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跨膜型CD59分子的构建及其在小鼠NIH3T3和EL-4细胞表达的研究 被引量：1
1
作者 白云 姜曼 +2 位作者 韩根成 王更银 朱锡华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期156-160,共5页
应用ＲＴ－ＰＣＲ方法，从Ｕ９３７细胞总ＲＮＡ中扩增得到编码人ＣＤ４６分子跨膜区和膜内区ｃＤＮＡ片段，用ＰＣＲ方法扩增得到编码成熟的ＣＤ５９胞外区蛋白的ｃＤＮＡ片段，连接并构建了跨膜型的ＣＤ５９分子ｃＤＮＡ。快速克隆于... 应用ＲＴ－ＰＣＲ方法，从Ｕ９３７细胞总ＲＮＡ中扩增得到编码人ＣＤ４６分子跨膜区和膜内区ｃＤＮＡ片段，用ＰＣＲ方法扩增得到编码成熟的ＣＤ５９胞外区蛋白的ｃＤＮＡ片段，连接并构建了跨膜型的ＣＤ５９分子ｃＤＮＡ。快速克隆于ｐＧＥＭ－ＴＥａｓｙ载体进行序列测定，证实了其阅读框的完整和序列的正确性。进一步将ｃＤＮＡ重组于逆转录病毒ｐＬＸＳＮ载体，电穿孔转染ＰＡ３１７细胞，用病毒上清感染小鼠ＮＩＨ３Ｔ３、ＥＬ－４细胞，经ＦＡＣＳ检测筛选获得表达重组ＣＤ５９ＴＭ分子的阳性细胞克隆。本研究为更深入地研究ＧＰＩ锚固的ＣＤ５９分子与细胞活化信号转导的关系建立了可靠的细胞模型；同时也为探讨应用跨膜型的ＣＤ５９分子对ＰＮＨ进行基因治疗奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 cd59 跨膜型 补体 EL-4细胞 血红蛋白尿
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