LncRNA GSEC调控CTCF促进布鲁氏菌性脊柱炎巨噬细胞极化的机制研究

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作者 阿日奔吉日嘎拉 王金山 +5 位作者 李斯琴 李强 刘志恒 刘雄伟 高飞 王兴 《实用临床医药杂志》 2025年第24期113-119,共7页

目的探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)G-四链形成序列(GSEC)在布鲁氏菌性脊柱炎(BS)中的作用及其对BS巨噬细胞极化的调节机制。方法选取2021年5月—2024年5月收治的36例初诊BS患者及同期体检的30名健康人员为研究对象,采集所有受试者静... 目的探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)G-四链形成序列(GSEC)在布鲁氏菌性脊柱炎(BS)中的作用及其对BS巨噬细胞极化的调节机制。方法选取2021年5月—2024年5月收治的36例初诊BS患者及同期体检的30名健康人员为研究对象,采集所有受试者静脉血备用。人单核细胞(THP1)经培养后分组:对照组[细胞培养基中加入5%健康人群血清及50 ng/mL佛波酯(PMA)分化48 h]、BS组(细胞培养基中加入5%BS患者血清及50 ng/mL PMA分化48 h)、sh-NC组(转染对照载体sh-NC)、sh-GSEC组[转染含LncRNA GSEC的shRNA(sh-GSEC)慢病毒载体]、sh-GSEC+LV-NC组[转染含sh-GSEC的慢病毒载体与对照载体(LV-NC)]和sh-GSEC+LV-CTCF组[转染含sh-GSEC的慢病毒载体与含CCCTC结合因子(CTCF)过表达载体(LV-CTCF)的慢病毒载体]。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测各组转染分化的巨噬细胞中LncRNA GSEC及CTCF mRNA表达水平;蛋白免疫印迹(Western blot)分析各组CTCF蛋白表达情况;RNA免疫沉淀(RIP)测定LncRNA GSEC与CTCF结合情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测纳入者血清和各组细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-10和转化生长因子β(TGF-β)水平;流式细胞术分析各组M1型和M2型巨噬细胞比例。结果BS患者外周血M1型巨噬细胞含量较健康人群上调,M2型巨噬细胞含量较健康人群降低,差异均有统计学意义(P<0.001)。ELISA显示,与健康人群比较,BS患者血清中促炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平上调,抗炎因子IL-4、IL-10、TGF-β水平降低,差异均有统计学意义(P<0.001)。RT-qPCR结果显示,BS患者外周血中LncRNA GSEC表达水平为(4.05±0.26),高于健康人群的(1.02±0.11),差异有统计学意义(P<0.001)。RT-qPCR结果显示,sh-GSEC组细胞中LncRNA GSEC表达水平为(0.32±0.07)%,低于sh-NC组的(1.02±0.09)%,差异有统计学意义(P<0.001)。流式细胞术分析显示,sh-GSEC组M1型巨噬细胞含量较sh-NC组降低,M2型巨噬细胞含量升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。ELISA检测结果显示,sh-GSEC组巨噬细胞上清液中促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平较sh-NC组降低,抗炎因子IL-4、IL-10、TGF-β水平升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。Western blot分析显示,BS患者外周血中CTCF蛋白表达水平较健康人群上调,差异有统计学意义(P<0.001)。RIP结果表明,CTCF抗体所捕获的复合物中LncRNA GSEC含量较IgG抗体捕获的复合物中更富集(P<0.001)。RT-qPCR结果显示,sh-GSEC+LV-CTC组巨噬细胞中CTCF mRNA表达水平为(3.53±0.47),较sh-GSEC+LV-NC组的(1.01±0.05)和sh-GSEC组的(1.02±0.04)升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。Western blot结果显示,sh-GSEC+LV-CTCF组巨噬细胞中CTCF蛋白水平为(3.12±0.27),较sh-GSEC+LV-NC组(1.03±0.06)和sh-GSEC组(1.01±0.04)升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。流式细胞术结果显示,sh-GSEC组M1型巨噬细胞含量较sh-NC组降低,M2型巨噬细胞含量升高,差异均有统计学意义(P<0.01);sh-GSEC+LV-CTCF组M1型巨噬细胞含量较sh-GSEC+LV-NC组升高,M2型巨噬细胞含量降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论LncRNA GSEC通过靶向调控CTCF表达,调节巨噬细胞向M1型极化,促进BS的发生,这为理解BS病机及开发新的诊断和治疗标志物提供了新方向。 展开更多

