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细胞周期相关因子CDCA3基因shRNA表达载体的构建及鉴定 被引量：1
1
作者 李娟 唐刘君 +5 位作者 王晓辉 查欣 胡中倩 邢小翠 杨晓明 汪思应 《安徽医学》 2012年第2期136-140,共5页
目的设计能转录短发夹状RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,构建能有效下调CDCA3蛋白表达的shRNA真核表达载体,研究其对CDCA3表达的影响,以便进一步研究CDCA3的功能。方法根据文献获得CDCA3的siRNA靶序列,依据RNA干扰机制和shRNA... 目的设计能转录短发夹状RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,构建能有效下调CDCA3蛋白表达的shRNA真核表达载体,研究其对CDCA3表达的影响,以便进一步研究CDCA3的功能。方法根据文献获得CDCA3的siRNA靶序列,依据RNA干扰机制和shRNA靶序列的设计原则,以CDCA3基因为靶基因,合成一对编码shRNA的两条DNA序列,经退火后合成DNA双链,再克隆至shRNA表达载体pSIREN-DNRDsRed质粒中,连接产物转化E.coilJM109感受态细胞,然后挑取克隆提质粒,进行酶切鉴定和DNA序列测定。将构建成功的载体通过脂质体介导转染导入人胚肾HEK293细胞,采用Western blot法和Realtime RT-PCR,检测特异性shRNA对CDCA3蛋白在mRNA及蛋白表达水平的抑制效果。结果成功构建靶向CDCA3蛋白的特异shRNA的真核表达载体;转染HEK293细胞后,可显著下调CDCA3在细胞内的mRNA水平及蛋白表达水平。结论 CDCA3蛋白的特异shRNA的真核表达载体能显著下调HEK293细胞内的CDCA3蛋白表达。成功构建CDCA3 shRNA表达载体,为进一步研究CDCA3基因的功能提供了实验基础。 展开更多
关键词 cdca3蛋白 RNA干扰 SHRNA 载体构建
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CDCA3在肿瘤领域的研究进展 被引量：7
2
作者 王芹 孙正魁 《实用癌症杂志》 2018年第6期1043-1044,共2页
细胞周期调控异常将导致细胞过度增殖以及恶性肿瘤的发生。因此,细胞周期调控相关因子的研究对于揭示肿瘤的发生发展具有重要意义。在细胞周期的不同阶段,细胞分裂调控基因的表达都是必需的。许多研究报道了致癌作用与细胞周期相关基因... 细胞周期调控异常将导致细胞过度增殖以及恶性肿瘤的发生。因此,细胞周期调控相关因子的研究对于揭示肿瘤的发生发展具有重要意义。在细胞周期的不同阶段,细胞分裂调控基因的表达都是必需的。许多研究报道了致癌作用与细胞周期相关基因的关系。 展开更多
关键词 cdca3 肿瘤
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CDCA3在下咽鳞癌中的表达及临床意义
3
作者 吴俊福 代立媛 +3 位作者 崔萌 杜伟 刘善廷 娄卫华 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2020年第18期919-924,共6页
目的:探索与下咽鳞癌生长、转移及预后相关的分子标记物,为开发下咽鳞癌新的疗法提供理论依据。方法:分析Oncomine肿瘤芯片数据库中细胞分裂周期相关蛋白3(cell division cycle associated protein 3,CDCA3)在头颈部鳞癌及癌旁组织中的... 目的:探索与下咽鳞癌生长、转移及预后相关的分子标记物,为开发下咽鳞癌新的疗法提供理论依据。方法:分析Oncomine肿瘤芯片数据库中细胞分裂周期相关蛋白3(cell division cycle associated protein 3,CDCA3)在头颈部鳞癌及癌旁组织中的表达差异,检测下咽鳞癌及癌旁组织中CDCA3的表达,分析其表达水平与下咽鳞癌患者临床病理特征及预后的关系。结果:通过分析Oncomine肿瘤芯片数据库中CDCA3的DNA拷贝数,发现在肿瘤基因图谱(TCGA)数据集中,相比全血及正常头颈部组织,CDCA3的DNA拷贝数在头颈鳞癌组织中显著上调(P<0.05)。下咽鳞癌组织中CDCA3的mRNA相对表达水平较癌旁正常黏膜表达水平升高(P<0.05)。CDCA3的蛋白表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期等临床病理特征相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示CDCA3阳性表达组患者的总生存期显著低于CDCA3阴性表达组(P<0.05)。结论:CDCA3在下咽鳞癌组织中高表达,与下咽鳞癌患者原发肿瘤大小、TNM分期以及淋巴结转移情况密切相关,是影响患者预后的独立危险因素。 展开更多
关键词 下咽鳞癌cdca3 预后
