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激活标志物CD69蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
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作者 徐娜 张芷盈 +4 位作者 杜星南 于黛辉 郑海学 陈霞 伍国强 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第9期1241-1247,共7页
为了评估原核表达的猪源CD69蛋白的免疫原性及其潜在的应用价值,以pET-32a(+)为原核表达载体,猪源CD69基因为目的基因,构建重组质粒pET-32a-CD69,针对大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达;通过变性、复性等方法成功纯化蛋白后,将... 为了评估原核表达的猪源CD69蛋白的免疫原性及其潜在的应用价值,以pET-32a(+)为原核表达载体,猪源CD69基因为目的基因,构建重组质粒pET-32a-CD69,针对大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达;通过变性、复性等方法成功纯化蛋白后,将纯化的CD69蛋白与佐剂按1∶1的比例混合,多次免疫雄性BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并用免疫印迹试验(Western-blot)与酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)进行鉴定。结果表明,重组的CD69以包涵体形式表达,分子质量约为35 k Da;通过ELISA测定鼠源多克隆抗体效价,结果显示效价达到1∶64 000以上;Western-blot结果表明,该多克隆抗体表现出良好的反应性和特异性。激活标志物CD69蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备,为今后我国猪产业的发展与猪相关疾病检测提供了帮助。 展开更多
关键词 cd69基因 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
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