C-erbB-2与c-raf-1基因反义寡核苷酸联合对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用 被引量：6

1

作者 吴永忠 任庆兰 李少林 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第8期836-839,共4页

背景与目的:针对c-erbB-2与c-raf-1单基因的反义寡脱氧核苷酸(antisenseoligodexynucleotide,ASODN)治疗肿瘤的研究报道很多,这些研究往往局限于单个基因或细胞水平,从肿瘤发生的多基因学说上讲是不恰当的。本研究旨在探讨c-erbB-2与c-r... 背景与目的:针对c-erbB-2与c-raf-1单基因的反义寡脱氧核苷酸(antisenseoligodexynucleotide,ASODN)治疗肿瘤的研究报道很多,这些研究往往局限于单个基因或细胞水平,从肿瘤发生的多基因学说上讲是不恰当的。本研究旨在探讨c-erbB-2与c-raf-1基因联合ASODN对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用。方法:在BALB/c裸鼠上建立卵巢上皮癌模型,然后随机分成阴性对照组和6个实验组(分别为脂质体c-erbB-2SODN组、脂质体c-raf-1SODN组、脂质体c-erbB-2ASODN组、脂质体c-raf-1ASODN组、全剂量联合反义给药组、半剂量联合反义给药组)。检测裸鼠体重及肿瘤体积变化,计算抑瘤率及肿瘤缩小率。结果:给药后,全剂量联合反义给药组与半剂量联合反义给药组的肿瘤体积抑瘤率分别为72.5%和78.4%,肿瘤重量抑瘤率分别为70.7%和75.3%,肿瘤缩小率分别为29.7%和41.6%。在给药后,各组裸鼠体重变化无明显统计学差别。结论:C-erbB-2与c-raf-1基因联合ASODN在体内能明显地抑制肿瘤生长。 展开更多

关键词 C-ERBB-2 c-raf-1 基因 反义寡核苷酸 卵巢癌 裸鼠 皮下移植瘤 治疗

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益气活血汤对急性心肌梗死模型大鼠Ras、ERKl、p-ERKl和C-Raf-1表达的影响 被引量：6

2

作者 郭乐 潘坤 +1 位作者 尹胜 杨军辉 《湖南中医药大学学报》 CAS 2015年第3期19-21,26,F0003,共5页

目的探讨益气活血汤对急性心肌梗死(AMI)模型大鼠缺血心肌Ras、ERKl(extracellularsignal regulated kinasel)、p-ERKl(phosphor-ERKl)和C-Raf-1蛋白表达的影响。方法将Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、倍他乐克组和益气... 目的探讨益气活血汤对急性心肌梗死(AMI)模型大鼠缺血心肌Ras、ERKl(extracellularsignal regulated kinasel)、p-ERKl(phosphor-ERKl)和C-Raf-1蛋白表达的影响。方法将Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、倍他乐克组和益气活血汤大、小剂量组(下称大、小剂量组)。采用大鼠冠状动脉左前降支结扎构造急性心肌梗死(AMI)的心肌缺血模型。通过免疫组化法检测缺血心肌的Ras、ERKl、p-ERKl及C-Raf-1的蛋白表达。结果模型组Ras、ERKl、p-ERKl及CRaf-1的蛋白表达均高于空白组、假手术组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。Ras、C-Raf-1蛋白表达:小剂量组与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05);大剂量组及倍他乐克组与模型组比较均有增高(P<0.05或P<0.01)。ERK1、p-ERK1蛋白表达:大、小剂量及倍他乐克组与模型组比较均有增高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。四个因子在大剂量组的表达均较小剂量组增多更明显(P<0.05)。结论益气活血汤可能是通过提高Ras通路相关蛋白表达来促进缺血后心肌的血管生成,抑制心肌缺血的损伤。 展开更多

关键词 益气活血汤 心肌缺血 信号通路 RAS ERKL p-ERKl c-raf-1

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Bcl-2、C-Raf及双靶点RNAi质粒对HCT-8细胞株增殖的抑制作用 被引量：1

3

作者 王艳芬 迟春萍 +5 位作者 王志武 时成波 吉海滨 牛灵 盛军 李东复 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第1期47-50,共4页