关键词 布鲁氏菌性脊柱炎 长链非编码核糖核酸G-四链形成序列 ccctc结合因子 巨噬细胞 炎症因子 RNA免疫沉淀 佛波酯 慢病毒载体

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鸡CTCF基因真核表达载体的构建及其对脂类代谢作用的研究

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作者 夏磊 魏志恒 +5 位作者 裴军 刘世昊 周博 徐璐 郁建锋 顾志良 《常熟理工学院学报》 2025年第2期54-60,共7页

CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)是一种多功能且高度保守的转录调节因子,参与转录调控、染色质结构维护、细胞分化等多种生物学过程.本研究通过RT-qPCR检测CTCF基因在鸡不同组织中的表达量,发现CTCF在脑和心脏中高表达.构建的... CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)是一种多功能且高度保守的转录调节因子,参与转录调控、染色质结构维护、细胞分化等多种生物学过程.本研究通过RT-qPCR检测CTCF基因在鸡不同组织中的表达量,发现CTCF在脑和心脏中高表达.构建的CTCF真核过表达载体转染鸡肝癌细胞系LMH(Leghorn Male Hepatoma,LMH)后,成功表达CTCF-Myc融合蛋白.油红O染色和比色法检测显示,过表达CTCF后,LMH细胞脂滴沉积和总甘油三酯(TG)显著增加(P<0.01),磷脂酸磷酸酶1(LIPIN1)基因表达下调(P<0.01),固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、脂肪酸合酶(FASN)和乙酰辅酶A羧化酶α(ACACA)基因表达显著上调(P<0.05或P<0.01).结果表明,CTCF基因可能通过调控脂质代谢相关基因表达促进脂质沉积. 展开更多

关键词 ccctc结合因子 鸡肝癌细胞 脂滴沉积 甘油三酯 脂类代谢相关基因

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一例常染色体显性遗传智力障碍21型患者携带CTCF突变

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作者 丁娟 马明圣 《基础医学与临床》 2025年第12期1639-1642,共4页

目的探讨CCCTC结合因子(CTCF)突变相关常染色体显性遗传智力障碍21型(MRD21)的临床特点。方法回顾性分析1例常染色体显性遗传智力障碍21型患者的临床资料,包括临床表现、实验室检查及遗传学检查,并结合文献探讨。结果6岁男性患儿,新生... 目的探讨CCCTC结合因子(CTCF)突变相关常染色体显性遗传智力障碍21型(MRD21)的临床特点。方法回顾性分析1例常染色体显性遗传智力障碍21型患者的临床资料,包括临床表现、实验室检查及遗传学检查,并结合文献探讨。结果6岁男性患儿,新生儿期喂养困难,自幼便秘。自幼发育落后,表现为智力、语言落后,自闭症样表现。无癫痫发作。头磁共振成像、脑电图未见异常。查体与人眼神交流少,小头畸形,无特殊面容。全外显子组测序及Sanger测序验证患儿CTCF新生杂合突变c.1087-2A>G,患儿父母均无该变异。结论MRD21临床表现缺乏特异性,智力障碍最常见,其他表现还可有小头畸形,喂养困难、便秘等消化系统症状,行为异常也较常见。基因检测有助于明确诊断。 展开更多

关键词 智力障碍 ccctc结合因子(ctcf) 小头畸形 喂养困难

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原钙粘蛋白基因簇调控区域中成簇的CTCF结合位点分析 被引量：15

4

作者 翟亚男 许泉 +1 位作者 郭亚 吴强 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期323-336,共14页

