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外泌体递送CRISPR/Cas系统在靶细胞内可实现基因编辑
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作者 王白燕 杨树 +5 位作者 王弋鸣 吴梦晴 肖瑀 郭梓璇 张博艺 冯书营 《中国组织工程研究》 北大核心 2026年第7期1839-1849,共11页
背景:CRISPR/Cas基因编辑系统具有精准基因编辑、靶向设计简单、低成本以及高效率等特性,已被广泛应用于科学研究和相关临床治疗。然而,CRISPR/Cas系统如何更安全、更高效、更精准地递送到靶细胞内,仍是一个急需解决的难题。目的:从递送... 背景:CRISPR/Cas基因编辑系统具有精准基因编辑、靶向设计简单、低成本以及高效率等特性,已被广泛应用于科学研究和相关临床治疗。然而,CRISPR/Cas系统如何更安全、更高效、更精准地递送到靶细胞内,仍是一个急需解决的难题。目的:从递送CRISPR/Cas系统的外泌体来源及工程化策略、外泌体对CRISPR/Cas系统的装载方法、CRISPR/Cas系统的生物形式及其在细胞内的作用途径等方面进行全方面综述,为该领域的研究者提供更直观、更系统的视角。方法:以“exosome,drug delivery systems,delivery,CRISPR/Cas,gene editing,engineered exosomes,targeting”为英文检索词,以“外泌体,药物递送,CRISPR/Cas,工程化”为中文检索词,分别检索Pub Med数据库及中国知网,检索时限为2014-2024年。通过仔细阅读文献的标题和摘要进行初步筛选,排除研究内容相关性差及内容重复的文献,最终纳入了78篇文献进行归纳和探讨。结果与结论:(1)外泌体是一种直径30-150 nm的脂质囊泡,具有循环半衰期长、靶向组织的内在能力、良好的生物相容性以及较小的固有毒性等优势,显现出强大的靶向递送能力;(2)CRISPR/Cas系统虽是一种强大的基因编辑工具,然而现有的CRISPR/Cas系统递送载体各有利弊,无法完全满足需求;(3)递送CRISPR/Cas系统的外泌体主要来源于高产外泌体的细胞或组织,但研究者们依然需要根据研究所需进行选择或进一步工程化;(4)递送CRISPR/Cas系统的外泌体主要通过基因工程修饰、化学修饰、外泌体-脂质体杂交等策略实现工程化;(5)外泌体装载CRISPR/Cas系统的方法包括电穿孔、孵育、转染和主动装载途径等,选择合适的装载方法取决于CRISPR/Cas系统的理化性质;(6)外泌体递送CRISPR/Cas系统的生物形式包括质粒和核糖核蛋白复合体,两种形式各具特点,成功递送的CRISPR/Cas系统在靶细胞内实现基因编辑。 展开更多
关键词 外泌体 CRISPR/cas系统 基因编辑 药物负载 靶向递送 工程化
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CT三维重建联合血清CA19-9、CEA检查在确认肝门部胆管癌术前分期以及指导手术方式评估中的应用
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作者 张亚斌 郭双双 强军 《中国CT和MRI杂志》 2026年第2期101-103,共3页
目的探讨CT三维重建联合血清CA19-9、CEA检查在确认肝门部胆管癌术前分期以及指导手术方式评估中的应用。方法选取医院于2020年10月至2024年10月期间收治到院接受肝门部胆管癌手术治疗的100例患者,均于术前行CT三维重建扫描,以组织病理... 目的探讨CT三维重建联合血清CA19-9、CEA检查在确认肝门部胆管癌术前分期以及指导手术方式评估中的应用。方法选取医院于2020年10月至2024年10月期间收治到院接受肝门部胆管癌手术治疗的100例患者,均于术前行CT三维重建扫描,以组织病理学检查结果为“金标准”,分析CT三维重建联合血清CA19-9、CEA检查应用于肝门部胆管癌Bismuth Corlette分型、周围血管受累和淋巴结转移的诊断效果,评估手术可行性。结果CT三维重建评估Bismuth-Corlette分型准确率为91.18%,评估侵犯肝动脉、门静脉、淋巴结转移以及手术可切除性的灵敏度分别为90.85%、87.93%、86.98%、94.39%,特异度为93.16%、88.64%、85.37%、86.43%,准确率为93.37%、89.46%、85.33%、92.19%。结论CT三维重建联合血清CA19-9、CEA检查能显著提高肝门部胆管癌的术前分期准确性,对指导手术方式具有重要价值,可有效提高手术成功率。 展开更多
关键词 肝门部胆管癌术前分期 手术指导 CT三维重建联合血清ca19-9、CEA检查
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Establishing Programmable CRISPR/Cas13b-Mediated Knockdown System in Rice
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作者 WANG Shuman ZHANG Linqi +4 位作者 GAO Ruiren WEI Guangbo DONG Weiguo XU Jiming WANG Zhiye 《Rice science》 2025年第2期217-227,I0043-I0046,共15页