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CDCA3在食管癌中的表达及其对食管癌细胞增殖与凋亡的影响 被引量：4
4
作者 方兰 卢一艳 刘金楠 《国际检验医学杂志》 CAS 2020年第5期583-587,591,共6页
目的研究细胞周期相关因子(CDCA3)在食管癌组织和细胞中的表达及其对食管癌细胞增殖与凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR(qPCR)检测50例食管癌组织及其配对的癌旁组织中CDCA3 mRNA的表达水平,同时检测CDCA3 mRNA在不同食管癌细胞系(Eca10... 目的研究细胞周期相关因子(CDCA3)在食管癌组织和细胞中的表达及其对食管癌细胞增殖与凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR(qPCR)检测50例食管癌组织及其配对的癌旁组织中CDCA3 mRNA的表达水平,同时检测CDCA3 mRNA在不同食管癌细胞系(Eca109、Kyse-170、TE1)和人食管鳞状上皮细胞系Het-1A中的表达水平;采用si-CDCA3-1、si-CDCA3-2转染Eca109和TE1细胞,另转染si-NC作为阴性对照,MTS法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡变化;Western blot检测CDCA3、CyclinD1和cleaved caspase-3蛋白的表达变化。结果食管癌组织中CDCA3 mRNA的表达高于癌旁组织(P<0.05),Eca109、Kyse-170和TE1细胞中CDCA3 mRNA表达高于人食管鳞状上皮细胞(P<0.05)。沉默CDCA3表达后,Eca109细胞和TE1细胞的增殖率降低,G0/G1期细胞比例增加(P<0.05)。沉默CDCA3表达后,Eca109细胞和TE1细胞的凋亡率增加(P<0.05)。沉默CDCA3表达可降低CyclinD1蛋白表达和增加cleaved caspase-3蛋白表达(P<0.05)。结论CDCA3 mRNA在食管癌组织和细胞系中均高表达,干扰CDCA3的表达可能通过降低CyclinD1蛋白表达抑制细胞增殖,增加cleaved caspase-3蛋白表达促进细胞凋亡,提示CDCA3可能为食管癌的潜在治疗靶标。 展开更多
关键词 食管癌 cdca3 增殖 凋亡
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基于TCGA数据库分析细胞分裂周期相关蛋白3在肺腺癌中的表达与临床意义 被引量：2
5
作者 黄奔 柳家翠 +4 位作者 程庆元 段怡平 陈梁玥 蔡伟国 喻明霞 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 2020年第4期595-600,共6页
目的:研究细胞分裂周期相关蛋白3(CDCA3)在肺腺癌中的表达,分析CDCA3的表达与临床病理特征、预后的关系,探索CDCA3在肺腺癌发生发展中的作用机制。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库官方网站上下载肺腺癌的RNA-seq数据,提取CDCA3在肺... 目的:研究细胞分裂周期相关蛋白3(CDCA3)在肺腺癌中的表达,分析CDCA3的表达与临床病理特征、预后的关系,探索CDCA3在肺腺癌发生发展中的作用机制。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库官方网站上下载肺腺癌的RNA-seq数据,提取CDCA3在肺腺癌组织和正常组织样本中的表达数据,使用Mann-Whitney U检验分析两组之间的表达差异。根据CDCA3在肺腺癌样本中表达水平的中位值,将肺腺癌患者划分为高、低表达两组,使用卡方检验分析CDCA3表达与患者临床病理特征的联系,利用Kaplan-Meier法分析CDCA3表达与患者预后的相关性。使用单因素和多因素Cox回归分析其预后价值。利用基因集富集分析探索CDCA3在肺腺癌中参与的信号途径。结果:与正常组织相比,CDCA3在肺腺癌样本中表达显著上调(P<0.001),CDCA3的表达与患者的TNM stage分期显著相关(P=0.007)。Kaplan-Meier分析显示高表达组患者的总体生存率显著低于低表达组患者(P=0.002)。多因素Cox回归分析显示,CDCA3可以作为肺腺癌患者的独立预后因素(HR=1.40,95%CI:1.10~1.77,P=0.006)。GSEA富集分析结果提示,CDCA3主要参与细胞周期、DNA复制、RNA降解、错配修复、P53信号传导途径等信号通路。结论:CDCA3在肺腺癌中表达上调,可作为肺腺癌患者的独立预后因素,是肺腺癌的新型分子标志物。 展开更多
关键词 肺腺癌 cdca3 TCGA 预后 功能富集
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HOXB3促进骨肉瘤细胞增殖、克隆形成、迁移和抑制细胞凋亡的机制研究 被引量：2
6
作者 罗凯 段华彬 +1 位作者 罗明鼎 宋世杰 《现代检验医学杂志》 CAS 2022年第1期136-140,181,共6页
