胞的结合(英文)

14

作者 陈卫华 达万明 高春记 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第3期650-655,共6页

本研究构建人细胞间黏附分子1(ICAM-1)全长基因的真核表达载体pEGFP-C1-ICAM-1,转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)细胞株,并检测其在CHO细胞中的表达及与Molt-4细胞的结合。采用RT-PCR法从健康人外周血中分离单个核细胞,钓取ICAM-1全长基因(... 本研究构建人细胞间黏附分子1(ICAM-1)全长基因的真核表达载体pEGFP-C1-ICAM-1,转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)细胞株,并检测其在CHO细胞中的表达及与Molt-4细胞的结合。采用RT-PCR法从健康人外周血中分离单个核细胞,钓取ICAM-1全长基因(1622bp),与pMD18-T载体连接做全自动序列测定。将测序正确的克隆质粒pMD18-T-ICAM-1和表达载体pEGFP-C1分别用HindⅢ和Ⅰ进行双酶切,应用基因重组技术构建ICAM-1全长基因真核表达载体pEGFP-C1-ICAM-1,质粒经HindⅢ和SacII双酶切和PCR电泳鉴定后,采用脂质体转染法转染CHO细胞,并进行G418筛选。用RT-PCR、流式细胞术和荧光显微术检测ICAM-1-GFP的表达及亚细胞的定位,用检测ICAM-1-GFP/CHO细胞与Molt-4细胞的结合能力评价ICAM-1-GFP融合蛋白的功能。结果表明:重组质粒经限制性酶切鉴定得到与ICAM-1全长基因长度一致(1622bp)的酶切产物;测序分析证实,PCR产物与GenBank上登录的ICAM-1基因(NM_000201)序列完全一致,表明成功地完成了ICAM-1的扩增和表达载体的构建;荧光显微镜下可见转染的CHO细胞有绿色荧光蛋白的表达,表达的融合蛋白较均匀地分布于整个细胞;FACS检测ICAM-1-GFP的荧光转染率为(13±5.5)%,表明ICAM-1-GFP基因进入到CHO细胞并获得了有效表达,成功构建了ICAM-1-GFP/CHO细胞,并且ICAM-1-GFP/CHO细胞能够结合PMA处理的Molt-4细胞。结论:成功构建了ICAM-1-GFP真核表达载体,构建的ICAM-1-GFP真核表达载体在CHO细胞内稳定表达,ICAM-1-GFP/CHO细胞能与Molt-4细胞结合,这为进一步研究ICAM-1分子的功能打下基础。 展开更多

关键词 细胞间黏附分子-1 增强型绿色荧光蛋白 MOLT-4细胞 CHO细胞株

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乙肝病毒S抗原和preS1抗原表位融合蛋白(S/preS1)在CHO细胞中的稳定高效表达 被引量：7

15

作者 杨振西 李世崇 +5 位作者 刘红 张苗 叶玲玲 吴彦卓 徐明波 陈昭烈 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1808-1816,共9页

含前S蛋白的重组乙型肝炎疫苗是第3代乙肝疫苗研发的重点，有望替代现在广泛使用的基因工程疫苗。构建表达乙肝病毒S抗原和preS1抗原表位（21．47位氨基酸）融合蛋白（S／preS1）的真核表达载体HMRcHEF53u／Neo-S／preSl并转染CHO—S细... 含前S蛋白的重组乙型肝炎疫苗是第3代乙肝疫苗研发的重点，有望替代现在广泛使用的基因工程疫苗。构建表达乙肝病毒S抗原和preS1抗原表位（21．47位氨基酸）融合蛋白（S／preS1）的真核表达载体HMRcHEF53u／Neo-S／preSl并转染CHO—S细胞，经ELISA和有限稀释克隆筛选获得了S／preS1表达效率高、体外培养生物学性状好的CHO细胞系10G6。Westernblotting分析证实10G6表达的S／preSI同时保留s和preSl的天然免疫原性。10G6细胞在以活细胞密度和preSI／S浓度为评价指标的连续批次培养过程中保持着稳定的目的产物表达效率和良好的生长特性。采用无血清流加培养工艺，10G6细胞的活细胞密度和preSl／s浓度分另1达至07×10^6～10×10^6cells／mL和17～20mg／L。 展开更多

关键词 乙肝病毒表面抗原 PreS1抗原表位 疫苗 CHO细胞 表达

原文传递

hK1-L-Fc融合蛋白在CHO细胞中的表达及其活性研究 被引量：1

16

作者 邓春平 陶建军 +1 位作者 侯永敏 钟翎 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期23-28,共6页

