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美洲商陆PaCDPK基因家族鉴定及重金属胁迫应答分析
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作者 谢坤宏 张大为 +4 位作者 刘营 贺丹 邹子湘 严明理 周定港 《分子植物育种》 北大核心 2025年第1期71-79,共9页
钙依赖性蛋白激酶(CDPKs)是植物细胞内Ca2+信号识别及转导的重要媒介,在生长发育和逆境应答时起重要作用。本研究基于美洲商陆(Phytolacca americana L.)的转录组数据,通过生物信息学对美洲商陆PaCDPK基因家族进行鉴定和分析,分析了该... 钙依赖性蛋白激酶(CDPKs)是植物细胞内Ca2+信号识别及转导的重要媒介,在生长发育和逆境应答时起重要作用。本研究基于美洲商陆(Phytolacca americana L.)的转录组数据,通过生物信息学对美洲商陆PaCDPK基因家族进行鉴定和分析,分析了该家族基因成员及理化特性、系统进化关系、保守基序和保守功能结构域等,同时分析了其在重金属锰(Mn)和镉(Cd)胁迫下的表达模式。共鉴定到16个CDPK基因,依次命名为PaCDPK1~PaCDPK16,二级结构主要构成元件为α-螺旋和无规卷曲;系统发育分析将16个家族成员分为4个亚家族,且同一亚家族具有相似的保守基序;各成员均具有1个核心蛋白激酶结构域和2个EF-hand结构域;在重金属胁迫下的转录数据分析显示,不同家族成员对不同重金属的响应有不同的表达模式:PaCDPK2、PaCDPK4和PaCDPK5的表达量在两种胁迫下下调,而其他成员的表达量至少在一种胁迫下显著上调。该研究系统鉴定了Mn、Cd超累积植物美洲商陆的PaCDPK基因家族,为进一步了解美洲商陆CDPK基因提供了科学依据,也为深入解析美洲商陆的生长发育、逆境应答尤其是重金属胁迫响应时的功能提供参考。 展开更多
关键词 商陆属(Phytolacca) 全长转录组 钙依赖性蛋白激酶(cdpks) 生物信息学分析 逆境胁迫
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二穗短柄草钙依赖型蛋白激酶BdCDPK4基因的克隆及其编码蛋白质的生物信息学分析 被引量:2
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作者 韦淑亚 赵旭东 +2 位作者 王会平 杨广笑 何光源 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期345-352,共8页
二穗短柄草(Brachypodium distachyon L.)因与小麦、大麦等有很高的同源性,作为新型禾本科模式生物吸引了越来越多的研究者。试验采用基因克隆技术分离了二穗短柄草Bd CDPK4基因的编码区序列,并采用生物信息学方法分析了该基因及其编码... 二穗短柄草(Brachypodium distachyon L.)因与小麦、大麦等有很高的同源性,作为新型禾本科模式生物吸引了越来越多的研究者。试验采用基因克隆技术分离了二穗短柄草Bd CDPK4基因的编码区序列,并采用生物信息学方法分析了该基因及其编码的蛋白质的序列特征、结构和功能。结果表明,分离了BdCDPK4基因1 851 bp的cDNA序列(Gen Bank登录号为XM_003559516),编码区长度为1 752 bp,编码583个氨基酸,分子量为64.78 ku,等电点为9.12,含有N端可变区、蛋白激酶区、自抑制区、EF手型结构、类似钙调素等结构域。亚细胞定位预测位于叶绿体和液泡上。进化树分析结果显示,该蛋白与小麦Ta CDPK19蛋白的同源性最近。根据各物种间CDPKs蛋白的高同源性,结合小麦TaCDPK19基因被高盐和小麦白粉病菌Blumeria graministritici(Bgt)诱导,推测Bd CDPK4基因也可能参与逆境胁迫下的信号传导途径,在抗逆等生物学过程中发挥重要功能。 展开更多
关键词 cdpkS Bdcdpk4 多序列比对 生物信息学分析
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普通烟草CDPK基因家族的克隆及表达分析 被引量:19
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作者 太帅帅 刘贯山 +1 位作者 孙玉合 陈珈 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期3600-3608,共9页
