基于PPARγ/c-Ski信号通路探讨蔓荆子黄素对膝骨关节炎大鼠滑膜组织纤维化的影响及其作用机制

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作者 胡恩睿 魏义保 +3 位作者 廖太阳 刘德仁 龚子健 王培民 《中医正骨》 2025年第4期11-19,29,共10页

目的:探讨蔓荆子黄素对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠滑膜组织纤维化的影响及其作用机制。方法:将40只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、低浓度组、高浓度组和拮抗剂组,每组8只。模型组、低浓度组、高浓度组和拮抗... 目的:探讨蔓荆子黄素对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠滑膜组织纤维化的影响及其作用机制。方法:将40只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、低浓度组、高浓度组和拮抗剂组,每组8只。模型组、低浓度组、高浓度组和拮抗剂组大鼠均采用前交叉韧带离断法建立右侧KOA模型。造模14 d后,低浓度组和高浓度组大鼠分别按照0.2 mg·kg^(-1)·d^(-1)和0.4 mg·kg^(-1)·d^(-1)的剂量给予蔓荆子黄素灌胃;拮抗剂组大鼠在给予蔓荆子黄素灌胃的同时,每日按照1.0 mg·kg^(-1)的剂量腹腔注射GW9662溶液;假手术组、模型组、低浓度组、高浓度组大鼠均每日腹腔注射等体积生理盐水;连续干预14 d。干预结束后,采用ELISA试剂盒检测大鼠血清白细胞介素(interleukin,IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量;采用HE染色试剂盒、Masson染色试剂盒分别对大鼠膝关节滑膜组织进行染色,观察大鼠滑膜炎症程度与纤维化程度;分别采用实时定量PCR和Western Blot法检测大鼠膝关节滑膜组织中转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原、过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)γ、c-Ski的mRNA和蛋白表达水平。结果:①血清IL-1β和TNF-α含量检测结果。模型组大鼠血清IL-1β、TNF-α含量均高于假手术组(P=0.000,P=0.000),低浓度组和高浓度组大鼠血清IL-1β、TNF-α含量均低于模型组(IL-1β:P=0.004,P=0.000;TNF-α:P=0.000,P=0.000),拮抗剂组大鼠血清IL-1β、TNF-α含量均高于高浓度组(P=0.027,P=0.005)。②膝关节滑膜组织病理学观察结果。模型组大鼠膝关节滑膜组织部分缺损,衬里层细胞排列不规则,滑膜细胞大量增生,炎症细胞浸润明显,胶原纤维大量沉积;与模型组相比,低浓度组、高浓度组大鼠膝关节滑膜组织衬里层细胞排列较为规则,炎症细胞浸润明显减轻,胶原纤维沉积减轻;与高浓度组相比,拮抗剂组大鼠膝关节滑膜组织炎症细胞浸润更严重,胶原纤维沉积更多。③滑膜组织纤维化相关基因的mRNA和蛋白表达量检测结果。模型组大鼠滑膜组织中TGF-β、α-SMA、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白相对表达量均高于假手术组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000),低浓度组和高浓度组大鼠滑膜组织中TGF-β、α-SMA、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白相对表达量均低于模型组(mRNA:P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000;蛋白:P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000),高浓度组大鼠滑膜组织中TGF-β、α-SMA、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白相对表达量均低于低浓度组(P=0.000,P=0.021,P=0.001;P=0.001,P=0.000,P=0.002),拮抗剂组大鼠滑膜组织中TGF-β、α-SMA、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白相对表达量均高于高浓度组(P=0.000,P=0.001,P=0.001;P=0.002,P=0.001,P=0.020)。④滑膜组织中PPARγ/c-Ski信号通路相关基因的mRNA和蛋白表达量检测结果。模型组大鼠滑膜组织中PPARγ、c-Ski的mRNA和蛋白相对表达量均低于假手术组(P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000),低浓度组和高浓度组大鼠滑膜组织中PPARγ、c-Ski的mRNA和蛋白相对表达量均高于模型组(mRNA:P=0.001,P=0.000;P=0.004,P=0.000;蛋白:P=0.001,P=0.000;P=0.004,P=0.000),高浓度组大鼠滑膜组织中PPARγ、c-Ski的mRNA和蛋白相对表达量均高于低浓度组(mRNA:P=0.000,P=0.000;蛋白:P=0.049,P=0.000),拮抗剂组大鼠滑膜组织中PPARγ、c-Ski的mRNA和蛋白相对表达量均低于高浓度组(mRNA:P=0.000,P=0.000;蛋白:P=0.000,P=0.000)。结论:蔓荆子黄素能够改善KOA大鼠滑膜组织纤维化,且高浓度蔓荆子黄素比低浓度蔓荆子黄素的改善效果更佳;其作用机制可能与其能够激活PPARγ/c-Ski信号通路、抑制炎症反应有关。 展开更多

关键词 骨关节炎 膝 滑膜 纤维化 蔓荆子 黄酮醇类 炎症 过氧化物酶体增生物激活受体 c-ski 信号传导 大鼠

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血管紧张素Ⅱ通过抑制原癌基因c-SKI表达促进小鼠高血压性心肌纤维化 被引量：6

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作者 吕忠英 李红建 +1 位作者 张颖 王娟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1738-1745,共8页