哺乳动物中原钙粘蛋白(Protocadherin,Pcdh)基因簇包含50多个串联排列的基因,这些基因形成3个紧密相连的基因簇(Pcdh?、Pcdh?和Pcdh?),所编码的原钙粘蛋白质群在神经元多样性(Neuronal diversity)和单细胞特异性(Single cell identity)... 哺乳动物中原钙粘蛋白(Protocadherin,Pcdh)基因簇包含50多个串联排列的基因,这些基因形成3个紧密相连的基因簇(Pcdh?、Pcdh?和Pcdh?),所编码的原钙粘蛋白质群在神经元多样性(Neuronal diversity)和单细胞特异性(Single cell identity)以及神经突触信号转导中发挥重要作用。前期的工作已证实转录因子CTCF(CCCTC-binding factor)与CTCF结合位点(CTCF-binding site,CBS)的方向性结合能够决定增强子和启动子环化的方向以及其远距离交互作用的特异性,并进一步在Pcdh基因座(Locus)形成两个(Pcdh?和Pcdh?)染色质拓扑结构域(CTCF/cohesin-mediated chromatin domain,CCD),而且染色质拓扑结构域对于控制基因表达调控至关重要。本文通过生物信息学方法对比人类和小鼠序列,发现Pcdh??染色质拓扑结构域调控区域中的DNase I超敏位点(DNase I hypersensitive sites,HSs)较为保守。染色质免疫沉淀及大规模测序实验(Chromatin immunoprecipitation and massive parallel sequencing,Ch IP-Seq)揭示CBS位点在Pcdh??调控区域中成簇分布并且具有相同的方向。凝胶电泳迁移实验(Electrophoresis mobility shift assay,EMSA)确定Pcdh??调控区域内具体的42 bp CBS位点并且发现一个CTCF峰包含两个CBS位点。在全基因组范围内,运用计算生物学方法分析CTCF和增强子、启动子等调控元件的关系,发现CBS位点在调控元件附近有较多分布,推测CTCF通过介导增强子和启动子的特异性交互作用,在细胞核三维基因组内形成活性转录枢纽调控基因精准表达。 展开更多

关键词 原钙粘蛋白基因簇 转录因子ctcf ctcf结合位点 染色质拓扑结构域CCD 基因表达调控

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多功能转录因子CTCF重组质粒构建及其表达鉴定 被引量：2

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作者 蒋磊 覃扬 +3 位作者 孙芝琳 武静 杨文理 张军哲 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期1-5,共5页

目的构建人CTCFcDNA全长及N端、Zn指、C端3个片段的原核融合表达载体,纯化融合蛋白并进行鉴定。方法以编码CTCF全长序列的质粒为PCR模板,分别构建GST融合表达重组质粒pGEX-4T-2-CTCF,pGEX-4T-2-CTCF-N,pGEX-4T-2-CTCF-Zn,pGEX-4T-2-CTCF... 目的构建人CTCFcDNA全长及N端、Zn指、C端3个片段的原核融合表达载体,纯化融合蛋白并进行鉴定。方法以编码CTCF全长序列的质粒为PCR模板,分别构建GST融合表达重组质粒pGEX-4T-2-CTCF,pGEX-4T-2-CTCF-N,pGEX-4T-2-CTCF-Zn,pGEX-4T-2-CTCF-C,转化大肠杆菌BL21,酶切、测序鉴定;优化IPTG诱导表达条件,并对亲和层析纯化的GST融合蛋白CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF进行Far-Western blot鉴定。结果重组质粒经双酶切和测序鉴定证实构建成功。GST融合蛋白CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF-C均在大肠杆菌中成功诱导表达,融合蛋白经亲和层析纯化获得纯化蛋白。各纯化蛋白经SDS-PAGE和Far-Western blot鉴定,均为诱导表达蛋白质。结论成功构建了GST融合表达CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF-C的重组质粒,对融合蛋白表达条件进行了优化,获得了高效表达的GST融合蛋白。 展开更多

关键词 ctcf结合因子 融合蛋白 表达

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CCCTC-结合因子的表达水平影响其在细胞内的分布 被引量：1

6

作者 王荣 黄培堂 朱旭东 《生物技术通讯》 CAS 2011年第4期519-521,共3页

目的:研究CCCTC-结合因子(CTCF)的表达水平与其在HeLa和HepG2细胞内分布的关系。方法:利用小干扰RNA敲降CTCF的表达;利用免疫荧光染色检测CTCF在细胞内的分布。结果:在HeLa和HepG2细胞中下调CTCF的表达,检测到CTCF在细胞核内的分布比例... 目的:研究CCCTC-结合因子(CTCF)的表达水平与其在HeLa和HepG2细胞内分布的关系。方法:利用小干扰RNA敲降CTCF的表达;利用免疫荧光染色检测CTCF在细胞内的分布。结果:在HeLa和HepG2细胞中下调CTCF的表达,检测到CTCF在细胞核内的分布比例减少,而在细胞质内的分布比例相应增加。结论:CTCF的表达水平会影响其在细胞内的分布。 展开更多

