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CD3ε of a pan T cell marker involved in mouse Aspergillus fumigatus keratitis
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作者 Wen-Hao Shi Li-Mei Wang +4 位作者 Hai-Jing Yan Shi-Long Liu Xian Yang Xue-JiaoYang Cheng-Ye Che 《International Journal of Ophthalmology(English edition)》 SCIE CAS 2024年第4期616-624,共9页
AIM:To explore whether CD3ε is involved in the adaptive immunity of Aspergillus fumigatus(A.fumigatus)keratitis in mice and the role of innate and adaptive immunity in it.METHODS:Mice models of A.fumigatus keratitis ... AIM:To explore whether CD3ε is involved in the adaptive immunity of Aspergillus fumigatus(A.fumigatus)keratitis in mice and the role of innate and adaptive immunity in it.METHODS:Mice models of A.fumigatus keratitis were established by intra-stromal injection and corneal epithelial scratching.Subconjunctival injections of natamycin,wedelolactone,LOX-1 inhibitor(poly I)or Dectin-1 inhibitor(laminarin)were used to treat mice with A.fumigatus keratitis.Mice were pretreated by intraperitoneal injection of anti-mouse CD3ε.We observed the corneal infection of mice under the slit lamp microscope and made a clinical score.The protein expression of CD3ε and interleukin-10(IL-10)was determined by Western blotting.RESULTS:With the disease progresses,the degree of corneal opacity and edema augmented.In the intrastromal injection models,CD3εprotein expression began to increase significantly on the 2^(nd) day.However,in the scraping epithelial method models,CD3ε only began to increase on the 3^(rd) day.After natamycin treatment,the degree of corneal inflammation in mice was significantly attenuated on the 3^(rd) day.After wedelolactone treatment,the severity of keratitis worsened.And the amount of CD3ε protein was also reduced,compared with the control group.By inhibiting LOX-1 and Dectin-1,there was no significant difference in CD3ε production compared with the control group.After inhibiting CD3ε,corneal ulcer area and clinical score increased,and IL-10 expression was downregulated.CONCLUSION:As a pan T cell marker,CD3ε participate in the adaptive immunity of A.fumigatus keratitis in mice.In our mice models,the corneas will enter the adaptive immune stage faster.By regulating IL-10,CD3ε exerts antiinflammatory and repairs effects in the adaptive immune stage. 展开更多
关键词 cd3ε adaptive immunity Aspergillus fumigatus keratitis INTERLEUKIN-10
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树鼩CD3ε全长编码序列的克隆及分子特征分析 被引量:5
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作者 李乙江 高跃东 +7 位作者 郭彦 陆彩霞 黄京飞 夏雪山 代解杰 范泉水 李作生 张华堂 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期483-489,共7页