【目的】从普通烟草中分离更多CDPK基因,分析该基因家族的序列特征、进化关系和表达谱,为全面揭示其功能奠定基础。【方法】采用RT-PCR、RACE和生物信息学的方法,分离普通烟草CDPK基因;采用MEGA4.0软件构建系统进化树;利用RT-PCR研究普... 【目的】从普通烟草中分离更多CDPK基因,分析该基因家族的序列特征、进化关系和表达谱,为全面揭示其功能奠定基础。【方法】采用RT-PCR、RACE和生物信息学的方法,分离普通烟草CDPK基因;采用MEGA4.0软件构建系统进化树;利用RT-PCR研究普通烟草全长基因的表达谱。【结果】分离到普通烟草CDPK基因8个,其中3个可以找到完整的开放读码框;系统进化树分析显示,烟草属11个全长CDPK基因位于4个亚家族,预测的2对普通烟草和拟南芥的直系同源基因在功能上可能非常保守;3个普通烟草全长基因虽然在所有的组织中都能检测到,但是它们的表达谱在不同的组织间存在明显差异。【结论】分离到8个未报道的普通烟草CDPK基因,结合已有的报道,目前在普通烟草中获得了15个CDPK基因,为在基因组范围内研究普通烟草CDPK基因家族的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 普通烟草 cdpk 进化树 基因表达
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盐藻CDPK基因的克隆与生物信息学分析 被引量:15
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作者 张晓琳 柴晓杰 +2 位作者 张婷 余祝君 薛飞 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期418-424,共7页
为了研究CDPK基因的结构和功能,应用RT-PCR和RACE方法从盐藻Dunaliella salina中克隆得到CDPK基因(GenBank登录号为JQ964113),并对其进行生物信息学分析。结果表明:盐藻CDPK基因的cDNA全长3 052bp。5'-UTR长70bp;开放阅读框长1650bp... 为了研究CDPK基因的结构和功能,应用RT-PCR和RACE方法从盐藻Dunaliella salina中克隆得到CDPK基因(GenBank登录号为JQ964113),并对其进行生物信息学分析。结果表明:盐藻CDPK基因的cDNA全长3 052bp。5'-UTR长70bp;开放阅读框长1650bp,编码549个氨基酸;3'-UTR长1332bp。蛋白表现为弱酸性,且稳定、亲水,二级结构中以无规则卷曲和α-螺旋为主,三级结构同源建模成功。亚细胞定位于叶绿体和细胞核中,无跨膜结构域,无信号肽。蛋白序列中存在4个丝氨酸磷酸化位点、4个苏氨酸磷酸化位点和3个酪氨酸磷酸化位点,蛋白激酶结构域在53~331位氨基酸处,蛋白激酶ATP结合域在59~82位氨基酸处,丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性域在173~185位氨基酸处,4个EF-hand钙结合域分别在357~385、393~421、429~457、465~493位氨基酸处。进化分析结果表明,克隆的CDPK基因与团藻、衣藻、盐藻Dunaliella tertiolecta的CDPK亲缘关系最近。为进一步研究CDPK基因的功能及探究盐藻耐盐机制的信号转导途径奠定了分子基础。 展开更多
关键词 盐藻 钙依赖蛋白激酶(cdpks) CDNA全长 生物信息学分析
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梨CDPK基因家族全基因组序列鉴定分析 被引量:11
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作者 许园园 李晓刚 +2 位作者 李慧 蔺经 常有宏 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第3期659-666,共8页
