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猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白特异性纳米抗体的筛选与鉴定研究
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作者 孙鑫 杨利 +7 位作者 郭东辉 马旭东 杜露平 侯立婷 陈瑾 冯秀丽 郑其升 程海卫 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期941-947,共7页
[目的]猪CD205分子作为猪树突状细胞(DC)特异性的抗原提呈受体,在抗原提呈过程中起关键作用。本研究通过噬菌体展示技术针对猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白进行筛选以获得其特异性的纳米抗体,为猪CD205靶向抗原提呈研究奠定基础。[方法]利用... [目的]猪CD205分子作为猪树突状细胞(DC)特异性的抗原提呈受体,在抗原提呈过程中起关键作用。本研究通过噬菌体展示技术针对猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白进行筛选以获得其特异性的纳米抗体,为猪CD205靶向抗原提呈研究奠定基础。[方法]利用前期制备的猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白进行羊驼免疫,经6次皮下免疫后采集羊驼外周血淋巴细胞,提取总RNA后反转录获得cDNA,经PCR扩增编码纳米抗体的基因片段,构建猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白噬菌体展示纳米抗体基因文库,再运用噬菌体展示技术针对猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白进行亲和筛选,随机挑选单克隆菌落并使用Phage-ELISA方法鉴定出针对猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白的特异性纳米抗体。[结果]4轮亲和筛选后,通过Phage-ELISA方法鉴定和序列比对分析,共成功获得12个猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白特异性纳米抗体,其相对分子质量约为17×10^(3)。[结论]本研究成功筛选并获得猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白特异性的纳米抗体。 展开更多
关键词 cd205 CysR-FNⅡ 纳米抗体 噬菌体展示
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猪CD205分子CysR-FNⅡ截短基因的克隆表达及应用 被引量:1
2
作者 高文昊 杜露平 +5 位作者 侯立婷 于晓明 陈瑾 冯秀丽 郑其升 程海卫 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第5期1272-1277,共6页
为克隆表达编码猪CD205分子的CysR-FNⅡ截短基因片段,并验证其生物学活性,提取了猪淋巴组织总RNA,并合成cDNA,利用PCR方法扩增编码猪CD205分子的CysR-FNⅡ截短基因,构建pET-32a-CysR-FNⅡ原核重组表达质粒,转化至大肠杆菌BL21,分别进行... 为克隆表达编码猪CD205分子的CysR-FNⅡ截短基因片段,并验证其生物学活性,提取了猪淋巴组织总RNA,并合成cDNA,利用PCR方法扩增编码猪CD205分子的CysR-FNⅡ截短基因,构建pET-32a-CysR-FNⅡ原核重组表达质粒,转化至大肠杆菌BL21,分别进行诱导表达与蛋白质纯化,利用制备的目的蛋白免疫小鼠获得多克隆抗体,经间接免疫荧光试验和流式细胞分析鉴定。SDS-PAGE与Western Blot鉴定结果显示,目的蛋白以可溶性形式表达,大小约4.0×10^(4),与理论值一致。一次免疫后14 d抗体效价达1∶3200。间接免疫荧光试验和流式分析结果显示,获得的多克隆抗体可与猪骨髓来源树突状细胞发生特异性结合。说明该重组表达蛋白质具有相应的生物学活性,可用于猪CD205抗原靶向研究。 展开更多
关键词 cd205 CysR-FNⅡ截短基因 原核表达 生物学活性
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小鼠AChR(m97-116)肽段-CD205融合单链抗体的表达及活性检测
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作者 孙超 袁媛 +5 位作者 郑鹏飞 高星 赵元琳 李乐 常婷 李柱一 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 2015年第1期4-8,共5页
