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寿胎丸、举元煎作用CBA/J×DBA/2复发性自然流产模型的“胚-膜”免疫亚细胞群的分子串扰机制
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作者 高静心 陈秋平 +9 位作者 郑小艳 曾鹏飞 周瑞 唐砚彩 曾倩 郭文利 黄金珠 丁维俊 邓琳雯 周航 《中国实验方剂学杂志》 北大核心 2026年第2期70-87,共18页
目的:在单细胞分辨率下系统比较中医“补肾安胎”与“健脾安胎”两大经典治法(寿胎丸、举元煎)对CBA/J×DBA/2复发性自然流产(RPL)模型小鼠母-胎界面细胞谱系及通信网络的差异化调控,并阐明其现代科学内涵。方法:将雌性未孕CBA/J鼠... 目的:在单细胞分辨率下系统比较中医“补肾安胎”与“健脾安胎”两大经典治法(寿胎丸、举元煎)对CBA/J×DBA/2复发性自然流产(RPL)模型小鼠母-胎界面细胞谱系及通信网络的差异化调控,并阐明其现代科学内涵。方法:将雌性未孕CBA/J鼠分别与BALB/c(空白组)及DBA/2(造模组)雄鼠合笼,造模组孕鼠随机分为补肾高/低剂量组、健脾高/低剂量组、模型组、阳性药组(地屈孕酮组),每组10只,共7组。阴栓检出次日起灌胃给药或等体积生理盐水,连续10 d。干预结束后进行检测。(1)药效与表型评价:小鼠一般状态、子宫湿质量、胚胎丢失率;凝血四项[凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、凝血酶时间(TT)]及外周血雌二醇(E_(2))、孕酮(Pg)水平;取连胚蜕膜进行苏木素-伊红(HE)染色、透射电镜(TEM)评估病理变化;使用蛋白免疫印迹法(Western blot)定量核心蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)、血管紧张素II(AngII)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白血病抑制因子(LIF)、CXC趋化因子配体12(CXCL12)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)I/II相关表达;(2)单细胞层面:取空白、模型、补肾高剂量、健脾高剂量4组连胚蜕膜(每组6只,混合3个单细胞样本/组,共使用24只),经BD Rhapsody?平台,均匀流行近似投影(UMAP)降维聚类联合小鼠细胞图谱(scMCA)数据库绘制全细胞图谱;通过基因本体(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)、CellChat解析差异表达基因(DEGs)及细胞互作网络,构建亚型细胞蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)图;基于CytoTRACE拟时序分析,追踪母/胎来源的核心免疫细胞[聚焦自然杀伤(NK)细胞]的发育轨迹。结果:(1)病理学及Western blot结果显示,与空白组比较,RPL组小鼠胚胎丢失率显著升高(P<0.01)。连胚蜕膜Bcl-2、LIF、MMP-2、VEGF表达下降(P<0.05),CXCL12、AngII、IL-6蛋白显著含量上升(P<0.05),伴血管生成受阻、凋亡-炎症失衡及凝血功能紊乱。两方均剂量依赖性地降低流产率,恢复血管生成-炎症平衡;补肾高剂量对E2水平恢复优于Pg(P<0.05)。(2)单细胞转录组提示,与空白组比较,母胎界面蜕膜细胞、滋养层细胞、内皮细胞、成红细胞、NK细胞、巨噬细胞等多个关键细胞群存在差异,免疫和血管生成为RPL的关键环节;与RPL组比较,补肾高组(寿胎丸)可能通过逆转胚层NK细胞(上调mRNA共17个;下调mRNA共29个)及巨噬细胞(上调mRNA共117个;下调mRNA共53个)等关键亚群,通过调控免疫细胞,影响未折叠蛋白、细胞黏附、程序性细胞死亡,促进蜕膜化及血管生成,调控胚-膜发育。健脾高组(举元煎)可调控胚层NK细胞(上调mRNA共9个;下调mRNA共17个)及巨噬细胞(上调mRNA共110个;下调mRNA共81个)亚群,影响蜕膜炎症及凋亡,干预糖酵解。(3)拟时序分析与通讯网络提示,RPL组通信频率下降,补肾高组通过NKG2D、钙黏蛋白5(CDH5)、GDF、FASLG等通路重建母胎耐受;健脾高组强化IL-6/LIFR/JAK/信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)及桥粒/SEMA6/肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(TWEAK)信号,提高子宫内膜容受性。RPL组毒性dNK7比例升高,修复型dNK4减少,胚胎fNK1阻滞。补肾高组下调dNK7、提升dNK4;健脾高组抑制dNK7终末分化并上调LILRB1,恢复细胞毒性/修复平衡。结论:补肾、健脾法均有效治疗复发性自然流产,NK及巨噬细胞是胚膜交互的关键免疫细胞,补肾法(寿胎丸)优势调控未折叠蛋白、细胞黏附、程序性细胞死亡表型,在NKG2D和CDH5信号调控中呈现更接近生理状态的表达特征,健脾法(举元煎)对上皮间质转化(EMT)、血管生成、糖酵解有优势调控作用,在IL-6、LIFR相关通路呈现较高的通讯强度。 展开更多
关键词 复发性自然流产 单细胞测序 cba/j×DBA/2合笼 寿胎丸 举元煎
