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人CD154-GST融合蛋白基因在大肠杆菌中的表达 被引量：4
1
作者 张春艳 李树浓 +2 位作者 宁波 张志方 曹开源 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第8期673-677,共5页
目的 :为制备重组人CD15 4-谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)融合蛋白 (hCD15 4-GST) ,用于人CD15 4单克隆抗体研制。方法 :根据人CD15 4基因序列设计合成特异性引物 ,RT -PCR扩增人CD15 4基因 ,并插入融合蛋白原核表达载体pGEX - 4T - 1中 ,... 目的 :为制备重组人CD15 4-谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)融合蛋白 (hCD15 4-GST) ,用于人CD15 4单克隆抗体研制。方法 :根据人CD15 4基因序列设计合成特异性引物 ,RT -PCR扩增人CD15 4基因 ,并插入融合蛋白原核表达载体pGEX - 4T - 1中 ,得到重组表达质粒pGEX - 4T - 1/CD15 4;用此重组质粒转化大肠杆菌BL2 1细胞 ,转化菌落经BamHⅠ、EcoRⅠ酶切鉴定。IPTG诱导大肠杆菌表达人CD15 4蛋白 ,SDS -PAGE电泳鉴定表达产物。结果 :从人外周血淋巴细胞扩增出 82 0bp的hCD15 4cDNA ;将其克隆至pGEX - 4T - 1质粒中 ,经双酶切鉴定及DNA序列分析证实含有目的基因 ;IPTG诱导后的大肠杆菌经SDS -PAGE电泳鉴定出现明显的 5 5kD蛋白带。结论 :成功构建了人CD15 4-GST原核表达质粒 ,并在大肠杆菌中表达出人CD15 4-GST融合蛋白 ,为人CD15 展开更多
关键词 融合蛋白 克隆 移植排斥反应 cd154-gst
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