为进一步改造重组人激肽释放酶1(hK1),以期提高其生物活性,制备了通过柔性接头相连接的重组人激肽释放酶1-L-IgG1 Fc融合蛋白(hK1-L-Fc)。采用重叠延伸PCR技术构建hK1-L-Fc融合基因,克隆至表达载体pcDNA3.1,在中国仓鼠卵巢细胞(CHO-S)... 为进一步改造重组人激肽释放酶1(hK1),以期提高其生物活性,制备了通过柔性接头相连接的重组人激肽释放酶1-L-IgG1 Fc融合蛋白(hK1-L-Fc)。采用重叠延伸PCR技术构建hK1-L-Fc融合基因,克隆至表达载体pcDNA3.1,在中国仓鼠卵巢细胞(CHO-S)中表达。利用Protein A亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE、Western blotting、飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)、HPLC检测表达产物,底物法检测融合蛋白的体外活性。结果显示:成功构建pcDNA3.1-hK1-L-Fc重组表达载体;获得稳定表达融合蛋白的细胞株;无血清悬浮批式培养的表达量在0.7 mg/L以上;纯化的蛋白其纯度在95%以上,分子量约60 kDa;活性检测显示其比活性在9.2 U/mg以上,较hK1-Fc蛋白提高了18%以上。 展开更多

关键词 激肽释放酶1 融合蛋白 CHO细胞

原文传递

小凹蛋白-1介导阿托伐他汀对自发性高血压大鼠肾叶间动脉收缩反应的抑制作用

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作者 谢小萍 张海军 +3 位作者 郭艺彬 张茜 常耀明 暴军香 《临床肾脏病杂志》 2017年第10期624-630,共7页

目的肾叶间动脉收缩反应增强是高血压肾脏损伤的早期表现,是重要的预防和治疗靶点。平滑肌细胞小凹蛋白-1(caveolin-1)上调是其发生机制之一,阿托伐他汀(atorvastatin,ATVS)可通过降低胆固醇(cholesterol,CHO)调控caveolin-1表达,本研... 目的肾叶间动脉收缩反应增强是高血压肾脏损伤的早期表现,是重要的预防和治疗靶点。平滑肌细胞小凹蛋白-1(caveolin-1)上调是其发生机制之一,阿托伐他汀(atorvastatin,ATVS)可通过降低胆固醇(cholesterol,CHO)调控caveolin-1表达,本研究探讨ATVS是否通过caveolin-1抑制自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)肾叶间动脉对血管紧张素II(angiotensin,Ang II)的收缩反应。方法 12只SHR大鼠随机分为2组:SHR对照组及ATVS(50 mg·kg^(-1)·d^(-1))处理组,每组6只,6只Wistar Kyoto(WKY)大鼠作为正常对照组。采用尾套法测量大鼠尾动脉收缩压(systolic blood pressure,SBP),血管环张力描记技术检测肾叶间动脉收缩反应,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测caveolin-1和血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensin II type 1 receptor,AT1)蛋白表达,免疫沉淀和Western blot检测caveoin-1与AT1的结合。结果与WKY大鼠相比,SHR组SBP显著增高(P<0.05),肾叶间动脉对AngⅡ的收缩反应强度及敏感性均显著增强(P<0.05);4周ATVS处理显著降低SHR组SBP(P<0.05)及肾叶间动脉对AngⅡ的收缩反应强度及敏感性(P<0.05)。SHR组动脉AT1及caveolin-1的蛋白表达显著高于WKY大鼠(P<0.05),AngⅡ孵育所致caveolin-1与AT1的结合亦较WKY组显著增多(P<0.05)。ATVS处理可降低SHR组caveolin-1和AT1的蛋白表达(P<0.05),并抑制caveolin-1与AT1的结合(P<0.05),CHO孵育则可增高ATVS组caveolin-1蛋白含量并促进其与AT1的相互作用(P<0.05),同时可显著增加肾叶间动脉对AngⅡ收缩反应的强度及敏感性(P<0.05)。结论 ATVS可抑制SHR大鼠肾叶间动脉对AngⅡ的收缩反应,其机制与caveolin-1的蛋白表达降低及caveolin-1与AT1的结合减少有关。 展开更多

关键词 阿托伐他汀 高血压 血管紧张素Ⅱ 小凹蛋白-1

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环己酮肟在条形TRBS-1催化剂上的气相Beckmann重排反应 被引量：2

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作者 刘飞翔 程时标 《中外能源》 CAS 2012年第12期78-82,共5页