CRISPR-Cas endonucleases mediate prokaryotic adaptive immunity by targeting foreign nucleic acids.CRISPR/Cas13b is a class 2 type VI-B ribonuclease that targets and cleaves single-stranded RNA.It exhibits higher RNA i... CRISPR-Cas endonucleases mediate prokaryotic adaptive immunity by targeting foreign nucleic acids.CRISPR/Cas13b is a class 2 type VI-B ribonuclease that targets and cleaves single-stranded RNA.It exhibits higher RNA interference activity than Cas13a and Cas13c and causes fewer collateral effects than RxCas13d in mammalian cells.However,a programmable CRISPR/Cas13b-mediated RNA interference system for endogenous transcripts in rice has not yet been established.Here,we developed a CRISPR/Cas13b-mediated system to target endogenous transcripts in rice.Our CRISPR/Cas13b system could inhibit multiple endogenous mRNAs simultaneously.In addition,this system efficiently repressed endogenous long noncoding RNAs with more than 50% inhibition in stable transgenic plants.Furthermore,we found only weak collateral effects of the CRISPR/Cas13b-mediated system at the transcriptome-wide level,and no difference in the agronomic traits of stable transgenic rice in the field.We present a programmable CRISPR/Cas13b-mediated knockdown system for rice,offering a potential biotechnological tool for functional genomics and crop improvement. 展开更多
关键词 CRISPR/cas13b RNA knockdown system RICE collateral effect inorganic phosphate starvation
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Adopting Conservation Agriculture Systems in Morocco: A Case Study
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作者 Othmane Brache Said Laaribya +1 位作者 Ayoub Bouta Bojan Simovski 《Journal of Environmental & Earth Sciences》 2025年第6期73-90,共18页
This research paper addresses,from an ecogeographic perspective within a localised context,a new concept of nature conservation within modern farming systems:the direct seeding technique based on the principles of the... This research paper addresses,from an ecogeographic perspective within a localised context,a new concept of nature conservation within modern farming systems:the direct seeding technique based on the principles of the Conservation Agriculture System(CAS).The adoption of CAS aims to increase soil fertility,promote biodiversity,and sustain production,making it one of the most effective adaptation solutions available to address the challenges of climate change.CAS is defined as a farming system based on three key principles:minimal soil disturbance(reduced or zero tillage),maintaining a permanent soil cover(with residues from previous crops),and adopting crop rotation(diversifying crops rather than limiting them to a single type in consecutive seasons).However,there is limited research and a lack of scientific studies on the implementation of conservation agriculture in developing nations such as Morocco,particularly in the Had Kourt region.This study aims to assess the feasibility of CAS compared to traditional agricultural systems by surveying the opinions of farmers who have experience with both systems and comparing the outcomes of their practices based on simple indicators as an initial stage,with further