树鼩可作为人类疾病的良好模型,但缺乏对其免疫功能研究的基本标志和单克隆抗体。该研究应用RT-PCR技术,分别从3只树鼩的肝脏、脾脏和血液中克隆了CD3ε全长编码序列并用Discovery Studio等软件对其分子特征进行了分析。结果显示,树鼩CD... 树鼩可作为人类疾病的良好模型,但缺乏对其免疫功能研究的基本标志和单克隆抗体。该研究应用RT-PCR技术,分别从3只树鼩的肝脏、脾脏和血液中克隆了CD3ε全长编码序列并用Discovery Studio等软件对其分子特征进行了分析。结果显示,树鼩CD3εcDNA的开放阅读框全长582bp,编码193个氨基酸。树鼩与其他哺乳动物的CD3ε蛋白整体结构近似,与人和恒河猴CD3ε的亲缘关系较近,胞内域与跨膜域高度保守,但胞外域出现2个潜在的糖基化位点,表面电荷亦存在差异。该研究为今后制备树鼩CD3单克隆抗体及功能研究奠定初步的基础。 展开更多
关键词 树鼩 cd3ε cdNA 克隆 结构 功能 单克隆抗体
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麻鸭和樱桃谷鸭的CD3ε、CD4、CD8α基因ORF克隆及序列分析 被引量:4
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作者 李卫 白家媛 +5 位作者 许媛媛 谷长勤 张万坡 程国富 陈敏 胡薛英 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期4428-4434,共7页
【目的】分析比较中国部分品种鸭的CD3ε、CD4和CD8α基因ORF序列,为研究CD3ε链、CD4和CD8α链的结构和功能及其抗体的应用提供依据。【方法】利用RT-PCR,对麻鸭、樱桃谷鸭的CD3ε、CD4和CD8α基因ORF序列克隆测定,应用Clustal(X1.83)... 【目的】分析比较中国部分品种鸭的CD3ε、CD4和CD8α基因ORF序列,为研究CD3ε链、CD4和CD8α链的结构和功能及其抗体的应用提供依据。【方法】利用RT-PCR,对麻鸭、樱桃谷鸭的CD3ε、CD4和CD8α基因ORF序列克隆测定,应用Clustal(X1.83)和DNAstar生物学软件分别与GenBank上公布的北京鸭CD3ε(AF378704)、CD4(AF378701)和CD8α(AF378373)基因ORF序列进行序列分析。【结果】麻鸭、樱桃谷鸭、北京鸭CD3ε和CD4基因ORF序列及所编码的氨基酸同源性为99%;北京鸭和麻鸭CD8α基因ORF序列同源性为99%,与樱桃谷鸭的同源性为95%。麻鸭和北京鸭CD8α基因ORF序基因编码的氨基酸完全一致,与樱桃谷鸭的CD8α存在16处位点差异,其中胞外区有15个氨基酸的差异,使亲水性、抗原性以及此区域位于蛋白质表面的可能性都有明显差异。从遗传发生树得出樱桃谷鸭、北京鸭、麻鸭CD3ε和CD4的ORF序列相互之间的遗传关系近;樱桃谷鸭、麻鸭和北京鸭CD8α基因ORF序列之间的遗传关系较远。【结论】樱桃谷鸭、北京鸭、麻鸭CD3ε和CD4的ORF序列遗传变异性低,樱桃谷鸭与麻鸭和北京鸭CD8α基因ORF之间具有较高遗传变异性。 展开更多
关键词 cd3ε cd4 cd 序列分析 同源性
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Bcl-2家族蛋白参与调节CD3ε和5-氟尿嘧啶介导的T淋巴细胞凋亡 被引量:3
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作者 程宏 刘彦信 +2 位作者 张锦春 刘士廉 郑德先 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期17-21,共5页
目的 :研究Bcl 2家族成员在 5 氟尿嘧啶 (5 FU)和CD3ε介导的T淋巴细胞凋亡中的作用 ,阐述T淋巴细胞凋亡的分子机制 ,为相关肿瘤的治疗提供依据。方法 :用CD3ε特异的单克隆抗体 (2 0 0 μg/ml)和 5 FU(2 5 μg/ml)单独或联合刺激JK... 目的 :研究Bcl 2家族成员在 5 氟尿嘧啶 (5 FU)和CD3ε介导的T淋巴细胞凋亡中的作用 ,阐述T淋巴细胞凋亡的分子机制 ,为相关肿瘤的治疗提供依据。方法 :用CD3ε特异的单克隆抗体 (2 0 0 μg/ml)和 5 FU(2 5 μg/ml)单独或联合刺激JK、TJK和T3JK细胞 ,诱导细胞凋亡 ,用MTS比色法检测细胞死亡率 ,用Westernblot检测Bid的表达和活化。用脂质体的方法转染细胞。结果 :CD3ε特异的单克隆抗体和 5 FU分别单独处理TJK细胞 ,都能诱导其凋亡并伴随Bid的活化 ,二者联合使用能显著增加TJK细胞凋亡和Bid的活化。Bcl 2过表达可明显降低TJK细胞对 5 FU的敏感性。结论 :Bcl 2家族成员参与CD3ε和 5 FU诱导的T淋巴细胞凋亡的调节 ,Bcl 2过表达能显著抑制T淋巴细胞对 5 FU的敏感性。 展开更多
关键词 cd3ε 5-FU BID Bcl-2 细胞凋亡
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PHA、ConA及CD3ε单克隆抗体对小鼠淋巴细胞迁移及分泌趋化因子的影响 被引量:3
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作者 周灵 彭代智 +3 位作者 陈博 左海斌 刘敬 周新 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期295-299,308,共6页