目的:探讨原癌基因c-SKI (cellular Sloan-Kettering Institute)表达变化对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)诱导的小鼠高血压性心肌纤维化的影响。方法:将12只雄性C57BL/6小鼠随机分成PBS组(n=6)和Ang Ⅱ组(n=6),利用渗透压微泵... 目的:探讨原癌基因c-SKI (cellular Sloan-Kettering Institute)表达变化对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)诱导的小鼠高血压性心肌纤维化的影响。方法:将12只雄性C57BL/6小鼠随机分成PBS组(n=6)和Ang Ⅱ组(n=6),利用渗透压微泵皮下植入小鼠慢性持续给予等体积的PBS和Ang Ⅱ,给药4周,测定小鼠血压。取小鼠心脏组织进行HE和Masson染色检测病理学变化;免疫组织化学染色和Western blot检测c-SKI、CD31、平滑肌蛋白22(smooth muscle protein 22, SM22)、Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ, Col Ⅰ)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)水平。用不同浓度的AngⅡ处理人冠状动脉内皮细胞(humancoronaryarteryendothelialcells,HCAECs),显微镜观察细胞形态,CCK-8法检测细胞活力;用最低有效剂量的Ang Ⅱ处理HCAECs,免疫荧光染色和Western blot检测c-SKI、CD31、α-SMA、Col Ⅰ和上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)通路蛋白水平。过表达c-SKI和Ang Ⅱ联合处理HCAEC,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡情况,免疫荧光染色和Western blot检测α-SMA、c-SKI、CD31、Col Ⅰ、EMT通路蛋白和EMT标志因子的表达。结果:Ang Ⅱ处理后小鼠尾动脉收缩压升高,心室壁增厚,Col Ⅰ和α-SMA表达显著上调(P<0.01),c-SKI、CD31和SM22表达显著下调(P<0.01)。10μmol/L Ang Ⅱ处理HCAECs后,细胞连接松散,细胞形态改变,且48 h细胞活力显著降低(P<0.01);免疫荧光染色和Western blot结果显示,Ang Ⅱ组Col Ⅰ、α-SMA、Twist、Snail和p-Smad2/3蛋白水平显著升高(P<0.01),cSKI和CD31表达显著下调(P<0.01)。与Ang Ⅱ+vector组相比,过表达c-SKI联合Ang Ⅱ处理显著促进HCAECs活力(P<0.01),显著抑制细胞凋亡(P<0.01),显著上调c-SKI、CD31和E-cadherin表达(P<0.05),显著下调α-SMA、Col Ⅰ、Twist、Snail、p-Smad2/3、N-cadherin和vimentin表达(P<0.01)。结论:Ang Ⅱ可能通过调控c-SKI表达,促进小鼠高血压性心肌纤维化。 展开更多

关键词 血管紧张素Ⅱ 高血压 心肌纤维化 原癌基因c-ski 人冠状动脉内皮细胞 小鼠

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c-ski对大鼠皮肤成纤维细胞生物学行为的影响 被引量：4

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作者 刘霞 李平 +2 位作者 张恩 刘苹 周元国 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期173-176,共4页

目的研究原癌基因c-ski对大鼠皮肤成纤维细胞活力、肌成纤维细胞分化、型胶原分泌等生物学行为的影响。方法免疫组化检测皮肤成纤维细胞内c-Ski蛋白的表达,并在转染c-ski基因后,利用MTT法检测皮肤成纤维细胞增殖活力、免疫组化和RT-PCR... 目的研究原癌基因c-ski对大鼠皮肤成纤维细胞活力、肌成纤维细胞分化、型胶原分泌等生物学行为的影响。方法免疫组化检测皮肤成纤维细胞内c-Ski蛋白的表达,并在转染c-ski基因后,利用MTT法检测皮肤成纤维细胞增殖活力、免疫组化和RT-PCR检测型胶原分泌、α-SMA细胞免疫组化检测肌成纤维细胞分化的改变。结果大鼠皮肤成纤维细胞内有c-Ski蛋白的表达,且主要表达在细胞核内,c-ski可以以剂量依赖的方式增加皮肤成纤维细胞的增殖活力,并可降低型胶原蛋白和mRNA的水平,但不改变皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化过程。结论c-ski促进细胞增殖但降低胶原分泌的作用可能对促进创伤愈合、降低瘢痕形成有着重要的意义。 展开更多

关键词 c-ski 成纤维细胞 胶原 分化

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Wistar大鼠c-ski基因部分序列的克隆、测序及实时荧光定量PCR的建立 被引量：2

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作者 李平 刘苹 +3 位作者 熊仁平 赵艳 朱敏 周元国 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1221-1224,共4页

目的测定Wistar大鼠c-ski基因部分序列,并应用于检测大鼠c-ski基因表达的实时荧光定量PCR的建立。方法提取培养的Wistar大鼠皮肤成纤维细胞总RNA,通过RT-PCR扩增,将扩增产物克隆到PMD-18T载体上并测序。根据获得的c-ski基因部分序列设... 目的测定Wistar大鼠c-ski基因部分序列,并应用于检测大鼠c-ski基因表达的实时荧光定量PCR的建立。方法提取培养的Wistar大鼠皮肤成纤维细胞总RNA,通过RT-PCR扩增,将扩增产物克隆到PMD-18T载体上并测序。根据获得的c-ski基因部分序列设计实时荧光定量PCR引物,建立SYBRgreen定量PCR检测方法,并检测培养的大鼠皮肤成纤维细胞c-skimRNA表达水平。结果获得的Wistar大鼠c-ski基因cDNA序列长561bp,为未曾报道的新序列,其与人、小鼠具有较高的同源性,Gen-Bank收录(收入号DQ409171)。建立的SYBRgreen定量PCR检测标准品在103～109拷贝范围内的相关系数为0.99149。体外培养的Wistar大鼠皮肤成纤维细胞样品中c-skimRNA水平为(1.02±0.18)×106拷贝/μl。结论新获得了Wistar大鼠c-ski基因部分序列,该序列可用于实时荧光定量PCR的建立。 展开更多