目的研究Bcl-2、C-Raf及双靶点的RNA干扰质粒对人结肠癌HCT-8细胞株增殖的抑制作用。方法利用Ambion公司网上设计软件,分别以Bcl-2和C-Raf为靶标,设计合成63个核苷酸的双链RNA,构建质粒pSilencer3·1-H1/Bcl-2、pSilencer3·1-H... 目的研究Bcl-2、C-Raf及双靶点的RNA干扰质粒对人结肠癌HCT-8细胞株增殖的抑制作用。方法利用Ambion公司网上设计软件,分别以Bcl-2和C-Raf为靶标,设计合成63个核苷酸的双链RNA,构建质粒pSilencer3·1-H1/Bcl-2、pSilencer3·1-H1/C-Raf及pSilencer3·1-H1/Bcl-2/C-Raf,分别转染结肠癌细胞株HCT-8,用MTT法检测其对细胞增殖的抑制作用,RT-PCR检测Bcl-2和C-Raf的mRNA转录。结果经MTT法检测,构建的Bcl-2和C-Raf基因及双靶点RNAi质粒3个转染组的细胞存活率均降低,双靶点质粒转染组较两个单靶点转染组细胞存活率明显降低,差异有显著意义。经RT-PCR检测,转染双靶点质粒后,HCT-8细胞中Bcl-2和C-Raf基因的表达均较对照组明显减弱。结论Bcl-2、C-Raf及双靶点RNAi质粒对HCT-8细胞株增殖有抑制作用。 展开更多

关键词 BCL-2基因 c-raf基因 RNA干扰 基因沉默

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Bcl-2/C-Raf双基因“敲低”抑制人结肠癌细胞增殖 被引量：1

4

作者 杜柏权 于源华 +1 位作者 赵然 牛灵 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期298-303,共6页

RNA干扰是一种具有序列特异性的基因沉默,能够触发具有相应序列的mRNA的降解.构建具有双靶点的RNAi质粒表达载体,与单靶点表达载体比较,探讨其对结肠癌细胞增殖的抑制作用.本研究分别构建了针对Bcl-2、C-Raf和Bcl-2/C-Raf靶基因的质粒... RNA干扰是一种具有序列特异性的基因沉默,能够触发具有相应序列的mRNA的降解.构建具有双靶点的RNAi质粒表达载体,与单靶点表达载体比较,探讨其对结肠癌细胞增殖的抑制作用.本研究分别构建了针对Bcl-2、C-Raf和Bcl-2/C-Raf靶基因的质粒表达载体,通过LipofectamineTM2000介导转染人结肠癌细胞系HCT-8后,检测相应转染组靶基因的mRNA和蛋白质表达量,测定各组细胞活性,研究RNAi对各组癌细胞增殖的抑制率.结果表明,分别转染3种质粒表达载体后,3组结肠癌细胞中相应靶基因的mRNA和蛋白质表达量均降低;转染双靶点干扰质粒的试验组;其细胞活性低于单靶点组;对于针对Bcl-2,C-Raf和Bc-l2/C-Raf基因的3组干扰实验,RNAi对结肠癌细胞增殖的抑制率分别为43.87%,40.64%和63.85%.RNAi是结肠癌细胞中的一种功能途径,以质粒作为表达载体,同时具备Bc-l2/C-Raf双靶点的表达载体,对结肠癌细胞增殖的抑制作用要明显优于单靶点表达载体,双靶点质粒表达载体在结肠癌的基因治疗中是有潜力的. 展开更多

关键词 RNA干扰 BCL-2 c-raf HCT-8细胞

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RNA干扰抑制结肠癌细胞内Bcl-2／C-Raf的表达

5

作者 何秀霞 杜柏权 于源华 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2008年第23期4728-4730,4732,共4页

[目的]构建Bcl-2/C-Raf的双靶点的RNAi质粒表达载体与单靶点表达载体比较,研究RNAi对各组癌细胞增殖的抑制作用。[方法]分别构建了针对Bcl-2、C-Raf和Bcl-2/C-Raf靶基因的质粒表达载体,通过Lipofec-tamineTM2000介导转染人结肠癌细胞系H... [目的]构建Bcl-2/C-Raf的双靶点的RNAi质粒表达载体与单靶点表达载体比较,研究RNAi对各组癌细胞增殖的抑制作用。[方法]分别构建了针对Bcl-2、C-Raf和Bcl-2/C-Raf靶基因的质粒表达载体,通过Lipofec-tamineTM2000介导转染人结肠癌细胞系HCT-8后,检测相应转染组靶基因的mRNA和蛋白质表达量,测定各组细胞活性。[结果]分别转染3种质粒表达载体后,3组结肠癌细胞中相应靶基因的mRNA和蛋白质表达量均降低;转染双靶点干扰质粒的试验组;其细胞活性低于单靶点组;对于针对Bcl-2,C-Raf和Bcl-2/C-Raf基因的3组干扰实验,RNAi对结肠癌细胞增殖的抑制率分别为43.87%、40.64%和63.85%。[结论]Bcl-2/C-Raf双靶点的表达载体对结肠癌细胞增殖的抑制作用要明显优于单靶点表达载体。双靶点质粒表达载体在结肠癌的基因治疗中具有很大优势。 展开更多

关键词 RNA干扰 BCL-2 c-raf HCT-8细胞

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抑制c-raf-1基因对人宫颈癌细胞放射敏感性影响的实验研究

6

作者 任庆兰 吴永忠 +1 位作者 陈晓品 李少林 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第9期946-950,共5页