目的探讨不同浓度的PHA、ConA及CD3ε单克隆抗体对Balb/c小鼠淋巴细胞迁移及分泌趋化因子的影响,初步了解这3种刺激剂与小鼠淋巴细胞迁移功能之间的关系。方法通过研磨法分离Balb/c小鼠脾脏淋巴细胞,用不同浓度的PHA、ConA及CD3ε单克... 目的探讨不同浓度的PHA、ConA及CD3ε单克隆抗体对Balb/c小鼠淋巴细胞迁移及分泌趋化因子的影响,初步了解这3种刺激剂与小鼠淋巴细胞迁移功能之间的关系。方法通过研磨法分离Balb/c小鼠脾脏淋巴细胞,用不同浓度的PHA、ConA及CD3ε单克隆抗体分别刺激培养淋巴细胞,收集细胞上清,用Traswell法测定细胞上清对淋巴细胞迁移率的影响;ELISA法检测细胞上清中趋化因子XCL1、CCL4、CCL5、CCL3、IL-16、IL-8及CCL20的水平。结果 PHA组各个浓度刺激下淋巴细胞的迁移率和对照组无明显差异;ConA组的刺激浓度为20μg/ml时,其对应的淋巴细胞迁移率明显高于对照组;CD3ε单抗组,其浓度分别为2.5、10μg/ml时,对应的淋巴细胞迁移率明显高于对照组。在各个刺激组中,ELISA测得的多种趋化因子水平在总体上存在明显差异。结论 ConA及CD3ε单克隆抗体分别刺激小鼠淋巴细胞后,其分泌趋化因子的功能发生了明显的改变,这些趋化因子影响着小鼠淋巴细胞的迁移功能。趋化因子XCL1、CCL4、CCL5、CCL3的水平明显高于对照,说明这几个因子在淋巴细胞迁移中起到重要的作用。根据实验结果初步推荐CD3ε单抗可以作为小鼠淋巴细胞迁移试验中的首选阳性对照,次选为ConA。 展开更多
关键词 PHA CONA cd3εmAb 细胞迁移 趋化因子
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超抗原SEA对K562细胞诱导脐带血单个核细胞上CD3ε链表达的影响 被引量:2
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作者 田红霞 高永鹏 +3 位作者 林晨 陈少华 杨力建 李扬秋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1175-1177,1181,共4页
目的:探讨金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对K562细胞诱导正常人脐带血单个核细胞(MNCs)中CD3ε链基因表达的影响。方法:常规分离4例脐带血单个核细胞,分别与抗CD3单克隆抗体(mAb)、单纯K562细胞、单纯SEA以及SEA联合K562细胞共培养,诱导MNC... 目的:探讨金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对K562细胞诱导正常人脐带血单个核细胞(MNCs)中CD3ε链基因表达的影响。方法:常规分离4例脐带血单个核细胞,分别与抗CD3单克隆抗体(mAb)、单纯K562细胞、单纯SEA以及SEA联合K562细胞共培养,诱导MNCs活化增殖,并设空白对照组。刺激培养48 h后,收集各组细胞提取mRNA并合成cDNA,以β2微球蛋白基因作为内参照,采用实时荧光定量PCR检测在各组MNCs中CD3ε链基因的表达,并根据公式2-△△C t对CD3ε链表达的差异倍数进行相对定量分析。结果:K562细胞组MNCs中CD3ε链基因表达的水平略有降低,抗CD3 mAb组、SEA组、SEA联合K562细胞组的诱导活化的MNCs中CD3ε链基因的表达均有增强,而SEA联合K562细胞组MNCs中CD3ε链基因的表达明显高于单纯SEA组(P<0.01)。结论:超抗原SEA可以增加K562细胞在体外诱导脐带血MNCs中CD3ε链基因的表达。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA) cd3ε K562细胞 脐带血单个核细胞 实时定量PCR
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樱桃谷鸭CD3ε胞外区多肽原核表达、抗体制备及初步应用 被引量:1
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作者 李卫 白家媛 +5 位作者 彭俊平 谷长勤 张万坡 程国富 陈敏 胡薛英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1067-1071,共5页
应用PCR技术从樱桃谷鸭总RNA中克隆CD3ε基因ORF序列(DuCD3ε),通过生物学软件分析,切除信号肽和跨膜区,将胞外区cDNA(DuCD3ε)插入表达载体pET-28a,构建了E.coliBL21(pET-28a/DuCD3ε)原核表达系。经IPTG诱导表达、蛋白纯化,制... 应用PCR技术从樱桃谷鸭总RNA中克隆CD3ε基因ORF序列(DuCD3ε),通过生物学软件分析,切除信号肽和跨膜区,将胞外区cDNA(DuCD3ε)插入表达载体pET-28a,构建了E.coliBL21(pET-28a/DuCD3ε)原核表达系。经IPTG诱导表达、蛋白纯化,制备兔抗DuCD3ε多克隆抗体。应用免疫组织化学SABC方法在樱桃谷鸭外周血液涂片上进行初步应用。结果显示,DuCD3ε胞外区序列长252 bp,编码83个氨基酸。SDS-PAGE和Western-blot分析证实重组DuCD3ε(rDuCD3ε)在BL21大肠杆菌中表达,表达蛋白相对分子质量约为14 000,经3次免疫后,通过间接ELISA测定兔抗rDuCD3ε蛋白多克隆抗体效价为1:12 800。在鸭瘟病毒感染后不同时间,对照组CD3+T淋巴细胞数占淋巴细胞总数的百分比为28%~47%,试验组CD3+T淋巴细胞百分比为32%~77%,在感染后1~3 d外周血液中CD3+T淋巴细胞比值急剧升高,3 d以后比值缓慢下降。结果表明,本试验成功表达CD3ε胞外区多肽,制备的兔抗樱桃谷鸭CD3ε多克隆抗体可用于鸭外周血中CD3+T淋巴细胞标记染色,具有较好的特异性。 展开更多
关键词 樱桃谷鸭 cd3ε 表达 多克隆抗体
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抗树鼩CD3ε单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定 被引量:1
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作者 徐婧雯 张雪梅 +7 位作者 吴忠香 朱文兵 蒋曦 巩蔚 严丽蔚 宋杰 李慧 董少忠 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期54-62,共9页