CDPK是植物特有的一类丝氨酸/苏氨酸型蛋白激酶,在介导植物生育信号和逆境信号转导中具有重要作用。为揭示CDPK基因在梨生长发育与抗逆防御机制中的作用,本研究通过生物信息学手段,结合梨基因组注释信息,鉴定梨基因组中CDPK家族基... CDPK是植物特有的一类丝氨酸/苏氨酸型蛋白激酶,在介导植物生育信号和逆境信号转导中具有重要作用。为揭示CDPK基因在梨生长发育与抗逆防御机制中的作用,本研究通过生物信息学手段,结合梨基因组注释信息,鉴定梨基因组中CDPK家族基因成员,利用MEGA6.0程序进行多序列比对、分类并构建系统进化树;利用per1程序以及GSDS工具进行基因结构与保守性分析,为植物CDPK基因功能分析与利用提供依据。结果表明,本研究成功鉴定出26个CDPK家族成员,根据系统发育树分析,所有PbCDPK被分为4类;基因结构预测结果表明,大多数PbCDPK均含有6~7个内含子;且预测的PbCDPK氨基酸序列绝大多数含4个EF-hand功能域;为了深入分析梨与其他物种的同源进化关系,构建了梨与拟南芥、水稻的CDPK基因系统进化树,进化树聚类分析结果将所有的CDPK蛋白分为四类。综上所述,目前已初步获得26个梨CDPK基因,为在基因组范围内研究CDPK基因在梨生长发育与逆境响应中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 cdpk家族基因 全基因组鉴定 系统进化
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铁皮石斛DoCDPK基因的克隆与表达分析 被引量:11
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作者 盛况 高燕会 +1 位作者 斯金平 朱玉球 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2412-2422,共11页
利用RACE技术和RT-PCR相结合,从铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)中克隆得到长度分别为1 863和1 729 bp的钙依赖蛋白激酶(calcium-dependent protein kinase)基因DoCDPK1与DoCDPK2的cDNA全长序列,开放阅读框分别为1 539... 利用RACE技术和RT-PCR相结合,从铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)中克隆得到长度分别为1 863和1 729 bp的钙依赖蛋白激酶(calcium-dependent protein kinase)基因DoCDPK1与DoCDPK2的cDNA全长序列,开放阅读框分别为1 539和1 536 bp,编码512和511个氨基酸,编码蛋白表现为亲水性,结构稳定,二级结构主要由α–螺旋和无规卷曲构成。qRT-PCR分析结果表明DoCDPK1和DoCDPK2主要在铁皮石斛叶片中表达;4℃低温和400 mmol·L^(-1) NaCl处理后,DoCDPK1和DoCDPK2在各个时间点上(2、4、8、12和24 h)的表达量有不同程度提高,而100 mmol·L^(-1) ABA处理后DoCDPK1和DoCDPK2的表达量呈现不同变化趋势,推测DoCDPK1和DoCDPK2参与低温等非生物胁迫的响应。 展开更多
关键词 铁皮石斛 cdpk基因 基因克隆 逆境胁迫 基因表达
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植物中的钙依赖蛋白激酶(CDPK)的结构特征和功能研究进展 被引量:12
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作者 姜珊珊 张丹 +2 位作者 孔祥培 周严 李德全 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期12-19,共8页
Ca2+是植物中重要的第二信使,细胞中的钙信号经钙传感蛋白(CaMs、CaMLs、CBLs和CDPKs)传递到下游组分(转录因子,NADPH氧化酶基因等),引起相关基因的表达,使植物对生物或非生物胁迫作出响应。钙依赖蛋白激酶(CDPKs)是在植物及原生动物中... Ca2+是植物中重要的第二信使,细胞中的钙信号经钙传感蛋白(CaMs、CaMLs、CBLs和CDPKs)传递到下游组分(转录因子,NADPH氧化酶基因等),引起相关基因的表达,使植物对生物或非生物胁迫作出响应。钙依赖蛋白激酶(CDPKs)是在植物及原生动物中发现的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在Ca2+介导的信号途径中起重要作用。CDPKs是由多基因家族编码,分属4个亚家族,各亚族成员具有相同或不同的表达模式、亚细胞定位、底物特异性、功能各异或冗余等特性。综述CDPKs的结构特征、表达模式、定位、调控、体内外底物、抑制剂,以及在响应生物及非生物胁迫中的作用等方面的研究进展,旨在探讨CDPKs的功能及其调控机制。 展开更多
关键词 钙依赖蛋白激酶(cdpks) 结构特征 调控机制 生物学功能