目的:探讨用反义技术抑制癌基因c-raf-1对宫颈癌细胞(HeLa)放射敏感性的影响。方法:设立空白对照组、c-raf-1正义寡核苷酸组和脂质体组(仅加入等量的脂质体)作对照,用RT-PCR检测宫颈癌细胞处理前后c-raf-1表达水平的变化。用集落形成试... 目的:探讨用反义技术抑制癌基因c-raf-1对宫颈癌细胞(HeLa)放射敏感性的影响。方法:设立空白对照组、c-raf-1正义寡核苷酸组和脂质体组(仅加入等量的脂质体)作对照,用RT-PCR检测宫颈癌细胞处理前后c-raf-1表达水平的变化。用集落形成试验检测各实验组照射后人宫颈癌HeLa细胞株集落形成率,AO/EB荧光染色法检测细胞凋亡率的变化,流式细胞仪测定Bcl-2蛋白的表达。结果:c-raf-1反义寡核苷酸能有效抑制c-raf-1癌基因的表达,经脂质体介导的c-raf-1反义寡核苷酸作用的宫颈癌细胞经60Coγ射线照射后其集落形成率较正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下降,而凋亡率明显增加,Bcl-2蛋白的表达显著下调,与对照各组比较有显著差异(P<0.01)。结论:c-raf-1反义寡核苷酸通过抑制c-raf-1基因降低人宫颈癌HeLa细胞放射抗性。其辐射增敏作用可能与c-raf-1反义寡核苷酸抑制了辐射抵抗信号转导途径。 展开更多

关键词 人宫颈癌细胞株HeLa c-raf-1 反义技术 放射敏感性

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合用C-Raf和PKC-αmRNA为靶点的反义寡核苷酸增强对肺腺癌A549细胞体外生长的抑制作用

7

作者 袁守军 汤仲明 +1 位作者 宋海峰 朱宝珍 《中国药理学与毒理学杂志》 CSCD 北大核心 2000年第2期136-139,共4页

观察了靶向 C- raf m RNA ( ISIS51 32 )和PKC- α m RNA( ISIS352 1 )的反义硫代寡核苷酸合用对肺腺癌 A549细胞体外增殖的抑制作用 ( MTT法 ) .单用药组药物浓度为 50 0 ,2 0 0和 80 nmol·L-1;合用组 A两药浓度分别为 2 50 ,1 0 ... 观察了靶向 C- raf m RNA ( ISIS51 32 )和PKC- α m RNA( ISIS352 1 )的反义硫代寡核苷酸合用对肺腺癌 A549细胞体外增殖的抑制作用 ( MTT法 ) .单用药组药物浓度为 50 0 ,2 0 0和 80 nmol·L-1;合用组 A两药浓度分别为 2 50 ,1 0 0及 40 nmol· L-1,即两药药量减半 ,药物摩尔浓度之和与单用药相同 .合用组 B两药浓度分别为 50 0 ,2 0 0及 80nmol·L-1,但作用时间减半 (各 3h) ,两药作用时间之和与单用药相同 .结果表明 ,在合用组 A,两药浓度水平为 1 0 0 nmol· L-1时 ,对 A549细胞生长的抑制作用大于 ISIS352 1单用药组的 2 0 0 nmol· L-1水平 ( P<0 .0 1 ) ;在合用组 B,两药浓度水平为 2 0 0和 80 nmol· L-1时 ,对 A549细胞生长的抑制作用分别大于 ISIS352 1单用药组的 2 0 0 nmol· L-1和ISIS51 32单用药组的 80 nmol· L-1水平 ( P<0 .0 1 ) ;其余合用组各个药物浓度水平的效应 ,与相应的单用药组的效应相近 .提示靶向不同癌基因的反义药物合用 ,可能增强对肿瘤细胞的抑制作用 . 展开更多