目的:制备鼠抗树鼩CD3ε单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法:以GST-CD3ε蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术融合免疫后的BALB/c小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,通过间接酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosor... 目的:制备鼠抗树鼩CD3ε单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法:以GST-CD3ε蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术融合免疫后的BALB/c小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,通过间接酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测,筛选出多株能分泌抗树鼩CD3ε的杂交瘤细胞株,经过3次亚克隆筛选后,制备小鼠腹水单克隆抗体,并纯化得到鼠抗树鼩CD3ε单克隆抗体,通过腹水单克隆抗体效价测定、单克隆抗体亲和力测定、单克隆抗体抗原表位分析、Western blot和流式细胞荧光分选技术(fluorescence activated cell sorting,FACS)分析其生物学特性。结果:筛选到5株能稳定分泌抗树鼩CD3ε单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为78I、87I、92D1、75II和35C8,腹水单克隆抗体效价分别为1∶10~6、1∶10~6、1∶10~4、1∶10~6、1∶10~3,亲和力解离常数(Kd)分别为1.8×10^-5、2.9×10^-5、4.9×10^-5、7.3×10^-5、3.6×10^-5。5株单克隆抗体抗原表位分析显示78I、87I和75II识别同一抗原表位,而92D1和35C8识别另一抗原表位。经Western blot检测,HRP标记后的92D1能识别GST-CD3ε蛋白和树鼩外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),并对大鼠、小鼠和猴的PBMC有抗体交叉反应。经FACS检测,PE-Cy5.5标记后的92D1能特异性识别树鼩PBMC。结论:成功制备出鼠抗树鼩CD3ε的单克隆抗体,为进一步应用于树鼩免疫检测奠定基础。 展开更多
关键词 树鼩 cd3ε 单克隆抗体
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多发性骨髓瘤患者外周血CD3ε基因的表达特点 被引量:1
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作者 林春兰 陈少华 +3 位作者 杨力建 周羽竝 陈思 李扬秋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期159-161,共3页
目的:建立荧光定量PCR法检测CD3ε链表达水平的方法,了解多发性骨髓瘤(MM)T细胞信号传导分子CD3ε基因的表达特点。方法:采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量分析法检测22例MM患者及22例正常人外周血单个核细胞CD3ε基因的表达情况,... 目的:建立荧光定量PCR法检测CD3ε链表达水平的方法,了解多发性骨髓瘤(MM)T细胞信号传导分子CD3ε基因的表达特点。方法:采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量分析法检测22例MM患者及22例正常人外周血单个核细胞CD3ε基因的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,22例健康人作为对照,采用相对定量公式:2-△Ct×100%,计算MM患者CD3ε基因相对mRNA表达量。结果:MM患者和正常人外周血单个核细胞均表达CD3ε基因,具体表达量呈现很大的个体差异性。MM患者CD3ε基因mRNA相对表达量最高为39.78%,最低为0.48%,正常人CD3ε基因mRNA相对表达量最高为5.15%,最低为0.01%。MM患者CD3ε基因表达量明显高于正常人(P<0.05)。结论:成功建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法检测CD3ε链表达水平的方法,率先报道了多发性骨髓瘤中CD3ε基因高表达的特点,为了解多发性骨髓瘤T细胞免疫学特点提供新的资料。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 荧光定量PCR cd3ε基因
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CD3εY171点突变对CD8ε/CD3ε融合分子介导的T淋巴细胞功能影响及bcl-2基因的抗凋亡作用
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作者 杨学辉 郑德先 刘彦信 《河北医科大学学报》 CAS 1999年第6期331-334,共4页
目的 观察CD3εY171/P171 点突变及bcl- 2 基因对T 淋巴细胞凋亡的影响。方法 通过电穿孔对CD8 阴性的人Jurkat T(JK) 淋巴细胞转染CD3εY171/P171 点突变的CD8ε融合分子,对表达野生... 目的 观察CD3εY171/P171 点突变及bcl- 2 基因对T 淋巴细胞凋亡的影响。方法 通过电穿孔对CD8 阴性的人Jurkat T(JK) 淋巴细胞转染CD3εY171/P171 点突变的CD8ε融合分子,对表达野生型CD8ε融合分子的人TJK 转染bcl- 2 基因分别获得稳定表达细胞株(T1JK,TJK/bcl- 2),利用CD8ε单克隆抗体刺激细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果CD3εY171/P171 点突变或bcl-2 表达增强后,细胞凋亡率均明显降低。结论 本文结果表明CD3εY171/P171 是CD8ε激活诱导细胞凋亡过程中的一个关键位点,bcl- 2 展开更多