关键词 ccctc-结合因子 表达水平 胞内分布

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CCCTC-结合因子在子宫内膜癌中的表达及诊断意义

7

作者 胡俊 袁瑞 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期401-405,共5页

目的:探讨CCCTC-结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)在子宫内膜癌中的表达及临床诊断意义。方法:随机选取30例正常子宫内膜标本(其中15例增殖期内膜组织,15例分泌期内膜组织)为对照组,45例子宫内膜癌患者的子宫内膜标本为实验组。采用... 目的:探讨CCCTC-结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)在子宫内膜癌中的表达及临床诊断意义。方法:随机选取30例正常子宫内膜标本(其中15例增殖期内膜组织,15例分泌期内膜组织)为对照组,45例子宫内膜癌患者的子宫内膜标本为实验组。采用Western blot法检测CTCF蛋白和人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)在各组中的表达水平以及相关性;半定量RT-PCR法检测各组中CTCF基因mRNA及hTERT基因mRNA转录水平。结果:CTCF和hTERT在各组中均有表达。实验组CTCF蛋白和hTERT基因蛋白阳性表达率及相对表达量与对照组(分别88.89%vs.60%χ2=8.57,P=0.005;80%vs.26.67%,χ2=21.11,P=0.000;t=50.039,P=0.000;t=10.662,P=0.000)间存在差异;实验组CTCF基因mRNA和hTERT基因mRNA相对表达量与对照组(分别t=67.448,P=0.000;t=65.908,P=0.000)间同样具有统计学差异性。CTCF的表达与子宫内膜癌的病理分级和临床手术分期均有关(分别χ2=8.613,P=0.007;χ2=11.739,P=0.001),与病理类型无关(χ2=4.906,P=0.086);hTERT的表达与子宫内膜癌病理分级、病理类型、临床分期均无关(分别χ2=0.352,P=0.258;χ2=1.568,P=0.457;χ2=0.000,P=1.000)。子宫内膜癌中CTCF和hTERT的异常表达存在相关性(χ2=5.625,P=0.018),并呈正相关(r=0.354,P=0.017)。结论:CTCF与端粒酶hTERT在正常子宫内膜组织与子宫内膜癌中表达具有差异性,不同临床参数下CTCF与hTERT表达情况各异,CTCF和hTERT在预测与临床参数关系密切的子宫内膜癌复发过程中起重要作用。 展开更多

关键词 ccctc-结合因子 人端粒酶逆转录酶 子宫内膜肿瘤

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GST-CTCF融合蛋白原核表达载体的构建及表达

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作者 付晶晶 易丽君 李红 《南昌大学学报（医学版）》 CAS 2015年第1期1-3,14,共4页

目的构建人CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)与谷胱甘肽转移酶(glutathione S-transferase,GST)重组蛋白的原核表达载体,并进行诱导表达。方法以pEASY-T1-SIMPLE-CTCF为模板,设计引入限制性酶切位点的CTCF引物,PCR方法扩增目... 目的构建人CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)与谷胱甘肽转移酶(glutathione S-transferase,GST)重组蛋白的原核表达载体,并进行诱导表达。方法以pEASY-T1-SIMPLE-CTCF为模板,设计引入限制性酶切位点的CTCF引物,PCR方法扩增目的片段,产物经限制性内切酶酶切后与原核表达载体pGEX-4T-1连接,构建成pGEX-4T-1-CTCF原核表达载体,转化至大肠埃希菌BL21中,经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)进行诱导,Western blot检测GST-CTCF融合蛋白的表达情况。结果经菌液PCR、质粒双酶切分析、基因测序分析证实重组表达质粒pGEX-4T-1-CTCF构建成功,GST-CTCF融合蛋白产物经Western blot鉴定为特异性表达。结论成功构建了pGEX-4T-1-CTCF原核表达质粒,获得特异性的GST-CTCF融合蛋白,为进一步研究转录因子CTCF的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 ctcf 原核表达载体 谷胱甘肽转移酶 重组蛋白表达