关键词 反义寡核苷酸 c-raf 肺腺癌 A549 MRNA

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c-Raf基因对大肠癌细胞生长的作用及其分子机制研究

8

作者 张乐 白月奎 +3 位作者 刘凯东 刘铭 李非 罗淑萍 《肿瘤学杂志》 CAS 2019年第4期293-299,共7页

[目的]通过转染siRNA沉默c-Raf基因以探讨其在大肠癌细胞生长中的作用及其相关分子机制。[方法]通过阳离子脂质体介导的方法将siRNA转染入大肠癌细胞HCT116和SW620,经Western blot验证siRNA的干扰效果。经MTT法、Transwell实验、细胞克... [目的]通过转染siRNA沉默c-Raf基因以探讨其在大肠癌细胞生长中的作用及其相关分子机制。[方法]通过阳离子脂质体介导的方法将siRNA转染入大肠癌细胞HCT116和SW620,经Western blot验证siRNA的干扰效果。经MTT法、Transwell实验、细胞克隆形成实验和流式细胞术研究下调c-Raf基因对HCT116和SW620增殖、迁移和相关细胞活力的影响。采用Western blot法检测转染siRNA后相关细胞周期蛋白水平。[结果] HCT116和SW620转染后细胞活力明显下降,转染siRNA 48h后HCT116与SW620细胞的抑制率分别为34%、28%。流式细胞术发现HCT116和SW620在c-Raf基因下调后,较多细胞滞留在G1期(P<0.05)。Western blot实验发现转染siRNA后细胞p-Cdc2、E2F1、CyclinD1表达水平均有下降(P<0.05)。siRNA转染HCT116和SW620细胞后,细胞凋亡比例分别为9.68%±2.37%、7.29%±1.68%,均高于对照组(P<0.05)。siRNA转染HCT116和SW620细胞后Caspase-3相对水平分别为0.57±0.11、0.47±0.09,Bcl-2相对水平分别为0.16±0.05、0.23±0.04,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。siRNA转染HCT116和SW620细胞后N-cadherin相对水平分别为0.24±0.07、0.22±0.04,E-cadherin相对水平分别为0.47±0.12、0.58±0.13,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。[结论]通过下调c-Raf基因的表达可将大肠癌细胞阻滞在G1期,促使细胞发生凋亡,同时抑制大肠癌细胞发生EMT转化。 展开更多

关键词 c-raf基因 大肠肿瘤 分子机制

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脂质体-c-raf-1反义寡核苷酸转染对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤形成的作用

9

作者 吴永忠 谭巧玲 +1 位作者 任庆兰 李少林 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期149-151,共3页

目的　探讨经脂质体一硫代磷酸化修饰的c raf 1反义寡脱氧核苷酸(ASODN)作用后的卵巢上皮癌细胞株SKOV3在裸鼠皮下的成瘤能力。方法　利用脂质体将经硫代磷酸化修饰的寡核苷酸导入SKOV3细胞,然后将这种被转染的细胞接种于裸鼠皮下,观察... 目的　探讨经脂质体一硫代磷酸化修饰的c raf 1反义寡脱氧核苷酸(ASODN)作用后的卵巢上皮癌细胞株SKOV3在裸鼠皮下的成瘤能力。方法　利用脂质体将经硫代磷酸化修饰的寡核苷酸导入SKOV3细胞,然后将这种被转染的细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤体积的变化,并计算抑瘤率。结果　经脂质体c raf 1 ASODN作用后的卵巢上皮癌细胞在裸鼠皮下成瘤能力降低,最大抑瘤率达35.3%(P<0.05)。首次出现肉眼可见肿瘤的平均时间延长为8.8天(P <0.05)。结论　c raf 1 癌基因的反义调控能降低卵巢上皮癌细胞的成瘤能力,抑制肿瘤生长,在卵巢上皮癌的基因治疗中有一定作用。 展开更多

关键词 c-raf-1 反义寡核苷酸 人卵巢上皮癌 裸鼠皮下移植瘤

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脂质体-c-raf-1反义寡核苷酸治疗人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤

10

作者 吴永忠 任庆兰 李少林 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2004年第3期302-304,共3页

目的 :探讨c-raf- 1反义寡脱氧核苷酸 (ASODN)对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用。方法 :将 15只裸鼠建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型 ,然后随机分成 3组予以不同条件处理 :对照组 (腹腔注射转染液和脂质体 ) ,正义治疗组 (腹腔注射... 目的 :探讨c-raf- 1反义寡脱氧核苷酸 (ASODN)对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用。方法 :将 15只裸鼠建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型 ,然后随机分成 3组予以不同条件处理 :对照组 (腹腔注射转染液和脂质体 ) ,正义治疗组 (腹腔注射脂质体 -c -raf- 1-SODN) ,反义治疗组 (腹腔注射脂质体 -c -raf- 1-ASODN)。治疗期间定期观测裸鼠体重并测量肿瘤体积 ,计算抑瘤率及肿瘤缩小率。结果 :反义治疗组与正义治疗组的抑瘤率分别为 6 8.1%和 6 .8% ,反义治疗组肿瘤缩小率为 16 .7% ,与正义治疗组相比较有明显的差别。各组裸鼠体重变化无明显差别。结论 :脂质体 -c -raf - 1-ASODN对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤有一定的治疗价值 。 展开更多

关键词 反义寡脱氧核苷酸 c-raf-1基因 人卵巢上皮癌 裸鼠皮下移植瘤

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c-raf-1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞受照后Ki-67表达的影响