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在反复自然流产模型CBA/J×DBA/2小鼠血清中未检测出抗精子抗体 被引量:2
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作者 林羿 曾耀英 +5 位作者 曾山 詹美意 关洁宾 狄静芳 冯铮 全世明 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 2002年第3期121-124,共4页
目的 :评价抗精子抗体 (anti -spermantibody ,AsAb)与反复自然流产 (recurrentspontaneousabortion ,RSA)小鼠模型CBA/J×DBA/ 2生殖力特点的关系 .方法 :对CBA/J×DBA/ 2小鼠的生殖力特点做为期 6 0d的观察 ,与生殖力正常的BA... 目的 :评价抗精子抗体 (anti -spermantibody ,AsAb)与反复自然流产 (recurrentspontaneousabortion ,RSA)小鼠模型CBA/J×DBA/ 2生殖力特点的关系 .方法 :对CBA/J×DBA/ 2小鼠的生殖力特点做为期 6 0d的观察 ,与生殖力正常的BALB/c×DBA/ 2小鼠进行比较 ,并检测上述雌鼠血清AsAb水平 .结果 :CBA/J×DBA/ 2小鼠平均每窝产仔数和雌雄同笼至第 1窝鼠仔出生的平均时间均与BALB/c×DBA/ 2小鼠有显著差异 ,分别为 (3 0± 1 1)只与 (6 1± 1 6 )只 ,P <0 0 0 1,和 (33 5± 7 1)d与 (2 5 8± 3 2 )d ,P <0 0 1.在这些CBA/J×DBA/ 2和BALB/c×DBA/ 2组合的雌鼠血清中均未检测出AsAb .结论 :CBA/J×DBA/ 展开更多
关键词 cba/j×DBA/2 小鼠 反复自然流产 抗精子抗体 动物模型 血清检测 生殖力 发病机制
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基于高通量测序结果的益气化痰活血方干预CBA/J小鼠甲状腺免疫机制研究 被引量:2
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作者 潘伊萌 杨潇 +3 位作者 刘子玉 孙英惠 尹远平 高天舒 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期59-62,共4页
目的探讨益气化痰活血方干预CBA/J小鼠甲状腺免疫机制。方法采用异源性甲状腺抗原免疫法注射CBA/J小鼠,建立ATT模型小鼠,随机分为模型组(MG)、益气化痰活血方低(YG-1)、中(YG-2)、高(YG-3)剂量组、亚硒酸钠组(SeG),每组10只。另设正常组... 目的探讨益气化痰活血方干预CBA/J小鼠甲状腺免疫机制。方法采用异源性甲状腺抗原免疫法注射CBA/J小鼠,建立ATT模型小鼠,随机分为模型组(MG)、益气化痰活血方低(YG-1)、中(YG-2)、高(YG-3)剂量组、亚硒酸钠组(SeG),每组10只。另设正常组(NG)。分别给予不同处理因素连续灌胃给药8周。8周后取材,Elisa检测小鼠血清TG-A6浓度;HE染色检测小鼠甲状腺淋巴浸润情况;PT-PCR检测各组小鼠甲状腺组织基因表达水平。结果与NG组相比,MG组小鼠间质可见淋巴细胞浸润,TG-Ab显著升高(P<0.05);与MG组相比,YG-2组小鼠甲状腺组织淋巴细胞浸润情况明显减轻,TG-Ab水平显著降低(P<0.05)。与NG组比较,MG组IL-21、IL-23R、JAK2、RoRα和IL-17mRNA表达上调(P<0.05);与MG组比较,YG-1组IL-21、IL-23R、JAK2、STAT3和IL-17mRA表达下调(P<0.05);YG-2组IL-1β、IL-21、IL-23R、RORYt和IL-17mRNA表达下调(P<0.05);YG-3组IL-1β、IL-21、IL-23R、RORα、RORYt和IL-17mRA表达下调(P<0.05)。结论益气化痰活血方可减轻ATT小鼠甲状腺淋巴细胞炎症浸润,降低TG-Ab水平,可能与下调IL-1β、IL-21、IL-23R、JAK2、STAT3、RoRYt、RoRα和IL-17mRNA基因表达有关。 展开更多
关键词 益气化痰活血方:自身免疫性甲状腺炎 高通量测序 cba/j小鼠
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两个CBA亚系流产模型数据比较 被引量:1
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作者 王蕾 吴旭颖 +3 位作者 高玉龙 张文明 李斌 刘云波 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第6期76-79,92,共5页
目的观察了CBA/J和CBA/Ola两个亚系流产模型数据。10~16周龄CBA/J胚胎吸收率为12.8%~22.2%高于10~16周龄CBA/Ola胚胎吸收率的11.4%~13.0%。方法设计CBA/J和CBA/Ola两个亚系的流产模型实验,每个亚系分别6组动物互配并进行观察。六组中三... 目的观察了CBA/J和CBA/Ola两个亚系流产模型数据。10~16周龄CBA/J胚胎吸收率为12.8%~22.2%高于10~16周龄CBA/Ola胚胎吸收率的11.4%~13.0%。方法设计CBA/J和CBA/Ola两个亚系的流产模型实验,每个亚系分别6组动物互配并进行观察。六组中三组为10周龄CBA组,另外三组为16周龄CBA组。每个周龄三组包括CBA自交组,BALB/c和CBA互配组和DBA2和CBA互配组。结果CBA/J比CBA/Ola成模率高,且16周雌性CBA/J造模成功率比10周雌性CBA/J高。CBA/J和CBA/Ola亚系本品系互配都存在胚胎吸收问题,原因还有待于进一步研究。结论16周CBA/J雌鼠更适用于流产模型造模。 展开更多