关键词 c-ski 克隆 分子 序列分析 聚合酶链反应

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封闭负压引流技术对人慢性创面组织中C-ski及Smad3表达的影响 被引量：3

5

作者 曾勇 简华刚 +1 位作者 宗建春 秦开秀 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期704-707,共4页

目的观察封闭负压引流技术(vacuum-assisted closure,VAC)治疗慢性创面前后创缘组织中C-ski及Smad3表达的改变,从创面愈合启动方面探讨VAC促进创面愈合的机制。方法临床选取慢性创面病例14例,分别于治疗前,治疗后1、4、7d取创缘全层皮... 目的观察封闭负压引流技术(vacuum-assisted closure,VAC)治疗慢性创面前后创缘组织中C-ski及Smad3表达的改变,从创面愈合启动方面探讨VAC促进创面愈合的机制。方法临床选取慢性创面病例14例,分别于治疗前,治疗后1、4、7d取创缘全层皮肤组织,应用免疫组织化学检测样本组织的C-ski及Smad3的表达变化,应用RT-PCR检测样本组织中C-ski mRNA和Smad3mRNA的变化。结果治疗前创缘组织中C-ski的表达较少,治疗后逐渐增加,治疗后第4天起较治疗前显著增加(P<0.05)。相反,治疗前创缘组织中Smad3的表达较多,治疗1d后轻微减少,治疗4d和7d后显著减少(P<0.05),C-ski mRNA和Smad3mRNA的表达趋势同其蛋白一样。C-ski阳性表达与Smad3阳性表达呈显著负相关(r=-0.873,P<0.01)。结论VAC治疗后,能够使创缘组织中的C-ski表达增加并且抑制了Smad3的表达。 展开更多

关键词 封闭负压引流技术 慢性创面 c-ski Smad3

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c-SKI对冠脉内皮细胞增殖及内皮-间充质转化的影响 被引量：3

6

作者 王娟 幸世峰 +3 位作者 吕忠英 李鹏 李红建 罗梅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1762-1768,共7页

目的:探讨核蛋白c-SKI对冠状动脉内皮细胞增殖能力及内皮-间充质转化的影响。方法:使用不同浓度的转化生长因子β1(TGF-β1)作用人冠脉内皮细胞不同时点,Western blot法检测各组细胞中c-SKI、间充质细胞标志物波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋... 目的:探讨核蛋白c-SKI对冠状动脉内皮细胞增殖能力及内皮-间充质转化的影响。方法:使用不同浓度的转化生长因子β1(TGF-β1)作用人冠脉内皮细胞不同时点,Western blot法检测各组细胞中c-SKI、间充质细胞标志物波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及内皮细胞标志物E-钙黏蛋白的表达。使用携带c-ski基因的慢病毒转染冠脉内皮细胞后采用RT-qPCR验证转染效率。将细胞分为4组:对照组、TGF-β1(5μg/L)组、c-ski基因感染+TGF-β1组及对照病毒感染+TGF-β1组。过表达c-SKI后,MTT实验和集落形成实验检测冠脉内皮细胞的增殖能力,Western blot检测波形蛋白、α-SMA、E-钙黏蛋白、Smad2、Smad3、p-Smad2和p-Smad3蛋白的水平。结果:TGF-β1处理冠脉内皮细胞后,c-SKI在冠脉内皮细胞中的表达呈剂量和时间依赖性下降(P<0.01)。MTT及集落形成实验结果显示,过表达c-SKI可显著抑制冠脉内皮细胞增殖(P<0.01)。Western blot检测结果显示,与病毒对照组相比,过表达c-SKI可显著下调冠脉内皮细胞中α-SMA和波形蛋白的表达量(P<0.01),上调E-钙黏蛋白的表达量(P<0.01),同时抑制Smad2和Smad3蛋白的磷酸化(P<0.01),逆转TGF-β1诱导的内皮-间充质转化。结论:内皮-间充质转化过程中c-SKI表达下调,而过表达c-SKI能够抑制冠脉内皮细胞增殖及内皮-间充质转化,其机制可能与调控TGF-β1/Smad信号通路活性有关。 展开更多

关键词 c-ski 细胞增殖 内皮-间充质转化 TGF-Β1/SMAD信号通路 冠状动脉内皮细胞

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c-ski对大鼠皮肤成纤维细胞增殖的调节作用及机制 被引量：6

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作者 刘霞 李平 +3 位作者 张恩 刘萍 周萍 周元国 《细胞生物学杂志》 CSCD 2005年第5期559-564,共6页

c-ski是成纤维细胞增殖的复杂调节子,它对中胚层来源的皮肤成纤维细胞增殖的作用还不清楚。在观察正常成纤维细胞周期c-ski表达的时相特点的基础上,通过体外转染c-ski,观察它对细胞增殖活性、细胞周期进展以及周期蛋白表达的影响。结果... c-ski是成纤维细胞增殖的复杂调节子,它对中胚层来源的皮肤成纤维细胞增殖的作用还不清楚。在观察正常成纤维细胞周期c-ski表达的时相特点的基础上,通过体外转染c-ski,观察它对细胞增殖活性、细胞周期进展以及周期蛋白表达的影响。结果显示:c-skimRNA表达在加入血清后开始升高,在细胞周期G1期的高峰期达到峰值,S期显著下降,在G2/M期维持在较低的水平;转染的c-ski可以以剂量依赖的方式增加细胞的增殖活性,并且可以逆转Smad3对细胞增殖活性的抑制作用;C-ski使成纤维细胞提前达到G0/G1期的最低点,进入S期;同时细胞G1期周期蛋白cyclinD的表达增加。这些结果表明:c-ski是皮肤成纤维细胞G1期的调节子,通过加快G1期进展促进增殖,抑制Smad3活性,促进cyclinD的表达可能与这一作用的分子机制有关。 展开更多