11

作者 任庆兰 吴永忠 李少林 《中国肿瘤》 CAS 2003年第5期286-288,共3页

[目的]探讨癌基因c鄄raf鄄1的反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞受照后Ki鄄67表达的影响。[方法]设立c鄄raf鄄1正义寡核苷酸组和非处理组(仅加入等量的脂质体)作对照,用RT鄄PCR检测卵巢癌细胞处理前后c鄄raf鄄1表达水平的变化,用免疫组化技术... [目的]探讨癌基因c鄄raf鄄1的反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞受照后Ki鄄67表达的影响。[方法]设立c鄄raf鄄1正义寡核苷酸组和非处理组(仅加入等量的脂质体)作对照,用RT鄄PCR检测卵巢癌细胞处理前后c鄄raf鄄1表达水平的变化,用免疫组化技术检测人卵巢癌细胞株SKOV3在脂质体鄄c鄄raf鄄1反义寡核苷酸作用前后受60Coγ射线照射后细胞Ki鄄67的表达情况。[结果]c鄄raf鄄1反义寡核苷酸能抑制c鄄raf鄄1癌基因的表达,经脂质体介导的c鄄raf鄄1反义寡核苷酸作用的卵巢癌细胞经γ射线照射后其Ki鄄67表达较转染正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下调,而转染c鄄raf鄄1正义寡核苷酸组和单纯照射组相比无明显差异。[结论]c鄄raf鄄1反义寡核苷酸通过抑制c鄄raf鄄1的表达降低人卵巢癌细胞株SKOV3受照射后的增殖能力。该作用可能与c鄄raf鄄1反义寡核苷酸抑制了引起肿瘤细胞辐射抗拒的细胞信号传导途径有关。 展开更多

关键词 卵巢肿瘤 细胞株 c-raf-1反义寡核苷酸 辐射 KI-67 肿瘤 实验性

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靶向c-Raf-1基因的反义核酸抗乙型肝炎病毒活性研究

12

作者 黄海 张秀娟 +2 位作者 谢佩雯 王学军 王升启 《生物技术通讯》 CAS 2013年第5期616-620,共5页

目的:通过体内外实验验证靶向c-Raf-1基因的反义核酸是否具有抑制乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法:设计靶向c-Raf-1基因的反义核酸,并在细胞水平进行体外抗HBV活性筛选,通过RT-PCR检测c-Raf-1基因mRNA水平的变化,通过体内药效学实验进一... 目的:通过体内外实验验证靶向c-Raf-1基因的反义核酸是否具有抑制乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法:设计靶向c-Raf-1基因的反义核酸,并在细胞水平进行体外抗HBV活性筛选,通过RT-PCR检测c-Raf-1基因mRNA水平的变化,通过体内药效学实验进一步验证反义核酸的抗HBV效果。结果:经体外筛选,靶向c-Raf-1基因的反义核酸Raf-3145具有相对明显的抑制HBV表面抗原(HBsAg)的作用,并可剂量依赖性地抑制c-Raf-1基因的表达;体内药效学结果显示,反义核酸Raf-3145在30 mg/kg剂量下对HBsAg的表达具有一定的抑制作用。结论:经体内外活性评价,初步确定了靶向宿主基因c-Raf-1的反义核酸具有一定的抑制HBsAg表达的活性,也进一步验证了c-Raf-1基因可以作为抗HBV药物设计的候选靶点。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 反义核酸 c-raf-1基因

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Ras/Raf/P-C-Raf在子宫腺肌病中的表达及意义 被引量：2

13

作者 曾玉燕 李坤寅 关永格 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2017年第7期517-520,共4页

目的:检测Ras/Raf/P-C-Raf在子宫腺肌病在位内膜、异位病灶组织中的表达水平,以及阻断Ras表达后病灶细胞抑制率的变化,探讨Ras/Raf/P-C-Raf在子宫腺肌病中的发病机制。方法:收集子宫腺肌病患者的病灶组织或石蜡切片,Western blot法、免... 目的:检测Ras/Raf/P-C-Raf在子宫腺肌病在位内膜、异位病灶组织中的表达水平,以及阻断Ras表达后病灶细胞抑制率的变化,探讨Ras/Raf/P-C-Raf在子宫腺肌病中的发病机制。方法:收集子宫腺肌病患者的病灶组织或石蜡切片,Western blot法、免疫组化法检测Ras、Raf及P-C-Raf在子宫腺肌病组织中的表达水平;体外培养子宫腺肌病病灶细胞,CCK-8法检测FTS组(Ras抑制剂)及FTS+E2组细胞生长抑制率。结果:Ras、Raf主要表达定位于胞浆与胞膜。与对照组子宫肌层及内膜相比,子宫腺肌病异位病灶、在位内膜中Ras、Raf表达水平均明显升高(P<0.05);子宫腺肌病在位内膜P-C-Raf水平较异位病灶及正常子宫内膜组高(P<0.05)。FTS组、FTS+E2组均能抑制子宫腺肌病病灶细胞增殖,其中FTS+E2组的细胞抑制率较FTS组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:通过抑制Ras表达证实子宫腺肌病异位病灶及在位内膜过高表达的Ras/Raf及在位内膜P-C-Raf过表达促进子宫腺肌病病灶细胞增殖,参与子宫腺肌病的发生发展。其中E2促进病灶细胞增殖效应的途径之一可能通过Ras发挥作用。 展开更多

