【目的】应用RNA干扰技术,靶向抑制舌癌细胞中Cdc6的表达,观察舌癌细胞增殖、凋亡等改变,初步探讨下调Cdc6表达抑制舌癌细胞增殖的分子机制。【方法】实验分4组:空白对照组CON,阴性对照组NC,实验组KD1和KD2。应用前期构建的Cdc6的慢病...【目的】应用RNA干扰技术,靶向抑制舌癌细胞中Cdc6的表达,观察舌癌细胞增殖、凋亡等改变,初步探讨下调Cdc6表达抑制舌癌细胞增殖的分子机制。【方法】实验分4组:空白对照组CON,阴性对照组NC,实验组KD1和KD2。应用前期构建的Cdc6的慢病毒载体,转染舌癌CAL-27细胞,通过Real time RT-PCR和Western blot法检测Cdc6 mRNA及蛋白的表达;以MTT法测定活细胞数并绘制细胞生长曲线;利用流式细胞仪观察细胞凋亡。【结果】慢病毒载体转染CAL-27细胞后,Real time RT-PCR和Western blot实验结果显示:舌癌CAL-27细胞中Cdc6的表达明显被抑制,相对NC组,KD1、KD2组对Cdc6基因敲减效率分别为55.60%和64.38%。蛋白表达分别降低44.44%和66.67%;细胞生长曲线表明,细胞生长明显减缓,KD1和KD2组细胞生长抑制率分别为33.68%和35.79%;流式细胞仪检测细胞周期显示:KD1组、KD2组两组细胞凋亡率较NC组均有显著上升,分别为57.55%和83.81%。【结论】靶向Cdc6慢病毒载体RNA干扰能有效抑制舌癌CAL-27细胞的DNA复制,阻止舌癌细胞的增殖。展开更多
文摘【目的】应用RNA干扰技术,靶向抑制舌癌细胞中Cdc6的表达,观察舌癌细胞增殖、凋亡等改变,初步探讨下调Cdc6表达抑制舌癌细胞增殖的分子机制。【方法】实验分4组:空白对照组CON,阴性对照组NC,实验组KD1和KD2。应用前期构建的Cdc6的慢病毒载体,转染舌癌CAL-27细胞,通过Real time RT-PCR和Western blot法检测Cdc6 mRNA及蛋白的表达;以MTT法测定活细胞数并绘制细胞生长曲线;利用流式细胞仪观察细胞凋亡。【结果】慢病毒载体转染CAL-27细胞后,Real time RT-PCR和Western blot实验结果显示:舌癌CAL-27细胞中Cdc6的表达明显被抑制,相对NC组,KD1、KD2组对Cdc6基因敲减效率分别为55.60%和64.38%。蛋白表达分别降低44.44%和66.67%;细胞生长曲线表明,细胞生长明显减缓,KD1和KD2组细胞生长抑制率分别为33.68%和35.79%;流式细胞仪检测细胞周期显示:KD1组、KD2组两组细胞凋亡率较NC组均有显著上升,分别为57.55%和83.81%。【结论】靶向Cdc6慢病毒载体RNA干扰能有效抑制舌癌CAL-27细胞的DNA复制,阻止舌癌细胞的增殖。