关键词 c-ski 大鼠 皮肤成纤维细胞 细胞增殖 调节作用 调节机制 细胞周期

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荔枝核总黄酮对肝纤维化大鼠模型PPARγ/c-Ski表达的影响 被引量：9

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作者 康毅 罗伟生 +4 位作者 黄红 黄旭平 张扬武 黄瑞 谭全肖 《世界科学技术-中医药现代化》 2016年第1期106-111,共6页

目的:本研究主要观察荔枝核总黄酮(TFL)对二甲基亚硝胺(DMN)诱导的肝纤维化大鼠的防治效果,并从PPARγ、c-Ski等信号分子角度探讨TFL抗肝纤维化的作用机制。方法:90只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、TFL(高、中、低)剂量组和秋... 目的:本研究主要观察荔枝核总黄酮(TFL)对二甲基亚硝胺(DMN)诱导的肝纤维化大鼠的防治效果,并从PPARγ、c-Ski等信号分子角度探讨TFL抗肝纤维化的作用机制。方法:90只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、TFL(高、中、低)剂量组和秋水仙碱阳性对照组,每组15只。空白对照组不造模,其余各组按2 mL·kg^(-1)腹腔注射0.5%的DMN溶液制作肝纤维化模型(生理盐水稀释,每周前3天,共4周);造模同时TFL高、中、低剂量组分别以TFL200、100、50 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃给药,秋水仙碱组以秋水仙碱0.1 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃给药,空白对照组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,每日1次,共6周(上述灌胃药物均用适量生理盐水配置成混悬液);6周末处死大鼠,腹主动脉真空负压采血检测天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、转化因子-β1(TGF-β1)血清水平;Masson染色法观察大鼠肝纤维化程度,并进行肝纤维化半定量评分;运用免疫组化检测各组肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)和c-Ski的蛋白相对表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠血清AST、ALT、TGF-β1水平、肝纤维半定量评分和肝组织α-SMA蛋白表达均显著升高(P<0.05);PPARγ和c-Ski蛋白相对表达明显减少(P<0.05);与模型组比较,荔枝核总黄酮各组血清AST、ALT、TGF-β1水平、肝纤维半定量评分和肝组织α-SMA蛋白表达均明显减少(P<0.05);肝组织PPARγ、c-Ski的蛋白相对表达明显增加(P<0.05),且具有一定量效关系。结论:TFL能够有效地降低DMN诱导的肝纤维化大鼠的肝损伤,改善其肝纤维化的程度;其抗肝纤维化的作用机制可能是通过上调PPARγ/c-Ski表达,下调α-SMA和TGF-β1表达,抑制肝星状细胞活化来实现。 展开更多

关键词 肝纤维化 荔枝核总黄酮 Α-平滑肌肌动蛋白 转化因子-β1 过氧化物酶体增殖物活化受体y c-ski

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c-ski在胃癌组织中的表达与临床因素相关性分析 被引量：3

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作者 潘申 石颖 +2 位作者 慎睿哲 吴云林 程时丹 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2010年第11期975-977,共3页

目的探讨c-ski在胃癌组织中的表达与临床因素相关性分析。方法采用RT-PCR法和免疫组化法检测癌旁组织和胃癌组织中c-ski蛋白及mRNA表达情况。结果胃癌组织c-ski蛋白阳性率和c-skimRNA水平明显高于癌旁组织(P<0.01);c-ski蛋白阳性率... 目的探讨c-ski在胃癌组织中的表达与临床因素相关性分析。方法采用RT-PCR法和免疫组化法检测癌旁组织和胃癌组织中c-ski蛋白及mRNA表达情况。结果胃癌组织c-ski蛋白阳性率和c-skimRNA水平明显高于癌旁组织(P<0.01);c-ski蛋白阳性率肠型胃癌明显高于弥漫型胃癌,差异具有统计学意义(P<0.05)。c-ski蛋白阳性率与患者的性别、肿瘤的大小、浸润深度、是否有淋巴结及远处转移、1年的生存时间无关。结论 c-ski在胃癌组织中表达明显升高,且在弥漫型胃癌和肠型胃癌表达中存在差异。 展开更多

关键词 c-ski 胃癌 免疫组织化学 RT-PCR

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c-Ski/SnoN与肾间质纤维化 被引量：3

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作者 陆敏 张悦 +1 位作者 刘煜敏 陆海英 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期159-162,共4页

c-Ski/SnoN是由原癌基因c-ski/sno编码的核蛋白,属于Ski家族成员。近年来有研究表明c-Ski/SnoN是TGF-β1/Smad信号通路的重要负性调控因子,通过与Smad蛋白相互作用来抑制TGF-β1靶基因的活化。本文就c-Ski/SnoN对TGF-β1/Smad信号通路... c-Ski/SnoN是由原癌基因c-ski/sno编码的核蛋白,属于Ski家族成员。近年来有研究表明c-Ski/SnoN是TGF-β1/Smad信号通路的重要负性调控因子,通过与Smad蛋白相互作用来抑制TGF-β1靶基因的活化。本文就c-Ski/SnoN对TGF-β1/Smad信号通路的调节作用,以及在肾间质纤维化的发生发展中的作用及机制作一综述。 展开更多

关键词 c-ski/SnoN SMADS 信号转导 肾间质纤维化

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不同剂量C-ski基因转染对兔眼小梁切除术后的影响 被引量：1

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作者 邹欢 叶剑 +2 位作者 周元国 袁容娣 霍妍 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期504-507,共4页

