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兔microRNA-18b生物信息学分析及其与CDK19的靶向验证 被引量：1
1
作者 李泽 江钧益 +2 位作者 王淑辉 孙秀柱 魏泽辉 《家畜生态学报》 北大核心 2020年第9期24-29,共6页
为探究miR-18b对兔卵巢颗粒细胞增殖凋亡的作用及潜在调控靶点,利用生物信息学技术预测兔miRNA-18b(ocu-miR-18b)的靶基因及其可能参与的生物学过程。预测结果发现靶基因的功能注释分析显著富集在细胞增殖和凋亡的调控等过程,而其中CDK1... 为探究miR-18b对兔卵巢颗粒细胞增殖凋亡的作用及潜在调控靶点,利用生物信息学技术预测兔miRNA-18b(ocu-miR-18b)的靶基因及其可能参与的生物学过程。预测结果发现靶基因的功能注释分析显著富集在细胞增殖和凋亡的调控等过程,而其中CDK19可能是miR-18b的潜在靶基因。为验证假设,将扩增的野生型及突变型的CDK19 3’UTR序列分别克隆至荧光素酶报告载体中,与miR-18b的mimics(试验组)或mimics NC(对照组)共同转染至HEK293T细胞。通过双荧光素酶报告系统检测细胞的荧光素酶活性,鉴定miR-18b与CDK19 3’UTR的靶向关系。并且通过qRT-PCR检测miR-18b对靶基因的调控作用。结果表明:成功构建了CDK19基因3’UTR荧光素酶报告质粒,证明了miR-18b可以作用于CDK19基因3’UTR,抑制其荧光素酶活性。此外,qRT-PCR分析表明,miR-18b与CDK19表达模式相反。从而证明了miR-18b与CDK19的直接靶向关系,为更深入研究miR-18b与卵巢颗粒细胞的关系奠定基础。 展开更多
关键词 miR-18b cdk19 兔卵巢颗粒细胞 生物信息学 双荧光素酶报告系统
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lncCASC2通过miR-222-3p/CDK19轴调控胃癌NK细胞杀伤敏感性 被引量：3
2
作者 郭伟胜 付利然 +2 位作者 赵林 魏光亚 张娟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第19期2352-2357,共6页
目的:探究CDK19对胃癌NK细胞杀伤敏感性的影响及作用机制。方法:TCGA数据库分析胃癌患者及细胞系中CDK19表达及其与生存期的关联。CCK-8法检测敲低CDK19后MGC-803、NCI-N87细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡。LDH法检测sh-CDK19、sh-... 目的:探究CDK19对胃癌NK细胞杀伤敏感性的影响及作用机制。方法:TCGA数据库分析胃癌患者及细胞系中CDK19表达及其与生存期的关联。CCK-8法检测敲低CDK19后MGC-803、NCI-N87细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡。LDH法检测sh-CDK19、sh-CASC2、miR-222-3p inhibitor、IL-6、IL-8、anti-IL-6、anti-IL-8对胃癌NK细胞杀伤敏感性的影响。Antibody Chip检测敲低CDK19后NCI-N87细胞中细胞因子表达。qPCR检测CDK19、IL-6、IL-8 mRNA表达,Western blot检测CDK19蛋白表达,双荧光素酶报告基因检测miR-222-3p和CDK19的靶向关系。结果:CDK19在胃癌患者及细胞系中高表达。低表达CDK19的胃癌患者总生存期更长,在MGC-803、NCI-N87细胞中敲低CDK19,可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制IL-6、IL-8表达,增强NK细胞杀伤敏感性。NCI-N87细胞中lncCASC2通过miR-222-3p正向调控CDK19表达,进而抑制NK细胞杀伤敏感性。结论:胃癌细胞中CDK19呈高表达,受lncCASC2/miR-222-3p调控,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,且促进IL-6、IL-8表达,抑制胃癌NK细胞杀伤敏感性。 展开更多
关键词 胃癌 lncCASC2 miR-222-3p cdk19 NK细胞
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