analysis of additional indicators planned through subsequent scientific investigations.The sampling method used in this study is non-discriminatory,as semi-structured interviews were conducted with a group of farmers to gather their opinions on CAS.The adoption of conservation agriculture has been linked to prior knowledge of the system,acquired through training and fieldwork via application platforms,which remain limited in scope. 展开更多
关键词 Conservation Agriculture system(caS) Climate Change Zero Tillage Soil Optimization Biodiversity Sustain Production
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癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)联合神经元特异性烯醇化酶(NSE)在肺癌患者诊断中的价值分析
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作者 黄淑慧 《首都食品与医药》 2026年第1期83-86,共4页
目的探讨联合检测CEA、CA125、NSE在肺癌患者诊断中的价值。方法选取2024年1月-12月荔浦市人民医院收治的50例疑似肺癌的患者,对患者的血液标本进行分析和观察,均进行CEA、CA125、NSE检测,将病理检查结果作为金标准。观察单项CEA检测(A... 目的探讨联合检测CEA、CA125、NSE在肺癌患者诊断中的价值。方法选取2024年1月-12月荔浦市人民医院收治的50例疑似肺癌的患者,对患者的血液标本进行分析和观察,均进行CEA、CA125、NSE检测,将病理检查结果作为金标准。观察单项CEA检测(A组)、单项CA125检测(B组)、单项NSE检测(C组)以及三项联合检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。结果50例患者中,有41例患者被确诊为肺癌。三项联合检测的阴性预测值、敏感性均优于A、B、C组(P<0.05);四组的阳性预测值与特异性对比,无明显差异(P>0.05),但三项联合检测的阳性预测值与特异性数值均高于A、B、C组。结论三项指标联合检测可提高肺癌诊断的准确率。 展开更多
关键词 CEA ca125 NSE 肺癌患者
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Production of ^(287,288)Mc isotopes in the ^(48)Ca+^(243)Am reaction at China Accelerator Facility for Superheavy Elements
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作者 X.Y.Huang Z.Y.Zhang +38 位作者 J.G.Wang L.Ma C.L.Yang M.H.Huang X.L.Wu Z.G.Gan H.B.Yang M.M.Zhang Y.L.Tian Y.S.Wang J.Y.Wang Y.H.Qiang G.Xie S.Y.Xu Z.Zhao Z.C.Li L.C.Sun L.Zhu X.Zhang H.Zhou F.Guan Z.H.Li W.X.Huang Z.Qin Y.Wang X.J.Yin Y.F.Cui Z.W.Lu Y.He L.T.Sun Z.Z.Ren S.G.Zhou V.K.Utyonkov A.A.Voinov Yu.S.Tsyganov A.N.Polyakov D.I.Solovyev N.D.Kovrizhnykh M.V.Shumeiko 《Chinese Physics Letters》 2026年第1期9-16,共8页
We report the results of the experiment on synthesizing ^(287,288)Mc isotopes (Z=115) using the fusionevaporation reaction ^(243)Am(^(48)Ca,4n,3n)^(287,288)Mc at the Spectrometer for Heavy Atoms and Nuclear Structure-... We report the results of the experiment on synthesizing ^(287,288)Mc isotopes (Z=115) using the fusionevaporation reaction ^(243)Am(^(48)Ca,4n,3n)^(287,288)Mc at the Spectrometer for Heavy Atoms and Nuclear Structure-2(SHANS2),a gas-filled recoil separator located at the China Accelerator Facility for Superheavy Elements(CAFE2).In total,20 decay chains are attributed to ^(288)Mc and 1 decay chain is assigned to ^(287)Mc.The measured oa-decay properties of ^(287,288)Mc as well as its descendants are consistent with the known data.No additional decay chains originating from the 2n or 5n reaction channels were detected.The excitation function of the ^(243)Am(^(48)Ca,3n)^(288)Mc reaction was measured at the cross-section level of picobarn,which indicates the promising capability for the study of heavy and superheavy nuclei at the facility. 展开更多