目的通过观察兔眼小梁切除术后,不同剂量C-ski基因重组质粒转染对眼压、滤过泡、滤过道炎症细胞、Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维、肌成纤维细胞的影响,了解C-ski基因对滤过道抗瘢痕化的作用。方法36只新西兰大白兔,随机分为4组,每组9只,分别对兔... 目的通过观察兔眼小梁切除术后,不同剂量C-ski基因重组质粒转染对眼压、滤过泡、滤过道炎症细胞、Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维、肌成纤维细胞的影响,了解C-ski基因对滤过道抗瘢痕化的作用。方法36只新西兰大白兔,随机分为4组,每组9只,分别对兔右眼行小梁切除术,于术毕辅以结膜下注射0.01mol/L的PBS溶液0.1ml(A组)、C-ski基因重组pcDNA3.0质粒100μg(B组)、300μg(C组)和500μg(D组)进行治疗,并于术后第1、3、5、7、14、21、30天观察滤过泡情况并测量双眼眼压,第7、14、30天分批处死家兔(每次每组3只),取右眼制作石蜡切片,分别进行HE、天狼星红、免疫组化染色,观察炎症细胞、Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维、肌成纤维细胞情况。结果A组与B组的两眼眼压差、滤过泡、Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维、炎症和肌成纤维细胞数量在各个时间点差异无统计学意义(P>0.05)。D组双眼眼压差在第7～21天与A组比较,差异有统计学意义(P<0.05),Ⅰ型胶原量在第14天后与A组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),C组各项测量指标在各个时间点与B、D组比较,差异均无统计学意义。结论将不同剂量的C-ski基因重组pcD-NA3.0质粒用于兔眼小梁切除术后抗瘢痕治疗,均未引起明显炎症反应,且随转染的C-ski基因剂量的逐渐增大其抑制I型胶原生成的作用越明显。500μg剂量的C-ski基因重组质粒能明显延长滤过泡生存时间,维持术后低眼压状态。 展开更多

关键词 基因 c-ski 小梁切除术 抗瘢痕

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C-ski、转化生长因子-β_1蛋白表达在口腔鳞状细胞癌中的意义 被引量：1

12

作者 王琼 何欣蓉 +1 位作者 郭晓光 朱治键 《中国医药导报》 CAS 2012年第9期19-21,共3页

目的探讨C-ski、转化生长因子-β1(TGF-β1)在口腔鳞状癌中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测48例口腔鳞状细胞癌组织和20例口腔正常黏膜组织中C-ski、TGF-β1蛋白的表达情况,并分析C-ski蛋白表达与口腔鳞状细胞癌患者临床病理特... 目的探讨C-ski、转化生长因子-β1(TGF-β1)在口腔鳞状癌中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测48例口腔鳞状细胞癌组织和20例口腔正常黏膜组织中C-ski、TGF-β1蛋白的表达情况,并分析C-ski蛋白表达与口腔鳞状细胞癌患者临床病理特征的关系以及C-ski、TGF-β1两者的相关性。结果在正常口腔黏膜组织、口腔鳞状细胞癌组织中,C-ski蛋白表达阳性率分别为40%(8/20)、75%(36/48),两者比较差异有高度统计学意义(P<0.01),TGF-β1蛋白表达阳性率分别为30%(6/20)、68.8%(33/48),两者比较差异有高度统计学意义(P<0.01)。在口腔鳞状细胞癌组织中C-ski蛋白的表达与口腔鳞状细胞癌组织的浸润深度、细胞分化程度、肿瘤分期均无相关性,而与有无淋巴结转移相关(χ2=5.807,P=0.018);C-ski蛋白表达与TGF-β1蛋白表达呈正相关(r=9.341,P=0.002)。结论 C-ski可能作为一个潜在癌基因,在口腔鳞状细胞癌组织中上调表达参与口腔鳞状细胞癌的发生发展。 展开更多

关键词 c-ski TGF-Β1蛋白 免疫组化 口腔鳞癌

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过表达c-SKI抑制异丙肾上腺素诱导的小鼠心肌纤维化 被引量：4

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作者 张颖 向燕 +1 位作者 张岳 王娟 《基础医学与临床》 2021年第3期364-369,共6页

目的探讨原癌基因c-SKI在异丙肾上腺素(ISO)诱导的小鼠心肌纤维化中的作用及机制。方法将小鼠分为对照组(control组)、模型组(model组)、c-SKI基因感染模型组(LV-SKI组)及对照病毒感染模型组(LV-NC组),每组10只。模型组采用皮下注射ISO ... 目的探讨原癌基因c-SKI在异丙肾上腺素(ISO)诱导的小鼠心肌纤维化中的作用及机制。方法将小鼠分为对照组(control组)、模型组(model组)、c-SKI基因感染模型组(LV-SKI组)及对照病毒感染模型组(LV-NC组),每组10只。模型组采用皮下注射ISO 30 d,首次剂量为5 mg/kg,后续以2.5 mg/kg。2周后LV-SKI组和LV-NC组于18、21、24、27和30 d分别尾静脉注射c-SKI慢病毒和对照病毒,剂量均为100μL,滴度1×108 TU。HE染色和Masson染色观察心肌组织病理学;ELISA检测心肌组织中Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白含量;Western blot检测c-SKI、间质细胞标志物波形蛋白(vimentin)、α-SMA、内皮细胞标志物CD31以及转录因子Snail、Twist及Slug的表达。结果与对照组相比,模型组小鼠心肌纤维组织中c-SKI的表达呈时间依赖性下降(P<0.01);模型组心肌细胞排列紊乱,间质显著增多,Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白含量增加(P<0.01);心肌组织vimentin、α-SMA、Snail、Twist及Slug表达均上调,CD31蛋白表达下调(P<0.05)。过表达c-SKI后,与LV-NC组比较,小鼠心肌结构趋于整齐,间质胶原纤维减少,心肌组织中Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白减少(P<0.01);Vimentin、α-SMA蛋白的表达下调(P<0.05);CD31蛋白的表达上调(P<0.05);同时转录因子Snail、Twist和Slug蛋白的表达也随之下调(P<0.01)。结论小鼠心肌纤维化进程中c-SKI表达下调,而过表达c-SKI能够通过抑制内皮-间充质转化(End-MT)改善ISO诱导的心肌纤维化。 展开更多