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CCCTC-结合因子与输入蛋白13存在蛋白间相互作用

9

作者 王荣 沈晶晶 +1 位作者 黄培堂 朱旭东 《生物技术通讯》 CAS 2011年第5期640-642,共3页

目的:研究CCCTC-结合因子(CTCF)是否与输入蛋白13(IPO13)存在相互作用。方法:采用GST pull-down及免疫共沉淀实验研究二者的相互作用。

关键词 ccctc-结合因子 输入蛋白13 蛋白质相互作用

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CCCTC结合因子在HeLa细胞中调控X染色体连锁的凋亡抑制蛋白的表达

10

作者 冯烨 涂长春 +1 位作者 黄培堂 朱旭东 《生物技术通讯》 CAS 2010年第6期787-789,共3页

目的:确定HeLa细胞的CCCTC结合因子(CTCF)表达水平是否与细胞的抗凋亡能力相关,并研究其具体分子机制。方法:用顺铂和阿糖胞苷分别诱导HeLa细胞和CTCF敲降的HeLa-CTCF-II-11细胞凋亡,比较两者的凋亡率;用基因表达芯片检测CTCF敲降后HeL... 目的:确定HeLa细胞的CCCTC结合因子(CTCF)表达水平是否与细胞的抗凋亡能力相关,并研究其具体分子机制。方法:用顺铂和阿糖胞苷分别诱导HeLa细胞和CTCF敲降的HeLa-CTCF-II-11细胞凋亡,比较两者的凋亡率;用基因表达芯片检测CTCF敲降后HeLa细胞的表达谱变化,寻找并验证受CTCF调控的与凋亡相关的蛋白。结果:用顺铂和阿糖胞苷诱导后,HeLa-CTCF-II-11细胞的凋亡率显著高于HeLa细胞;HeLa细胞的CTCF敲降后,X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达显著下降。结论:CTCF敲降使HeLa细胞的抗凋亡能力下降,CTCF对XIAP基因的表达调控在这个过程中起了重要作用。 展开更多

关键词 ccctc结合因子 X染色体连锁的凋亡抑制蛋白 基因表达调控 凋亡

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CCCTC-结合因子与核周蛋白α4存在分子间相互作用并调控其基因表达 被引量：2

11

作者 沈晶晶 黄培堂 朱旭东 《生物技术通讯》 CAS 2010年第4期481-483,共3页

目的:研究CCCTC-结合因子(CTCF)是否与核周蛋白α4(KPNA4)有蛋白间相互作用并调控其表达。方法:用GSTpull-down实验研究CTCF是否与KPNA4存在蛋白间相互作用;用逆转录半定量PCR和免疫印迹检测CTCF敲降对KPNA4基因表达的影响。结果:GSTpul... 目的:研究CCCTC-结合因子(CTCF)是否与核周蛋白α4(KPNA4)有蛋白间相互作用并调控其表达。方法:用GSTpull-down实验研究CTCF是否与KPNA4存在蛋白间相互作用;用逆转录半定量PCR和免疫印迹检测CTCF敲降对KPNA4基因表达的影响。结果:GSTpull-down实验表明CTCF与KPNA4之间存在相互作用;当CTCF敲降时,KPNA4基因的表达随之下降。结论:CTCF与KPNA4之间存在相互作用并调控其基因表达。 展开更多