关键词 spectrometer heavy atoms fusionevaporation reaction China Accelerator Facility Superheavy Elements PRODUCTION decay chains ISOTOPES ca am reaction mc
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Effect of different artificial aging treatments on tensile creep behavior of extruded lean Mg−Al−Ca−Mn alloy
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作者 Ming-yu LI Zhi-ping GUAN +6 位作者 Jia-wang SONG Hong-jie JIA Pin-kui MA Gang WANG Wei YAN Ming-hui WANG Zhi-gang LI 《Transactions of Nonferrous Metals Society of China》 2026年第1期112-123,共12页
The effects of artificial aging(T6)on the creep resistance with tensile stresses in the range of 50−80 MPa at 175℃were investigated for an extruded Mg−1.22Al−0.31Ca−0.44Mn(wt.%)alloy.The Guinier-Preston(G.P.)zones pr... The effects of artificial aging(T6)on the creep resistance with tensile stresses in the range of 50−80 MPa at 175℃were investigated for an extruded Mg−1.22Al−0.31Ca−0.44Mn(wt.%)alloy.The Guinier-Preston(G.P.)zones primarily precipitate in the sample aged at 200℃for 1 h(T6-200℃/1h),while the Al_(2)Ca phases mainly precipitate in the sample aged at 275℃for 8 h(T6-275℃/8h).The T6-200℃/1h sample exhibits excellent creep resistance,with a steady-state creep rate one order of magnitude lower than that of the T6-275℃/8h sample.The abnormally high stress exponent(~8.2)observed in the T6-200℃/1h sample is associated with the power-law breakdown mechanism.TEM analysis illuminates that the creep mechanism for the T6-200℃/1h sample is cross-slip between basal and prismatic dislocations,while the T6-275℃/8h sample exhibits a mixed mechanism of dislocation cross-slip and climb.Compared with the Al_(2)Ca phase,the dense G.P.zones effectively impede dislocation climb and glide during the creep process,demonstrating superior creep resistance of the T6-200℃/1h sample. 展开更多
关键词 Mg−Al−ca−Mn alloy tensile creep artificial aging cross slip
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Cas9和PE介导湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因敲除的研究 被引量:5
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作者 周磊 李东旭 +3 位作者 冒魏佳 刘孜斐 高雪 万永杰 《南京农业大学学报》 北大核心 2025年第2期419-426,共8页
[目的]本文利用CRISPR/Cas9系统和先导编辑(prime editor, PE)对湖羊骨骼肌卫星细胞中的肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因外显子进行敲除,旨在比较2种技术敲除MSTN基因的效率,以验证新型基因编辑工具PE用于湖羊骨骼肌卫星细胞上的可... [目的]本文利用CRISPR/Cas9系统和先导编辑(prime editor, PE)对湖羊骨骼肌卫星细胞中的肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因外显子进行敲除,旨在比较2种技术敲除MSTN基因的效率,以验证新型基因编辑工具PE用于湖羊骨骼肌卫星细胞上的可行性。[方法]针对湖羊MSTN基因的3个外显子分别设计向导RNA(single guide RNA,sgRNA)以及引导RNA(prime editing guide RNA,pegRNA),构建相应的质粒后将含有Cas9/sgRNA或PE/pegRNA的质粒共同转染湖羊骨骼肌卫星细胞。