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黄瓜钙依赖性蛋白激酶基因CsCDPK5的克隆及响应淹水胁迫的表达分析 被引量:6
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作者 许学文 季晶 +2 位作者 陆璐 齐晓花 陈学好 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期704-714,共11页
通过对黄瓜耐涝品系Zaoer-N和不耐涝品系Pepino淹水处理72 h后发现,Zaoer-N下胚轴平均可生成24.6条不定根,而Pepino平均仅能生成1.5条不定根,两者差异显著。从上述两个品种中克隆了钙依赖性蛋白激酶基因CsCDPK5的全长,两者序列完全一致... 通过对黄瓜耐涝品系Zaoer-N和不耐涝品系Pepino淹水处理72 h后发现,Zaoer-N下胚轴平均可生成24.6条不定根,而Pepino平均仅能生成1.5条不定根,两者差异显著。从上述两个品种中克隆了钙依赖性蛋白激酶基因CsCDPK5的全长,两者序列完全一致,全长均为1 887 bp,编码629个氨基酸,预测其编码蛋白质分子量为59.17 k D,理论等电点为5.65。亚细胞定位预测表明CsCDPK5定位于细胞质。Zaoer-N和Pepino启动子相似度为99%,有14个碱基位点的差异,两者均含有与激素信号及低氧胁迫响应相关的顺式作用元件,而诱导子激活元件AT-rich sequence和功能未知元件F-box为Zaoer-N所特有的启动元件。qRT-PCR结果表明:(1)CsCDPK5在黄瓜下胚轴中的表达量最高;(2)淹水条件下,Zaoer-N和Pepino下胚轴中CsCDPK5的相对表达量均呈现先上升后下略有降,之后又上升的趋势,且Zaoer-N中的表达量大于Pepino;(3)根和叶中CsCDPK5的相对表达量无明显规律性;(4)在使用乙烯竞争性抑制剂1-MCP预处理后,淹水条件下Zaoer-N下胚轴不定根形成被抑制,CsCDPK5的表达与非淹水对照亦无明显差异。综上所述,黄瓜CsCDPK5为淹水胁迫响应基因,可能参与黄瓜淹水后下胚轴不定根的形成过程。 展开更多
关键词 黄瓜 淹水胁迫 不定根 cdpk
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梨树CDPK基因家族进化和表达分析 被引量:6
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作者 韩艳丽 李静 +2 位作者 操庆国 徐银 颜志明 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1026-1032,共7页
钙依赖蛋白激酶(CDPK或CPK)在植物生长和发育、逆境信号刺激及其对病原物的防御反应过程中发挥着非常重要的作用。本研究利用梨树全基因组数据,采用生物信息学的方法,在全基因组水平上对梨树CDPK基因家族进行系谱进化关系、基因结构、... 钙依赖蛋白激酶(CDPK或CPK)在植物生长和发育、逆境信号刺激及其对病原物的防御反应过程中发挥着非常重要的作用。本研究利用梨树全基因组数据,采用生物信息学的方法,在全基因组水平上对梨树CDPK基因家族进行系谱进化关系、基因结构、共线性关系及表达情况等分析。结果表明,梨树基因组中共存在31个CDPK基因,命名为PbCDPK1~PbCDPK31。系谱分析结果表明,这些CDPK基因归属于4个亚家族。共线性分析检测到12对CDKP基因间存在显著的共线性关系,其中10对由最近一次发生的全基因组复制事件形成。非同义/同义置换率的比率(dN/dS)说明CDPK基因在功能上进化得非常保守。荧光定量PCR结果发现,5个梨树CDPK基因对干旱逆境有响应。试验结果可为进一步开展梨树CDPK基因家族的功能鉴定和分子进化机制的研究提供参考。 展开更多
关键词 梨树 cdpk基因 生物信息学 进化 干旱
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植物中钙依赖蛋白激酶(CDPK)的研究进展 被引量:19
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作者 武志刚 武舒佳 +1 位作者 王迎春 郑琳琳 《草业学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期204-214,共11页