目的构建小鼠AChR(m97-116)肽段-CD205融合单链抗体原核表达载体,表达融合单链抗体(m97-116-scFv205),检测其对未成熟树突状细胞(iDC)的亲和力,为通过iDC诱导AChR特异性免疫耐受提供实验基础。方法分离培养小鼠原代骨髓祖细胞,经粒细胞... 目的构建小鼠AChR(m97-116)肽段-CD205融合单链抗体原核表达载体,表达融合单链抗体(m97-116-scFv205),检测其对未成熟树突状细胞(iDC)的亲和力,为通过iDC诱导AChR特异性免疫耐受提供实验基础。方法分离培养小鼠原代骨髓祖细胞,经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)10ng/mL和白细胞介素4(IL-4)10ng/mL刺激培养,经脂多糖(LPS)1ng/mL诱导24h后,高倍显微镜及扫描电镜观察细胞形态;流式细胞术(FCM)检测细胞表面相关分子表达,对iDC表型进行鉴定;构建原核表达载体m97-116-scFv205-pET22b(+),0.1 mmol/mL异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)18℃诱导表达18h,镍(Ni)柱纯化,SDSPAGE和Western blot检测融合单链抗体m97-116-scFv205表达及纯化;FCM检测其与iDC的亲和力。结果形态学观察提示培养细胞为DC,FCM结果显示培养细胞符合iDC表型;SDS-PAGE和Western blot在上清中检测到m97-116-scFv205可溶性表达;亲和力检测显示m97-116-scFv205与iDC具有较高亲和力。结论成功构建并表达m97-116-scFv205融合单链抗体,该抗体与iDC具有较高的亲和力,为下一步靶向iDC诱导AChR特异性免疫耐受治疗重症肌无力奠定了良好的实验基础。 展开更多
关键词 重症肌无力 未成熟树突状细胞 融合单链抗体 cd205
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猪CD205特性的研究 被引量:1
4
作者 Lilian Flores-Mendoza 晋大鹏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第4期20-20,共1页
CD205是树突状细胞(DCs)表达的一种细胞表面受体,在抗原捕获和递呈给内吞途径的过程中起重要作用。CD205除在DCs中表达外,还在胸腺上皮细胞中高表达,但在B细胞、巨噬细胞和T细胞中很少表达或几乎不表达。CD205在大多数动物中均有研究,... CD205是树突状细胞(DCs)表达的一种细胞表面受体,在抗原捕获和递呈给内吞途径的过程中起重要作用。CD205除在DCs中表达外,还在胸腺上皮细胞中高表达,但在B细胞、巨噬细胞和T细胞中很少表达或几乎不表达。CD205在大多数动物中均有研究,但在猪中却鲜有报道。本试验对猪CD205及其在参与免疫反应的不同细胞和组织中mRNA的表达进行了研究。运用染色体步移扩增获得猪CD205的完整cDNA序列,长5175 bp,编码1723个氨基酸。Multi-domain structure分析发现,猪CD205与小鼠、人和牛的氨基酸同源性分别为74%、81%和85%。运用定量RT-PCR检测猪的正常组织和细胞,结果发现,CD205 mRNA在猪胸腺和郎格汉氏细胞中高表达。进一步研究猪CD205的特性,将有助于更好地了解该受体的作用,为深入研究抗原定向猪DCs提供参考依据。 展开更多
关键词 cd205 C-型凝集素受体
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A potential germ cell-specific marker in Japanese flounder,Paralichthys olivaceus:identification and characterization of lymphocyte antigen 75(Ly75/CD205)
5
作者 YANG Yang LIU Qinghua +2 位作者 MA Daoyuan SONG Zongcheng LI Jun 《Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2018年第4期1342-1348,共7页
Some germ cell marker genes, such as vasa, nanos, and dead end( dnd), have been identified in fish. Recently, lymphocyte antigen 75(Ly75/CD205) has been identified as a mitotic germ cell-specific cell-surface marker i... Some germ cell marker genes, such as vasa, nanos, and dead end( dnd), have been identified in fish. Recently, lymphocyte antigen 75(Ly75/CD205) has been identified as a mitotic germ cell-specific