条形TRBS-1催化剂的主要组成为Silicalite-1分子筛,该分子筛属于具有MFI拓扑学结构的无铝全硅分子筛,是ZSM-5型结构分子筛家族中组成最简单的一种分子筛,其骨架仅含有硅原子和氧原子,基本结构单元为SiO4四面体。本文制备了条形TRBS-1催... 条形TRBS-1催化剂的主要组成为Silicalite-1分子筛,该分子筛属于具有MFI拓扑学结构的无铝全硅分子筛,是ZSM-5型结构分子筛家族中组成最简单的一种分子筛,其骨架仅含有硅原子和氧原子,基本结构单元为SiO4四面体。本文制备了条形TRBS-1催化剂用于环己酮肟气相Beckmann重排反应生产ε-己内酰胺。运用XRD、N2吸附-脱附、TEM等技术,对条形TRBS-1催化剂进行了表征。结果显示,条形TRBS-1催化剂具有MFI结构特征;BET比表面积达到360m2/g,非微孔比表面积为30m2/g,孔体积和微孔体积分别为0.48mL/g和0.15mL/g,N2吸附-脱附等温线在p/p0=0.45～0.98范围存在滞后环;条形TRBS-1催化剂的颗粒尺寸为200～300nm,大小均匀,其表面存在大量20～50nm小颗粒的黏结剂。环己酮肟在条形TRBS-1催化剂上的气相Beckmann重排反应具有很高的环己酮肟转化率和ε-己内酰胺选择性,且催化剂稳定性和再生性能良好。 展开更多

关键词 条形TRBS-1催化剂 环己酮肟(CHO) ε-己内酰胺(CPL) 气相Beckmann重排反应

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不同信号肽对GLP-1-Fc融合蛋白表达的影响 被引量：3

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作者 陈英 肖海鹏 +5 位作者 张奕敏 黄成潭 龚庆伟 马利 陈小锋 李文佳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第12期1326-1332,共7页

目的探讨不同信号肽对GLP-1-Fc融合蛋白表达的影响。方法对含7种不同信号肽(A^G)GLP-1-Fc融合蛋白的谷氨酰胺缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHOK1SV GS-KO)进行流加培养,评估含各信号肽细胞的比生长率,并检测融合蛋白的表达量、反相纯度、电... 目的探讨不同信号肽对GLP-1-Fc融合蛋白表达的影响。方法对含7种不同信号肽(A^G)GLP-1-Fc融合蛋白的谷氨酰胺缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHOK1SV GS-KO)进行流加培养,评估含各信号肽细胞的比生长率,并检测融合蛋白的表达量、反相纯度、电荷异质性组成、降解比例及糖型。同时对含最优信号肽GLP-1-Fc融合蛋白的细胞进行高密度发酵,并检测生物活性。结果含信号肽E的重组细胞比生长率略低,相应的融合蛋白表达量也略低,但反相纯度较高,酸性异构体比例较低,主峰含量最高,且降解比例较低,糖型G0F/G0F含量最高,整体质量较好,因此确定其为最佳信号肽。含信号肽E的细胞在1 L和7 L细胞反应器中发酵,RP-HPLC纯度分别高达89. 66%和89. 76%,生物活性与市售参比制剂一致。结论信号肽的筛选和优化需综合评估信号肽对融合蛋白表达量和产物关键质量属性的影响。 展开更多

关键词 信号肽 GLP-1-Fc融合蛋白 CHO细胞

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生产抗Tim3单抗CHO细胞N-1灌流高密度培养工艺研究

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作者 苏贤德 陆建胜 +2 位作者 胡伟伟 张鹏 陶玉贵 《药物生物技术》 CAS 2023年第5期464-469,共6页

通过开发高表达量、高效率重组人源化靶向Tim3的单克隆抗体细胞培养工艺,来显著降低Tim3抗体生产成本,提升药品市场可及性。本研究对CHO细胞N-1种子灌流培养工艺和生产抗Tim3单抗CHO细胞高密度培养工艺进行小试工艺开发,实现了高效细胞... 通过开发高表达量、高效率重组人源化靶向Tim3的单克隆抗体细胞培养工艺,来显著降低Tim3抗体生产成本,提升药品市场可及性。本研究对CHO细胞N-1种子灌流培养工艺和生产抗Tim3单抗CHO细胞高密度培养工艺进行小试工艺开发,实现了高效细胞培养抗体生产。结论:基于交替切向流动过滤(ATF)的灌注过程,N-1种子细胞密度可达53×10^(6)cells/mL;接种至终反应器后进行超高接种密度(uHSD)的补料分批生产,细胞跳过适应期直接进行对数增殖,2 d后细胞便进入稳定期进行蛋白高效表达。对比常规补料分批式生产,细胞周期由14 d缩短为8 d,产品表达量由3.51 g/L提升至5.68 g/L,产品关键质量参数与原始工艺高度类似,生产效率提升3倍左右。研究初步表明,采用对CHO细胞N-1种子灌流培养工艺对抗Tim3单抗CHO细胞高密度培养工艺进行小试工艺开发,实现了高效细胞培养抗体生产。 展开更多

关键词 CHO细胞 N-1灌流 超高接种密度 Tim3单抗 工艺开发 高表达量 高效率

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