关键词 ccctc-结合因子 核周蛋白α4 基因表达调控 蛋白质相互作用

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敲低CTCF腺病毒表达载体的构建及效果检测 被引量：1

12

作者 王天艺 张彦 +1 位作者 师明磊 赵志虎 《生物技术通讯》 CAS 2014年第4期484-487,共4页

目的:获得敲低效果较好的CCCTC结合因子(CTCF)的RNA干扰腺病毒载体,以便于研究其在肿瘤发生发展中的作用。方法:从已发表文献中获得CTCF敲低靶序列,合成2对含有小发卡结构的寡核苷酸序列,将其进行退火磷酸化后,分别克隆到腺病毒包装载体... 目的:获得敲低效果较好的CCCTC结合因子(CTCF)的RNA干扰腺病毒载体,以便于研究其在肿瘤发生发展中的作用。方法:从已发表文献中获得CTCF敲低靶序列,合成2对含有小发卡结构的寡核苷酸序列,将其进行退火磷酸化后,分别克隆到腺病毒包装载体上;将重组质粒转染人胚肾293A细胞,收获腺病毒;将收获的腺病毒分别感染人胚肾HEK293细胞和靶细胞人肺腺癌细胞A549,通过RT-PCR和Western印迹鉴定相关基因的表达变化。结果与结论:RT-PCR和Western印迹鉴定显示构建的表达CTCF短发夹RNA(shRNA)的腺病毒载体能够有效抑制CTCF转录和蛋白水平,为后续CTCF的生物学功能和机制研究奠定了基础。 展开更多

关键词 ccctc结合因子 RNA干扰 腺病毒载体

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CCCTC结合因子对翼状胬肉中B淋巴细胞瘤-2基因表达的调控及其机制 被引量：2

13

作者 殷秀琴 于莉 +1 位作者 易璐 方家华 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期421-427,共7页

目的探讨转录因子CCCTC结合因子(CTCF)对翼状胬肉中B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)表达的调控及其分子机制。方法纳入2017年6月至2019年2月在长沙市第一医院眼科行翼状胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植术治疗的原发性翼状胬肉患者22例,术中... 目的探讨转录因子CCCTC结合因子(CTCF)对翼状胬肉中B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)表达的调控及其分子机制。方法纳入2017年6月至2019年2月在长沙市第一医院眼科行翼状胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植术治疗的原发性翼状胬肉患者22例,术中收集翼状胬肉组织作为翼状胬肉组;同期纳入因结膜裂伤、眼球破裂伤或眼球穿通伤就诊的眼外伤患者20例,取眼外伤修复手术过程中切取的少量正常结膜组织作为正常结膜组。分别采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测各组样本中CTCF及Bcl-2的表达水平;采用亚硫酸氢盐处理后测序法(BSP)检测各组样本中Bcl-2启动子DNA甲基化水平。分离并培养翼状胬肉成纤维细胞,使用波形蛋白抗体进行免疫组织化学鉴定成纤维细胞。将分离培养的细胞分成2个组,CTCF干扰组转染CTCF干扰质粒,对照组转染对照质粒。采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测CTCF、Bcl-2表达水平;采用细胞计数试剂盒8检测各组培养12、24和48 h细胞增生活性;采用BSP检测各组样本中Bcl-2启动子DNA甲基化水平。比较各组各指标差异,采用Pearson线性相关分析探讨翼状胬肉组织中Bcl-2 mRNA与CTCF蛋白及Bcl-2基因启动子甲基化水平的相关性。结果翼状胬肉组CTCF mRNA及蛋白相对表达水平分别为7.23±3.34和0.92±0.21,明显高于正常结膜组的1.10±0.44和0.28±0.07,差异均有统计学意义(t=-8.136、-13.025,均P<0.01)。翼状胬肉组Bcl-2 mRNA及蛋白相对表达水平分别为10.27±4.64和0.95±0.27,高于正常结膜组的1.10±0.41和0.32±0.14,差异均有统计学意义(t=-8.789、-10.782,均P<0.01)。翼状胬肉组CTCF蛋白相对表达量与Bcl-2 mRNA相对表达量呈显著正相关(r=0.746,P<0.01)。翼状胬肉组Bcl-2启动子区DNA甲基化水平为0.65±0.09,低于正常结膜组的0.83±0.06,差异有统计学意义(t=7.408,P<0.01)。翼状胬肉组Bcl-2启动子DNA甲基化水平与Bcl-2 mRNA相对表达量呈显著负相关(r=-0.635,P<0.01)。CTCF干扰组CTCF及Bcl-2 mRNA相对表达水平为0.37±0.03和0.53±0.06,明显低于对照组的1.02±0.06和0.99±0.07,差异均有统计学意义(t=20.035、9.029,均P<0.01);CTCF干扰组CTCF及Bcl-2蛋白相对表达水平为0.23±0.06和0.56±0.07,低于对照组的0.52±0.05和0.92±0.12,差异均有统计学意义(t=6.914、4.719,均P<0.01)。CTCF干扰组转染后12、24和48 h细胞活力分别为0.10±0.01、0.17±0.01和0.38±0.04,低于对应时间点对照组的0.12±0.01、0.29±0.01和0.85±0.06,差异均有统计学意义(t=3.718、18.350、15.621,均P<0.01)。CTCF干扰组Bcl-2启动子DNA甲基化水平为0.75±0.04,明显高于对照组的0.61±0.03,差异有统计学意义(t=-4.472,P<0.05)。结论翼状胬肉中CTCF高表达,其可能通过下调启动子DNA甲基化水平介导Bcl-2异常表达。 展开更多