关键词 T细胞 代谢 cd3εY171 点突变 细胞凋亡
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驱铅治疗后铅中毒患者CD3γ和CD3δ及CD3ε链mRNA水平的变化 被引量:5
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作者 郭理杏 肖彦凯 +5 位作者 刘思初 李萡 杨志前 张伊利 刘薇薇 李扬秋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期508-511,共4页
目的了解驱铅治疗后铅中毒患者外周血中T细胞受体信号转导分子CD3γ、CD3δ、CD3ε链表达情况。方法采用实时荧光定量PCR分别检测9例健康人及16例铅中毒患者临床上进行驱铅治疗前后外周血单个核细胞中CD3γ、CD3δ、CD3ε链mRNA水平,以... 目的了解驱铅治疗后铅中毒患者外周血中T细胞受体信号转导分子CD3γ、CD3δ、CD3ε链表达情况。方法采用实时荧光定量PCR分别检测9例健康人及16例铅中毒患者临床上进行驱铅治疗前后外周血单个核细胞中CD3γ、CD3δ、CD3ε链mRNA水平,以β2微球蛋白(β2M)基因为内参基因,根据相对定量公式2-△Ct×100%计算各基因表达水平。采用Spearman秩相关分析健康人和铅中毒患者驱铅治疗前后CD3γ、CD3δ、CD3ε链mRNA水平相关性。结果铅中毒患者驱铅治疗前后CD3γ链mRNA水平与健康人相比无明显差异;驱铅治疗前后CD3δ链mRNA水平均显著低于健康人,驱铅治疗后CD3δ链mRNA水平较治疗前更低;驱铅治疗前CD3ε链mRNA水平与健康人相比显著升高,驱铅治疗后CD3ε链mRNA水平有所恢复。健康人中CD3γ链与CD3δ链、CD3γ链与CD3ε链、CD3δ链与CD3ε链均无相关性;铅中毒患者驱铅治疗前CD3γ链与CD3δ链,CD3γ链与CD3ε链,CD3δ链与CD3ε链均呈显著正相关,驱铅治疗后仅CD3δ链与CD3ε链呈显著正相关。结论铅中毒患者CD3γ、CD3δ、CD3ε链mRNA水平呈不同趋势的改变,提示铅中毒后对机体免疫系统有一定影响并且在不同基因之间存在差异;驱铅治疗后体内铅负荷降低,CD3δ链表达水平仍然与健康人不同,说明驱铅治疗后机体的免疫功能仍存在异常。 展开更多
关键词 荧光定量PCR cd3γ链 cd3δ链 cd3ε MRNA水平
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CD3ε胞浆区Tyr突变阻断下游的细胞凋亡信号传递 被引量:6
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作者 何亦平 刘彦信 +2 位作者 肖声 刘士廉 郑德先 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期199-202,共4页
目的:利用稳定表达CD8ε融合分子的细胞凋亡模型,研究其CD3εITAM中两个酪氨酸的突变对细胞凋亡信号传递及相关基因表达的影响。方法:将稳定表达CD8ε融合分子及其3种突变分子的T淋巴细胞分别用抗CD8单抗刺激后... 目的:利用稳定表达CD8ε融合分子的细胞凋亡模型,研究其CD3εITAM中两个酪氨酸的突变对细胞凋亡信号传递及相关基因表达的影响。方法:将稳定表达CD8ε融合分子及其3种突变分子的T淋巴细胞分别用抗CD8单抗刺激后,检测4种细胞蛋白酪氨酸磷酸化和胞浆Ca2+浓度的变化以及细胞凋亡相关基因表达。结果:抗体刺激后,表达CD8ε的细胞与表达其3种突变分子的细胞相比,其蛋白磷酸化增加,胞浆Ca2+浓度升高;立早基因nur77和细胞凋亡基因fas表达水平升高。结论:首次发现CD3εITAM中两个酪氨酸的突变阻断了CD3介导的凋亡信号传导途径,并影响nur77和fas基因的表达。 展开更多
关键词 细胞凋亡信号 酪氨酸突变 cd3ε分子
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1例CD3ε缺陷致重症联合免疫缺陷病的临床及免疫学特征分析 被引量:2
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作者 张素倩 唐文静 +6 位作者 吴俊峰 戴荣欣 秦涛 白晓明 代继宏 丁媛 赵晓东 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期421-425,共5页
目的探讨1例由11q23染色体CD3E基因突变导致CD3ε缺陷重症联合免疫缺陷病的临床特征及免疫表型。方法收集近期就诊于重庆医科大学附属儿童医院的1例疑诊CD3ε缺陷致重症联合免疫缺陷病患儿外周血标本,提取外周血单个核细胞(PBMC)及核酸,... 目的探讨1例由11q23染色体CD3E基因突变导致CD3ε缺陷重症联合免疫缺陷病的临床特征及免疫表型。方法收集近期就诊于重庆医科大学附属儿童医院的1例疑诊CD3ε缺陷致重症联合免疫缺陷病患儿外周血标本,提取外周血单个核细胞(PBMC)及核酸,CDR3扫描谱型技术分析T淋巴细胞受体(TCR)多样性,定量PCR检测TCR重排剪切环(TREC)含量,二代测序筛查免疫相关基因,一代测序验证。结果 TCR Vβ亚家族表现为单克隆或寡克隆峰,提示TCR重组受限;定量PCR未检测到TREC含量提示TCR重组及T细胞胸腺输出严重受损;二代测序显示CD3E基因复合杂合突变,一代测序验证证实。结论通过临床及免疫学分析、二代测序筛查及一代测序证实,确诊1例CD3E基因复合杂合突变致CD3ε缺陷重症联合免疫缺陷病,该病例罕见且临床与免疫学表型复杂,临床诊断存在困难,导致漏诊与延迟诊断,患者死亡率高且均为早期死亡,干细胞移植或基因治疗是其唯一的根治手段,因此提高临床工作者对本病的认识对于早期诊断与针对性治疗至关重要。 展开更多
关键词 重症联合免疫缺陷病 cd3ε缺陷 二代测序 精准医疗
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中华鳖CD3γ/δ、CD3ε和CD3ζ分子的克隆与表达分析 被引量:1