关键词 cba/Ola cba/j cba 流产模型 亚系
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益气化痰活血方对自身免疫性甲状腺炎小鼠肠道菌群的影响 被引量:11
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作者 郭风宜 刘子玉 +6 位作者 王智民 宋囡 孙英惠 陈丝 尹远平 高天舒 杨潇 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期292-295,共4页
目的从肠道菌群角度探讨益气化痰活血方对自身免疫性甲状腺炎(AIT)小鼠的影响。方法选取6~8周龄CBA/J雌性小鼠15只适应性喂养1周后,随机分为对照组(DZ)、模型组(MX)、益气化痰活血方组(ZY),每组各5只,DZ组小鼠给予皮下多点(背部皮下、... 目的从肠道菌群角度探讨益气化痰活血方对自身免疫性甲状腺炎(AIT)小鼠的影响。方法选取6~8周龄CBA/J雌性小鼠15只适应性喂养1周后,随机分为对照组(DZ)、模型组(MX)、益气化痰活血方组(ZY),每组各5只,DZ组小鼠给予皮下多点(背部皮下、颈部皮下、腹部皮下)注射磷酸缓冲盐溶液(PBS)+完全弗氏佐剂(CFA),其余各组经皮下多点(同DZ组)注射200μg猪甲状腺蛋白(pTg)+CFA进行初次免疫,4周后,DZ组经皮下多点注射PBS+不完全弗氏佐剂(IFA),其余各组经皮下多点注射200μg pTg+IFA进行加强免疫,第8周成模。成模后ZY组小鼠灌服益气化痰活血方(18.20g/kg/d),其余各组小鼠予等量蒸馏水,每日灌服1次,8周后处死小鼠,取材。应用HE染色技术检测CBA/J小鼠甲状腺淋巴细胞浸润情况;应用ELISA法测定小鼠血清TGAb水平情况;应用16S rDNA测序观察小鼠肠道菌群结构与组成情况。结果与DZ组相比,MX组小鼠甲状腺细胞淋巴浸润明显,TGAb显著升高(P<0.001);与MX组相比,ZY组小鼠甲状腺淋巴细胞浸润情况明显减轻,TGAb水平下降(P<0.001)。与DZ组相比,MX组小鼠肠道菌群结构及组成发生改变,软壁菌门水平显著降低(P<0.05),厚壁菌门、拟杆菌门比例升高(P>0.05),厚壁菌门/拟杆菌门(F/B)比值升高(P>0.05);与MX组相比,ZY组小鼠肠内厚壁菌门水平显著降低(P<0.05),拟杆菌门比例升高(P>0.05),F/B比值下降(P>0.05),放线菌门比例升高(P>0.05)。结论益气化痰活血方可减轻AIT小鼠甲状腺淋巴细胞炎症浸润程度、降低TGAb水平,可能与改变肠道菌群的结构及组成有关。 展开更多
关键词 自身免疫性甲状腺炎 益气化痰活血方 肠道菌群 16S rDNA测序 cba/j小鼠
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自然流产模型小鼠子宫蜕膜组织miRNAs的表达 被引量:2
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作者 谭彬 何俊琳 +5 位作者 刘学庆 黎刚 丁裕斌 陈雪梅 王应雄 余秋波 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第15期1663-1666,共4页
目的寻找自然流产模型小鼠(CBA/J×DBA/2)子宫蜕膜组织与正常妊娠小鼠(CBA/J×BALB/c)子宫蜕膜组织之间差异表达的miRNAs。方法建立自然流产小鼠模型和正常妊娠小鼠模型,利用miRCURY LNATMmicroRNAArrays 10.0检测两组孕小鼠子... 目的寻找自然流产模型小鼠(CBA/J×DBA/2)子宫蜕膜组织与正常妊娠小鼠(CBA/J×BALB/c)子宫蜕膜组织之间差异表达的miRNAs。方法建立自然流产小鼠模型和正常妊娠小鼠模型,利用miRCURY LNATMmicroRNAArrays 10.0检测两组孕小鼠子宫蜕膜组织miRNAs的表达,筛选两组小鼠子宫蜕膜组织差异表达的miRNAs,并对其进行功能检索和靶基因预测。结果 CBA/J×DBA/2小鼠胚胎吸收率为30.9%,CBA/J×BALB/c小鼠胚胎吸收率为7.0%,两者差异有统计学意义(P<0.01)。miRNAs芯片数据表明流产蜕膜组织和正常蜕膜组织之间有13个miRNAs存在明显表达差异(ratios≥2.0或≤0.5),其中表达上调8个,表达下调5个。预测软件显示miR-21和miR-26a的靶基因分别是和妊娠相关的RECK和LIF两个因子。结论小鼠子宫蜕膜组织miR-21和miR-26a的差异性表达可能在小鼠胚胎自然流产过程中扮演重要角色。 展开更多
关键词 自然流产 MIRNAS 子宫蜕膜 小鼠