关键词 c-ski 心肌纤维化 内皮-间充质转化(End-MT) 转录因子

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上调c-Ski基因表达对青光眼兔术后瘢痕形成及TGF-β、RhoA/Rock信号通路的影响 被引量：1

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作者 刘莉莉 招志毅 曾招荣 《广西医学》 CAS 2023年第9期1048-1053,1064,共7页

目的探讨上调c-Ski基因表达对青光眼兔术后瘢痕形成及转化生长因子(TGF)-β、Ras同源家族成员A(RhoA)/Rho相关激酶(Rock)信号通路的影响。方法取30只新西兰大白兔建立青光眼模型,并进行青光眼滤过手术。将其随机分为A组(仅造模及手术,... 目的探讨上调c-Ski基因表达对青光眼兔术后瘢痕形成及转化生长因子(TGF)-β、Ras同源家族成员A(RhoA)/Rho相关激酶(Rock)信号通路的影响。方法取30只新西兰大白兔建立青光眼模型,并进行青光眼滤过手术。将其随机分为A组(仅造模及手术,不给药)、B组(结膜下注射400μg空白质粒)、C组(结膜下注射100μg c-Ski质粒)、D组(结膜下注射200μg c-Ski质粒)和E组(结膜下注射400μg c-Ski质粒),每组6只。分别于术后2 d、4 d、7 d、14 d和28 d检测各组兔的眼压、滤过道组织中Ⅰ型和Ⅱ型胶原面积占比。术后28 d采用实时荧光定量PCR检测各组兔滤过道组织中c-Ski、TGF-β1、Rock和RhoA mRNA表达水平,采用Western blot检测各组兔滤过道组织中TGF-β1、Rock及RhoA蛋白表达水平。结果术后2 d、4 d、7 d、14 d、28 d,C组、D组及E组兔眼压均低于A组和B组,D组和E组兔眼压均低于C组(均P<0.05)。术后2 d、4 d、7 d、14 d、28 d,C组、D组及E组Ⅰ型胶原面积占比依次降低且均低于A组和B组(均P<0.05);术后14 d,C组、D组及E组Ⅱ型胶原面积占比依次降低且均低于A组和B组(均P<0.05)。术后28 d,C组、D组、E组兔滤过道组织中c-Ski mRNA表达水平均高于A组和B组,TGF-β1、Rock及RhoA的mRNA和蛋白表达水平均低于A组和B组,且C组、D组、E组c-Ski mRNA表达水平依次升高,TGF-β1、Rock及RhoA的mRNA和蛋白表达水平依次降低(均P<0.05)。结论上调c-Ski基因表达能够降低青光眼兔术后的眼压,减少胶原合成,抑制瘢痕形成,这可能与其抑制TGF-β1及RhoA/Rock信号通路有关。 展开更多

关键词 青光眼 c-ski基因 术后 瘢痕 转化生长因子β Rho相关激酶 Ras同源家族成员A 兔

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miR-155-5p靶向c-SKI对冠状动脉内皮细胞增殖及胶原合成的影响 被引量：1

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作者 吕忠英 巴·巴音斯勒玛 +1 位作者 张岳 王娟 《医学研究杂志》 2021年第2期57-62,共6页

目的探讨miR-155-5p靶向c-SKI对TGF-β1诱导的人冠状动脉内皮细胞增殖及胶原合成的影响。方法不同浓度TGF-β1处理人冠状动脉内皮细胞48h, MTT法检测细胞增殖情况,Western blot法和RT-PCR法检测细胞中胶原蛋白、miR-155-5p和c-SKI的表... 目的探讨miR-155-5p靶向c-SKI对TGF-β1诱导的人冠状动脉内皮细胞增殖及胶原合成的影响。方法不同浓度TGF-β1处理人冠状动脉内皮细胞48h, MTT法检测细胞增殖情况,Western blot法和RT-PCR法检测细胞中胶原蛋白、miR-155-5p和c-SKI的表达。转染miR-155-5p抑制剂后,MTT法检测细胞增殖能力,Western blot法检测胶原蛋白表达。生物信息学软件预测miR-155-5p的靶基因,荧光素酶活性分析、Western blot法和RT-PCR法进行靶向关系验证。结果TGF-β1呈剂量依赖性诱导冠状动脉内皮细胞胶原合成,促进细胞增殖,抑制细胞中c-SKI的表达,促进miR-155-5p mRNA表达。在TGF-β1诱导的冠状动脉内皮细胞中,抑制miR-155-5p表达后可抑制冠状动脉内皮细胞增殖和胶原蛋白合成。miR-155-5p可靶向结合c-SKI 3′UTR,抑制miR-155-5p的表达可促进冠状动脉内皮细胞中c-SKI的表达。结论 miR-155-5p可能通过负向调控c-SKI的表达影响冠状动脉内皮细胞增殖和胶原的合成。 展开更多

关键词 miR-155-5p c-ski 冠状动脉内皮细胞 增殖 胶原合成

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大鼠c-ski基因siRNA真核表达载体的构建及其在成纤维细胞中的干扰效果观察

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作者 李平 刘苹 +4 位作者 陈星云 赵艳 彭艳 陈磊 周元国 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期551-554,共4页