关键词 翼状胬肉 B淋巴细胞瘤-2 ccctc结合因子 DNA甲基化

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CTCF调控小鼠AML12肝细胞系脂质代谢功能与基因表达

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作者 陈怀煌 左武 卞迁 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1069-1082,共14页

目的·明确CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)对肝细胞脂质代谢的调控作用,并探究CTCF调控肝细胞基因表达的作用机制。方法·通过慢病毒将稳定表达Ctcf shRNA的DNA序列整合到小鼠永生化的AML12肝细胞系中,实现对Ctcf的... 目的·明确CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)对肝细胞脂质代谢的调控作用,并探究CTCF调控肝细胞基因表达的作用机制。方法·通过慢病毒将稳定表达Ctcf shRNA的DNA序列整合到小鼠永生化的AML12肝细胞系中,实现对Ctcf的稳定敲低。通过反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)验证Ctcf的敲低效率。碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色测定细胞周期,使用CCK-8法绘制细胞生长曲线,检测Ctcf敲低对细胞生长的影响。油红O染色标记细胞内脂质,检测CTCF对AML12细胞脂质代谢和脂滴累积的影响。使用CUT&Tag测序技术分析Ctcf敲低后CTCF在全基因组的结合变化。结合RNA测序(RNA-seq)的转录组数据分析CTCF结合变化后的转录组变化,使用基因本体论(GO)、京都基因和基因组数据库(KEGG)富集分析及基因集富集分析(GSEA)揭示Ctcf敲低对AML12肝细胞基因的表达影响,并探究差异基因与CTCF结合变化间的关联。结果·RT-qPCR结果表明Ctcf在mRNA水平敲低了63.4%,Western blotting验证了CTCF在蛋白表达层面降低了57.7%(均P<0.05)。生长曲线及周期实验确定了Ctcf敲低后细胞增殖阻滞于G1/G0期。并且AML12细胞在Ctcf敲低后自发出现细胞内脂质蓄积(P<0.05)。CTCF在全基因组的结合呈现出显著变化,大多数CTCF结合差异区域表现出CTCF结合减少,但仍有部分区域CTCF结合增加。转录组数据显示Ctcf敲低导致1344个基因出现显著的表达变化,在上调基因中富集出与脂滴堆积相关的脂质代谢通路。CTCF结合上调峰关联的差异基因富集在脂质转运与脂质定位相关通路,而CTCF结合下调峰关联的差异基因主要富集在DNA损伤修复、细胞凋亡、细胞周期等生物学过程,但CTCF在基因组的结合变化并不足以导致邻近基因的表达上调或下调。结论·CTCF通过调控脂质代谢相关基因的表达影响肝细胞的代谢功能,然而CTCF在基因组上的结合变化与邻近基因的表达缺乏显著的相关性,可能主要通过远端调控的方式对基因表达产生影响。 展开更多

关键词 ccctc结合因子(ctcf) AML12细胞系 脂质代谢 转录调控

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CTCF通过抑制p53信号通路促进胆管癌细胞的生长、迁移和侵袭

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作者 闫晗 石培培 +2 位作者 王亚会 高成明 周钢桥 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2022年第6期625-635,共11页