24 h后观察细胞荧光,48 h后再将细胞消化,使用流式细胞分选仪根据荧光强度筛选出转染成功的强阳性细胞,收集细胞,获得基因组DNA后进行桑格测序,检测2种基因编辑工具对MSTN基因的打靶效率。[结果]成功构建了分别针对湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因3个外显子敲除的基因编辑工具,质粒测序结果显示序列插入正确;CRISPR/Cas9的编辑效率(65%、88%、91%)显著高于PE的编辑效率(57%、29%、33%),而PE的插入缺失率显著低于CRISPR/Cas9。[结论]在转染效率相近的情况下,CRISPR/Cas9相比于PE对于湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因的敲除有更高的编辑效率。 展开更多
关键词 基因编辑 CRISPR/cas9 先导编辑(PE) MSTN 湖羊 骨骼肌卫星细胞
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基于CRISPR-Cas系统的多重耐药菌防治技术研究进展 被引量:1
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作者 周倩 唐梦君 +4 位作者 张小燕 陆俊贤 唐修君 杨星星 高玉时 《生物技术通报》 北大核心 2025年第5期42-51,共10页
动物源细菌耐药性影响动物养殖安全,同时对人类公共卫生和食品安全产生重要威胁。抗生素的滥用加剧了耐药细菌的传播,而新型抗菌药物研发日益困难,动物源细菌耐药污染已成为全球范围内的公共危机,一旦耐药菌从动物向人类扩散,将极大地... 动物源细菌耐药性影响动物养殖安全,同时对人类公共卫生和食品安全产生重要威胁。抗生素的滥用加剧了耐药细菌的传播,而新型抗菌药物研发日益困难,动物源细菌耐药污染已成为全球范围内的公共危机,一旦耐药菌从动物向人类扩散,将极大地威胁人类健康,亟须新的方法和策略应对细菌耐药。CRISPR-Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR-associated)是第三代“基因组定点编辑技术”,该技术能够靶向剪切外源性核酸,保护微生物遗传物质遗传稳定性。与传统的多重耐药菌防治策略相比,CRISPR-Cas系统具备独特的DNA序列的靶向性和灵敏度,通过精准、简便和高效的基因编辑技术,与核酸扩增技术、比色技术等相结合,可以提高灵敏度和检测时效性等性能指标。本文介绍了CRISPR-Cas系统的由来、系统分类、基因编辑的作用机理,在此基础之上,聚焦于该系统在多重耐药菌防治领域的研究进展和应用,在耐药致病菌消除、耐药基因消除以及致病菌诊断检测方面给出案例分析以及目前存在的挑战。总的来说,基于CRISPR-Cas系统的序列特异性抗菌剂能够降低细菌多重耐药性,结合核酸扩增技术和实时监控设备提升检测的精准性和效率,为动物源细菌耐药防控和监测研究提供了新思路。 展开更多
关键词 CRISPR-cas系统 基因编辑 多重耐药菌 耐药基因 防治技术
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基于RPA-CRISPR/Cas12a的沙氏弧菌可视化检测方法的建立 被引量:1
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作者 葛辉 巫旗生 +8 位作者 宁岳 冯君雅 陈昊翔 李慧耀 叶军 吴丽云 温凭 徐春燕 任磊 《水产学报》 北大核心 2025年第11期203-215,共13页
【目的】建立基于RPA-CRISPR/Cas12a的沙氏弧菌实时荧光检测法和试纸条检测法,满足牡蛎新发病原沙氏弧菌的快速检测需求。【方法】实验针对沙氏弧菌toxR基因设计特异性片段,优选RPA引物和crRNA序列,确保基因标志物的准确扩增与识别;当CR... 【目的】建立基于RPA-CRISPR/Cas12a的沙氏弧菌实时荧光检测法和试纸条检测法,满足牡蛎新发病原沙氏弧菌的快速检测需求。【方法】实验针对沙氏弧菌toxR基因设计特异性片段,优选RPA引物和crRNA序列,确保基因标志物的准确扩增与识别;当CRISPR/Cas12a系统识别到RPA扩增的病原靶标基因并激活其反式切割活性后,生物素修饰的单链DNA荧光探针作为报告分子被切割,分别依据蓝光下的荧光强度和试纸条的显色情况判定检测结果;实验采用多种弧菌验证检测方法的特异性,并通过不同浓度沙氏弧菌菌液评估2种检测方法的灵敏度;最终将2种检测方法与PCR方法进行真实样本检测对比。【结果】本研究成功建立了RPA-CRISPR/Cas12a荧光检测法和试纸检测法,且均表现出优异的特异性,可准确识别沙氏弧菌,整个检测流程可在1 h内完成;2种方法的检测限均达到100 CFU/mL,检测结果与PCR高度一致(符合率100%)。【结论】本研究开发的基于RPA-CRISPR/Cas12a的荧光检测法和试纸检测法,突破了传统方法的局限,显著缩短检测时间,且无需复杂仪器,操作简便,为沙氏弧菌的现场快速检测提供了可靠的技术支持。本研究为沙氏弧菌的快速检测提供了高效、便捷的新方法,对水产养殖病害防控和食品安全保障具有重要意义。 展开更多
关键词 沙氏弧菌 重组酶聚合酶扩增(RPA) CRISPR/cas12a 荧光检测 试纸检测
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铸态602 CA镍基高温合金的热变形行为 被引量:1
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作者 闫英杰 曹洪祥 +3 位作者 翟亚中 张钰昆 曹睿 车洪艳 《塑性工程学报》 北大核心 2025年第2期130-140,共11页
