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抗CD71人-鼠嵌合抗体(D2C)的构建和表达 被引量:5
1
作者 王硕 蒋琳 +4 位作者 叶庆 朱慧芬 杨敬 邵静芳 沈关心 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期665-668,共4页
目的 :构建抗CD71人 鼠嵌合抗体的真核细胞表达载体并在真核细胞中表达嵌合抗体。方法 :将鼠源性抗CD71单抗 (75 79)重、轻链可变区基因 (VH 和VL)分别克隆至含有人IgG轻、重链恒定区的表达载体pγ Expr和pκ Expr中 ;将嵌合表达载体 (... 目的 :构建抗CD71人 鼠嵌合抗体的真核细胞表达载体并在真核细胞中表达嵌合抗体。方法 :将鼠源性抗CD71单抗 (75 79)重、轻链可变区基因 (VH 和VL)分别克隆至含有人IgG轻、重链恒定区的表达载体pγ Expr和pκ Expr中 ;将嵌合表达载体 (Chi75 79 pγ Expr和Chi75 79 pκ Expr)经电转染技术共转染至真核细胞 (SP2 0 )中。结果 :经ELISA法检验阳性转染瘤细胞培养上清 ,证明其表达蛋白产物中同时具有人IgG重链恒定区 (Cγ)和轻链恒定区 (Cκ)蛋白 ;通过间接免疫荧光流式细胞术 (FCM)和间接免疫荧光显微技术 ,证明该表达产物能够特异性识别和结合表达于靶细胞表面的CD71分子。结论 :抗CD71人 鼠嵌合抗体 (D2C)在体外真核细胞表达成功。 展开更多
关键词 cd7l 人-鼠嵌合抗体 构建 表达
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鼠抗CD71单抗轻链及重链可变区基因的克隆和序列分析 被引量:1
2
作者 王志友 沈弢 +5 位作者 张爱华 闭兰 金玉铃 孙可芳 余模松 史良如 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第5期409-411,共3页
目的 获得鼠抗人CD71分子单抗的轻链及重链可变区基因。方法 用一步法提取总RNA,逆转录形成cDNA,设计并合成一套扩增小鼠重、轻链可变区的通用引物,通过PCR扩增基因.分别克隆人pMD18-T载体中,作核苷酸序列分析。结果用重链引物扩增获... 目的 获得鼠抗人CD71分子单抗的轻链及重链可变区基因。方法 用一步法提取总RNA,逆转录形成cDNA,设计并合成一套扩增小鼠重、轻链可变区的通用引物,通过PCR扩增基因.分别克隆人pMD18-T载体中,作核苷酸序列分析。结果用重链引物扩增获得长约350bp的片段,用轻链引物扩增获得长约330bp的片段,序列测定获得它们的DNA序列。结论克隆的重链可变区基因长度为348bp,属于小鼠H链可变区IA亚组;克隆的轻链可变区基因长度为336bp,属于小鼠K轻链可变区Ⅱ亚组。 展开更多
关键词 CD71 抗体 可变区基因 单克隆抗体 序列分析 动物实验
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抗B7-1和抗CD40L单抗延长小鼠皮肤移植物存活实验研究 被引量:3
3
作者 孙传洋 单玉喜 +2 位作者 胡玉敏 陈易人 张学光 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期319-322,共4页
将C57BL/6小鼠腹部全层皮肤移植于BALB/c小鼠中段背部,实验分组(每组7只小鼠):1.B7-1功能性单抗(4E5)治疗组;2.抗CD40L单抗(4F1)治疗组;3.4E5+4F1治疗组,各单抗以20㎎/㎏的剂量注入腹腔内;4.空白对照组,只注射同等量的生理盐水。注射时... 将C57BL/6小鼠腹部全层皮肤移植于BALB/c小鼠中段背部,实验分组(每组7只小鼠):1.B7-1功能性单抗(4E5)治疗组;2.抗CD40L单抗(4F1)治疗组;3.4E5+4F1治疗组,各单抗以20㎎/㎏的剂量注入腹腔内;4.空白对照组,只注射同等量的生理盐水。注射时间为移植后0﹑1﹑3﹑5d,观察移植皮肤排斥情况。于术后第6天分别杀死各组受体和供体鼠,取受体脾细胞与供体作混合淋巴细胞反应(MLR)。收集培养6d的初次反应细胞,检测再次MLR。结果发现,与对照组相比,各单抗治疗组皮肤移植物存活时间延长(P<0.05﹚;与各单独应用4F1和4E5相比,联合使用4F1和4E5产生一定的协同作用,但未能进一步延长移植物的寿命(P>0.05)。初次单向MLR:4F1﹑4E5和4F1+4E5治疗组受体T淋巴细胞在MLR中表现对供体淋巴细胞特异性低反应性,能有效抑制T细胞对同种异体抗原的初次应答。再次单向MLR:4F1﹑4E5﹑4F1+4E5对供体淋巴细胞在再次反应中仍保持着对同种抗原的反应性,与对照组无显著差异,未能诱导特异性免疫耐受。综上结果证实,anti-CDB7-1mAb(4E5)和anti-CD40LmAb(4F1)作为新型免疫抑制剂,在一定程度上抑制细胞免疫应答,干预排斥反应。 展开更多
关键词 B7-CD28/CD40-CD40L共刺激信号 移植排斥反应 混合淋巴细胞反应
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