关键词 子宫腺肌病 Ras/Raf P-c-raf FTS

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mTOR抑制剂RAD001通过c-Raf/ERK1/2通路介导胰腺癌耐药的机制 被引量：4

14

作者 魏锋 张平 +2 位作者 綦俊 王蒙 王广义 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期23-27,共5页

目的研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂RAD001介导胰腺癌细胞耐药的分子机制,探索逆转该耐药性的可行性方案。方法 Western blot法检测RAD001对胰腺癌细胞中相关蛋白的影响;Western blot法验证RAD001与c-Raf抑制剂索拉菲尼联合用... 目的研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂RAD001介导胰腺癌细胞耐药的分子机制,探索逆转该耐药性的可行性方案。方法 Western blot法检测RAD001对胰腺癌细胞中相关蛋白的影响;Western blot法验证RAD001与c-Raf抑制剂索拉菲尼联合用药对相关信号通路蛋白的抑制;磺酰罗丹明B(SRB)比色法、平板克隆形成实验观察RAD001与索拉菲尼联合用药时对细胞增殖和生长的影响;构建胰腺癌荷瘤裸鼠模型,验证联合用药对肿瘤生长的抑制作用。结果 RAD001可有效抑制mTOR下游效应蛋白,但同时诱导c-Raf的激活;RAD001与索拉菲尼联合用药可以有效抑制c-Raf/ERK1/2的激活;同时可有效逆转胰腺癌细胞的耐药,与RAD001单独用药组相比较,具有明显的协同抑制作用;体内抑瘤实验进一步证实该联合用药方案可有效抑制移植瘤的生长。结论 c-Raf的激活上调参与胰腺癌对mTOR抑制剂RAD001的耐药,以c-Raf为靶点可改善RAD001对胰腺癌的靶向治疗效果。 展开更多

关键词 MTOR抑制剂 胰腺癌 耐药性 c—Raf通路

原文传递

原癌基因c-raf在精原干细胞中的表达及作用

15

作者 闫登科 徐斯凡 +1 位作者 王晶磊 陈家详 《中央民族大学学报（自然科学版）》 2007年第3期233-237,共5页

本研究用基因测序和BLAST检验扩增的精原干细胞DNA和c-raf的同源性;用MTT法观察c-rafASODNs(反义c-raf寡脱氧核甘酸)拮抗c-raf对体外培养精原干细胞培养的作用,探讨原癌基因c-raf对体外精原干细胞培养增殖的影响.实验结果显示扩增的精... 本研究用基因测序和BLAST检验扩增的精原干细胞DNA和c-raf的同源性;用MTT法观察c-rafASODNs(反义c-raf寡脱氧核甘酸)拮抗c-raf对体外培养精原干细胞培养的作用,探讨原癌基因c-raf对体外精原干细胞培养增殖的影响.实验结果显示扩增的精原干细胞DNA和c-raf的同源性98%;c-rafASODNs对体外培养的精原干细胞存活呈剂量依赖性抑制作用(P<0.05).提示c-raf在精原干细胞中表达;原癌基因c-raf促进精原干细胞体外培养的增殖. 展开更多

关键词 精原干细胞 c-raf 反义寡脱氧核甘酸

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螺内酯通过抑制左心室肥厚大鼠促肥大生长因子的表达和c-Raf/ERK1/2信号通路的活化来预防左心室肥厚 被引量：2

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作者 刘红 张维新 张玲燕 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第20期2464-2469,共6页

目的:探讨螺内酯对左心室肥厚大鼠免疫及炎症的干预作用及机制。方法:采用腹主动脉缩窄法建立压力超负荷诱导的左心室肥厚大鼠模型,每天按照20 mg/kg的剂量对螺内酯组的左心室肥厚模型大鼠灌胃螺内酯,对照组、模型组和假手术组大鼠灌胃... 目的:探讨螺内酯对左心室肥厚大鼠免疫及炎症的干预作用及机制。方法:采用腹主动脉缩窄法建立压力超负荷诱导的左心室肥厚大鼠模型,每天按照20 mg/kg的剂量对螺内酯组的左心室肥厚模型大鼠灌胃螺内酯,对照组、模型组和假手术组大鼠灌胃等体积的生理盐水,共治疗8周。采用Sircol Soluble Collagen Assay胶原蛋白检测试剂盒测定大鼠左心室匀浆中的总可溶性胶原。采用ELISA法检测心室组织匀浆中的PDGF-BB和TGF-β1水平,采用qPCR检测c-myc、GATA4和ANP的表达,采用Western blot检测大鼠左心室组织中c-Raf和ERK1/2的活化情况。结果:模型组大鼠的左心室重量与体重比值(VW/BW)比对照组显著增加了36.60%,而螺内酯可显著降低大鼠的VW/BW。模型组大鼠心室总胶原蛋白相对表达量显著上调了46.45%,而螺内酯组与对照组无显著差异。模型组大鼠的PDGF-BB和TGF-β1表达量分别显著上调了70.14%和118.47%,螺内酯组显著低于模型组,且与对照组无显著差异。模型组大鼠的c-Raf和ERK1/2磷酸化水平分别显著上调了106.25%和74.00%,而螺内酯组与对照组无显著差异。模型组大鼠的c-myc和GATA4 mRNA表达水平分别显著上调了115.01%和254.00%,而螺内酯处理可抑制c-myc和GATA4 mRNA的上调。模型组大鼠的ANP mRNA表达水平显著上调了421.00%,而螺内酯处理可抑制ANP mRNA的上调。结论:螺内酯通过抑制了促肥大生长因子(PDGF-BB和TGF-β1)的表达和c-Raf/ERK1/2信号通路的活化来预防左心室肥厚。 展开更多

