目的探讨力生长因子(MGF)对软骨终板干细胞(CESCs)增殖、迁移和分化的影响及其作用机制。方法招募因退行性椎间盘疾病于广西壮族自治区人民医院进行椎间盘融合手术患者,术中采集其椎间盘软骨终板组织约2 cm 3,取CESCs并进行培养。通过CC...目的探讨力生长因子(MGF)对软骨终板干细胞(CESCs)增殖、迁移和分化的影响及其作用机制。方法招募因退行性椎间盘疾病于广西壮族自治区人民医院进行椎间盘融合手术患者,术中采集其椎间盘软骨终板组织约2 cm 3,取CESCs并进行培养。通过CCK-8实验评估MGF对CESCs增殖的影响;通过Transwell实验评估MGF对CESCs迁移和侵袭能力的影响;通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot实验检测成骨、成软骨及成脂分化相关因子的表达水平,并分析细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化对MGF作用效果的影响。结果CCK-8实验结果显示,MGF可促进CESCs增殖,且呈剂量依赖性。Transwell实验结果显示,MGF可促进CESCs迁移。经ERK抑制剂PD98059干预后,MGF的促增殖作用显著降低(P<0.05)。经胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)抑制剂PQ401干预后,MGF的促迁移作用也显著降低(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示,MGF组碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)和骨钙素(OC)的mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05),聚集蛋白聚糖(AGG)、性别决定区相关转录因子-9(SOX-9)和Ⅱ型胶原(CⅡ)的mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05)。Western blot实验结果也显示,MGF组ALP、Runx2和OC的蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05),AGG、SOX-9和CⅡ的蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05)。MGF组磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)/总细胞外信号调节激酶(t-ERK)比值显著高于对照组(P<0.05),MGF+PQ401组p-ERK/t-ERK比值低于MGF组,但仍高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MGF通过诱导ERK磷酸化促进CESCs的增殖和迁移。展开更多
文摘目的探讨力生长因子(MGF)对软骨终板干细胞(CESCs)增殖、迁移和分化的影响及其作用机制。方法招募因退行性椎间盘疾病于广西壮族自治区人民医院进行椎间盘融合手术患者,术中采集其椎间盘软骨终板组织约2 cm 3,取CESCs并进行培养。通过CCK-8实验评估MGF对CESCs增殖的影响;通过Transwell实验评估MGF对CESCs迁移和侵袭能力的影响;通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot实验检测成骨、成软骨及成脂分化相关因子的表达水平,并分析细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化对MGF作用效果的影响。结果CCK-8实验结果显示,MGF可促进CESCs增殖,且呈剂量依赖性。Transwell实验结果显示,MGF可促进CESCs迁移。经ERK抑制剂PD98059干预后,MGF的促增殖作用显著降低(P<0.05)。经胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)抑制剂PQ401干预后,MGF的促迁移作用也显著降低(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示,MGF组碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)和骨钙素(OC)的mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05),聚集蛋白聚糖(AGG)、性别决定区相关转录因子-9(SOX-9)和Ⅱ型胶原(CⅡ)的mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05)。Western blot实验结果也显示,MGF组ALP、Runx2和OC的蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05),AGG、SOX-9和CⅡ的蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05)。MGF组磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)/总细胞外信号调节激酶(t-ERK)比值显著高于对照组(P<0.05),MGF+PQ401组p-ERK/t-ERK比值低于MGF组,但仍高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MGF通过诱导ERK磷酸化促进CESCs的增殖和迁移。