为了探索铸态602 CA镍基高温合金的最佳热加工工艺,采用Gleeble-3800热模拟机研究了602 CA合金铸锭在高温压缩变形时的热变形行为,分析了高温压缩过程中微观组织的演化规律。结果表明,在变形温度为900、1000、1100和1200℃,应变速率为0.... 为了探索铸态602 CA镍基高温合金的最佳热加工工艺,采用Gleeble-3800热模拟机研究了602 CA合金铸锭在高温压缩变形时的热变形行为,分析了高温压缩过程中微观组织的演化规律。结果表明,在变形温度为900、1000、1100和1200℃,应变速率为0.1、1和10 s^(-1),真应变为60%的条件下,铸态602 CA合金的流动应力随着温度的降低和应变速率的增大而增加。在此基础上分别建立了简化的Arrhenius本构方程模型和应变补偿Arrhenius本构方程模型,应变补偿本构方程提高了流动应力预测的准确性。热加工图显示最佳热加工温度为1140~1200℃,最佳应变速率为0.1~1 s^(-1)。在1200℃/0.1 s^(-1)和1200℃/1 s^(-1)时,发生完全动态再结晶。 展开更多
关键词 602 ca合金 热变形 本构方程 热加工图
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血清CYFRA21-1、HCY、CA153联合检验在乳腺癌诊断中的价值分析 被引量:1
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作者 李璐璐 叶亚举 +1 位作者 赵菲菲 轩小燕 《实用癌症杂志》 2025年第8期1269-1272,共4页
目的探究血清CYFRA21-1、HCY、CA153联合检验在乳腺癌诊断中的价值。方法选取98例乳腺癌患者设为恶性组,另选取同期的乳腺良性肿瘤患者及体检健康女性各98例,分别对应为良性组和对照组。比较3组研究对象血清CYFRA21-1、HCY、CA153水平... 目的探究血清CYFRA21-1、HCY、CA153联合检验在乳腺癌诊断中的价值。方法选取98例乳腺癌患者设为恶性组,另选取同期的乳腺良性肿瘤患者及体检健康女性各98例,分别对应为良性组和对照组。比较3组研究对象血清CYFRA21-1、HCY、CA153水平及血清三项单独检测和联合检测的阳性率情况,并比较分析血清三项单独及联合检测对乳腺癌的诊断效能。结果恶性组血清CYFRA21-1、HCY、CA153水平及三项血清指标单独和联合检测的阳性率均明显高于良性组及对照组(P<0.05);良性组血清CYFRA21-1、HCY、CA153水平及三项血清指标单独和联合检测的阳性率均明显高于对照组(P<0.05)。血清CYFRA21-1、HCY、CA153单独及联合检测的AUC^(ROC)分别为0.909(95%CI:0.868~0.950)、0.977(95%CI:0.952~1.000)、0.920(95%CI:0.883~0.957)、0.997(95%CI:0.000~1.000),三项血清指标联合检测的AUC^(ROC)最大,对乳腺癌的诊断效能最高。结论CYFRA21-1、HCY、CA153在乳腺癌患者血清中显著升高,联合检测血清CYFRA21-1、HCY、CA153在乳腺癌的临床诊断中具有较高的应用价值。 展开更多
关键词 CYFRA21-1 HCY ca153 联合检验 乳腺癌 诊断价值
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SYSTEMATIC COVARIATION OF SR, BA, CA ELEMENTS IN CENOZOIC VOLCANIC ROCKS ON THE FILDES PENINSULA, WEST ANTARCTICA, AND ITS RELATION TO PEIROGENESIS
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作者 Zheng Xiangshen and Liu XiaohanLaboratory of Lithosphere Tectonic Evolution,Institute of Geology, Academia Sinica,P.O. Box 634, Beijing 100029 《Chinese Journal of Polar Science》 1991年第1期30-38,共9页
Cenozoic volcanic rocks in the Fildes Peninsula are composed of High-Al basalt, basaltfc andesite, andesite, and dacite belonging to a calc-alkaline volcanic series with low-K and high-Al characteristics. Using a new ... Cenozoic volcanic rocks in the Fildes Peninsula are composed of High-Al basalt, basaltfc andesite, andesite, and dacite belonging to a calc-alkaline volcanic series with low-K and high-Al characteristics. Using a new indicator, the Sr / Ca-Ba / Ca, systematics proposed by Onuma (1980, 1981) and Sr, Ba, Ca concentrations in volcanic lavas and subvolcanic rocks, the authors find that the high-Al basaltic volcanic rocks either in volcanic strata or in subvolcanic intrusives were formed from a primary magma, in different stages through the fractional crystallization of clinopyro-xene(Cpx)and plagioclase (P1) in the process of magmatic evolution, resulting in the formation of basaltic-andesitic, andesitic and dacitic rocks. 展开更多
关键词 Fildes Peninsula Cenozoic volcanic rocks Sr / ca-Ba / ca systematics
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利用CRISPR/Cas9编辑草莓FvPDS基因的研究