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作者 付建平 郭政 +2 位作者 高谦 罗璋 聂品 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期1-9,共9页
本研究克隆了中华鳖(Pelodiscus sinensis)T细胞表面标记分子CD3γ/δ、CD3ε和CD3ζ的基因,分析了其在组织/器官表达的分布,并进一步揭示了嗜水气单胞菌(Aeromanas hydrophila)感染后这些基因的表达变化。中华鳖CD3γ/δ和ε分子结构相... 本研究克隆了中华鳖(Pelodiscus sinensis)T细胞表面标记分子CD3γ/δ、CD3ε和CD3ζ的基因,分析了其在组织/器官表达的分布,并进一步揭示了嗜水气单胞菌(Aeromanas hydrophila)感染后这些基因的表达变化。中华鳖CD3γ/δ和ε分子结构相似,均含有1个免疫球蛋白样结构的胞外区、1个跨膜区和含有1个ITAM结构域的胞浆区。与之不同的是,CD3ζ含有1个仅由10个氨基酸组成的胞外区、1个跨膜区和含有3个ITAM结构域的胞浆区。通过生物信息学分析显示,CD3γ/δ由6个外显子和5个内含子组成,CD3ε由7个外显子和6个内含子组成,且CD3γ/δ和CD3ε位于染色体Scaffold JH208224中反向排列且相距9.9 kb。CD3ζ位于染色体Scaffold JH209116.1上,由8个外显子和7个内含子组成。荧光定量PCR分析显示,CD3γ/δ、ε和ζ在脾、肝、肠、血液中表达量较高,在胸腺、肾、心脏、肌肉和肺中表达量低。腹腔注射嗜水气单胞菌12 h后,CD3γ/δ、ε和ζ在胸腺中都呈显著的上调表达,分别为对照组的69.3倍、85.7倍和163.4倍,表明细菌感染可以诱导CD3分子的表达。 展开更多
关键词 cd3γ δ cd3ε cd3ξ 中华鳖 表达分析 淋巴细胞
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CD3ε和PMA对fas基因转录调控作用的研究 被引量:2
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作者 袁泉 郑德先 +1 位作者 肖声 刘士廉 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第6期770-774,共5页
研究了CD3ε和PMA对细胞凋亡基因fas的转录调控作用.根据已知的人fas基因5'上游序列设计引物,用PCR法从人胸腺细胞基因组DNA中扩增出fas5'上游长为446bp的启动子片段.将此片段定向克隆到以虫荧光素酶... 研究了CD3ε和PMA对细胞凋亡基因fas的转录调控作用.根据已知的人fas基因5'上游序列设计引物,用PCR法从人胸腺细胞基因组DNA中扩增出fas5'上游长为446bp的启动子片段.将此片段定向克隆到以虫荧光素酶为报告基因的真核细胞表达载体pXP2中.经限制性内切酶酶切鉴定及序列测定分析表明此重组表达质粒DNA的结构和序列正确.用此质粒(pXP2-fasup)瞬时转染人JurkatT淋巴细胞,分析报告基因的表达水平.结果表明fas基因上游-506到-60的区域有弱启动子活性,约是阴性对照的1.5倍.抗CD3ε抗体和PMA处理均可增强fas启动子的活性,促进报告基因的表达,其虫荧光素酶活性分别是未经处理的pXP2-fasup转染细胞的1.7倍和3.3倍,但二者没有协同作用.PKC的抑制剂staurosporine和PTK的抑制剂herbimycinA可抑制PMA诱导的fas基因转录,使虫荧光素酶基因的表达降至未用PMA处理的水平.但PTK的另一种抑制剂genistein可与PMA发挥协同作用,上调fas基因的转录,使虫荧光素酶活性增加到5倍.这些结果为阐明CD3ε及PMA介导T淋巴细胞激活和凋亡的分子机制? 展开更多
关键词 FAS基因 转录调控 PMA cd3ε 细胞凋亡
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人T淋巴细胞CD3ε链的原核表达及纯化
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作者 金玉玲 张爱华 +3 位作者 闭兰 赵亚杰 彭祥兵 孙可芳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第7期647-650,共4页
目的原核表达并纯化人T淋巴细胞CD3ε(hCD3ε)链。方法以健康成人外周血单个核细胞总RNA为模板,采用RT-PCR法扩增人CD3ε链基因,并克隆入pCR-II载体,酶切鉴定及测序分析后,再定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-3中,构建重组表达质粒pGEX-4T... 目的原核表达并纯化人T淋巴细胞CD3ε(hCD3ε)链。方法以健康成人外周血单个核细胞总RNA为模板,采用RT-PCR法扩增人CD3ε链基因,并克隆入pCR-II载体,酶切鉴定及测序分析后,再定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-3中,构建重组表达质粒pGEX-4T-3-hCD3ε,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经GST亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定。结果酶切分析及DNA测序证实,hCD3ε链基因被正确克隆入pGEX-4T-3载体,并能在原核系统中稳定表达。表达产物的相对分子质量为49 500,0.2 mmol/L IPTG 25℃诱导表达4.5 h,目的蛋白的表达量最高,占菌体总蛋白的29.3%,其中可溶性表达占12.8%。纯化的融合蛋白纯度可达86.1%,可分别被兔抗人CD3ε多抗和羊抗GST多抗识别。结论已成功地原核表达并纯化了GST-hCD3ε融合蛋白。 展开更多
关键词 人T淋巴细胞 cd3ε 原核表达 纯化