目的构建大鼠c-ski基因的特异性siRNA沉默质粒,并评价其在大鼠皮肤原代成纤维中的干扰效果。方法采用pSUPER质粒构建大鼠c-ski基因siRNA的重组真核表达质粒,转染大鼠皮肤成纤维细胞,采用荧光纤维镜观察转染效率,BrdUELISA法检测转染后... 目的构建大鼠c-ski基因的特异性siRNA沉默质粒,并评价其在大鼠皮肤原代成纤维中的干扰效果。方法采用pSUPER质粒构建大鼠c-ski基因siRNA的重组真核表达质粒,转染大鼠皮肤成纤维细胞,采用荧光纤维镜观察转染效率,BrdUELISA法检测转染后细胞增殖情况并作为其干扰效果的初步筛选,定量PCR、免疫组化法检测c-ski基因和蛋白的表达变化。结果构建3个c-SkisiRNA沉默质粒,按照质粒(μg)/脂质体(μl)1∶2.5的比例转染时效率最高,约为53.5%。转染c-SkisiRNA沉默质粒后,细胞增殖降低,且抑制效果与转染剂量成正比。定量PCR、免疫组化法结果显示转染后c-ski基因表达下调51%(P<0.01),蛋白表达明显降低。结论c-Ski沉默质粒构建成功,瞬时转染大鼠皮肤原代成纤维细胞后可以显著抑制c-ski基因和蛋白的表达。 展开更多

关键词 基因 c-ski RNA干扰 转染 细胞增殖

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c-ski基因重组腺病毒质粒的构建及其对肿瘤相关成纤维细胞增殖的影响

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作者 王黎阳 赵浏阳 +2 位作者 彭琼乐 孙艳 柳满然 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第12期1738-1742,共5页

目的构建携带c-ski基因的重组腺病毒质粒,并检测其对肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)增殖活力的影响。方法以pcDNA3-c-ski质粒为模板,PCR扩增c-ski基因,与腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV连接,构建重组穿梭质粒pAdT... 目的构建携带c-ski基因的重组腺病毒质粒,并检测其对肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)增殖活力的影响。方法以pcDNA3-c-ski质粒为模板,PCR扩增c-ski基因,与腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV连接,构建重组穿梭质粒pAdTrack-c-ski,经PmeⅠ线性化后,转化感受态大肠埃希菌BJ5183,获得重组腺病毒质粒,经PacⅠ线性化后,转染HEK-293细胞,获得重组腺病毒,经扩增及纯化后测定病毒滴度。将纯化的重组腺病毒感染乳腺癌CAFs,采用Western blot法检测感染细胞中c-Ski蛋白的表达水平;MTT法和细胞计数法检测重组腺病毒对CAFs细胞增殖活力的影响。结果重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切鉴定证明构建正确;转染HEK-293细胞48 h后可见大量绿色荧光蛋白的表达,纯化的重组腺病毒的滴度为3.11×1010IFU/ml;感染重组腺病毒的乳腺癌CAFs中c-Ski蛋白的表达水平明显高于空病毒组和空白对照组(P<0.001),且增殖活力明显高于空白对照组(P<0.05)。结论成功构建了表达c-ski基因的重组腺病毒质粒,其可明显促进CAFs的增殖,为进一步研究c-Ski对CAFs增殖分化等生物学功能的影响及作用机制提供了实验依据。 展开更多

关键词 c-ski基因 腺病毒 成纤维细胞 细胞增殖

原文传递

大、小剂量TGF-β1刺激大鼠皮肤成纤维细胞24h后检测c-Ski和Smad3的表达及其生物学意义

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作者 李平 熊仁平 +3 位作者 刘苹 赵艳 陈星云 周元国 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第24期2905-2909,共5页

目的:探讨大、小剂量转化生长因子β1(TGF-β1)刺激大鼠皮肤成纤维细胞24h后检测c-Ski和Smad3的表达及其生物学意义.方法:大、小剂量TGF-β1刺激体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞,24h后采用WesternBlot和荧光实时定量PCR观察c-Ski,Smad3,Cy... 目的:探讨大、小剂量转化生长因子β1(TGF-β1)刺激大鼠皮肤成纤维细胞24h后检测c-Ski和Smad3的表达及其生物学意义.方法:大、小剂量TGF-β1刺激体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞,24h后采用WesternBlot和荧光实时定量PCR观察c-Ski,Smad3,CyclinD蛋白和c-Ski,Smad3mR-NA水平的变化情况;pcDNA3.0-LacZ报告基因免疫组化染色来确定转染效率,BrdUELISA法检测c-Ski和Smad3质粒分别转染或转染同时加大、小剂量TGF-β1刺激后细胞增殖的变化.结果:不同剂量TGF-β1刺激24h后,小剂量刺激可显著提高c-Ski,CyclinD的表达水平,而Smad3表达水平无显著变化;大剂量刺激可显著提高Smad3的表达水平和显著降低CyclinD的表达水平,c-Ski表达水平无显著变化.转染c-Ski可以促进细胞增殖,但同时降低了大、小剂量TGF-β1调节细胞双向增殖的幅度;转染Smad3可以抑制细胞增殖同时也降低了大、小剂量TGF-β1调节细胞双向增殖的幅度.结论:大、小剂量TGF-β1刺激24h后引起Smad3和c-Ski表达不同变化决定了细胞的增殖状态,这也是大、小剂量TGF-β1双向调节细胞增殖作用的可能机制之一. 展开更多

关键词 c-ski SMAD3 成纤维细胞 细胞增殖

原文传递

靶向调控c-SKI的microRNA的筛选及验证

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作者 王娟 李鹏 +2 位作者 吕忠英 张颖 曹桂秋 《基础医学与临床》 CSCD 2020年第1期60-66,共7页