cell-surface marker in several fish species. In this study, the Japanese flounder Paralichthys olivaceus ly75 homolog( ly75) was cloned and its expression pattern in gonads was analyzed. The full-length c DNA of ly75 was 7 346 bp, with an open reading frame(ORF) of 5 229 bp. The ORF encoded a protein containing 1 742 amino acids with a predicted molecular mass of 196.89 k Da. In adult tissues, ly75 transcripts were detected in all analyzed tissues but abundantly in the testis. In in-situ hybridization analyses, ly75 mRNA was predominantly localized in oocytes in the ovary and spermatogonia in the testis, but ly75 mRNA was not detected in oogonia, spermatocytes, spermatids, or spermatozoa. These results indicated that ly75 could be a potential germ cell-specific marker in P. olivaceus, as in other fishes. 展开更多
关键词 Ly75/cd205 Japanese flounder Paralichthys olivaceus gonads germ cell-specific marker
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猪CD205单克隆抗体的制备和特性研究
6
作者 Flores-Mendoza L 刘丹 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第7期208-208,共1页
本试验旨在研制猪CD205单克隆抗体,并对猪CD205蛋白在淋巴组织、单核细胞来源的树突状细胞(DC)及分离自猪皮肤的DC中的表达进行比较分析。本研究制备了针对猪CD205C型凝集素样结构域5的单克隆抗体1.F6F6,Western blotting结果显示其能... 本试验旨在研制猪CD205单克隆抗体,并对猪CD205蛋白在淋巴组织、单核细胞来源的树突状细胞(DC)及分离自猪皮肤的DC中的表达进行比较分析。本研究制备了针对猪CD205C型凝集素样结构域5的单克隆抗体1.F6F6,Western blotting结果显示其能识别肠系膜淋巴结细胞中约200ku的蛋白质条带。流式细胞仪分析结果表明,单克隆抗体1.F6F6能分别识别28.5%、28.1%、34.1%和6%的细胞扁桃体、腹股沟和肠系膜淋巴结和胸腺细胞。约20%单核细胞来源的DC呈阳性,而LPS激活的细胞阳性率增加至36%。约70%猪皮肤中分离的DC表达CD205受体。识别CD205受体的单克隆抗体的制备为应用抗针对DC靶抗原的CD205抗体增强免疫应答的启动新策略提供了可能。 展开更多
关键词 树突状细胞 C型凝集素受体 cd205
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CD205的结构与功能研究 被引量:6
7
作者 卢晓 陈政良 《国外医学(分子生物学分册)》 CSCD 2002年第5期306-308,共3页
CD2 0 5是一种分子量 2 0 5 k D的 C型凝集素 ,为 I型膜蛋白 ,含有 10个糖识别域 ,系巨噬细胞甘露糖受体家族成员。人 CD2 0 5基因位于染色体 2 q2 4 ,其 c DNA长 5 16 6 bp,编码产物 172 2个氨基酸残基。CD2 0 5主要表达于树突状细胞... CD2 0 5是一种分子量 2 0 5 k D的 C型凝集素 ,为 I型膜蛋白 ,含有 10个糖识别域 ,系巨噬细胞甘露糖受体家族成员。人 CD2 0 5基因位于染色体 2 q2 4 ,其 c DNA长 5 16 6 bp,编码产物 172 2个氨基酸残基。CD2 0 5主要表达于树突状细胞和胸腺上皮细胞 ,在介导胞吞、抗原提呈中起关键作用 ,还参与稳定胸腺微环境 。 展开更多
关键词 cd205 结构 功能 树突状细胞 胞吞作用 抗原提呈
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肝脏间质树突状细胞在多器官功能障碍综合征中的变化与意义 被引量:4
8
作者 王宏伟 陆江阳 +3 位作者 王晓虹 田光 杨毅 李玲 《中国危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期596-599,I0002,共5页