Ca^(2+)是植物细胞信号转导中重要的第二信使,在植株受到外界逆境胁迫时,细胞中的钙信号经钙传感蛋白(CaMs、CaMLs、CBLs和CDPKs)传递到下游组分引起相关基因的表达,从而响应环境的各种变化。钙依赖性蛋白激酶(CDPK)是Ca^(2+)传感器,可... Ca^(2+)是植物细胞信号转导中重要的第二信使,在植株受到外界逆境胁迫时,细胞中的钙信号经钙传感蛋白(CaMs、CaMLs、CBLs和CDPKs)传递到下游组分引起相关基因的表达,从而响应环境的各种变化。钙依赖性蛋白激酶(CDPK)是Ca^(2+)传感器,可以将细胞内Ca^(2+)信号传递到可以与14-3-3蛋白相互作用的靶蛋白从而刺激靶蛋白发生磷酸化。CDPK在植物生长的诸多方面发挥关键作用,如花粉管的伸长、植物的生长发育以及对生物胁迫、非生物胁迫的应激反应。大多数CDPK具有明显的亚细胞分布,使它们能够"感受"局部Ca^(2+)浓度的变化并与其靶细胞发生特异性作用。14-3-3蛋白是一类通过磷酸化激活的真核蛋白,它可以与不同靶蛋白相互作用,调控植物重要的生理生化过程。近年来研究发现,14-3-3蛋白作为CDPK的靶蛋白和CDPK交叉磷酸化形成CDPK/14-3-3复合物,进一步调节植物初级代谢、开花和激素合成。将从CDPK的结构、亚细胞定位、靶蛋白、生物学功能,特别是CDPK与14-3-3之间的交叉调节及其在植物信号通路中的协同作用方面进行全面的综述,旨在为未来CDPK研究提供参考和新的方向。 展开更多
关键词 cdpk 14-3-3蛋白 非生物胁迫 亚细胞定位
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普通烟草钙依赖蛋白激酶NtCDPK15的基因克隆及表达分析 被引量:8
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作者 康乐 张丽 +4 位作者 张磊 吴清章 丁安明 宗鹏 刘贯山 《中国烟草科学》 CSCD 2013年第3期48-54,共7页
钙依赖蛋白激酶(CDPK)对Ca2+信号转导通路下游元件的调控具有重要作用。本实验采用同源克隆技术从普通烟草中分离得到1个CDPK基因,命名为NtCDPK15(GenBank登录号为JN662020),cDNA全长为1963 bp,ORF大小为1569 bp,编码522个氨基酸。多序... 钙依赖蛋白激酶(CDPK)对Ca2+信号转导通路下游元件的调控具有重要作用。本实验采用同源克隆技术从普通烟草中分离得到1个CDPK基因,命名为NtCDPK15(GenBank登录号为JN662020),cDNA全长为1963 bp,ORF大小为1569 bp,编码522个氨基酸。多序列比对结果表明,NtCDPK15的编码产物具有典型的CDPK保守序列,C末端调控区有4个EF手性结构。系统进化树分析显示,NtCDPK15可能来源于绒毛状烟草,预测NtCDPK15与NtCDPK1这对旁系同源基因在功能上可能非常保守。实时荧光定量PCR分析结果表明,NtCDPK15在根和叶中的表达量显著高于茎中的表达量,但经盐胁迫诱导后NtCDPK15在茎中的表达量显著增加,同时,盐胁迫还使基因在叶中的表达量显著上调,ABA胁迫可诱导基因在根中的表达,而干旱胁迫可使基因在根和叶中的表达量下调,这些结果说明NtCDPK15在普通烟草中的表达受盐胁迫及ABA胁迫诱导,但受干旱胁迫抑制。 展开更多
关键词 普通烟草 cdpk RACE 非生物胁迫 基因表达
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野生大豆CDPK基因保守区的克隆及序列分析 被引量:6
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作者 才华 朱延明 +2 位作者 李杰 柏锡 李勇 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第2期159-164,共6页
CDPK(Ca2+-dependent,calmodulinindependentproteinkinase)是植物钙信号传导过程中关键的蛋白激酶,在逆境胁迫信号传导过程中起到重要作用。研究基于同源序列候选基因的策略,根据已经公布的多个CDPK序列的比对结果,在保守性较高的区域... CDPK(Ca2+-dependent,calmodulinindependentproteinkinase)是植物钙信号传导过程中关键的蛋白激酶,在逆境胁迫信号传导过程中起到重要作用。研究基于同源序列候选基因的策略,根据已经公布的多个CDPK序列的比对结果,在保守性较高的区域,设计两对巢式简并引物,结合降落PCR和巢式PCR在野生大豆中克隆。对获得的序列片段进行序列分析,发现该序列具有激酶活性的功能区域和CDPK特有的EF手性结构区,并且与VrCDPK(U08140)序列达到94%的相似性,可以确定该片段是CDPK基因的保守序列。结果证明,野生大豆中也存在CDPK基因,并为通过RACE等方法获得野生大豆全长CDPK基因奠定了基础。 展开更多