目的筛选和验证靶向调控c-SKI并与纤维化相关的microRNA(miRNA)。方法生物信息学方法预测并结合文献报道,筛选出靶向c-SKI的候选miRNAs,RT-qPCR检测人心肌成纤维细胞(HCFBs)中候选miRNAs和c-SKI的表达,筛选出抑制作用最显著的miRNA;构建... 目的筛选和验证靶向调控c-SKI并与纤维化相关的microRNA(miRNA)。方法生物信息学方法预测并结合文献报道,筛选出靶向c-SKI的候选miRNAs,RT-qPCR检测人心肌成纤维细胞(HCFBs)中候选miRNAs和c-SKI的表达,筛选出抑制作用最显著的miRNA;构建c-SKI-3′-UTR野生型(c-SKI-wt)和突变型(c-SKI-mut)载体,分别与miR-155a-5p/miR-17a-5p的模拟物、抑制剂及对照在人胚肾上皮细胞(HEK293T)中共转染,双萤光素酶报告系统检测各组荧光素酶活性;接着,分别将miR-155a/miR-17a-5p mimics和inhibitor转染至人心肌成纤维细胞(HCFBs),Western blot检测各组细胞c-SKI的表达。结果 1)经筛选miR-155a-5p和miR-17a-5p对c-SKI的抑制作用最明显(P<0.01);2)与NC组相比,miR-155a-5p/miR-17a-5p mimics组萤光素酶活性均显著下降(P<0.05),miR-155a-5p/miR-17a-5p inhibitor组萤光素酶活性均明显增强(P<0.05);3)与NC组相比,miR-155a-5p/miR-17a-5p mimics组中c-SKI蛋白表达显著下调,miR-155a-5p/miR-17a-5p inhibitor组中c-SKI的表达显著上调(P<0.01)。结论 miR-155a-5p和miR-17a-5p可分别靶向结合c-SKI的3′-UTR,在HCFBs中负性调控c-SKI的表达。 展开更多

关键词 c-ski miR-155a-5p miR-17a-5p 双萤光素酶报告系统 心肌纤维化

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过表达c-SKI对心肌纤维化小鼠的心肌重构、心肌纤维化改善作用及其机制

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作者 王娟 向燕 韩素霞 《山东医药》 CAS 2020年第21期53-56,共4页

目的观察尾静脉注射c-SKI过表达慢病毒重组质粒对心肌纤维化小鼠的心室重构、心肌组织纤维化改善作用,并探讨其机制。方法将40只C57小鼠随机分为对照组、模型组、模型+c-SKI慢病毒质粒转染组(LVSKI组)和模型+空白病毒质粒转染组(LV-NC组... 目的观察尾静脉注射c-SKI过表达慢病毒重组质粒对心肌纤维化小鼠的心室重构、心肌组织纤维化改善作用,并探讨其机制。方法将40只C57小鼠随机分为对照组、模型组、模型+c-SKI慢病毒质粒转染组(LVSKI组)和模型+空白病毒质粒转染组(LV-NC组)。模型组、LV-SKI组、LV-NC组采用皮下注射异丙肾上腺素的方法构建小鼠心肌纤维化模型。LV-SKI组在建模第18天开始每隔3天尾静脉注射c-SKI过表达的慢病毒重组质粒p LVX-IRES-Puro-SKI,持续至30天;LV-NC组在建模第18天开始每隔3天尾静脉注射空白病毒质粒,持续至30天;模型组注射等量生理盐水;对照组不作处理。第30天时使用心脏超声检查各组小鼠心率(HR)、左心室收缩末期内径(LVIDs)、舒张末期内径(LVIDd)、左室射血分数(EF%)、左心室短轴缩短率(FS%)等心功能指标;麻醉后取小鼠心脏,分离出左心室,分别称取心脏重量(HW)、左心室重量(LVM),计算心脏质量指数(HMI)、左心室质量指数(LVMI);取各组小鼠心脏组织标本,Masson染色后观察小鼠心肌组织,计算胶原容积分数(CVF);取各组小鼠心脏组织标本,采用免疫组化法检测各组小鼠心肌组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白,采用Western Blotting法检测各组小鼠心肌组织中Smad3、P-Smad3蛋白,测算P-Smad3/Smad3。结果与对照组相比,模型组小鼠HR、LVIDs、LVIDd升高,EF%、FS%降低(P均<0.01);与LV-NC组相比,LV-SKI组小鼠HR、LVIDs、LVIDd降低,EF%、FS%升高(P均<0.01)。与对照组相比,模型组小鼠HW、LVM、HMI、LVMI均升高(P均<0.01);与LV-NC组相比,LV-SKI组小鼠HW、LVM、HMI、LVMI均降低(P均<0.01)。模型组心肌细胞结构紊乱,间隔显著增宽,间质增多,可见有大量束状的蓝色胶原纤维;与模型组和LV-NC组相比,LV-SKI组上述病理变化有所减轻。与对照组相比,模型组小鼠CVF升高(P<0.01);与LV-NC组相比,LV-SKI组小鼠CVF降低(P<0.01)。与对照组相比,模型组小鼠Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白相对表达量和P-Smad3/Smad3均升高(P均<0.05);与LV-NC组相比,LV-SKI组小鼠Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白相对表达量和P-Smad3/Smad3均降低(P均<0.05)。结论过表达c-SKI可改善心肌纤维化小鼠的心室重构、心肌组织纤维化,其机制可能与调控TGFβ1/Smad信号通路活性有关。 展开更多

关键词 c-ski 心肌纤维化 心肌重构 TGFβ1/Smad信号通路

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