目的探讨肝脏间质树突状细胞在多器官功能障碍综合征(MODS)免疫紊乱机制中的影响与作用。方法150只C57BL/6小鼠经腹腔注射酵母多糖复制MODS模型,随机分为正常对照组和致伤后3~6h、12~48h、5~7d及10~12d组。观察各组小鼠肝脏间... 目的探讨肝脏间质树突状细胞在多器官功能障碍综合征(MODS)免疫紊乱机制中的影响与作用。方法150只C57BL/6小鼠经腹腔注射酵母多糖复制MODS模型,随机分为正常对照组和致伤后3~6h、12~48h、5~7d及10~12d组。观察各组小鼠肝脏间质树突状细胞的形态学变化及其表面标记物CD11c、CD205、CD80和I—A^B的表达水平;用流式细胞术检测各组外周血CD4^+与CD8^+的T细胞数量及CD4’/CD8’比值。结果急性损伤期(12~48h)肝脏间质树突状细胞大量增生,CD11c、CD205、CD80和I—A^b表达均较正常对照组显著上升(P均〈0.01),外周血T细胞CD4^+/CD8^+比值则明显下降(P〈O.01);功能衰竭期(10~12d)肝脏间质树突状细胞继续增生,但CD205、CD80和I—A^b表达较急性损伤期显著减少(P〈0.05或P〈0.01),外周血T细胞CD4^-/CD8^+比值下降至最低。结论肝脏间质树突状细胞参与并影响了MODS中肝脏局部与全身免疫失衡及免疫抑制过程。 展开更多
关键词 多器官功能障碍综合征 间质树突状细胞 T细胞亚群 cd205 CD11C I—A^b
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小鼠肺脏间质树突状细胞形态学分布与观察 被引量:1
9
作者 王宏伟 陆江阳 +3 位作者 王晓虹 田光 杨毅 李玲 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期347-351,共5页
目的认识小鼠肺脏间质树突状细胞(dendritic cells,DC)的形态、数量和分布特点。方法运用光镜、电镜观察与免疫组化标记(CD11c、CD205、CD80、CD86及MHC-II类分子I-Ab)方法,观察研究C57BL/6小鼠肺脏间质树突状细胞的形态、数量和分布。... 目的认识小鼠肺脏间质树突状细胞(dendritic cells,DC)的形态、数量和分布特点。方法运用光镜、电镜观察与免疫组化标记(CD11c、CD205、CD80、CD86及MHC-II类分子I-Ab)方法,观察研究C57BL/6小鼠肺脏间质树突状细胞的形态、数量和分布。结果小鼠肺脏间质树突状细胞具有与免疫器官及外周血中DC相同的超微形态特征;CD11c阳性DC含量约占肺脏总细胞数的8.5‰,广泛分布于肺间质中;表达CD205、CD80、CD86及I-Ab的成熟DC含量稀少,多位于间质血管周围。结论肺脏间质树突状细胞是一种脏器免疫前哨细胞,是肺脏免疫微环境的重要组成部分。 展开更多
关键词 树突状细胞 cd205 CD11C 共刺激分子 MHC-Ⅱ类分子
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人肝脏间质树突状细胞的分布与形态学观察
10
作者 杨毅 王宏伟 +1 位作者 李玲 陆江阳 《感染.炎症.修复》 2008年第4期214-216,257,共4页
目的:观察人肝脏间质树突状细胞(DC)的形态、数量和分布特点,为进一步认识DC在肝脏免疫微环境中的构成特点提供依据。方法:运用光镜、电镜观察与免疫组化标记(CD11c、CD205、CD209)方法,观察研究人体肝脏间质DC的形态、数量和分布。结果... 目的:观察人肝脏间质树突状细胞(DC)的形态、数量和分布特点,为进一步认识DC在肝脏免疫微环境中的构成特点提供依据。方法:运用光镜、电镜观察与免疫组化标记(CD11c、CD205、CD209)方法,观察研究人体肝脏间质DC的形态、数量和分布。结果:人肝脏间质DC超微形态具有特征性的胞质突起,细胞器不发达;CD11c标记DC的阳性率为(1.80±0.35)%,集中分布于肝汇管区、中央静脉旁和肝被膜下间质中;表达CD205和CD209的成熟DC含量较少,其阳性率分别为(1.33±0.21)%和(1.15±0.16)%,多位于肝汇管区血管周围。结论:间质DC是一种免疫前哨细胞,是肝脏免疫微环境的重要组成部分。 展开更多
关键词 树突状细胞 CD11C cd205 CD209
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酵母多糖致伤MODS模型小鼠的胸腺树突状细胞病理观察 被引量:3
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作者 孙宇 陆江阳 +2 位作者 王晓虹 杨毅 李玲 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期95-99,共5页