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Sequencing and expression analysis of CD3γ/δ and CD3ε chains in mandarin fish, Siniperca chuatsi 被引量:2
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作者 郭政 聂品 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2013年第1期106-117,共12页
The genomic and cDNA sequences of the CD3γ/δ and CD3ε homologues in the mandarin fish, Siniperca chuatsi, were determined. As in other vertebrate CD3 molecules, the deduced amino acid sequences of mandarin fish CD3... The genomic and cDNA sequences of the CD3γ/δ and CD3ε homologues in the mandarin fish, Siniperca chuatsi, were determined. As in other vertebrate CD3 molecules, the deduced amino acid sequences of mandarin fish CD3γ/δ and CD3ε contained conserved residues and motifs, such as cysteine residues and CXXC and immunoreceptor tyrosine-based activation motifs. However, mandarin fish CD3γ/δ and CD3ε showed some differences to their mammalian counterparts, specifically the absence of a negatively charged residue in the transmembrane region of CD3γ/δ. Additionally, while an N-glycosylation site was present in CD3c, the site was not observed in CD3γ/δ. The CD3γ/δ and CD3ε subunit sequences contain six and five exons, respectively, consistent with homologues from Atlantic salmon, Salmo salar. Phylogenetic analysis also revealed that CD3γ/δ and CD3ε in mandarin fish are closely related to their counterparts in Acanthopterygian fish. Real-time PCR showed CD3γ/δ and CD3ε were expressed mainly in the thymus and spleen in normal healthy fish and, to a lesser extent, in mucosal-associated lymphoid tissues, such as the intestine and gills. When lymphocytes isolated from head kidney were treated with the mitogens phytohemagglutinin, concanavalin, and polyriboinosinic polyribocytidylic acid, mRNA expression levels of CD3γ/δ and CD3ε were significantly elevated within 12 h of treatment. This indicated the presence of T lymphocytes in the head kidney of teleost fish, and also the recognition of mitogens by the lymphocytes. Mandarin fish infected with the bacterial pathogen Flavobacterium columnare also showed an increase in the expression of CD3γ/δ and CD3ε mR_NA, indicating that CD3γ/δ and CD3ε lymphocytes are involved in the immune response of this species. 展开更多
关键词 cd3γ/δ cd3ε mandarin fish MITOGEN Flavobacterium columnare
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TCR和CD3ε在αβ和γδΤ细胞上表达的比较研究——TCR/CD3复合物内2个TCR异二聚体结合3条CD3ε链的证据
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作者 GillesThibault PierreBardos 整丹 《重庆师范大学学报(自然科学版)》 CAS 1996年第S1期165-169,共5页