目的探究同源异型盒基因B3(homeobox genes B3,HOXB3)对骨肉瘤细胞增殖、克隆形成、迁移和凋亡的影响及其潜在分子机制。方法检测2020年1月~12月在雅安市第二人民医院骨科行手术治疗的30例骨肉瘤患者病理组织及邻近正常组织中HOXB3表达... 目的探究同源异型盒基因B3(homeobox genes B3,HOXB3)对骨肉瘤细胞增殖、克隆形成、迁移和凋亡的影响及其潜在分子机制。方法检测2020年1月~12月在雅安市第二人民医院骨科行手术治疗的30例骨肉瘤患者病理组织及邻近正常组织中HOXB3表达;通过转染干扰siRNA敲低HOXB3表达,验证其转染效率;采用细胞增殖实验、克隆形成实验、细胞划痕实验及细胞凋亡实验分别探究敲低HOXB3对骨肉瘤细胞增殖、克隆形成、迁移和凋亡的影响;分析CDCA3在骨肉瘤中的表达特征及与HOXB3的相关性,通过染色质免疫共沉淀技术(chromatin immunoprecipitation,ChIP)分析和荧光素酶报告基因实验验证HOXB3和细胞分裂周期相关蛋白3(cell division cycle associatedfprotein 3,CDCA3)结合关系;验证HOXB3和CDCA3表达调控对骨肉瘤细胞生物学行为的作用机制。结果30例骨肉瘤临床组织中HOXB3表达(41.154±8.626)较邻近正常组织(22.857±7.512)显著升高,差异有统计学意义(t=8.975,P<0.001)。敲低HOXB3表达后,骨肉瘤细胞增殖率、克隆形成率和迁移率明显降低(F=37.477~399.842,均P<0.001),细胞凋亡率显著升高(F=10.556,P=0.011)。骨肉瘤组织中CDCA3表达(38.624±7.736)明显高于邻近正常组织(21.875±6.482),差异有统计学意义(t=9.090,P<0.001);HOXB3与CDCA3表达呈正相关(r=0.736,P<0.01)。CDCA3是HOXB3的靶基因;敲低HOXB3表达显著降低了骨肉瘤细胞中CDCA3表达(F=694.283,P<0.001)。HOXB3可结合CDCA3的启动子区域正调控CDCA3的表达;在敲低HOXB3表达的细胞中回补CDCA3,逆转了HOXB3对骨肉瘤细胞增殖、克隆形成、迁移、凋亡的抑制/促进作用。结论HOXB3在骨肉瘤中表达上调,其可能通过与CDCA3启动子区域结合,正向调控CDCA3表达促进了骨肉瘤细胞的增殖、克隆形成及迁移,抑制了细胞凋亡,可作为临床骨肉瘤治疗的潜在药物靶点。 展开更多
关键词 骨肉瘤 同源异型盒基因B3 染色质免疫共沉淀技术3 增殖 克隆形成 迁移 凋亡
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细胞周期相关因子3在乳腺癌组织中的表达及对乳腺癌细胞增殖的影响
7
作者 吴元肇 曾勇 +1 位作者 郑克思 陈艳梅 《健康研究》 CAS 2022年第5期538-543,共6页
目的 检测乳腺癌组织中细胞周期相关因子3(cell division cycle associated protein 3,CDCA3)的表达水平,分析CDCA3对乳腺癌细胞生长增殖的影响。方法 对我院乳腺癌标本库中41例不同分期乳腺癌组织进行免疫组化检测,结合生物信息学方法... 目的 检测乳腺癌组织中细胞周期相关因子3(cell division cycle associated protein 3,CDCA3)的表达水平,分析CDCA3对乳腺癌细胞生长增殖的影响。方法 对我院乳腺癌标本库中41例不同分期乳腺癌组织进行免疫组化检测,结合生物信息学方法与癌症基因组图谱(TCGA)数据库,分析CDCA3在乳腺癌组织中的表达情况。利用shRNA构建稳定敲低CDCA3的乳腺癌MCF7细胞株,观察下调CDCA3后乳腺癌细胞的增殖情况。采用蛋白免疫印迹法检测增殖相关NF-кB信号转导通路相关蛋白NF-кB1(p50)、RelA(p65)表达水平,观察CDCA3对NF-кB通路的调控作用。结果 免疫组化及生物信息学分析结果均显示乳腺癌组织中CDCA3蛋白表达量(1.83±0.72)显著高于癌旁组织(1.02±0.51),且CDCA3高表达患者的总体生存率(59.24%)显著低于CDAC3低表达者(70.15%),差异均有统计学意义(P<0.05)。CDCA3表达下调后,MCF7细胞增殖受抑制,G1期细胞比例显著增加,NF-кB1(p50)、RelA(p65)表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。GSEA结果表明,CDCA3可能通过调节G1S检查点、mTOR信号通路、E2F信号通路、NF-кB信号通路、胆固醇平衡、糖酵解反应、细胞的有丝分裂纺锤体等对乳腺癌的发生发展产生影响。结论 CDCA3在乳腺癌肿瘤组织中高表达,且其表达水平与乳腺癌预后呈负相关,干扰CDCA3表达可抑制乳腺癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 细胞周期相关因子3 乳腺癌 细胞增殖
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