目的 研究树突状细胞在MODS免疫器官损伤中的病变特点。方法 运用光镜、电镜与免疫组化(CD1a、CD205及 MIDC -8标记)方法,观察小鼠MODS模型中胸腺树突状细胞的变化特点。结果 致伤早期胸腺树突状细胞大量增生、机能活 跃伴淋巴细胞... 目的 研究树突状细胞在MODS免疫器官损伤中的病变特点。方法 运用光镜、电镜与免疫组化(CD1a、CD205及 MIDC -8标记)方法,观察小鼠MODS模型中胸腺树突状细胞的变化特点。结果 致伤早期胸腺树突状细胞大量增生、机能活 跃伴淋巴细胞大量凋亡;在缓解期(3~7天)胸腺及树突状细胞恢复正常;MODS期(8~12天)树突状细胞数量再次增加,但 功能减弱。同时伴有较多树突状细胞和淋巴细胞变性凋亡。结论 树突状细胞病变是MODS免疫系统损伤的首发病变,树 突状细胞的数量与机能变化与MODS模型病程具有高度平行,提示树突状细胞病变与MODS启动机制和病程转归有重要关 系。 展开更多
关键词 MODS 胸腺树突状细胞 病理观察 模型小鼠 病程 凋亡 淋巴细胞 机能 结论 平行
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小鼠脾脏树突状细胞的分布与形态学观察 被引量:8
12
作者 刘茜 陆江阳 +4 位作者 王晓虹 王宏伟 田光 杨毅 李玲 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2007年第4期346-348,351,共4页
目的:认识脾脏树突状细胞的含量、分布及形态特征。方法:运用光镜、电镜观察,免疫组化标记(CD11c、CD205、CD80与CD86、I-Ab)与免疫荧光标记方法,观察小鼠脾脏树突状细胞的含量、分布与形态结构。结果:小鼠脾脏白髓与红髓中散在分布着... 目的:认识脾脏树突状细胞的含量、分布及形态特征。方法:运用光镜、电镜观察,免疫组化标记(CD11c、CD205、CD80与CD86、I-Ab)与免疫荧光标记方法,观察小鼠脾脏树突状细胞的含量、分布与形态结构。结果:小鼠脾脏白髓与红髓中散在分布着体积较大的不规则形树突状细胞,含量以白髓边缘区最多,依次为白髓和红髓脾索。CD11c+DC约占脾脏细胞总数的3%,而CD205+DC约占脾脏细胞总数的2‰。脾脏树突状细胞表面形成数个胞浆突起。胞核略长多有凹陷。胞浆低电子密度,细胞器不发达,无溶酶体和吞噬体。结论:多种树突状细胞标志物联合标记,结合光、电镜形态学观察,能够较全面反映小鼠脾脏内树突状细胞的形态分布特征,为树突状细胞研究提供了形态学依据。 展开更多
关键词 树突状细胞 CD11C cd205 共刺激分子
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肾脏间质树突状细胞在多器官功能障碍综合征中的变化与作用 被引量:2
13
作者 王宏伟 陆江阳 +3 位作者 王晓虹 田光 李玲 杨毅 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 2007年第11期1146-1150,共5页
目的探讨肾脏间质树突状细胞在多器官功能障碍综合征免疫紊乱中的影响与作用。方法腹腔注射酵母多糖制造C57BL/6小鼠MODS模型,分为正常、3~6 h、12~48 h、5~7d和10~12 d组。观察各组小鼠肾脏间质树突状细胞的病理学变化及其表面标记... 目的探讨肾脏间质树突状细胞在多器官功能障碍综合征免疫紊乱中的影响与作用。方法腹腔注射酵母多糖制造C57BL/6小鼠MODS模型,分为正常、3~6 h、12~48 h、5~7d和10~12 d组。观察各组小鼠肾脏间质树突状细胞的病理学变化及其表面标记物CD11c、CIY205、CD80和I-A^b在MODS各期肾脏中的表达水平;流式细胞术检测外周血CD4^+与CD8^+的T细胞数量与比值。结果在急性损伤期,肾脏间质树突状细胞大量增生,CD 80和I-A^b表达较正常组差异具有统计学意义(P<0.01和P<0.05),外周血T细胞CD^4/CD8^+比值则明显下降(P<0.01)。功能衰竭期,肾脏间质树突状细胞增生至最高点,但其CD80和I-A^b表达较急性损伤期显著减少(P<0.01),外周血T细胞CD4^+/CD8^+比值下降至最低(P<0.01)。结论肾脏间质树突状细胞参与并影响了MODS中肾脏局部与全身的免疫失衡及免疫抑制过程。 展开更多
关键词 多器官功能障碍综合征 树突状细胞 电子显微镜 cd205 I-A^b
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In vivo administration of Fms-like tyrosine kinase-3 ligand effectively stimulates lung dendritic cell expansion in mice 被引量:2
14
作者 WANG Hong-wei LU Jiang-yang +1 位作者 WANG Lin TIAN Guang 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2012年第14期2562-2567,共6页