关于TCR/CD3复合物的化学计量测定法的公认模式是每个复合物由1或2个TCR异二聚体与2个CD3ε相结合.它们主要建立在分解细胞膜复合物等生化研究的基础上.最近定量研究αβ和γδ淋巴细胞的CD3ε和TCR链的相关比例是在未变性条件下进行.... 关于TCR/CD3复合物的化学计量测定法的公认模式是每个复合物由1或2个TCR异二聚体与2个CD3ε相结合.它们主要建立在分解细胞膜复合物等生化研究的基础上.最近定量研究αβ和γδ淋巴细胞的CD3ε和TCR链的相关比例是在未变性条件下进行.定量流式细胞测定法(QFCM)研究表明αβ和γδPBL表达的CD3ε链分别为β-和δ-链的1.56和1.52倍.相应地,CD3ε分别与TCR-α,TCR-β,TCR-γ及TCR-δ的比值表现在三株多克隆细胞株和Jurkat细胞上均非常接近于l.50.这些结果清楚地表明αβ以及γδT细胞表达的CD3ε大约为每一种TCR链的1.50倍.这强烈地显示αβ和γδ的TCR/CD3复合物由2个TCR异二聚体与3个CD3ε链相结合(或这种结合比例的成倍增大).此外,本研究显示γδSPBL表达的TCR和CDε链1.90倍于αβPBL(-δ对一β).进一步发现,CD4^+αβPBL的TCR-β和CD3ε.表达较高,同时在CD8^+和CD8^-的γδPBL上均有TCR-δ和CD3ε表达.这些结果证明,CD8^+或CD8-γδPBL,CD4^+aβPBL和CDS8^+αβPBL表达的TCR/CD3复合物水平是依次减少的. 展开更多
关键词 TCR/cd3复合物 cd3ε γδΤ细胞 比较研究 T细胞 异二聚体 细胞株 标准曲线 抗体 抗原
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中药内服、外敷治疗浆细胞性乳腺炎(肿块期)的疗效观察及其对外周血CD3、CD20、CD68和炎性因子表达的影响
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作者 吴燕 方珍 《中国中医药科技》 2025年第2期202-206,共5页
目的:观察中药内服、外敷治疗浆细胞性乳腺炎(PCM)(肿块期)的临床疗效及其对外周血CD3、CD20、CD68和炎性因子水平的影响。方法:选择本院甲状腺乳腺外科2020年1月—2023年6月收治的女性PCM患者86例,按照随机数字表法分为观察组和对照组... 目的:观察中药内服、外敷治疗浆细胞性乳腺炎(PCM)(肿块期)的临床疗效及其对外周血CD3、CD20、CD68和炎性因子水平的影响。方法:选择本院甲状腺乳腺外科2020年1月—2023年6月收治的女性PCM患者86例,按照随机数字表法分为观察组和对照组,每组43例;对照组予以甲泼尼龙片、奥美拉唑肠溶胶囊口服,并口服中药疏肝清热方,观察组在对照组治疗基础予以中药乳痈膏外敷,两组疗程均为4周。比较两组患者治疗前后中医症状评分、肿块大小、疼痛视觉模拟评分(VAS),并比较两组患者外周血CD3、CD20、CD68、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,比较两组治疗总有效率和12个月复发率。结果:治疗后观察组总有效率高于对照组(P<0.05);观察组治疗后各项中医症状评分、肿块最大径、疼痛VAS评分均低于对照组(P<0.01);外周血CD3、CD20、CD68、IL-6、IL-1β、TNF-α含量均低于对照组(P<0.01),随访12个月复发率低于对照组(P<0.05)。结论:疏肝清热方内服联合乳痈膏外敷治疗肿块型PCM患者效果显著,可有效减轻炎症反应,抑制机体的免疫应答,改善中医症状,缩小肿块,减轻疼痛,降低复发率。 展开更多
关键词 浆细胞性乳腺炎 肿块期 疏肝清热方 乳痈膏 cd3cd20、cd68、IL-6 IL-1β TNF-α
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抗逆转录病毒治疗对HIV-1感染者PD-1^(+)CD160^(+)CD3^(+)T细胞的影响
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作者 彭丽珊 杨洋 +1 位作者 伍月榕 刘显 《标记免疫分析与临床》 2025年第2期303-308,共6页
目的探讨抗逆转录病毒治疗(antiretroviral treatment,ART)对HIV-1感染者(people living with HIV-1,PLWH)CD3^(+)T细胞PD-1和CD160表达及其活化凋亡水平的影响。方法收集66例慢性HIV-1感染患者,根据是否接受ART治疗,将PLWH分为non-ART... 目的探讨抗逆转录病毒治疗(antiretroviral treatment,ART)对HIV-1感染者(people living with HIV-1,PLWH)CD3^(+)T细胞PD-1和CD160表达及其活化凋亡水平的影响。方法收集66例慢性HIV-1感染患者,根据是否接受ART治疗,将PLWH分为non-ART组(39例)和ART组(27例),并设置HIV-1阴性对照组(30例)。采用流式细胞术检测3组外周血CD4计数及CD3^(+)T细胞中PD-1、CD160、CD95、CD38和HLA-DR的表达,并分析3组间不同指标的差异性。结果non-ART组CD3^(+)T细胞百分比和PD-1^(+)T细胞百分比与ART组相比差异无统计学意义(P=0.8141,P>0.9999),而其CD160^(+)CD3^(+)T细胞百分比显著高于ART组(P=0.0162)。共表达分析显示,non-ART组PD-1^(+)CD160^(+)CD3^(+)T细胞百分比显著高于ART组(P=0.0121),而在单阳的CD3^(+)T性细胞(CD160^(+)PD-1^(-)和PD-1^(+)CD160-)细胞群,ART组和non-ART组差异均无统计学意义(P=0.3382,P>0.9999)。在PD-1^(+)CD160^(+)CD3^(+)T细胞CD38方面,non-ART组显著高于ART组和HIV-1阴性对照组(P=0.0005,P=0.0015),HIV-1阴性对照组和ART组差异无统计学意义(P>0.9999)。结论ART对PLWH中PD-1^(+)CD160^(+)CD3^(+)T细胞百分比及其CD38的表达具有调节作用。 展开更多
关键词 ART HIV-1 cd3^(+)T细胞 PD-1 cd160
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