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基于CASFISH的检测染色体脆性位点表达的方法
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作者 张鋆坤 杨雨蒙 +6 位作者 吴彤彤 仲昭华 林清雅 吴迪 陈志玲 王海龙 王丹 《首都师范大学学报(自然科学版)》 2025年第5期47-55,共9页
染色体脆性位点是染色体上易发生断裂的一些特殊区域。常见脆性位点(CFSs)是最主要的脆性位点类型,其稳定性与癌症密切相关。传统的CFSs稳定性检测技术具有诸多局限性,限制了该领域研究工作的发展。本研究意在建立一种基于CRISPR/dCas9... 染色体脆性位点是染色体上易发生断裂的一些特殊区域。常见脆性位点(CFSs)是最主要的脆性位点类型,其稳定性与癌症密切相关。传统的CFSs稳定性检测技术具有诸多局限性,限制了该领域研究工作的发展。本研究意在建立一种基于CRISPR/dCas9介导的荧光原位杂交(CASFISH)检测技术,以期提高检测CFSs表达的灵敏度和易操作性。以16号染色体FRA16D两侧的2个重复序列为靶标设计并制备了单链向导核糖核酸(sgRNA),利用纯化的GST-dCas9-EGFP和GST-dCas9-mCherry融合蛋白在U2OS细胞中开展CASFISH检测。结果显示,sgRNA/dCas9探针可以识别FRA16D两侧的脱氧核糖核酸(DNA),在细胞中实现FRA16D的成像观测。在诱导的复制压力下,双色荧光探针也可以定量检测FRA16D的断裂情况。在此工作基础上进一步优化将为在活细胞内观测CFSs表达的动态过程,研究DNA复制过程中CFSs的稳定性等工作提供便利。 展开更多
关键词 染色体脆性位点 CFSs CRISPR/dCas9介导的荧光原位杂交
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