Background Dendritic ceils (DCs) are the most important professional antigen presenting cells that play a key role in initiating adaptive immune responses. The depletion and dysfunction of DCs contribute to the deve... Background Dendritic ceils (DCs) are the most important professional antigen presenting cells that play a key role in initiating adaptive immune responses. The depletion and dysfunction of DCs contribute to the development of immunodeficiency or immunoparalysis in some lung diseases. In the present study, we investigated the effects of Fms-like tyrosine kinase-3 ligand (FIt3L) administration in vivo on lung DCs expansion to provide an experimental basis of FIt3L used as a potential therapeutic agent for the related lung disorders. Methods Balb/c mice were randomly divided into FIt3L group (n=10) and control group (n=10). Each mouse in the FIt3L group received subcutaneous administration of FIt3L at a dose of 10 pg once daily for nine consecutive days. Lung histology was observed, and CD11c and CD205 were immunologically labeled in lung tissue sections. Low-density lung cells were separated by density gradient centrifugation, and then subsets and MHC-II/I-Ad expression of DCs were analyzed by flow cytometry. Results In the FIt3L group the number and density of DC-like cells were markedly increased compared with the control group, mainly distributed in the alveolar septa. Immunological labeling in situ found that there were significantly higher numbers of CD11c+ and CD205+ DCs in lung mesenchymal tissue (P 〈0.05), where they formed a denser reticular formation. Flow cytometry analysis demonstrated that the proportions of myeloid CD11c+CD11b+ DCs and plasmacytoid CD11c+CD45R/B220+ DCs in the low-density lung cells in the FIt3L group were significantly higher compared with the control group; showing 3.17- and 3.3-fold increase respectively (P 〈0.05). The proportion of CD11c+ DCs expressing MHC-II/I-Ad+ was significantly increased, with a 2.7-fold increase as compared with the control group (P 〈0.05). Conclusions FIt3L administration in vivo induces lung DCs expansion, favoring myeloid and plasmacytoid DC subsets, which are phenotypically more mature. FIt3L may be useful in the therapy to augment immune function of the lung. 展开更多
关键词 Fins-like tyrosine kinase-3 ligand lung dendritic cell MHC-II cd205
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