关键词 野生大豆 渗透胁迫 cdpk保守区 基因克隆
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钙依赖蛋白激酶(CDPKs)在植物钙信号转导中的作用 被引量:39
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作者 刘贯山 陈珈 《植物学通报》 CSCD 北大核心 2003年第2期160-167,共8页
CDPKs在植物钙信号转导中起重要作用。本文介绍了植物钙信号转导及CDPKs的结构与生化性质 ,在此基础上 ,重点总结了CDPKs在植物钙信号转导中的潜在调节作用 ,包括基因表达、代谢、离子和水分的跨膜运输、细胞骨架的动态变化、气孔运动... CDPKs在植物钙信号转导中起重要作用。本文介绍了植物钙信号转导及CDPKs的结构与生化性质 ,在此基础上 ,重点总结了CDPKs在植物钙信号转导中的潜在调节作用 ,包括基因表达、代谢、离子和水分的跨膜运输、细胞骨架的动态变化、气孔运动和生长发育等 。 展开更多
关键词 钙依赖蛋白激酶 cdpkS 植物钙信号转导 结构 生化性质 钙调素
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龙血树DCDPK2基因的克隆及表达分析 被引量:4
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作者 张浩 蔡文伟 +3 位作者 张树珍 杨学 刘琳 杨本鹏 《热带作物学报》 CSCD 2010年第7期1130-1136,共7页
通过RACE技术克隆龙血树CDPK基因的全长cDNA,并对基因序列进行相关分析与基因表达分析。结果表明:该基因全长为1 810 bp,编码区长度为1 587 bp,编码528个氨基酸,其氨基酸序列具有CDPK基因编码氨基酸的所有典型结构特征;经序列比对发现... 通过RACE技术克隆龙血树CDPK基因的全长cDNA,并对基因序列进行相关分析与基因表达分析。结果表明:该基因全长为1 810 bp,编码区长度为1 587 bp,编码528个氨基酸,其氨基酸序列具有CDPK基因编码氨基酸的所有典型结构特征;经序列比对发现其核酸序列与玉米CDPK基因的同源性高达81%,氨基酸序列与其它植物中的CDPK氨基酸序列同源性很高。该基因命名为DCDPK2基因。对未经血竭诱导和诱导的龙血树组培苗进行半定量RT-PCR表达分析,发现在添加了诱导物的组培苗中DCDPK2基因的表达显著增强。 展开更多
关键词 龙血树 cdpk基因 克隆 RACE技术 表达分析
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钙依赖型蛋白激酶(CDPKs)在植物中的生理功能 被引量:12
15
作者 倪天华 魏幼璋 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2002年第6期241-246,共6页
 简要介绍了钙依赖型蛋白激酶(Calcium-dependentProteinKinases,CDPKs)的结构特点及家族成员,重点对CDPKs在植物环境胁迫、防御反应、生长发育、离子通道调节和激素信号等方面的生理功能研究进展进行了综述和讨论,并展望了该领域的研...  简要介绍了钙依赖型蛋白激酶(Calcium-dependentProteinKinases,CDPKs)的结构特点及家族成员,重点对CDPKs在植物环境胁迫、防御反应、生长发育、离子通道调节和激素信号等方面的生理功能研究进展进行了综述和讨论,并展望了该领域的研究前景。 展开更多
关键词 钙依赖型蛋白激酶 生理功能 植物 cdpkS 激素信号
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羊草CDPK基因全长cDNA的克隆及原核表达 被引量:3
16
作者 崔喜艳 秦思余 +3 位作者 刘忠野 高瑜 蒋载阳 郭继勋 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期123-128,共6页