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Populational change of CD4^(+)CD25^(+)Treg cells is responsible for the synergistic effect of the combination of RAMP2 with baicalin in treating recurrent spontaneous abortion mouse models
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作者 Cong Chen Zhuo-Lan Li +2 位作者 Jing-Tian Guo Wen-Yao Xue Wei Guo 《Traditional Medicine Research》 2024年第8期59-66,共8页
Background: The absence of a safe and effective therapy for recurrent spontaneous abortion due to a maternofetal failure in immunological tolerance remains an intractable clinical obstacle for surgeons. Recently, trad... Background: The absence of a safe and effective therapy for recurrent spontaneous abortion due to a maternofetal failure in immunological tolerance remains an intractable clinical obstacle for surgeons. Recently, traditional Chinese medicine has become a feasible alternative for certain diseases, including recurrent spontaneous abortion. However, because of the complex composition of the traditional Chinese medicine formula, its action mechanism remains unclear. Methods: We selected two isolated active ingredients (RAMP and baicalin) from the traditional Chinese medicine formula and used an abortion-prone CBA/J × DBA/2 model to simulate human RSA and compared the changes in fetal resorption rate, Treg cell percentage, and relevant cytokines before and after combination therapy. In addition, The mechanisms were preliminarily discussed using in vitro differentiation models. Results: In CBA/J × DBA/2 abortion-prone mice, the combination therapy resulted in a lower embryo resorption rate compared to that obtained with individual delivery of either RAMP or baicalin, thereby playing an embryo-protective role through the increase in Treg cells for the maintenance of maternal-fetal immune tolerance. In in vitro primary cell differentiation experiments, the concentration of Treg cells significantly increased from 11% to 17.9% after the combination therapy compared to that of the single administration group. Conclusion: the synergistic effects of RAMP and baicalin were responsible for Treg differentiation. The present study provides a solid basis for improving the applicability of traditional Chinese herbs in the treatment of recurrent spontaneous abortion. 展开更多
关键词 recurrent spontaneous abortion Atractylodes macrocephala Koidz. Scutellaria baicalensis Georgi cba/j×DBA/2 regulatory T cells
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