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作者 刘丽锋 宋艳红 +2 位作者 赵霞 李刚 周厚成 《园艺学报》 北大核心 2025年第7期1687-1695,共9页
八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase,PDS)是类胡萝卜素生物合成的关键酶,其编码的PDS基因参与并调控植物类胡萝卜素的累积,PDS基因突变会使植物产生肉眼可见的白化表型,常用来作为检测基因编辑成功与否的标记基因。选取森林草莓Fv... 八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase,PDS)是类胡萝卜素生物合成的关键酶,其编码的PDS基因参与并调控植物类胡萝卜素的累积,PDS基因突变会使植物产生肉眼可见的白化表型,常用来作为检测基因编辑成功与否的标记基因。选取森林草莓FvPDS基因作为靶标,利用CRISPR/Cas9系统构建双靶点基因编辑载体,农杆菌介导法稳定遗传转化森林草莓种质HLJ-005(红果)、HLJ-004(白果),通过TA克隆测序法分析基因编辑的类型。遗传转化HLJ-005约2250块叶片外植体,筛选到具有卡那霉素抗性的植株147株,通过PCR鉴定,24株为阳性材料,阳性率为16.32%,最后测序获得了5株具有编辑的材料,编辑效率为20.83%;遗传转化HLJ-004约2305块叶片外植体,获得具有卡那霉素抗性的植株234株,PCR检测为6株阳性材料,阳性率为2.56%,测序只有3株为具有编辑的材料,编辑效率为50%。两个编辑位点都产生了突变,分别是单碱基或多个碱基的缺失,但是这两份种质的突变类型不尽相同。结果表明,利用CRISPR/Cas9系统可以通过稳定表达,HLJ-004、HLJ-005两个森林草莓实现双靶点同时敲除,HLJ-004、HLJ-005可作为草莓基因编辑的遗传转化材料,并验证了适合草莓基因编辑的CRISPR/Cas9系统。 展开更多
关键词 草莓 CRISPR/cas9 FvPDS 基因编辑
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EuCAD基因CRISPR/Cas9敲除载体构建及基因编辑效果验证
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作者 陈博雯 肖玉菲 +4 位作者 李军集 钟连香 魏秋兰 覃子海 刘海龙 《分子植物育种》 北大核心 2025年第7期2226-2231,共6页
为了对尾叶桉(Eucalyptus urophylla)木质素合成关键基因开展基因编辑研究,本研究构建了Eu-CAD基因的CRISPR/Cas9敲除载体,并利用原生质体转化体系对基因编辑效果进行验证。对EuCAD基因序列进行分析,设计两条位于外显子的靶位点序列,使... 为了对尾叶桉(Eucalyptus urophylla)木质素合成关键基因开展基因编辑研究,本研究构建了Eu-CAD基因的CRISPR/Cas9敲除载体,并利用原生质体转化体系对基因编辑效果进行验证。对EuCAD基因序列进行分析,设计两条位于外显子的靶位点序列,使用Golden Gate技术构建得到基因编辑载体pRGEB35-CAD。以尾叶桉继代苗茎尖为材料建立原生质体转化体系,用pGFP质粒进行转化,依据GFP荧光激发结果统计体系的转化率为2.47%。将pRGEB35-CAD转化至原生质体,PCR鉴定显示在原生质体中EuCAD发生了预期的基因编辑,pRGEB35-CAD取得了预期基因编辑效果。本研究构建的EuCAD基因CRISPR/Cas9敲除载体可对目标基因进行基因编辑,为进一步创制EuCAD敲除突变体奠定了研究基础。 展开更多
关键词 CRISPR/cas9敲除载体 原生质体转化 caD基因 尾叶桉
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应用CRISPR/Cas9技术对五指山猪GHRHR基因的编辑
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作者 王文涛 张思佳 +9 位作者 何鑫淼 陈诗怡 吴赛辉 张冬杰 陈瑶生 丛佩清 亓美玉 田明 刘娣 何祖勇 《东北农业大学学报》 北大核心 2025年第2期44-52,共9页
生长激素释放激素受体(GHRHR)表达于垂体细胞表面,调节垂体生长激素合成与分泌,对动物生长发育发挥重要调控作用。为深入了解GHRHR对五指山猪生长发育的影响,通过CRISPR-ctRNP体外酶切试验,筛选出切割效率达27.3%的1条gRNA用于构建CRISP... 生长激素释放激素受体(GHRHR)表达于垂体细胞表面,调节垂体生长激素合成与分泌,对动物生长发育发挥重要调控作用。为深入了解GHRHR对五指山猪生长发育的影响,通过CRISPR-ctRNP体外酶切试验,筛选出切割效率达27.3%的1条gRNA用于构建CRISPR/Cas9表达载体。转染五指山猪肾细胞后,经流式分选富集到编辑效率高达100%的细胞群体作为供体细胞,进行体细胞核移植;再将250枚克隆胚胎转移至5头代孕母猪输卵管中,最终1头代孕母猪成功妊娠,分娩3头克隆仔猪均为GHRHR双等位基因编辑个体;编辑均导致GHRHR基因产生移码突变,可导致蛋白翻译提前终止,丧失生物学功能。最终仅有1头GHRHR编辑五指山猪存活,该个体60日龄时,体质量较野生型个体平均体质量下降23.4%。研究结果在五指山猪中实现GHRHR基因高效编辑,为培养微型宠物猪及解析GHRHR的调控功能提供理论依据。 展开更多
关键词 五指山猪 生长激素释放激素受体 基因编辑猪 CRISPR/cas9
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基于CRISPR/Cas9基因编辑系统建立WIP 1基因g.37536832 C>A位点突变的ST细胞系
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作者 王楠 杜伟伟 +7 位作者 王婉洁 王悦 袁茂莎 聂雨欣 孙亚茹 刘志国 吴添文 牟玉莲 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第5期1966-1976,共11页
