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转基因抗虫大豆转化体CAL16定性PCR检测方法
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作者 陆佳雨 王沛然 +6 位作者 许学 吴爽 胡笑林 李晨 潘伟芹 江雅婷 汪秀峰 《生物安全学报(中英文)》 北大核心 2025年第2期137-144,共8页
【目的】转基因大豆CAL16的抗虫融合蛋白Cry1Ab/Vip3Da对大豆鳞翅目害虫有很好的抗性效果,但目前针对抗虫大豆CAL16及其衍生品种的定性检测的方法尚未建立,本研究旨在根据外源片段插入位置,设计CAL16转化体的特异的定性PCR检测引物,弥... 【目的】转基因大豆CAL16的抗虫融合蛋白Cry1Ab/Vip3Da对大豆鳞翅目害虫有很好的抗性效果,但目前针对抗虫大豆CAL16及其衍生品种的定性检测的方法尚未建立,本研究旨在根据外源片段插入位置,设计CAL16转化体的特异的定性PCR检测引物,弥补标准上的空白。【方法】根据技术资料公布的插入位置和载体信息,在左边界(LB端)和右边界(RB端)设计多对引物,分别对引物进行特异性测试、扩增反应优化、测序验证、稳健性测试、灵敏度测试、检出限测试等。【结果】数据显示,引物组合CAL16-F/R具有很好的特异性和稳健性,检出限为0.10%,符合相关转基因分子检测标准的要求,国内的8家转基因生物安全检测机构能够重复试验结果,因此,该方法可以在检测行业中推广使用。【结论】转基因抗虫大豆CAL16定性PCR检测方法的建立,为我国CAL16抗虫大豆及其衍生品种的安全监管提供技术支撑。 展开更多
关键词 转基因 大豆 cal16转化体 PCR检测
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转基因大豆CAL16转化体特异性定量检测方法的建立
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作者 王沛然 陆佳雨 +5 位作者 许学 吴爽 李晨 胡笑林 潘伟芹 汪秀峰 《中国油料作物学报》 北大核心 2025年第4期1036-1050,共15页
以杭州瑞丰生物科技有限公司研发的转Cry1Ab/Vip3Da基因抗虫大豆,即转基因大豆CAL16为材料,建立CAL16转化体特异性定量PCR检测方法,旨在给我国CAL16及其衍生品系的生物育种产业化提供技术支撑。根据5′端和3′端旁侧序列设计引物探针组... 以杭州瑞丰生物科技有限公司研发的转Cry1Ab/Vip3Da基因抗虫大豆,即转基因大豆CAL16为材料,建立CAL16转化体特异性定量PCR检测方法,旨在给我国CAL16及其衍生品系的生物育种产业化提供技术支撑。根据5′端和3′端旁侧序列设计引物探针组合,筛选出5′端一对最佳引物组合,PCR产物片段大小为112 bp。经特异性测试、标准曲线的建立、正确度和精密度测试、检出限和定量限测试、稳健性测试、微滴式数字PCR验证,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好。检出限达到0.025%,相当于10个拷贝的CAL16特异性片段;定量限达到0.1%,约为40个拷贝。实验室间循环验证显示:该方法符合国家标准方法各项要求,可满足检测需求。最终对CAL16定量方法进行不确定度评定,确保量值科学可靠,满足定量标识的需求。 展开更多
关键词 转基因大豆 cal16 转化体特异性 定量检测 不确定度
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