【目的】通过对羊草Leymus chinensis CDPK基因进行克隆及原核表达,为进一步研究CDPK基因的功能,探讨羊草适应生境分子机制提供理论基础.【方法】用RT-PCR结合RACE技术克隆了羊草钙依赖蛋白激酶(CDPK)基因,命名为Lc-CDPK;构建了羊草C... 【目的】通过对羊草Leymus chinensis CDPK基因进行克隆及原核表达,为进一步研究CDPK基因的功能,探讨羊草适应生境分子机制提供理论基础.【方法】用RT-PCR结合RACE技术克隆了羊草钙依赖蛋白激酶(CDPK)基因,命名为Lc-CDPK;构建了羊草CDPK基因的原核表达载体,转化到大肠埃希菌Escherichia coli BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,经SDS-PAGE分析CDPK蛋白的表达情况.【结果和结论】羊草CDPK基因全长c DNA序列为1 704 bp,包括1个1 647 bp的开放阅读框,编码548个氨基酸,从第81~339个氨基酸构成了具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化活性的S-TKc结构域,有4个保守的EF手型结构域;编码区核苷酸序列与其他禾本科作物比对后发现,与小麦CDPK基因的相似性最高,相似度为96%;IPTG诱导表达出相对分子质量为61 350的融合蛋白,表达产物大小与预计理论值相符.诱导7 h蛋白表达量最高,表达量占菌体总蛋白的49.1%. 展开更多
关键词 羊草 cdpk基因 基因克隆 原核表达
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马铃薯CDPK基因的克隆及生物信息学分析 被引量:3
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作者 田再民 赵益 +7 位作者 纪艺红 冯琰 龚学臣 刘毅强 翟鑫娜 张云帅 王燕 魏东 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2022年第5期1435-1442,共8页
钙依赖蛋白激酶基因(CDPK)在环境胁迫中对植物具有非常重要的调节作用。为了研究StCDPK基因在马铃薯生长发育过程中的作用和功能,本试验以马铃薯组培苗‘夏坡蒂’为材料,从马铃薯cDNA中克隆得到CDPK基因,并进行生物信息学分析;通过RT-q... 钙依赖蛋白激酶基因(CDPK)在环境胁迫中对植物具有非常重要的调节作用。为了研究StCDPK基因在马铃薯生长发育过程中的作用和功能,本试验以马铃薯组培苗‘夏坡蒂’为材料,从马铃薯cDNA中克隆得到CDPK基因,并进行生物信息学分析;通过RT-qPCR方法,在干旱、低温和高温胁迫下对StCDPK基因的表达量进行初步分析。结果表明,克隆出的StCDPK基因全长1620 bp,开放阅读框全长1599 bp,编码532个氨基酸;蛋白质相对分子质量58979.29,理论等电点(pI)为6.49;平均亲水系数-0.402,为亲水性蛋白;α-螺旋占42.48%,无规曲线区域占37.03%;并通过同源蛋白比对,与龙葵同源性最高;通过构建基因进化树,发现与大豆在同一分支上;RT-qPCR分析表明,干旱、低温、高温均能诱导StCDPK基因的表达,结果表明StCDPK基因可能在非生物胁迫中起着重要作用。 展开更多
关键词 马铃薯 cdpk 基因克隆 生物信息学分析
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小桐子CDPK及相关激酶基因家族的全基因组鉴定及表达分析 被引量:2
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作者 王海波 郭俊云 +4 位作者 辛胡 刘潮 高永 代冬琴 唐利洲 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期105-116,共12页
基于小桐子基因组数据库,在全基因组水平对小桐子CDPK及相关激酶基因家族进行鉴定,并对其系统进化、基因结构、保守结构域、染色体定位以及器官与低温胁迫表达进行分析,为深入开展小桐子CDPK及相关激酶基因的功能鉴定及其在小桐子遗传... 基于小桐子基因组数据库,在全基因组水平对小桐子CDPK及相关激酶基因家族进行鉴定,并对其系统进化、基因结构、保守结构域、染色体定位以及器官与低温胁迫表达进行分析,为深入开展小桐子CDPK及相关激酶基因的功能鉴定及其在小桐子遗传改良中的应用提供依据。利用CDPK结构域的隐马尔可夫模型对小桐子蛋白质数据库进行相似性检索,经过Pfam与CDD在线工具的验证获得小桐子CDPK及相关激酶基因家族成员。利用不同的工具对CDPK及相关激酶基因进行生物信息学对比分析。通过小桐子器官与低温表达谱数据进行CDPK及相关激酶基因的表达分析。小桐子基因组中共检索到17个CDPK基因、5个CRK基因、2个PPCK基因、4个PEPRK基因以及1个CCaMK基因,各基因家族成员的基因长度、蛋白质等电点及亚细胞定位等理化参数具有家族特异性。