关键词 左心室肥厚 螺内酯 压力超负荷 动物模型 c-raf/ERK1/2信号通路

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PI3K及C-Raf的表达与胎儿生长受限关系的研究 被引量：1

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作者 林小琦 梁卫桃 莫丽芳 《临床医学工程》 2019年第8期1055-1056,共2页

目的探讨胎儿生长受限(FGR)孕妇血清中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(C-Raf)的变化与FGR的关系。方法选取2016年8月至2017年7月在东莞市第三人民医院分娩的80例FGR孕妇为FGR组,同期80例健康孕妇为对照组,采用酶联免疫... 目的探讨胎儿生长受限(FGR)孕妇血清中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(C-Raf)的变化与FGR的关系。方法选取2016年8月至2017年7月在东莞市第三人民医院分娩的80例FGR孕妇为FGR组,同期80例健康孕妇为对照组,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测孕妇的血清PI3K和C-Raf水平。结果单因素分析结果显示,FGR组的胎儿体质量及总蛋白含量低于对照组,血清PI3K、C-Raf水平均显著低于对照组(P<0.05);多因素分析结果显示,C-Raf(OR=0.990,P=0.000)、总蛋白含量(OR=0.785,P=0.012)是FGR的独立危险因素。结论C-Raf表达的改变可能会导致FGR的发生,C-Raf可作为血清标志物预测FGR的发生。 展开更多

关键词 胎儿生长受限 PI3K c-raf

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mTOR抑制剂RAD001通过c-Raf／ERKl／2通路介导胰腺癌耐药的机制 被引量：1

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作者 李宝玉 何立杰 +1 位作者 刘辉 刘宾 《重庆医学》 CAS 北大核心 2017年第A01期304-305,共2页

目的分析哺乳动物雷帕霉素蛋白（mTOR）信号通路抑制剂-RAD001介导胰腺癌耐药的机制，探索有效的耐药逆转机制。方法2016年10月至2017年1月通过进行多项实验分析RAD001对胰腺癌细胞中相关蛋白含量的影响，分析索拉菲尼与RAD001舍用对肿... 目的分析哺乳动物雷帕霉素蛋白（mTOR）信号通路抑制剂-RAD001介导胰腺癌耐药的机制，探索有效的耐药逆转机制。方法2016年10月至2017年1月通过进行多项实验分析RAD001对胰腺癌细胞中相关蛋白含量的影响，分析索拉菲尼与RAD001舍用对肿瘤细胞生长与增殖的抑制作用，总结索拉菲尼对RAD001介导胰腺癌细胞耐药机制的抑制效果。结果RAD001和索拉菲尼均具有一定的抗肿瘤作用，RAD001能通过有效抑制mTOR蛋白通路的激活发挥作用，索拉菲尼能通过抑制ERK通路的激活发挥作用，但RAD001与索拉菲尼合用不仅能起到显著的抗肿瘤作用，且索拉菲尼还能有效逆转胰腺癌细胞对RAD001的耐药性，增强疗效；与单独用药比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论c-Raf通路上调能有效增强胰腺癌细胞对RAD001的耐药性，但ERKl／2通路的激活能有效抑制胰腺癌细胞耐药性，因而在临床上可广泛应用能激活ERKl／Z通路的药物对胰腺癌进行辅助治疗。 展开更多

关键词 mTOR RAD001 c-raf/ERKl/2通路 胰腺癌耐药机制 索拉菲尼

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氯化钴通过c-Raf/MAPK/NF-κB通路对人非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭及迁移影响 被引量：1

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作者 牛海文 曹国磊 +4 位作者 崔浩波 何丽丽 曹嘉芮 李晓晗 罗琴 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2022年第7期475-480,500,共7页