为了探索CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)对人胆管癌细胞的生长、迁移和侵袭能力的影响及其潜在的分子作用机制,利用慢病毒感染法获得稳定过表达或敲低CTCF的胆管癌细胞系,采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting,Wb)检测CTC... 为了探索CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)对人胆管癌细胞的生长、迁移和侵袭能力的影响及其潜在的分子作用机制,利用慢病毒感染法获得稳定过表达或敲低CTCF的胆管癌细胞系,采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting,Wb)检测CTCF蛋白表达水平,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法和克隆形成实验检测细胞生长情况,采用Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力,采用GraphPad软件(v6)的Mann-Whitney U检验分析CTCF基因在癌和癌旁组织间的mRNA差异表达.结果显示:过表达CTCF可显著促进HCCC-9810和RBE胆管癌细胞的生长、迁移和侵袭能力;敲低CTCF呈现相反的表型.通过通路富集分析发现:CTCF的表达水平在胆管癌中与p53信号通路活性显著负相关,过表达CTCF可显著下调p53及其靶基因p21的mRNA和蛋白表达水平,而敲低CTCF则显著促进p53和p21的mRNA和蛋白表达水平.综上,本研究揭示CTCF可能通过抑制p53信号通路而促进胆管癌细胞生长、迁移和侵袭而发挥促癌基因的功能. 展开更多

关键词 胆管癌 ccctc结合因子(ctcf) 细胞生长 细胞迁移 细胞侵袭 P53通路

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绝缘子调控基因的表达 被引量：2

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作者 王海 张倩 方向东 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期493-498,共6页

绝缘子在调控真核基因时空特异表达的过程中起着至关重要的作用.它的主要功能是增强子阻断和异染色质屏障.已经有竞争、阻断和成环等模型描述其增强子阻断功能;而它的异染色质屏障功能主要是通过影响染色质组蛋白的翻译后修饰来实现.已... 绝缘子在调控真核基因时空特异表达的过程中起着至关重要的作用.它的主要功能是增强子阻断和异染色质屏障.已经有竞争、阻断和成环等模型描述其增强子阻断功能;而它的异染色质屏障功能主要是通过影响染色质组蛋白的翻译后修饰来实现.已经确定的绝缘子包括果蝇基因组中的染色质特化结构(specialized chromatin structures,scs)和scs'、gypsy、鸡珠蛋白β基因座上游的DNaseⅠ高敏感位点cHS4以及小鼠或人Igf2/H19基因座上的印记控制区(imprinting controlregion,ICR)和DNA甲基化区域(DNA methylated regions,DMR)元件等.许多转录因子参与绝缘子的基因调控作用,例如脊椎动物中的CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF).利用基因组学和生物信息学等方法,还可以在基因组中发现新的绝缘子元件. 展开更多

关键词 绝缘子 异染色质 转录调控 ccctc结合因子

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胎盘长链非编码RNA CTD-2012K14.6异常表达致胎儿巨大的初步功能研究 被引量：3

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作者 闫林萍 乌兰 +1 位作者 钟天鹰 刘岚 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期138-142,共5页

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)致妊娠糖尿病(gestational diabetes mellitu,GDM)巨大儿发生的作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(qantitative real-timePCR,qRT-PCR)检测CTD-2012K14.6在GDM和正常胎盘组织中的表... 目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)致妊娠糖尿病(gestational diabetes mellitu,GDM)巨大儿发生的作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(qantitative real-timePCR,qRT-PCR)检测CTD-2012K14.6在GDM和正常胎盘组织中的表达量,并进行胎儿体重相关性分析;运用生物信息分析技术确定CTD-2K14.6调控的下游靶基因,并利用过表达及干扰RNA技术改变CTD-2K4.6在人滋养层细胞系中的表达,及其对下游靶基因表达的调控作用。结果与正常妊娠胎盘组织相比,CTD-2012K14.6在GDM孕妇的胎盘组织中的相对表达量明显上调(1.70±0.63对1.00±0.56,P<0.01),且与胎儿体重呈正相关,r=0.850,P<0.01;在线分析CTD-2012K14.6位于chr16:67,549,214-67,563,958,染色体位置分析发现,CTD-2012K14.6位于CTCF基因的内含子内;过表达CTD-2012K14.6可明显降低CTCF核酸与蛋白表达量,而使胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)核酸与蛋白表达量显著升高;敲除CTD-2012K14.6显著升高CTCF核酸与蛋白表达量,而明显降低IGF-Ⅱ核酸与蛋白表达量。结论胎盘组织中异常表达的CTD-2012K14.6可能通过调控CTCF,IGF-Ⅱ影响巨大儿发生发展。 展开更多

关键词 妊娠糖尿病 巨大儿 长链非编码RNA CTD-2012K14.6 ccctc结合因子 胰岛素样生长因子2

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