序列比对与系统进化分析显示,5个基因家族都单独聚类,而CDPK与PEPRK基因家族又分别聚类为4个与2个亚族,且鉴定到小桐子CDPK家族成员的N-端可变区、激酶结构区、自抑区及EF-hand调控区4个保守结构域以及其他激酶成员的激酶结构域。同时,分别有21个与24个CDPK及相关激酶可能发生N-豆蔻酰化与N-十六烷酰化的修饰。染色体定位表明,小桐子CDPK及相关激酶基因不均匀地分布于10条染色体上,且存在JcCDPK7/JcCDPK9串联复制现象。转录组表达分析表明,29个CDPK及相关激酶基因中,有24个基因在叶片、根及种子中都有表达,而JcCDPK3、JcCDPK11、JcCRK3及JcCCaMK属于低温诱导高表达基因,与小桐子的抗冷性直接相关。 展开更多
关键词 小桐子 CA^2+ 蛋白激酶 cdpk基因 基因家族 表达分析
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鸡柔嫩艾美耳球虫CDPK和鸡IFN-γ重组质粒的构建与体外表达 被引量:2
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作者 徐守振 李卫华 +1 位作者 尹燕博 汪明 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期920-924,共5页
采用SOE-PCR技术将鸡柔嫩艾美耳球虫CDPK抗原基因与鸡干扰素-γ(IFN-γ)基因用(GGGGS)315个疏水柔性氨基酸接头融合,扩增出IFN-γ-CDPK融合基因,将其克隆到pMAL-p2X载体上,构建了重组原核表达质粒pMAL-IFN-γ-CDPK,用IPTG诱导表达并纯... 采用SOE-PCR技术将鸡柔嫩艾美耳球虫CDPK抗原基因与鸡干扰素-γ(IFN-γ)基因用(GGGGS)315个疏水柔性氨基酸接头融合,扩增出IFN-γ-CDPK融合基因,将其克隆到pMAL-p2X载体上,构建了重组原核表达质粒pMAL-IFN-γ-CDPK,用IPTG诱导表达并纯化重组蛋白,经免疫印迹分析该蛋白的生物学活性。结果显示,成功构建了共表达IFN-γ-CDPK融合基因的原核表达载体,表达纯化了具有良好的免疫反应性的IFN-γ-CDPK融合蛋白,表达纯化的IFN-γ-CDPK融合蛋白能够和鸡柔嫩艾美耳球虫甘肃株抗血清发生特异性结合,为进一步研制高效力的鸡球虫新型基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 重叠延伸聚合酶链反应 cdpk基因 IFN-Γ基因 共表达
原文传递
柠条锦鸡儿CkCDPK基因的克隆、表达分析及载体构建 被引量:2
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作者 贾会丽 郭继承 +5 位作者 吴欣明 王运琦 刘建宁 方志红 石永红 董宽虎 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第3期43-51,共9页
钙依赖蛋白激酶作为一个关键的信号传导器,通过调控和参与植物体内的代谢途径等方式在植物抵御逆境胁迫过程中发挥着重要作用。为了探索柠条锦鸡儿相关基因的功能,本研究利用同源克隆的方法,从柠条锦鸡儿中克隆了1个CDPK类基因的CDS,命... 钙依赖蛋白激酶作为一个关键的信号传导器,通过调控和参与植物体内的代谢途径等方式在植物抵御逆境胁迫过程中发挥着重要作用。为了探索柠条锦鸡儿相关基因的功能,本研究利用同源克隆的方法,从柠条锦鸡儿中克隆了1个CDPK类基因的CDS,命名为CkCDPK。通过测序和生物信息学分析,结果显示,该基因包含1710bp的开放阅读框,编码570个氨基酸,分子质量为64.03ku,蛋白质等电点(PI)为9.12。结构分析显示,CkCDPK含有N端可变区、蛋白激酶区、4个EF手型结构和类似钙调素等结构域。利用实时荧光定量PCR检测了CkCDPK基因在不同逆境胁迫下的表达量,结果显示,NaCl胁迫和干旱胁迫下该基因的表达量呈现出单峰趋势,其中,盐胁迫6h、干旱胁迫4h表达量最高,外源ABA诱导下该基因的表达量基本呈逐渐上升趋势。表明该基因可能参与了柠条锦鸡儿的抗逆性调控。构建植物超表达载体pCAMBIA3301-CkCDPK,可为进一步研究CkCDPK基因在柠条锦鸡儿抗逆性调控中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 柠条锦鸡儿 钙依赖蛋白激酶(cdpk) 逆境胁迫 载体构建
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