目的探讨体外缺氧微环境对c-Raf/MAPK/NF-κB通路的影响,并观察不同浓度氯化钴(CoCl_(2))及作用不同时间对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法采用CoCl_(2)建立人NSCLC细胞系NCI-H1650和A549细胞体外化学乏氧模型,... 目的探讨体外缺氧微环境对c-Raf/MAPK/NF-κB通路的影响,并观察不同浓度氯化钴(CoCl_(2))及作用不同时间对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法采用CoCl_(2)建立人NSCLC细胞系NCI-H1650和A549细胞体外化学乏氧模型,以作用浓度0μmol/L为对照组,作用不同浓度为实验组。通过不同浓度(100、200、300、400和500μmol/L)的CoCl_(2)分别作用NCI-H1650和A549细胞12 h,CCK-8法检测其存活率。根据半数抑制浓度(IC_(50))值选择对缺氧环境适应能力较强的A549细胞,用同样方法进一步检测CoCl_(2)浓度为50、100、150和200μmol/L作用于细胞6、8、12、24和48 h的存活率。不同浓度CoCl_(2)作用同一时间,蛋白质印迹法检测细胞HIF-1α、c-Raf、MAPK和NF-κB的蛋白水平。Transwell小室检测CoCl_(2)对细胞迁移和侵袭能力的影响。结果当CoCl_(2)作用于A549细胞时,IC_(50)值为927.5μmol/L,作用于NCI-H1650细胞时,IC_(50)值为890.4μmol/L,成功建立缺氧NCI-H1650与A549细胞模型。当不同浓度CoCl_(2)(0~500μmol/L)作用于H1650细胞时,CoCl_(2)作用浓度对细胞存活率无影响,差异无统计学意义,F=2.942,P=0.058;作用于A549细胞时,细胞存活率分别为(1.05±0.04)%、(1.01±0.11)%、(0.81±0.05)%、(0.80±0.01)%、(0.77±0.02)%和(0.51±0.05)%,差异有统计学意义,F=30.930,P<0.001。其中,当浓度>100μmol/L时,各浓度组存活率均高于对照组,差异有统计学意义,均P<0.05。当CoCl_(2)作用时间为6~48 h,作用浓度一定时,A549细胞存活率无明显改变,差异无统计学意义;当CoCl_(2)作用时间不变,存活率随着浓度的增加而下降,并呈浓度依赖性,差异有统计学意义。与CoCl_(2)作用浓度0μmol/L[(38.33±7.64)个]相比,作用浓度分别为50、100、150、200μmol/L时A549细胞迁移数分别为(60.67±7.02)、(83.33±5.03)、(131.67±12.58)和(161.34±47.37)个,差异有统计学意义,F=127.671,P<0.001;其中,当CoCl_(2)浓度≥50μmol/L时迁移能力均高于对照组,差异有统计学意义,t值分别为-3.728、-8.521、-10.983和-22.115,P值分别为0.020、0.001、<0.001和<0.001。各组蛋白表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义,均P<0.05。结论CoCl_(2)模拟的缺氧可以使NSCLC细胞增殖、侵袭和转移增加,其机制与c-Raf/MAPK/NF-κB信号通路相关。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 丝氨酸激酶 c-raf/MAPK/NF-κB 增殖 侵袭 迁移

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三萜皂苷Saxifragifolin D抑制人肝癌耐药细胞HepG2/ADM生长并诱导细胞凋亡作用研究 被引量：6

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作者 石俊敏 张冬梅 +4 位作者 姚楠 冯国培 王英 栗原博 叶文才 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期34-38,共5页

目的研究Saxifragifolin D(SD)对人肝癌耐药细胞HepG2/ADM的生长抑制及诱导凋亡作用。方法采用MTT法观察SD对HepG2/ADM细胞的增殖抑制作用,应用流式细胞仪分析SD对细胞周期的影响,AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测凋亡细胞比率,JC-1染色观察S... 目的研究Saxifragifolin D(SD)对人肝癌耐药细胞HepG2/ADM的生长抑制及诱导凋亡作用。方法采用MTT法观察SD对HepG2/ADM细胞的增殖抑制作用,应用流式细胞仪分析SD对细胞周期的影响,AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测凋亡细胞比率,JC-1染色观察SD对细胞内线粒体膜电位的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-9,caspase-3和PARP的激活及c-Raf,MEK和ERK蛋白的表达和磷酸化水平。结果 SD可以明显抑制人肝癌耐药细胞HepG2/ADM的增殖。细胞周期检测发现SD诱导细胞产生亚二倍体凋亡峰,同时细胞凋亡率也由对照组的5.3%增加到34.8%和47.8%。线粒体膜电位检测结果显示SD导致细胞内线粒体膜电位的明显降低。Western blot检测结果表明caspase-9,caspase-3被激活,PARP被剪切活化,cytochrome C由线粒体释放至胞质,c-Raf、MEK和ERK蛋白的磷酸化水平降低。结论 SD可以抑制人肝癌耐药细胞HepG2/ADM增殖并诱导其凋亡,作用机制可能与线粒体功能障碍及抑制c-Raf/MEK/ERK通路的活化有关。 展开更多

关键词 Saxifragifolin D HepG2/ADM细胞 细胞凋亡 caspase活化 线粒体功能障碍 c-raf/MEK/ERK

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