【目的】利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得野生型p53诱导磷酸酶1(wild-type p53-induced phosphatase 1,WIP1)基因与精子活力显著相关的位点g.37536832 C>A突变的猪睾丸(swine testis,ST)细胞系,为在细胞层面上进一步探讨WIP 1基因... 【目的】利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得野生型p53诱导磷酸酶1(wild-type p53-induced phosphatase 1,WIP1)基因与精子活力显著相关的位点g.37536832 C>A突变的猪睾丸(swine testis,ST)细胞系,为在细胞层面上进一步探讨WIP 1基因与公猪精液品质性状之间的关系奠定基础。【方法】利用CRISPOR在线网站在猪WIP 1基因g.37536832 C>A位点附近区域设计3条向导RNA(single guide RNA,sgRNA),并将其连接至pX458-GFP载体;通过T7E1酶切试验检测3条sgRNA活性,选择效率较高的sgRNA。构建Donor载体,并将其与sgRNA载体共同转染至ST细胞,采用流式细胞术将表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的阳性细胞进行富集和单克隆细胞筛选,并对筛选出的单克隆细胞进行基因型鉴定。【结果】质粒测序结果表明,成功将3条sgRNA连接至pX458-GFP载体上;T7E1酶切结果显示,转染pX458-GFP-sgRNA1和pX458-GFP-sgRNA2质粒组产生了切割,效率分别为24%和27%,而转染pX458-GFP-sgRNA3质粒组未检测到切割,因此选择pX458-GFP-sgRNA2质粒进行试验。成功构建Donor载体,并将pX458-GFP-sgRNA2和Donor载体共转染至ST细胞。基因型鉴定结果显示,获得的269株单克隆中有205株细胞发生了基因编辑,基因编辑效率为76%,其中9株为WIP 1基因g.37536832 C>A位点纯合突变的ST细胞,精确突变效率为3%。【结论】本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功获得了WIP 1基因g.37536832 C>A位点突变的ST细胞系,为深入研究WIP 1基因对公猪精液品质的影响提供了良好的细胞模型。 展开更多
关键词 CRISPR/cas9 WIP 1基因 ST细胞系
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Y元素对均匀态Mg-6Zn-0.25Ca镁合金耐蚀性能的影响
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作者 郭树国 刘全 +2 位作者 贾征 寇荣辉 刘绪栋 《稀有金属材料与工程》 北大核心 2025年第8期2136-2141,共6页
研究了Y元素对均匀态Mg-6Zn-0.25Ca合金耐蚀性能的影响。通过XRD、OM、SEM、失重、析氢和极化曲线实验研究了均匀态Mg-6Zn-0.25Ca和Mg-6Zn-1Y-0.25Ca这2种合金的微观组织及耐蚀性能。研究表明,均匀态Mg-6Zn-0.25Ca合金的第二相是Mg_(2)... 研究了Y元素对均匀态Mg-6Zn-0.25Ca合金耐蚀性能的影响。通过XRD、OM、SEM、失重、析氢和极化曲线实验研究了均匀态Mg-6Zn-0.25Ca和Mg-6Zn-1Y-0.25Ca这2种合金的微观组织及耐蚀性能。研究表明,均匀态Mg-6Zn-0.25Ca合金的第二相是Mg_(2)Ca,加入Y元素后平均晶粒尺寸稍有变大,Mg_(2)Ca相减少,还生成新的第二相Mg_(12)ZnY、Mg_(3)Y_(2)Zn_(3),并且第二相体积分数增加且分布更加均匀,这使得在腐蚀试验中镁基体上形成更加致密的腐蚀膜,该腐蚀膜可以起到屏障作用,新生成的Mg_(12)ZnY、Mg_(3)Y_(2)Zn_(3)都分布在晶界附近或枝晶间,显著降低了合金在腐蚀液中的电化学活性。这些使得Mg-6Zn-0.25Ca合金在3.5wt%NaCl的溶液中氢气析出量减少,增加Y元素使Mg-6Zn-0.25Ca合金的自腐蚀电位提高,并且减小自腐蚀电流密度,即有效地增强了均匀态Mg-6Zn-0.25Ca合金的耐蚀性能。所以Mg-6Zn-1Y-0.25Ca合金的耐蚀性能远高于Mg-6Zn-0.25Ca合金。 展开更多
关键词 Mg-6Zn-0.25ca合金 Mg-6Zn-1Y-0.25ca合金 均匀化 耐蚀性能 Mg_(2)ca
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基于RTCPA-CRISPR/Cas12a的牛病毒性腹泻病毒检测方法的建立及应用
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作者 蒙琦 常亮 +2 位作者 杨明 曹映辉 贺泂杰 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期80-88,共9页
本研究旨在建立一种检测牛病毒性腹泻病毒的RT-CPA-CRISPR/Cas12a方法。选取BVDV的E0蛋白基因序列为基础,设计CPA特异性引物。同时,依据CRISPR/Cas12a的设计原则,设计了crRNA靶向RT-RAA扩增产物,并优化了RT-CPA-CRISPR/Cas12a反应体系,... 本研究旨在建立一种检测牛病毒性腹泻病毒的RT-CPA-CRISPR/Cas12a方法。选取BVDV的E0蛋白基因序列为基础,设计CPA特异性引物。同时,依据CRISPR/Cas12a的设计原则,设计了crRNA靶向RT-RAA扩增产物,并优化了RT-CPA-CRISPR/Cas12a反应体系,此外,借助建立的该方法,开展了临床样品的检测。结果显示:所建立的检测方法对BVDV的最低检出限为8.0 copies/μL,并具有高度特异性,对42份临床样品检测显示,该方法与传统PCR方法的一致性好,符合率能达到92.86%。该研究建立了牛病毒性腹泻病毒的RT-CPA-CRISPR/Cas12a检测方法,为该病的诊断提供了技术手段。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 交叉引物恒温扩增技术 CRISPR/cas12a 灵敏度 特异性
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